细胞培养常用试剂
生物高一所有试剂知识点
生物高一所有试剂知识点生物是一门基础科学，其中试剂是进行实验研究的重要工具。
在高一生物学习中，了解并熟悉各种试剂的性质、用途以及实验操作是非常重要的。
本文将为你介绍生物高一所有试剂的知识点。
一、常用试剂1. 水：用于配制溶液、洗涤试剂瓶、清洗仪器等。
2. 盐酸（HCl）：用于调节pH值、去除金属氧化物、消化组织等。
3. 硫酸（H2SO4）：用于消化组织、脱水、酸碱滴定等。
4. 高锰酸钾（KMnO4）：常用于氧化反应，如检测有机物的存在与否。
5. 碘液（KI/I2）：常用于检测淀粉的存在与否，也可用于消毒。
6. 苏木精：用于染色组织切片，以便观察细胞和组织的形态结构。
7. 快速脱水液：用于组织固定和脱水，使组织保持完整性。
8. 甲醛：用于固定组织样本，以便后续的染色和显微观察。
9. 乙醇：用于固定和脱水组织，也可用于制备染色剂。
10. 苯酚：常用于提取核酸和蛋白质，也可用于制备染色剂。
二、分子生物学试剂1. 缓冲液：用于调节实验溶液的pH值，保持反应体系的稳定。
2. DNA提取试剂盒：用于从细胞中提取DNA，进一步进行分析和研究。
3. RNA提取试剂盒：用于从细胞中提取RNA，进行基因表达研究。
4. 聚合酶（DNA聚合酶、逆转录酶等）：用于DNA扩增和RNA逆转录反应。
5. 凝胶：如琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶，用于电泳分离DNA、RNA和蛋白质。
6. 荧光染料：如SYBR Green、荧光素等，用于检测DNA扩增反应的产物。
7. 蛋白质标记试剂：如辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等，用于蛋白质的检测与标记。
三、细胞生物学试剂1. 细胞培养基：提供细胞生长所需的营养物质和环境，如DMEM、RPMI-1640等。
2. 胰蛋白酶：用于细胞消化，从培养基中解离细胞。
3. 乳化液：用于制备细胞内器官的离心悬液，进一步进行细胞分析。
4. 细胞凋亡检测试剂盒：用于检测细胞凋亡（程序性细胞死亡）。
5. 细胞增殖试剂盒：用于检测细胞增殖情况，如MTT法、CCK-8法等。
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制一.常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO孵箱（孵育培养物）、2水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。
二.无菌操作无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。
2.CO孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者20.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75％酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。
3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。
三.器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：(1)新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。
2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。
细胞培养各种培养基简介
DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基如MEM和添加剂如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子组成,培养基的配方一直在改进,其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等;一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液BSS基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质;最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13种必须氨基酸、8种维生素;而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸,维生素的范围亦很广,另外常规含有无机盐和代谢添加剂例如核苷酸;MEM/F12 这两种培养基各取1/2,形成神经生物学最通用的培养基;Dulbecco`s改良培养基——DMEM,现应用于快速生长的细胞,同MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍;选择某种培养基,应仔细了解成分表,应知道大多数情形下培养基都有不足;例如,有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸,而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域,但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言,则并非最佳选择,特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时;F12中含有硫酸亚铁,据报道也有神经毒效应;在所有这些培养基中,谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度,这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源;对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸若培养基中这两种物质缺乏时;MEM与F12均要用5%的CO2来平衡,DMEM 含更高浓度的NaCO3,要用10%的CO2来平衡,当然也可以在较低CO2浓度下使用;这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的,但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果;原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐,以解除需要高浓度CO2培养环境的限制;实际操作中并非如此简单;显然,溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的;Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长,该培养基采用了与众不同的BSS作基础,它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力,培养基中使用半乳糖作碳源,以阻止培养基中乳酸形成,少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生;这一培养基的优点是明显的,特别是在保持较高CO2有困难时,例如在长时间的显微操作及生理学研究中;L15培养基已用来成功的培养了外周神经元,但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过;二、血清细胞在单纯的基础培养基中不能存活,在特殊类型的细胞培养中必须提供某些痕量营养物质及生长因子才能使细胞得以生长并维持生长状态;基础培养基常常要添加血清,血清终浓度多为5~20%;特殊用途的血清来源须用经验确定,广泛应用的血清种类有马血清与胎牛血清;胎牛血清中富含有丝分裂因子,常选其作增殖细胞用的血清,也用于细胞系和原代培养;而马血清常常用来作有丝分裂后的神经元培养;然而,很多人也将胎牛血清用于神经型血清；人类的胎盘血清,亦曾用于神经组织的器官类型的培养,也用在一些特殊培养种类中;血清的不同批号含有不同的成分,所以许多人发现,应该在使用前对血清进行测试;大多数试剂商提供样品,所满意的批号即可选用,这样可以一次得到足够一年用量的血清,血清在使用前通常在56℃加热30分钟,这一过程称为灭活;三、无血清培养基1979年神经细胞培养出现了一个重要进展,用化学添加剂即可维持神经细胞存活与生长而不需要在培养基中添加血清;其工作基础是用合适的激素、营养物和促贴壁的物质的组合置换培养基中的成分,最后找到了适合大多数细胞培养的试剂配方,该配方称为N2,专门用于神经细胞培养,最早是用在B104大鼠神经母细胞瘤细胞系的培养;它的基础培养基是1：1的DMEM与H12的混合液,添加了胰岛素、转铁蛋白、黄体酮、腐胺和硒;胰岛素和胰岛素样生长因子对于大多数类型细胞的存活和生长有重要作用,硒是谷胱甘肽产生的合作因子,可能有助于过氧化物和超氧化物的水解,有报道说还能防止细胞的光照损伤;随后的其他配方如N1N3则含有较低浓度的转铁蛋白;未料到的是上述配方构成的培养基可以支持神经母细胞瘤细胞系快速增殖,随后又发展了能支持原代培养的各种神经元生长的培养基,这种培养基在许多实验室里已取代了有血清培养;在某些培养方案中,细胞直接进入无血清培养,这样的培养基可以消除来自血清的不均一性;更为重要的是,它们可用来检测生长因子以及其他促进神经元存活或生长的因子,或者用来检测那些可保护神经元免遭环境毒物损伤的制剂;专用于神经元的培养基在某些培养环境中还可以减低非神经元细胞的增殖,故可使神经元纯化;血清中含有的组分,例如血清蛋白,可作为代谢毒物清除剂使用并能聚集于培养基中;当缺乏这些成分时,如神经元在无血清培养基中生长时,特别容易为过氧化物及自由基伤害,这已被许多研究者注意到了;过氧化物酶以及超氧化物歧化酶可阻止培养基中过氧化物和超氧化物的累积,有报道讲可以促进低密度培养细胞的存活;有学者发现细胞存活可为氧分压的下降而促进;因而,无血清培养基的配方常含有抗氧化剂的试剂;例如,维生素E和丙酮酸,可作为过氧化物清除剂使用;上述这些影响在高密度培养时变小,特别是神经元与胶质共培养时,它们可以吸收和代谢神经元毒性物质如谷氨酸;应该注意,尽管无血清培养基是有化学限定性的,但在培养过程中它仍有变动,培养起始时可能有些物质缺乏,而后细胞的产物可能积累,从而使培养基的成分改变;这其实是有另一方面的好处,即条件培养基已培养过细胞的培养基的形成,条件培养基常常用来增加神经元和胶质细胞的发育;生长因子绝大多数哺乳类胚胎神经元有严格的营养要求,若不能提供适宜的生长因子或合适的因子组分,将会使绝大多数神经元在体外培养的数天中死亡;解决这一问题有两条思路,一是让培养细胞提供自己的营养因子,二是在培养基中加入纯的生长因子;如果细胞混合物能在高密度时生长,所需的生长因子便会积累到可观的数值,尤其当培养基很少变化时;若某种生长因子积累,而最后促使所需要的细胞类型能够生长;但是,这种对营养生长因子自身倚赖性亦有弊端,因为通常在混合细胞群体中细胞很难有同比例增殖,某些细胞会因生长条件的贫乏而受限制;另外,这种方法只能进行相当高密度的细胞培养;因为培养基的条件在细胞的较低密度时变的不够有效;不过某些时候纯化神经元群体的低密度培养可用条件培养基经过了高密度培养进行,或在胶质上生长的神经元所用过的培养基来支持;满足神经元营养需求的第二条途径是向培养基中加入生长因子;通常用于组培的通用适宜因子是神经生长因子NGF;不过,只有少数对这种蛋白质有反应的细胞类型的细胞才能生长;许多PNS类型的神经元在离体状态时表现出简单的营养需求,只需提供单一的营养因子就足以使其在低密度时增殖;例如,大鼠交感神经元仅需NGF即能存活,在其生存期间,这些神经元可在严格局限条件下生长好几个月即在无血清培养基中、或缺乏胶质细胞、或在化学限定基质上;有证据表明NGF是活体中交感神经元存活的生理调节因子;然而,交感神经元也对来自胶质细胞的神经营养因子GDNF有反应,还有NT3、LIF与CNTF也对其有作用;在不产生GDNF 或NT3的动物中,交感神经元会有损伤;在离体与活体营养需求之间的差别或许可以用在不同环境中NGF含量和分布的不同来解释,培养中的NGF弥散在整个环境中,而在活体内,大部分区域的含量是有限的;因此,NGF的重要性在于其合适的浓度;尽管在大多数实验中已经习惯了营养因子的最大效应使用量,其他营养因子的协同效应在亚优剂量下更容易观察到;此外,高浓度的营养因子可使细胞更能抵抗毒剂以及其他压力;相应的,低浓度的营养因子可能用来检查表现型,例如对自由基或氨基酸的毒性刺激剂量的反应;有许多其他的PNS培养系统只需单一营养因子就可使有实用价值的细胞保持在一定比例,广为人知的有雏鸡睫状自主神经节神经元和大鼠背根神经节感觉神经元;不过,这些模型也有局限性;例如,培养中的睫状神经节的神经元加入CNTF时,超过90%的神经元能存活一个很长时期,但并未有迹象表明它属于内源的靶细胞来源的营养因子,而是有争论的相关分子,GPA,扮演了这一角色;大鼠背根神经节含有好几种细胞群体,其中小细胞群、包括nocioceptive cell,对NGF有反应,但其他神经元,例如大细胞群中的proprioception 却对不同的神经营养因子有反应;因此,在大多条件下培养物的生长并不能忠实反映亲代群体的所有特性,这一问题在CNS的细胞培养中特别突出,因为已有的经验表明,没有一种培养基能适合于所有类型及亚类的神经细胞的生长;现有的证据已表明,CNS神经元的营养需求比PNS的更复杂;对脊髓运动神经元与视网膜节细胞神经元的研究表明,这些神经元与外周神经元相比能对更为广泛的营养因子起反应;例如,至少发现了15种不同的分子可在离体条件下增加神经元的存活;而且,已观察到运动神经元与视网膜对任何单独的营养因子的存活反应,与PNS中所观察到的典型反应相比,都要小得多;因此,大多数影响运动神经元及视网膜节细胞的营养因子仅仅只能支持神经元的亚群,而神经元的最佳存活要求诸多因子的结合;在视网膜节细胞的培养中,因子的最佳组合如BDNF、CNTF、IGF、bFGF包括了来自不同生长因子家族的代表;这一结果的普遍性尚待进一步的证实,但敲除单一的营养因子基因之后,没有表现出对CNS大多类群的神经元的存活产生太大影响,这一观察与上述的事实是一致的;现已知少突胶质细胞的长期存活也需要众多营养因子的相互作用;四、抗生素在细胞培养中最常用的抗生素是青霉素常用浓度是25~100ui/ml与链霉素25~100μg/ml;这两种抗生素常混合使用;在一些实验室里,它们常规加入所有的培养基中;庆大霉素10~100μg/ml通常有广谱抗菌效应,并具有溶液稳定性,故也被一些实验室使用,特别是当有低水平的污染存在时更是这样;以上这些试剂对霉菌与酵母菌的污染均无效;尽管很多实验室在细胞系的培养基中常规加入抗生素作继代培养,但仍建议不要在原代培养中加入抗生素,其理由之一是获得的细胞是无菌的,原代培养时的细菌污染很少发生;其次,尽管认为抗生素对细胞代谢的影响可忽略,但最好避免使用它们,以免细胞生长环境的不稳定;最重要的是要意识到培养中主要污染物的类型,它们通常暗示了问题的来源;五、抗有丝分裂剂某些DNA合成抑制剂对分裂细胞有毒,但对没有DNA合成的细胞仅有轻微影响;由于神经元通常缺乏DNA合成能力,因此对抗有丝分裂剂没有多大反应;这样的试剂常常用于神经元的培养,以消除或减少非神经元群体;若要杀死所有的非神经元细胞,可以先加入血清或生长因子来保证有高比例的非神经元细胞进行DNA合成,此时再加入抗有丝分裂剂;但是,某些细胞在它的细胞周期的某些时相时对抗有丝分裂剂是不敏感的;不过,可以重复的将抗有丝分裂剂使用于增殖的细胞群体;在CNS神经元的培养中抗有丝分裂剂常常在星形细胞形成单层后加入,此时,星形细胞由于接触抑制而终止了DNA的合成即细胞停止增殖,它们不会因抗有丝分裂剂的加入而死亡;原代培养中用这种方法阻止成纤维细胞的过度增殖是十分必要的;有两种抗有丝分裂剂常用于神经元的培养：Fluorodexyuridine,是胸苷合成酶抑制剂,一般使用浓度为～10μM;尿苷10μM也常使用,可阻止不分裂细胞的RNA合成;另外,阿糖胞苷也常被使用,其使用浓度为5～50μM;使用任何一种抗有丝分裂剂,都必须考虑它的神经原毒性,应该确定最低效应的使用浓度;阿糖胞苷在很低的浓度下,也会对某些种类的神经元有毒性,可以造成特定神经原的死亡;其他的抗有丝分裂剂尚未表现出这种毒性;六、培养的保持培养物是应该保持在孵箱中的;孵箱可以自动将O2与CO2混合很快达到培养基的设计要求,空气中的氧浓度比血液和脑脊液中要高得多;对于某些细胞的生长,包括神经原,应使氧含量处在一个较低的水平;可以用孵箱达到这个标准,但这样的孵箱并未广泛使用;高湿度可避免培养皿中培养基的蒸发,保持孵箱中的湿度通常是在箱底部放上一大盆水,这水应该经常换,乘水容器应经常消毒以防霉菌生长;若孵箱曾被霉菌孢子严重污染过,那么要想完全去除污染则会非常困难;当培养物必须要长期保持在孵箱中时,应采用较少培养基的瓶、皿,且将盖子盖紧以避免蒸发,或采用相应的按比例供空气的孵箱;温度的精确调节应定期检查,孵箱温度常设置为37℃或较低温度;细胞在低温时可有较长时间的忍耐限度,但当温度升至39℃时,几小时内即死亡;维持培养物的最佳方案常常改变;例如培养胶质细胞时,要经常换液以使其增殖达到最大;而在培养某些神经原时,则要求尽可能少的换液,神经原在两次换液之间的条件下长的最好;大脑皮质的培养要求在不换液的情形下维持一个月以上;另一方面,象海马神经原那样的细胞,倚赖于条件培养基,若换液太频繁细胞就会衰退,此时,可采用1/3或1/2换液的方式;。
脂肪细胞培养试剂
脂肪细胞培养所需试剂1、低糖-DMEM、高糖DMEM/F12 (1∶1)各2袋2、胎牛血清10%1瓶3、胰蛋白酶0.25%4、0.1%胶原酶Ⅰ5、1μmol.L-1地塞米松、50μmol.L-1吲哚美辛（200）、0.5 mmol 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX）和胰岛素(Sigma, USA)链霉素、青霉素、10μmol.L-1胰岛素6、25ml培养瓶20个7、6孔培养板8个、24孔板4个8、PBS、酒精、无菌棉球、油性记号笔、封口膜10、油红O11、4%多聚甲醛、苏木精眼科剪、眼科镊各2把、200目筛网2个、150目筛网2个、CO2培养箱、25ml 离心管15支、吸管40支（长嘴）、5ml塑料带盖离心管10支、37℃水温摇床、培养皿5个、50ml烧杯4个所需配制的试剂1、PBS液：2、DMEM普通培养基：3、成脂诱导培养基4、0.075%胶原酶5、0.5%胰蛋白酶方法1、MA 提纯及去分化手术切除的腹部脂肪5ml, 冷冻，在2h内将脂肪组织送至实验室。
PBS反复冲洗，在通用培养液剔除血管，剪碎。
PBS 反复冲洗，置于 0.075% Ⅰ型胶原酶 37℃恒温摇床消化 45 min，期间反复震荡混匀，等量体积的完全培养基（高糖 DMEM、10%FBS、1% 青、链霉素）中和后，200 μm 尼龙网过滤，滤过物以离心半径 4 cm、180r/min离心10min，收集第2层脂肪细胞用200μm和150μm尼龙网过滤，去除其他细胞污染。
采用 Tholpady 等 [11] 方法收集人成熟脂肪细胞（mature adipocytes，MA）接种于 25 cm2培养瓶，每瓶（0.5 ～ 1.0）×105个细胞，瓶内充满完全培养基，将培养瓶翻转倒置于 37℃、5%CO2 培养箱内，使漂浮的脂肪细胞接触培养瓶底；48 h 后翻正培养瓶，吸出漂浮的 MA 悬液，接种于新的 25 cm2 培养瓶，进行新一轮天花板贴壁培养；48 h 后重复上一过程，以清除成纤维细胞状贴壁细胞；重复该过程至倒置相差显微镜下观察无成纤维细胞状细胞污染为止。
细胞培养常用试剂配制
常用试剂配制
PBS溶液配制：用电子天平准确称取NaCl 8.0 g，KCl 0.2 g，KH2P04 0.29 g，Na2HP04—12H20 1.42 g溶于800 mL的超纯水中，用磁场搅拌器搅拌至溶解后调节pH值为7.2～7.4，然后定容至1L。
置于高压灭菌锅中灭菌30min，冷却到室温后分装，于4℃冰箱冷藏备用。
DMEM／12高糖培养液：将袋装的DMEM／12粉末溶于800ml的超纯水中，同时加入3.79碳酸氢钠，66mg青霉素钠和100mg的硫酸链霉素，用磁力搅拌器充分混匀，调节pH值为7.2-7.4，然后定容至1L。
用孔径为0.229μm的滤膜过滤除菌，分装后置于4℃冰箱冷藏备用。
用于培养细胞的培养液为上述DMEM／12高糖溶液中加入10％-20％(体积比)的胎牛血清。
0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA消化液：准确称取0.25g的Trypsin和0.02g的EDTA，用PBS在容量瓶中定容至100ml，调节pH值为7.2-7.4，用孔径为0.22μm的滤膜过滤除菌，用2mL的离心管分装，冻存于-20℃冰箱备用。
双抗：80mL的超纯水中加入80万u的青霉素钠和100万u的硫酸链霉素，0．22μm的滤膜过滤除菌后，用2mL的离心管分装，冻存于-20℃冰箱备用。
二甲亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)冻存液：将DMSO、FBS和DMEM／12按1：3：6的比例混匀，现配现用。
细胞培养中的常用试剂
1.pbs缓冲液PBS是磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline）一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用。
它是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲液，主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广；而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。
如有需要PBS还可以补加1 mmol/L CaCl2和0.5 mmol/L MgCl2，以提供双价阳离子。
注：PBS不是磷酸缓冲液（phosphate buffer solution，PB）保存方法高温高压灭菌后置于4摄氏度冰箱保存待用。
PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 10mmol/L， KH2PO42mmol/LPBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用，具体试剂一般也有不同的比例配方，在针对性上就有了更好的效果。
1x PBS缓冲液就是0.01M的PBS,可直接使用,2x PBS 就是2倍浓度,使用时稀释一倍使用。
0.1M的PBS一般不用来配置缓冲液,用于其它用处。
作用PBS是磷酸缓冲盐溶液的简称，不仅伪狂犬病毒要用它稀释，一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。
原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，蒸馏水不具有盐平衡作用，可以破坏生物蛋白的结构及生物特性；生理盐水不具有调整pH的作用，对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应，所以使用PBS是首选。
PBS也不是万能的，有的生物活性物质需要的条件比PBS还要高，就需要在平衡缓冲液中加入2.DMEM培养液DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。
与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。
高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等 DMEM 是 dulbecco's modified eagle medium的缩写，所以其特点主要包括以下：（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等；（2）维生素含量为依格尔培养基的4倍；（3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸；（4）含有微量的铁离子。
细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本
细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本（一）胰酶的配制：（浓度为1‰，1L）1、认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。
2、称取牛胰蛋白酶1.0g；EDTA 2 g；3、用超纯水溶解；4、磁力搅拌器搅拌至胰酶完全溶解，溶液变得澄清；5、超纯水定容至1L；6、不锈钢滤器加0.22um滤纸两张高温灭菌后，在超净工作台过滤；7、在血清瓶中加入少量滤好的胰酶，置于细胞培养箱中检测是否染菌，其余置于4℃待用；8、过滤后洗净滤器再次灭菌，避免残留的胰酶降解蛋白。
（二）DMEM配制：1、所需试剂及材料：试剂：DMEM干粉（GIBCO 10L）、超纯水（Milli-Q）、Na2CO3 （Sigma）材料：10L玻璃瓶、500ml盐水瓶（灭菌）、0.22um滤膜、滤器（事先放好两层滤膜并高压灭菌）、磁力搅拌器大号搅拌子蠕动泵胶塞2、操作步骤：(1)10L玻璃瓶洗涤，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。
(2)在10L玻璃瓶中加入超纯水9.5L，将DMEM干粉倒入，在磁力搅拌器上搅拌溶解。
(3)按照3.7g/L 加入Na2CO3 。
(4)调节pH值至7.2~7.4。
(5)过滤分装，并注明名称及配制日期。
此过程注意无菌操作！(6)最后用血清瓶取10ml左右置于细胞培养箱中检测是否染菌。
(7)清洗滤器，10L玻璃瓶，软管，将所有实验器具归位。
（三）1640、MEM培养基的配制同上，Na2CO3的用量见包装说明（四）细胞间100×双抗（青霉素、链霉素）的配制青霉素及链霉素配制的终浓度为1万单位/毫升。
配制的步骤以400ml为例：1.认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。
2.准备5瓶青霉素（80万单位/瓶）、4瓶链霉素（100万单位/瓶）。
3.加入1-2ml细胞间专用PBS进入青霉素、链霉素的瓶子内，浸泡后吹吸数次至全部溶解，溶解后的液体吸入配制容器内。
细胞培养操作步骤
细胞培养操作步骤培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml冻存液的配置：DMSO18ml+胎牛血清2ml。
依次比例酌量配置。
超净工作台常规配置移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精灯1盏，液器1台，斜架1台，酒精喷壶1个，酒精棉球缸1个，污缸1个，常规耗材：培养瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），枪头（1ml、200μl、10μl），培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，保种管所需试剂：gibco高糖培养基，胎牛血清，双抗，DMSO，胰酶，苯扎溴氨，75%酒精……实验前准备：所需的各项高压后的耗材放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。
首次传代前细胞的复苏，首先用一大烧杯盛满37℃的温水放于液氮罐旁边，待细胞株取出后留上端1/3于37℃水面上尽最大速摇动管使其在2min内迅速融化。
若种管顶部含有冻存的细胞液在摇动期间用力甩动使其降于管底后再摇动。
这一过程可在超净工作台外操作。
实验步骤一、原代细胞的培养1.紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。
2.将所需的培养基确保瓶身干净后放于工作台面内，点燃酒精灯，将培养基瓶口用酒精棉球擦拭后，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖，分别放于酒精灯的两侧。
特别是将培养基瓶放于斜架上，瓶口对准酒精灯，且放在距离酒精灯最近的位置，瓶盖置于酒精灯的另一侧。
3.取1个高压后的新培养瓶，瓶口在酒精灯上消毒2-3次，旋开后分别再次消毒瓶口和瓶盖2-3次分别放于酒精灯两侧，把保种管在超净台外用酒精棉球擦拭下2/3后拿进超净台内在酒精灯上消毒保种管口2-3次放于台面左手边，取1ml移液器快速移动在酒精灯上消毒1-2次，然后再装上枪头吸取保种管内的细胞液，悬空移入培养瓶内。
4.拿出1支高压后的5ml定量移液管，在酒精灯上灼烧尾部后装于电动移液器上，再次放于酒精灯上灼烧整个定量移液管管身2-3次，悬空进入培养基瓶内吸取4ml培养基再悬空移入培养瓶内，将培养瓶瓶口和瓶盖在酒精灯上消毒2-3次后拧紧平放，在瓶身做好实验标记。
增强型细胞贴壁试剂使用说明书
增强型细胞贴壁试剂使用说明书一、产品介绍增强型细胞贴壁试剂是一种帮助细胞在培养皿内更好地附着于基质表面的试剂。
该试剂通过提供一种适宜的环境，可以增强细胞与基质的黏附能力，提高细胞的存活率和增殖能力。
二、产品成分增强型细胞贴壁试剂主要成分包括细胞黏附蛋白、细胞生长因子和培养基成分等。
其中的细胞黏附蛋白可以为细胞提供一个黏附的基础，细胞生长因子可以促进细胞的增殖和存活。
三、适用范围增强型细胞贴壁试剂适用于多种细胞类型的培养，包括但不限于肝细胞、心肌细胞、肾细胞等。
适用于常见的培养基体系，如DMEM、RPMI1640等。
同时，该试剂可以用于2D和3D细胞培养。
四、使用方法1.准备工作：a.将增强型细胞贴壁试剂放置在室温下静置，使其平衡至少30分钟。
b.用无菌方法将细胞培养基室温预热至37摄氏度。
2.增强细胞贴壁：a.从细胞培养冻存物或已培养细胞中获取所需细胞，根据实验需求进行细胞数目和浓度的调整。
b.将所需细胞分装至含有增强型细胞贴壁试剂的培养基中，每毫升培养基中添加适量的增强型细胞贴壁试剂。
根据实验需求，可以适量提高或降低试剂浓度。
c.轻轻摇晃培养皿，使细胞均匀分布在培养皿表面。
3.培养条件：a.将培养皿置于37摄氏度、5% CO2的细胞培养箱中培养。
b.根据细胞类型和实验需求，调整培养基的配方和培养时间。
5.试剂存储：a.增强型细胞贴壁试剂应存放在4摄氏度以下，避免阳光直射和冻结。
b.试剂开封后建议尽快使用，并避免频繁开封。
如需多次使用，请采取科学的保存方法。
六、注意事项1.本试剂仅供科研使用，不可用于临床诊断。
2.使用前请将试剂在室温下静置至少30分钟。
3.试剂使用过程中需注意无菌操作，避免细菌和其他污染物的污染。
4.使用前请阅读相关文献资料，根据实验目的和细胞类型确定试剂使用的最佳浓度和时间。
5.如试剂外观异常或过期，请勿使用。
6.使用过程中如有不适或异物入眼，请及时清洗，并就医处理。
七、产品规格增强型细胞贴壁试剂提供不同规格的包装，包括3毫升、10毫升和20毫升等。
实验总结-细胞培养方法
一、培养细胞常用配置培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml冻存液的配置：10 % DMSO + 90%依次比例酌量配置。
超净工作台常规配置移液器1套（μl、20μl、200μl、1ml），酒精灯1盏，液器1台，斜架1台，酒精喷壶1个，酒精棉球缸1个，污缸1个，常规耗材：培养瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），枪头（1ml、200μl、10μl），培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，冻存管所需试剂：培养基，胎牛血清，双抗，DMSO，胰酶，75%酒精……实验前准备：所需的各项高压后的耗材及污物缸放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。
培养基及胰酶恢复常温后使用，可37℃水浴5-10min二、细胞复苏步骤：1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。
2. 培养液（DMEM），恒温水浴箱37℃预热20min，备用。
超净台内准备一支15ml离心管备用。
3.将所需的培养基确保瓶身干净后酒精消毒放于工作台面内，点燃酒精灯，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后需再次分别消毒瓶口和瓶盖。
4. 从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入37℃水浴中，快速摇晃，直至冻存液融化至黄豆粒大小后迅速取出。
5. 将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。
6. 取出2个培养皿并做好标记（复苏日期等），提前加入5-10ml培养液；离心结束后用1ml培养液悬液混悬沉淀细胞后分别加入培养皿内。
7. 将培养基瓶口和瓶盖消毒2-3次后拧紧，熄灭酒精灯，整理实验台面，取出实验试剂及污缸等，关闭超净工作台。
8. 将培养瓶放入培养箱内培养注意事项：1. 取细胞的过程中注意带好防冻手套。
此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。
细胞培养常用缓冲配制及保存
细胞培养常用缓冲配制及保存（所需水全用合格的去离子水）１）Hank's液用途：用于保存标本产品编号：HA2004Y 产品规格：500ml 价格：120.00 配制：500ml (ddH2O)称量：NaCl……………………………….. 4g KCl………………………………………… 0.2gMgSO4.7H2O ……….……….0.1g Na 2HPO4.12H2O.............. 0.067 gKH2PO4 ....................0.03 g CaCL................................0.07 g葡萄糖 .......................0.5 g注意：A：在300-400ml水中依次溶解NaCl、KCl、MgSO4.7H2O、Na2HPO4.12H2O、KH2PO4、葡萄糖为A液。
B：在约50ml水中溶解CaCL2为B液。
C：将B液缓缓倒入A液中，同时搅拌，为C液。
D：在C液中加入1%酚红1ml，混均，加水至500ml，该液即为Hank's液，此液偏酸。
消毒：10磅10分种高压消毒（消毒时压力波动不能大，否则葡萄糖会沉淀出来，消毒完毕,须等冷却方打开高压锅，以免液体冲出。
）保存：4度。
使用：在使用时加入5.6% NaHCO3调PH至7.2左右，然后加入10%（体积/体积）青链霉素液。
2）5.6%NaHCO3液；用途：调节溶液的PH值。
配制：50ml称量：NaHCO3…………………2.8g注意：在约40ml水中溶解NaHCO3，再加水至50ml即可，NaHCO3溶解缓慢，故可适当加热。
消毒：10磅10分钟高压消毒。
保存：4度。
3）1%酚红液；用途：作溶液的指示剂。
配制：100ml称量：酚红………………………….1g注意：A）在于1N NaOH 2ml溶液中溶解酚红；酚红较为困难，所以在研钵中进行，不断研磨至溶。
细胞培养专用的试剂和耗材介绍
细胞培养技术也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。
不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术。
细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。
细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。
通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。
因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。
细胞培养泛指所有体外培养，其含义是指从动物活体体内取出组织，于模拟体内生理环境特定的体内条件下，进行孵育培养，使之生存并生长。
细胞培养工作现已广泛应用于生物学、医学、新药研发等各个领域，成为最重要的基础科学之一。
细胞培养专用试剂
细胞培养专用耗材。
3.细胞培养的基本条件-07资料
1）无菌室
◆
为无菌操作而设计的空间，包括操作间和缓冲间。
◆
操作间又可分为细胞室和感染室
缓冲间能保护无菌间的无菌环境，可兼有更换无 菌衣帽和进行一些简单操作（如放孵育箱、离心 等）的功能。
◆
◆
整个面积约10m2，通入经滤过的无菌空气，与周 围实验室比较应保持正压，常备紫外灯，室内其 他陈设尽量减少。
常用的消化液： 胰蛋白酶 依地酸二钠（disodium edetate,EDTA-2Na） 胶原酶
（1）胰蛋白酶
◆
胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽
健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨 架，从而使细胞分离。
◆
胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定
限度会损伤细胞。 胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无 Ca2+ 、 Mg2+ 的PBS缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25 ％ 。用滤器过滤除菌。
◆二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞生长繁
殖所需成分，它在细胞培养中的主要作用在于
维持培养基的PH值。
◆大多数细胞的适宜PH为7.2-7.4，偏离这一范
围对细胞培养将产生有害的影响。但细胞耐酸 性比耐碱性大一些，在偏酸环境中更利于细胞 生长。有资料显示，原代羊水细胞培养PH6.8 时最适。
3）抗菌素溶液：
素的影响
具体工作： 器皿洗刷 孵育 细胞传代
试剂和培养液的配 制
制备细胞
细胞的冻存、复苏和运 输
无菌观念
◆必须树立无菌观念，坚持一贯的无菌操作，进
行无菌处理。
◆实验室应分为无菌室、准备室和洗刷消毒室，
除洗刷消毒室须分隔开外，无菌室和准备室可 在同一房间内，但需划分出不同功能区，即无 菌操作区和培养、观察区。
细胞培养-Protocol
细胞培养是一项常用的生物技术，其原理是基于细胞在适当的培养条件下能够维持存活和增殖的能力。
通过细胞培养，可以获得大量的细胞样本，用于研究、药物筛选、疾病治疗等应用。
以下是细胞培养的原理、所需试剂和耗材、实验仪器、准备工作、实验方法、注意事项、常见问题及解决方法。
一、原理细胞培养的基本原理是模拟细胞在生物体内的生长环境，提供细胞生存和增殖所需的基本条件。
这些条件包括适当的温度、湿度、营养物质（如氨基酸、葡萄糖、脂肪酸等）和气体环境（如氧气、二氧化碳等）。
通过提供这些适宜的条件，细胞可以在体外环境中维持生存和增殖。
细胞培养中涉及的关键生物学过程包括细胞的贴壁、增殖和传代。
细胞的贴壁是指细胞在培养瓶内附着于瓶壁上的过程，这通常发生在细胞悬液加入培养液之后。
细胞贴壁后，会开始进行有丝分裂，进行增殖生长。
当细胞数量增加到一定程度时，需要将培养瓶中的细胞传代到新的培养瓶中，以维持细胞的适宜生长密度。
二、所需试剂和耗材细胞培养所需的主要试剂和耗材包括：1.培养基：为细胞提供基本的营养物质，如胎牛血清、氨基酸、葡萄糖等。
2.添加剂：包括抗生素、抗真菌药物等，用于防止培养过程中的污染。
3.培养瓶：用于细胞的培养，有不同的规格和形状。
4.移液器：用于吸取和转移细胞悬液和培养液。
5.离心管：用于离心收集细胞。
6.过滤器：用于过滤培养液中的杂质和颗粒。
7.DEPC水：用于制备无RNA酶的水。
8.无菌操作台：用于进行无菌操作，防止污染。
三、实验仪器细胞培养常用的实验仪器包括：1.细胞计数器：用于细胞计数和细胞密度测量。
2.显微镜：观察细胞的生长情况和形态变化。
3.CO2培养箱：为细胞提供适宜的生长温度和气体环境。
4.高压灭菌器：用于消毒处理实验器材和试剂。
5.超净工作台：用于进行无菌操作。
6.分光光度计：用于测量细胞生长的生化指标，如蛋白质含量等。
四、准备工作在进行细胞培养前，需要进行以下准备工作：1.选择适当的细胞：根据实验需求选择适合的细胞，了解其特性、来源和培养条件。
细胞培养常用试剂
器材与试剂干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器等具体步骤1. 水：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。
需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.2. PBS (也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：主要用于免疫组化染色时组织或细胞的漂洗溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4·H2O 1.56g，KH2PO4 0. 2g ）倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。
用HCl或NaOH调PH到7.4。
移入溶液瓶内待消毒：将PBS倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。
注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。
3. 胰蛋白酶溶液：胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。
不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。
胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。
使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。
因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。
终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。
搅拌混匀，置于4℃内过夜。
用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。
然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
4. 0.05％胰蛋白酶－0.02%EDTA溶液称取胰蛋白酶粉末（1：250）0.05g，EDTA 0.02g，加入PBSA 100ml，0.22um微孔滤膜过滤除菌，分装，于－20℃保存。
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• 酚红在Leabharlann pH值时呈现黄色,在pH6.6至8.0间 会呈现橙色，在高pH值时呈现红色。
• 酚红只是起指示酸碱度的作用，有酚红较 方便但没有也无妨。有人主张最好不用酚 红，可能对细胞生长不利，有时也会影响 一些检测结果。
• 此外酚红有雌激素样作用，所以如果做相 关的实验最好不加。
• 对于Hank`s与D-hank`s液的配制，不同的 文献有不同的配方
其他缓冲系统
• 碳酸盐缓冲系统 • 一般细胞培养液的pH在7.0-7.4之间。由于
碳酸盐pH缓冲系统是一种生理pH缓冲系统， 大多数培养液用它来保持稳定的pH。为了 维持稳定的pH，培养箱中的二氧化碳需要 维持在2-10%之间，以保持培养液中溶解的 二氧化碳的浓度。
• HEPES缓冲系统
• HEPES，即4-羟乙基哌嗪乙磺酸
青霉素与链霉素
• 一般合称双抗。 • 青霉素主要对革兰氏阳性菌有效。 • 链霉素对许多革兰阴性杆菌作用良好
• 配制胰酶液或者是胰酶/EDTA的基础液都是 D-hanks 液，而不能使用Hank`s液。 这是 由于钙离子和镁离子会影响胰蛋白酶的活 性，也会阻碍EDTA的作用。
PBS
• 磷酸盐缓冲液
磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於
它们是二级解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲 液，pH范围最宽：
D-Hank`s液配方
• D-Hanks液
NaCl
4.5g
KCl
0.2g
NaHCO3
0.175g
Na2HPO4·12H2O
0.076g
KH2PO4
0.03g
葡萄糖
0.5g
0.4%酚红
2.5ml
将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中，最
后加双蒸水定容至500ml，以5.6%NaHCO3调整
pH 值至7.4，4℃冰箱保存备用。
• Hank’s液 • D-Hank`s液 • PBS • EDTA • 胰蛋白酶 • 青霉素、链霉素
Hank`s液与D-Hank`s液
• Hank`s液是常见的平衡盐溶液(BSS)之一。 D-Hank`s液则是无钙镁离子的Hank`s液 （也有资料认为除了不含钙镁离子之外也 不含葡萄糖）。BSS与细胞生长状态下的 pH值、渗透压及无菌状态一致，且配方简 单，是组织培养基本用液，常用于配制培 养基及其他用液，或洗细胞等，细胞在这 种BSS中可生存几个小时。
• 我们可以看到，两者最主要的区别就是Dhank`s液中没有钙镁离子。
Hank`s液与D-Hank`s液
用途上的比较
• Hank`s液是组织培养基本用液，常用于配 制培养基及其他用液，或洗涤组织、细胞 等。细胞在Hank`s液中可以在一段时间内 维持一定的活力。另外Hank`s液还可以用 于终止EDTA的作用。
赖的细胞黏着糖蛋白 ）。而EDTA可以通过 螯合金属离子，破坏Ca2+或Mg2+依赖性的 细胞黏着。 • 胰蛋白酶
水解细胞间的蛋白质，方便形成细胞悬 液。
• 消化细胞时可以只使用胰蛋白酶，也可以 胰蛋白酶与EDTA同时使用。
• 胰蛋白酶的消化作用可以通过加入血清终 止。
• EDTA的作用可以通过加入Hank`s液终止。
• HEPES在pH7.2-7.4之间有很强的缓冲能力， 当透气的培养器皿被拿到二氧化碳培养箱 外面的时候，由于空气中二氧化碳浓度很 低，培养液中碳酸盐缓冲系统就会失去效 果，这时候HEPES缓冲系统就能继续保持 pH的稳定。
EDTA与胰蛋白酶
• EDTA，常用的阳离子螯合剂。 组织细胞间存在钙黏蛋白（一类Ca2+依
•
NaH2PO4： pKa1＝2.12， pKa2＝7.21
•
Na2HPO4： pKa1＝7.21， pKa2＝12.32
• 配酸性缓冲液： 用 NaH2PO4，pH＝1～4，
• 配中性缓冲液： 用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8，
• 配碱性缓冲液： 用 Na2HPO4，pH＝10～12。 因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，一般情况下用钾盐比
钠盐好（使用SDS-PAGE时除外）。
PBS与Hank`s液的用途区别
• PBS：磷酸缓冲盐溶液——具有pH缓冲作用的等 渗盐溶液。多用于非活体。
• Hank`s：平衡盐溶液——无机盐和葡萄糖浓度接 近大部分动物（植物）细胞的水平，可作为动 （植）物细胞短期培养（保存）。多用于活体。
• Hank`s液中盐成分较PBS复杂，且有葡萄糖，可 为细胞提供简单的营养，而PSB中只有磷酸根， 钠，钾，氯离子，只是最简单的盐平衡缓冲液， 不能为细胞提供暂时的营养。
Hank`s液配方
• Hank`s液（原液）
原液甲： NaCl
160g
KCl
8g
MgSO4·7H2O
2g
MgCl2·6H2O
2g
上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。
CaCl2 2.8g溶于100ml双蒸水
上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。
原液乙： Na2HPO4·12H2O
3.04g
KH2PO4
1.2g
葡萄糖
20g
加入800ml双蒸水，溶解。
0.4%酚红溶液
100ml
上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。
使用时甲，乙原液按下列比例配成 Hanks 液
使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，20min灭菌，放4℃冰箱保 存，使用前用NaHCO3调整pH值。