粪便 病原菌的分离与鉴定
粪便分离实验报告
粪便中病原微生物的分离与鉴定二、实验目的1. 掌握粪便标本的采集、处理和病原微生物的分离方法。
2. 熟悉不同培养基的制备和使用，了解病原微生物的生物学特性。
3. 培养实验室操作技能，提高对医学微生物学基本原理的认识。
三、实验原理粪便中存在大量微生物，其中既有对人体有益的正常菌群，也有可能引起疾病的病原微生物。
通过特定的分离培养方法，可以将病原微生物从粪便中分离出来，并进行鉴定，从而为疾病的诊断和治疗提供依据。
四、实验材料与试剂1. 实验材料：新鲜粪便标本2. 试剂与仪器：- 牛奶琼脂培养基- 血琼脂培养基- 脱纤维蛋白血琼脂培养基- 碎琼脂培养基- 革兰氏染色液- 稀释液- 移液器- 灭菌镊子- 灭菌培养皿- 显微镜- 移菌环1. 标本采集：采集新鲜粪便标本，注意避免污染。
2. 标本处理：将粪便标本加入适量的稀释液中，充分混合均匀。
3. 分离培养：- 取适量稀释后的粪便标本，分别接种于牛奶琼脂培养基、血琼脂培养基和脱纤维蛋白血琼脂培养基上。
- 将培养皿置于37℃恒温培养箱中培养24-48小时。
4. 观察与记录：观察培养基上菌落生长情况，记录菌落特征。
5. 鉴定：- 对疑似病原菌进行革兰氏染色，观察菌体形态和染色特性。
- 根据菌落特征和染色结果，进行初步鉴定。
六、实验结果1. 牛奶琼脂培养基上观察到典型的金黄色葡萄球菌菌落，革兰氏染色呈阳性。
2. 血琼脂培养基上观察到典型的溶血性链球菌菌落，革兰氏染色呈阳性。
3. 脱纤维蛋白血琼脂培养基上观察到典型的大肠杆菌菌落，革兰氏染色呈阴性。
七、讨论与分析1. 本实验成功分离出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和大肠杆菌，表明粪便标本中存在这些病原微生物。
2. 金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌均为革兰氏阳性菌，具有致病性，可能引起皮肤感染、呼吸道感染等疾病。
3. 大肠杆菌为革兰氏阴性菌，通常存在于人体肠道中，但在某些情况下也可能引起感染，如尿路感染、腹泻等。
4. 本实验结果表明，粪便分离培养是诊断肠道感染的重要手段，对于疾病的预防和治疗具有重要意义。
粪便检测实训报告
一、实训目的本次实训旨在使学生掌握粪便检测的基本原理、操作方法和注意事项，提高学生对粪便检测技术的实际操作能力，为今后从事相关领域工作打下坚实基础。
二、实训时间2021年X月X日至2021年X月X日三、实训地点XX大学医学检验技术实验室四、实训内容1. 粪便常规检测（1）目的：观察粪便的性状、颜色、气味等，初步判断患者是否存在消化系统疾病。
（2）操作步骤：①观察粪便的性状、颜色、气味；②记录粪便的性状、颜色、气味；③判断是否存在消化系统疾病。
2. 粪便潜血试验（1）目的：检测粪便中是否有隐血，协助诊断消化系统疾病。
（2）操作步骤：①收集新鲜粪便样本；②按照试剂盒说明书进行操作；③观察结果，判断是否存在隐血。
3. 粪便培养（1）目的：分离、鉴定粪便中的病原菌，为临床诊断提供依据。
（2）操作步骤：①采集新鲜粪便样本；②进行无菌操作；③接种于相应培养基；④观察菌落生长情况，进行鉴定。
4. 粪便虫卵及虫卵抗原检测（1）目的：检测粪便中的虫卵及虫卵抗原，协助诊断肠道寄生虫感染。
（2）操作步骤：①采集新鲜粪便样本；②进行镜检；③观察虫卵及虫卵抗原，判断是否存在寄生虫感染。
五、实训结果与分析1. 粪便常规检测：通过观察粪便的性状、颜色、气味，初步判断患者是否存在消化系统疾病。
如发现粪便性状异常，应进一步检查。
2. 粪便潜血试验：通过检测粪便中的隐血，协助诊断消化系统疾病。
结果显示，部分患者存在隐血，提示可能存在消化系统疾病，需进一步检查。
3. 粪便培养：成功分离出部分病原菌，为临床诊断提供依据。
其中，部分患者培养出大肠杆菌、志贺菌等，提示可能存在肠道感染。
4. 粪便虫卵及虫卵抗原检测：通过镜检和抗原检测，成功诊断出部分患者存在寄生虫感染，如蛔虫、钩虫等。
六、实训总结通过本次实训，我们掌握了粪便检测的基本原理、操作方法和注意事项。
在实际操作过程中，我们学会了如何正确采集、处理粪便样本，并进行了粪便常规检测、潜血试验、培养及虫卵及虫卵抗原检测。
观察粪便中细菌的方法
观察粪便中细菌的方法
观察粪便中细菌的方法主要包括以下步骤：
1. 样本采集：通常需要采集患者的粪便样本，可以检查粪便中是否存在细菌、寄生虫等，可以判断是否存在肠道感染。
2. 进行细菌培养：将粪便样本送至实验室进行细菌培养，以观察粪便中是否存在异常细菌。
3. 显微镜检查：将粪便样本制成涂片，在显微镜下观察细菌的形态、数量和分布情况。
4. 培养特性观察：观察细菌在培养基中的生长情况，包括菌落的形态、颜色、大小、边缘是否整齐等。
5. 生化试验：通过生化试验可以进一步确定粪便中细菌的种类和性质。
6. 药敏试验：通过药敏试验可以了解细菌对各种抗生素的敏感性和耐药性，为临床治疗提供参考。
通过以上步骤，可以观察粪便中细菌的数量、种类、生长情况等，有助于判断肠道疾病和选择合适的治疗方案。
粪便标本中病原菌的检测
粪便标本中粪便标本中所含细菌所含细菌所含细菌的检测的检测闫研（第一临床医学院临床医学五年制113200800100023）李梦婕（第一临床医学院临床医学五年制113200800100024）粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。
粪便标本中因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌，因此，粪便标本一般不作直接涂片检查，只有检查霍乱弧菌、结核杆菌、疑似葡萄球菌或艰难梭菌引起的伪膜性肠炎，以及菌群失调时，才做直接涂片检查。
1材料与方法1.1材料粪便标本，葡萄糖发酵微量管，乳糖发酵微量管，革兰氏染色液【结晶紫染色（第一液），芦戈氏碘液（第二液），95%酒精（第三液），稀释石炭酸复红（第四液）】，诊断血清，伊红美兰琼脂平板，斜面培养基，半固体培养基，肉汤培养基，接种环，接种针，打火机，油性笔，普通冰箱、冷藏室、隔水式电热恒温培养箱、奥林巴斯CX21型生物显微镜、1500W 电炉、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁而灭、天平、砝码、细菌干粉培养基、锥形瓶、量筒、试管筐、灭菌平皿、试管（棉塞）、刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、牛皮纸、橡皮筋。
1.2培养基的制备表1-1培养基的制备培养基称量（g）水量（ml）煮沸（次）分装（ml）备注（40人份）营养琼脂11.43004瓶，500ml 瓶，平板营养琼脂2.9753515支，中试管，斜面营养肉汤1.1501315支，小试管，液体半固体 1.5503315支，小试管，高层1.3细菌的分离和培养采用平板划线法从粪便标本中分离出病原菌。
将培养皿倒置，37℃培养24小时后观察结果。
1.4细菌纯培养1.4.1挑选单菌落粪便标本在伊红美蓝平板上用接种环挑去选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落进行接种。
1.4.2斜面接种法在斜面培养基上线自底部向上拉一线，在自下而轻轻的做蜿蜒连续划线进行接种。
微生物实验 肠道病原菌的分离与鉴定
【目的要求】
1.熟悉粪便中肠道杆菌的分离与鉴定程序。 2.了解肠道杆菌生化反应、免疫学检测原理、结果和意义。 3.掌握肠道杆菌的生物学性状。
粪便标本中致病性肠道杆菌的分离与鉴定程序
粪便标本
涂片，染色，镜检 （意义不大）
双糖铁培养基
SS培养基
生化反应： IMViC
药敏试 验
伤寒沙门菌
三、肠道杆菌的生物学性状--志贺菌
志贺菌
【实验报告】
记录粪便标本病原菌的分离与鉴定的步骤及结果。
大肠埃希菌
Rod-Shaped Bacterium, E. coli (division) (SEM x22,245) E. coli (0157:H7) a rod prokaryote. Hemorrhagic type
E. coli with fimbriae
三、肠道杆菌的生物学性状--伤寒沙门菌
血清学 试验
PCR试 验
一、上节课实验结果
1.SS琼脂平板结果及初步推断
结果： 平板上有几种菌？
ห้องสมุดไป่ตู้
二、本节课实验内容
1.双糖铁培养基结果观察 细菌动力，对葡萄糖和乳糖发酵的情况，是否产生硫化氢？
原始管
反应管
双糖铁培养基结果
菌名 大肠埃希菌
葡萄糖 （底层）
⊕
痢疾杆菌
+
伤寒沙门菌
+
肖氏沙门菌
⊕
乳糖 （斜面）
氨苄西林
氨苄西林
敏感 中介 耐药 10ug >=17 13--16 <=14
复方新诺明
>=16 9--15 <=10
复方新诺明
脓汁和粪便标本中病原菌的检测
脓汁和粪便标本中病原菌的检测（作者：bibi）目的从脓汁和粪便标本中分离、培养和检测病原体。
方法培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定。
结果脓汁标本形成黄、白两种颜色菌落，均为革兰氏阳性菌，均对青霉素和链霉素敏感；粪便标本形成紫黑和粉红色两种菌落，均为革兰氏阴性菌，对青霉素不敏感，对链霉素敏感。
四种细菌均对广谱抗菌素庆大霉素敏感。
关键词：脓汁粪便微生物细菌菌落生化鉴定药敏试验引言：常见的化脓性病原菌有葡萄球菌、链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、假单胞菌、流感杆菌等。
浓汁标本在做细菌分离培养的同时，均须直接涂片检查，观察是否有典型形态的菌体，芽孢有无，为临床提供最初的诊治依据。
粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌属、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。
粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基（如SS、伊红美蓝平板、碱性蛋白胨水），尽可能抑制杂菌，以利于病原菌的检出。
这次实验我们从浓汁标本中检出的是金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌，从粪便标本中检出的是大肠埃希菌、痢疾志贺菌。
更重要的是我们了解了，医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握了微生物试验的基本技能和基本原理，树立了牢固的无菌观念。
同时培养学生自学能力、科学思维能力、动手能力和表达能力。
培养学生从临床标本中分离细菌以查找与疾病有关的病原体，为临床治疗预后调查提供一定的价值1.实验器材：接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架、普通冰箱、冷藏室、隔水式电热恒温培养箱、奥林巴斯 CX21型生物显微镜、1500W电炉、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁而灭、天平、砝码、细菌干粉培养基、锥形瓶、量筒、试管筐、糖发酵管、灭菌平皿、试管（棉塞）、刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、牛皮纸、橡皮筋、尺子2.实验方法：2.1培养基的制备、消毒和灭菌培养基制备的一般程序：①调配→溶化→矫正pH →分装→灭菌→检定→保存。
粪便中病原菌的分离培养与鉴定
粪便中病原菌的分离培养与鉴定[摘要]目的：从粪便中分离、培养和检测病原菌，对于临床治疗及预后调查有一定的价值。
粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等，各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌。
此次我们主要分离培养并鉴定粪便标本中的大肠埃希菌和痢疾志贺菌[3]。
方法：本文利用伊红美蓝平板培养后的菌落特征，再提纯培养细菌进行革兰染色镜检、动力实验、生化反应。
可鉴定粪便标本中的病原菌。
[关键词]革兰染色大肠埃希菌志贺菌分离培养鉴定1.实验材料与仪器1.1标本：粪便标本1.2培养基：普通琼脂平板、伊红美蓝平板、营养琼脂斜面培养基、营养肉汤液体培养基、半固体琼脂培养基1.3试剂：细菌干粉培养基革兰染色法[1]试剂【结晶紫、碘酒、95%乙醇、稀释复红】、糖发酵管【乳糖、葡萄糖】、褔氏志贺菌诊断血清。
1.4仪器：接种环、接种针、酒精灯、试管架、恒温培养箱、显微镜、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁尔灭、灭菌平皿、刻度吸管、吸水纸、橡皮筋。
2.实验过程2.1细菌的分离与培养细菌分离培养：伊红美蓝平板分区划线分离（5区）。
无菌操作取粪便标本于固体平板培养基上，采用分区画线分离法培养细菌。
于37℃培养24小时，从而分离出单个菌落。
2.2细菌群体生长特征的观察观察形成菌落的大小、形状、边缘、表面、色素。
粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落。
紫黑色菌落具有金属光泽、大而隆起、不透明，菌落直径2～3mm。
淡粉红色菌落，半透明，直径1～2mm。
2.3细菌纯培养粪便标本在伊红蓝平板上，有紫黑色，粉红色两种菌落。
分别挑选这两种菌落在斜面培养基上接种标记，在37℃培养24h。
2.3.1斜面接种法选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落在平皿底部玻璃上，画个大圈选择菌落，右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌，再用灭菌的接种环套住菌落，轻刮取菌，将其伸入代接斜面试管底部，轻轻向上划线，接接种环退出斜面试管，再用火焰烧管口，并在火焰边将试管塞塞上，观察斜面培养基。
粪便病原菌分离与鉴定PPT课件
用于检测细菌是否产生吲哚及其衍生物，有 助6S rRNA基因测序
通过对细菌16S rRNA基因进行测序，可以确定细菌的 种属关系。
2 DNA指纹技术
利用细菌基因组的DNA指纹图谱进行鉴定，具有高分辨 率和高特异性。
3 实时荧光定量PCR
通过特异性引物和探针，快速、准确地检测和鉴定病原 菌。
加强手卫生
医护人员应经常洗手，并 使用消毒液对接触患者前 后进行手部消毒。
严格隔离感染患者
将感染病原菌的患者与其 他患者分开，以防止交叉 感染。
提高患者免疫力
鼓励患者保持健康的生活 方式，包括均衡饮食、适 量运动和充足的睡眠，以 提高免疫力。
06
总结与展望
研究成果总结
标准化与推广
分离方法优化
我们成功地优化了粪便病原菌 的分离方法，提高了分离效率 和准确性。通过改进培养基成 分和分离程序，我们能够更有 效地从粪便样本中筛选出目标 病原菌。
抗酸染色
用于鉴别结核分枝杆菌等抗酸 菌，具有特殊染色特性。
鞭毛染色
用于鉴定具有鞭毛的细菌，如 霍乱弧菌。
芽孢染色
用于观察细菌的芽孢，有助于 鉴别厌氧菌。
生化鉴定
糖发酵试验
通过检测细菌对糖类的发酵能力，可以初步 确定细菌的属和种。
酶试验
用于鉴别肠道细菌中的大肠杆菌、沙门氏菌 等。
甲基红试验
通过检测细菌产生的酶，如氧化酶、触酶等 ，有助于鉴别细菌种类。
耐药性的防控措施
01
合理使用抗生素
严格控制抗生素的使用，避免 滥用和过度使用，降低病原菌 耐药性的产生。
02
加强耐药性监测
建立和完善耐药性监测体系， 及时发现和报告耐药性病例， 采取有效措施控制传播。
化脓性球菌和粪便标本肠道致病菌的鉴定流程
化脓性球菌和粪便标本肠道致病菌的鉴定流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
文档下载后可定制修改，请根据实际需要进行调整和使用，谢谢！本店铺为大家提供各种类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，想了解不同资料格式和写法，敬请关注！Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!肠道致病菌包括多种细菌，其中化脓性球菌是一类常见的病原菌，对其进行鉴定是临床微生物学工作中的重要任务之一。
粪便标本中肠道致病菌的分离与鉴定
及 耐药性。结果：粪便标本 病原 菌呈现 阳性 １ ２ ６例 ，志贺氏菌 ５ ６株为 ４ ４ ． ４ ％；志贺菌存 在较 高耐药性 药物 为复方新诺 明和氨苄青
霉素。结论：肠道传染病主要肠道指标均为志贺 氏菌 ，应用头孢菌素类、喹诺 酮类药；肠 道；志贺茵
２ ３ ０例腹泻患者粪便标本中分离 出 １ ２ ６株病原菌，分离率
５ ４ ． ８ ％ ，病 原 菌 分 布 如表 １所 示 。 志 贺 氏 菌血 清 学 分 型 如表 ２ 所示 。 ５ ６株 志 贺 氏菌 药 物 敏 感 性 如 表 ３所 示 。 志 贺 菌 多 重 耐 药 分 布 如 表 ４所 示 。成 人 与 儿 童 志 贺 菌 耐 药 性 分 析 如表 ５ 、表 ６ 所示 。
［ Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ ］ Ｆ ｅ ｃ ｅ ｓ ； Ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｇ ｅ ｎ ｓ ； Ｇ ｕ ｔ ； Ｓ ｈ ｉ ｇ ｅ ｌ ｌ ａ
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ４ — ７ ８ ６ ０ ． ２ ０ １ ４ ． ２ ２ ． ０ ７ ４
．
１ ２ ６ ．
Ｃｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｊ ｏ ｕ ｎａ ｒ ｌ ｏ ｆ Ｃｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ２ ０ １ ４ Ｖ ｏ １ ． （ ６ ） Ｎｏ ． ２ ２
粪 便 标 本 中 肠 道 致 病 菌 的 分 离 与 鉴 定
Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｉ ｎ ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ａ ｌ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ａ ｌ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｍｅ ｎ ｓ
致泻性 大肠埃 希菌感 染属于 细菌性感 染性腹 泻中较 为重要 的
粪便标本中肠道致病菌的的分离鉴定
实验十粪便标本中肠道致病菌的的分离鉴定实验目的和要求1、掌握脓汁标本中常见病原菌分离和鉴定方法2、掌握药物敏感试验3、掌握肠道杆菌分离和鉴定的一般步骤4、熟悉肠道杆菌鉴定生化反应和血清学反应实验内容一、脓汁标本中未知病原菌的分离和鉴定二、粪便标本中肠道致病菌的分离和鉴定一、标本中未知病原性球菌的分离鉴定程序直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板涂片、染色、镜检挑取可疑菌落生化反应测定纯培养致病性测定（甘露醇、凝固酶等）标本血液脑脊液肉汤增菌培养涂片染色镜检二、标本中未知肠道感染细菌的分离鉴定程序标本脓血便、肛拭子选择/鉴别培基生化反应血清学鉴定克氏双糖铁培养基,动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基玻片凝集试验SS平板,EMB平板设计性实验临床标本中病原菌的分离与鉴定设计性实验1.脓汁标本：脓拭子培养基：血琼脂平板其他：3%H2O2、（兔血浆）、生理盐水、革兰染液、玻片等2.痰标本：咽拭子培养基：血琼脂平板其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等3.尿标本：尿液培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等4.粪便标本：肛门拭子培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺菌多价血清、玻片等脓拭子分离培养革兰染色（血平板）革兰染色触酶实验甘露醇实验方法：•1、分离培养、观察菌落特征：浓汁标本，用分离划线方法接种血平板，37℃培养18-24h以后观察结果。
重点：色素和溶血现象•2、革兰染色、观察形态学特征：取可疑菌落少许涂片，革兰染色、镜检。
结果观察•1、菌落观察•2、形态学观察（二）生化反应•触酶试验：(-) (+)H 2o 2H 2o o 2氧化氢酶+菌种：可疑菌落试剂：3%过氧化氢方法：见右图结果：见右图甘露醇实验•甘露醇生化反应管药敏实验浓汁标本可疑菌生长现象及生化反应结果观察形态学特征血平板生长现象触酶试验甘露醇试验结论：现象与论点、论据浓汁标本可疑菌药敏实验结果药品名称抑菌圈直径结论：咽拭子革兰染色革兰染色胆汁溶菌试验奥普托辛试验荚膜染色（石炭酸复红单染）分离培养（血平板）？粪便标本SS平板克氏双糖铁斜面培养基动力-半固体培养基生化反应管观察结果糖发酵试验玻片凝集试验革兰染色H2S试验尿液离心沉淀1500转，10分钟分离培养（EMB平板）革兰染色革兰染色克氏双糖铁斜面培养基动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基观察结果观察结果观察结果完成靛基质试验方法：•1、分离培养、观察菌落特征：粪便标本，用分离划线方法接种SS平板培养基37℃培养18-24h以后观察结果。
粪便细菌学规范
粪便细菌学检验操作规范实验室常规检查是细菌培养，沙门氏菌、志贺氏菌、邻单胞菌和气单胞菌、副溶血性弧菌、致泻性大肠杆菌作为实验室常规培养的主要腹泻病原菌。
一、标本采集与运送：1．标本采集（1）标本采集尽可能在发病早期和应用抗菌药物治疗之前。
在不同的时间采集2~3份标本可以提高致病菌的分离率。
（2）自然排便采集粪便标本时，取有脓血、粘液、组织碎片部分的粪便1～3g。
液体粪便则取絮状物，一般取1～3ml，直接装入粪便容器或保存液或运送培养基中送检。
（3）直肠拭子采集粪便标本，检查带菌者时可以采取肛拭（棉拭先用保存液或增菌培养基湿润），深入肛门内7~10cm除采样，不能及时接种时，应将标本放入保存液内。
(4)容器应清洁、带盖、广口的（不宜使用纸盒）、送检的标本中不能加入防腐剂。
2．标本运送（1）粪便标本应尽快送检，室温条件下不能超过2h。
如不能及时送检可加入pH7.0的磷酸盐甘油或转运培养基，但不宜超过24h。
使用改良Cary-Blair培养基时，不能运送培养志贺氏菌的标本。
（2）直肠拭子采集的标本必须置入运送培养基或GN肉汤中送检，转运时间不宜超过2h。
（3）高度怀疑霍乱弧菌感染的标本运送必须符合特殊标本的安全要求。
（4）直肠活检标本用粪便容器送检，内盛少量无菌蒸馏水以防止沉淀。
3．标本保存不能及时检验的标本通常4-6℃保存，用磷酸缓冲盐甘油溶液保存培养沙门氏菌和志贺氏菌的标本，保存培养弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl2(100mg/L)。
二、标本镜检粪便标本直接镜检找到大量多核白细胞，提示侵袭性致病菌感染。
如果是由肠道菌群紊乱引起的腹泻，革兰氏染色结果可以提示是酵母菌还是葡萄球菌感染。
2.革兰氏染色制备一张薄的粪便涂片，采用常规革兰氏染色方法。
镜下观察是否有大量WBCs，成丛的革兰氏阳性球菌，酵母菌。
3.水样粪便的标本，采用悬滴法暗视野（或相差显微镜）镜检，如发现细菌呈穿梭状极活泼的运动，则考虑为弧菌感染。
粪便标本中致病菌的检验实验设计
临床模拟标本细菌学检验的实验设计书1.标本分析标本中可能的正常菌群：正常情况下肠道中有多种细菌寄生，包括大量的厌氧菌、肠球菌、大肠埃希菌、肠杆菌、变形杆菌、粪产碱杆菌等。
标本中可能存在的病原菌：①细菌性：吸收不良性腹泻，包括致病性大肠埃希菌等；产毒素性腹泻，包括霍乱弧菌、肠毒素型大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌、变形杆菌、气单胞菌属、蜡样芽胞杆菌等；侵袭性腹泻，包括志贺菌、肠致病型大肠埃希菌、肠侵袭型大肠埃希菌、肠出血型大肠埃希菌、空肠弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森菌等；食物中毒，包括沙门菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、乙型溶血链球菌和肉毒梭菌等；伪膜性肠炎，包括艰难梭菌或金黄色葡萄球菌；慢性腹泻，可能由结核杆菌引起；继发性肠道感染：铜绿假单胞菌、非结核分枝杆菌等。
②真菌性：念珠菌、毛霉菌等。
③病毒性：轮状病毒等。
2.检验思路图1-1 粪便标本细菌学检验程序3.拟采用的实验方法及预期结果（1）显微镜检查（仅在怀疑为霍乱弧菌、艰难梭菌、结核分枝杆菌感染等情况下进行）①不染色标本检查：用生理盐水或卢戈氏碘液或0.1%亚甲蓝染液与等量的粪便标本混合均匀涂于载玻片上，盖上盖玻片用相差显微镜或暗视野显微镜高倍镜镜检。
A.若标本呈米泔样或洗肉水样，镜检发现逗点状或弯曲状的弧菌，呈流星样穿梭，运动活泼，提示霍乱弧菌感染。
此时加入O群或O139群霍乱弧菌多价诊断血清，显微镜下观察与不加诊断血清比较，若大于80%的细菌停止运动或运动明显减弱，判断为制动试验阳性，可初步报告为“疑似O群或O139群霍乱弧菌”。
B.若发现呈S形、螺旋形并快速、拧塞样或投镖样运动的细菌，提示为弯曲菌。
C.若高倍镜观察发现有无光亮的卵圆形孢子或假菌丝可初步报告酵母样真菌感染。
②染色检查：如细菌染色呈现下列典型形态时，对诊断具有提示作用。
A.取新鲜米泔样类便标本涂片2张，用乙醇或甲醇固定，分别进行革兰染色和1：10稀释苯酚复红染色，油镜观察呈鱼群状排列的杆状或弧形红色革兰阴性杆菌。
微生物实验 肠道病原菌的分离与鉴定
一、粪便标本致病性肠道杆菌的分离和鉴定程序
二、粪便标本致病性肠道杆菌的分离和鉴定
1.粪便接种SS（ Salmonella Shigella agar ）培养基
粪便四分区划线接种SS琼脂平板，37℃培养18-24小时。
大肠杆菌 痢疾杆菌 伤寒杆菌
SS平板 粉红色大菌落 无色细小 半透明菌落 无色细小 半透明菌落
实验九 粪便中病原菌的分离鉴定-1
【目的要求】
1.掌握肠道杆菌的生物学性状。 2.熟悉粪便中病原菌的分离鉴定程序。
病例回顾
某患者，女，45岁。于前日参加聚餐，昨日感觉腹部不适，今晨起有 发热、腹痛、水样腹泻，至下午就诊已腹泻5次，最后两次量不多，但有 黏液样物质带有血色。实验室检测：粪便检查发现有脓细胞5个，红细胞8 个；血液检测WBC14.5×109/L（4-10x109/L）。
2.可疑菌落穿刺接种双糖铁培养基 第2天观察SS培养基的培养结果并记录，挑取较小、无色、半
透明的可疑菌落穿刺接种双糖铁培养基，37℃培养18-24小时。 第3天取出双糖铁培养基放入冰箱，下次课备用。
原始管
反应管
三、肠道杆菌的生物学性状--大肠埃希菌
大肠埃希菌
Rod-Shaped Bacterium, 45) E. coli (0157:H7) a rod prokaryote. Hemorrhagic type
E. coli with fimbriae
三、肠道杆菌的生物学性状--伤寒沙门菌
伤寒沙门菌
三、肠道杆菌的生物学性状--志贺菌
志贺菌
【实验报告】
记录粪便标本接种SS培养基和双糖铁培养的结果，并对其进行初步判 断。
模拟粪便中伤寒沙门菌的分离与鉴定
模拟粪便中伤寒沙门菌的分离与鉴定肠杆菌科（Enterobacteriaceae）细菌是一大群生物学性状相似的革兰阴性杆菌，常寄居于人及动物的肠道内，亦存在于土壤、水和腐物中[1]。
多数是非致病菌或条件致病菌，少数为致病菌。
其生物学性状相似，但生化反应，抗原构造有差异，故可据此将它们进行分类、鉴定。
粪便中肠道菌的分离与鉴定对于临床病原学诊断具有重要意义。
1.材料与方法1.1 材料1.1.1模拟粪便、普通琼脂平板培养基、SS平板培养基、葡萄糖微量发酵管、乳糖微量发酵管、尿素酶微量管、醋酸铅培养基微量管、蛋白胨水培养基、吲哚试剂、半固体培养基、伤寒诊断血清、37℃恒温培养箱等。
1.2 方法1.2.1细菌分离培养取模拟粪便标本分区划种于SS平板培养基，置37℃培养箱培养18~24h后，观察结果，并对分离所获的菌落的细菌进一步鉴定。
1.2.2 细菌的生化反应挑取可疑菌落（无色菌落）的细菌，分别接种于葡萄糖微量发酵管、乳糖微量发酵管、尿素酶微量发酵管、醋酸铅培养基微量管、蛋白胨水培养基、半固体培养基，置37℃培养箱培养18~24h后观察结果。
1.2.3 血清学鉴定取伤寒诊断血清和生理盐水滴于玻片上，再取可疑菌分别与伤寒诊断血清和生理盐水混匀，观察有无凝集现象。
2.结果2.1细菌分离培养 SS平板上分离出两种不同性状菌落，一种为圆形、凸起、湿润、边缘整齐、表面光滑的无色透明菌落，直径约1~2mm，另一种为圆形凸起、湿润、边缘整齐、表面光滑的红色菌落，直径约2~3mm。
2.2 细菌生化反应和血清学鉴定所分到的两种不同性状菌落的生化反应、动力学试验、血清学鉴定结果见表1表1可疑菌的生化反应、动力试验和血清学检查结果双糖铁葡萄糖乳糖尿素 H2S 靛基质动力血清学可疑菌—/+ H2S+ + —— + — + +3.结果分析和讨论在肠杆菌科中，志贺菌、沙门菌等致病菌不发酵乳糖，其他大部分非致病肠道杆菌可分解乳糖，故在SS平板上无色半透明小菌落为可疑致病菌落[2]。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2.4细菌生化反应鉴定
• 2.4.1糖发酵试验。用接种针分别挑少许紫黑色和粉红色的细菌接 种到葡萄糖发酵微量管和乳糖发酵微量管中，将微量管放在平皿 盖内，在37℃下，培养24小时，观察其产酸产气情况。 • 2.4.2细菌药物敏感性试验。接种环分别取紫黑、粉红色两种菌液 3～6ul×2环，各自在两个平板上，作平板密集划线接种细菌（纱 窗样）。设计三点，三点之间等边三角距离，点距离平皿边缘约 15mm。作标记：青、链、庆。镊子火焰消毒，夹取相应的药物纸 片，平贴在已设定的位置上，按压，最后镊子火焰灭菌。 37℃18～24小时培养，观察结果。 • 2.4.3半固体接种法。接种针斜面取紫黑和粉红色的细菌，各自接 种进两个半固体培养基，从半固体培养基中心，垂直刺入，到达 培养基底部4/5处，再循原来的路线，退出接种针。 在37℃下,培 养24小时，观察结果。 • 2.4.4 痢疾血清玻片凝集反应。取载玻片1张，滴加痢疾血清和生 理盐水各15ul，2滴。用接种环挑取少许紫黑色菌落和粉红色菌落， 各自与上述混合液液滴混匀，观察结果
8
3.实验结果
• 3.1细菌在固体培养基上生长特征的观察。 • 将粪便标本用平半分区划分法接种于伊红 美兰培养皿上，培养出紫黑色和粉红色两 种菌落。(见图一)
9
• 3.2革兰染色镜检。 • 取紫黑色和粉红色菌涂片，革兰染色，进 行镜检。紫黑色菌革兰染色阴性，长杆状。 粉色菌革兰染色阴性，短杆状。（见图二， 图三）
5
2.2细菌的分离与培养
•
• • • •
2.2.1采用平板划线分离法，将取粪便标本中混杂的多种细 菌，在伊红美蓝固体培养基表面划线，使之分散成单个细 菌，在37℃培养24h，从而分离出肉眼可见的单个菌落。 2.2.2细菌在固体培养基上生长特征的观察。观察形成菌 落的大小、形状、边缘、表面、溶血性、色素、透明度、 湿润度。 2.2.3细菌的纯培养。粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑 色、粉红色两种菌落。挑选这两种不同菌落分别在斜面培 养基上接种，标记，在37℃培养18h。 2.2.4细菌在斜面培养基上生长特征的观察。观察细菌的生 长量、菌苔形状、表面形状、光泽、透明度、颜色等。 2.2.5液体培养基接种法。用接种环在固体或斜面培养基上 挑选紫黑色和粉红色菌苔少许移入液体培养基管中，在接 近液面的管壁上轻轻研磨，并沾取少量肉汤调和，使菌液 混合于培养基中，混匀。在35℃培养4~6h，观察细菌的生 长情况
6
2.3细菌个体形态特征的观察
• 2.3.1取两块玻片，在每块玻片上加生理盐水3～ 4ul，2滴，在斜面培养基上取紫黑色菌苔少许 （1mm小菌落的半量）与第一块玻片上的一滴盐 水混匀，再取粉红色菌苔少许（1mm小菌落的半 量）与第二块玻片上的一滴盐水混匀，涂成1cm2； 做好标志。经在空气中干燥后，再用酒精灯对其 进行固定。 • 2.3.2革兰染色。用结晶紫对以上两块已固定的玻 片进行初染1分钟，水洗；再用卢戈碘液媒染1分 钟，水洗；然后用95％乙醇对其进行脱色约20秒 钟，水洗；最后用稀释复红复染1分钟，水洗；吸 干，在显微镜下镜检。
实验目的
粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目 的菌的不同而选择培养基，以利于病原菌的检出。 而且，因其各种正常菌群含量甚多，仅以染色性 和形态无法分辨是否为病原菌。常见的病原菌有 志贺氏菌属、致病性大肠杆菌属、弧菌属、沙门 氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。 这次实验中我们从粪便标本中检出的是大肠 埃希菌、痢疾志贺菌。而且，我们从这次的综合 性实验中了解到了医学微生物学主要的研究方法 和手段，掌握了微生物试验的基本技能和基本原 理，树立了牢固的无菌观念。同时培养了我们的 动色 单染色 需氧培养 厌氧培养 微需氧培 养及特殊 培养
增菌培养
直接分离
动力观察及制动 试验 碱性胨水 增菌液 SS平板 碱性平板分 离 菌落形态 菌落形态 抗血清凝集 生化反应 副溶血性弧菌选 择性平板 菌落形态生化 反应
抗血清凝集 初步结果报告 生化反应
2
实验结果
1.实验材料
• 接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架、普 通冰箱、冷藏室、隔水式电热恒温培养箱、奥林 巴斯CX21型 生物显微镜、1500W电炉、蒸馏水、 玻片缸、消毒液、1‰新洁而灭、天平、砝码、细 菌干粉培养基（营养琼脂、营养肉汤、半固体琼 脂）、锥形瓶、量筒、试管筐、糖发酵微量管 （葡萄糖、乳糖）、灭菌平皿、试管（棉塞）、 刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、牛皮纸、 橡皮筋、尺子、药勺、革兰氏染色液（结晶紫染 液、卢戈碘液、95％乙醇、稀释石炭酸复红）、 小砂轮、痢疾血清、青霉素、链霉素、庆大霉素 和生理盐水滤纸片、线绳、香柏油、擦油纸
3
2.实验方法
• 2.1培养基的制备、消毒和灭菌 • 培养基制备的一般程序： • 调配→溶化→ 矫正pH →分装→灭菌→检定→保 存。 • 干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→灭菌→ 检定→保存。 • 干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放 在试管筐里，然后罩上硫酸纸，牛皮纸，用橡皮 筋扎好 →放入讲台边的高压灭菌桶或高压灭菌筐 内→送到高压灭菌室（洗刷室）。
10
• 3.3糖发酵实验和半固体培养基实验。 • 紫黑色菌两支单糖发酵微量管均变色和产 气，粉红色菌葡萄糖发酵管变色不产气泡， 乳糖发酵管既不变色也不产气泡。半固体 实验中，紫黑色菌成模糊状，粉色菌成清 晰的线状。（结果见图四，图五，表二）
11
• 表2、糖发酵试验和半固体培养基实验结果
细菌种类 紫黑色菌 粉红色菌 葡萄糖 ⊕ + 乳糖 ⊕ 半固体 + -
4
表1.培养基的制备
组号 培养基 称量(g) 水量(ml) 煮沸(次) 分装(ml) 备注(24人分)
1 营养琼脂
2,3 营养琼脂 6 营养肉汤 7,8 半固体
11.4
2.9 2.0 1.5
300
75 90 50 3 1 3 5 3 3
3瓶，500ml瓶，平板
15支，中试管，斜面 30支，小试管，液体 15支，小试管，高层