最新 补体介导的细胞毒试验
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细胞。
实验方法
1、小鼠脾细胞悬液的制备:
1）4～6周龄小鼠拉颈椎处死,取出脾脏放入已加入
4ml左右的冷Hanks’液的平皿中，用100目的不锈钢
网研磨后，经尼龙布过滤，放入试管。 2）离心1000 rpm 5分钟，洗1次。 3）将沉淀重悬于6ml冷Hanks’液中，配成1×107/ml 细胞浓度。
补体介导的细胞毒试验
实验原理
带有特异抗原的淋巴细胞(靶细胞)在体外与相
应抗体结合后,•Baidu Nhomakorabea在补体的参与下,引起靶细胞的死
亡。靶细胞的杀伤与否可借助染料(伊红y)排斥现象
判定。利用细胞毒试验可以检查细胞膜抗原,亦可鉴
定抗体的特异活性。 抗原是小鼠脾细胞，在体外利用抗小鼠脾细胞
抗体通过补体的协同作用,可杀伤95%以上的小鼠脾
2、取试管3支,标明顺序，按下表操作：
试验材料
试验管
补体对照
细胞对照
1×107/ml小鼠脾细胞
抗小鼠脾细胞抗体
0.1ml
0.1ml
0.1ml
---
0.1ml
---
Hanks’液
1:3补体(经脾细胞吸收) 1%伊红-Y染料
--0.1ml 2d
0.1ml
0.1ml 2d
0.2ml
--2d
混匀, 37℃, 30分钟
混匀,室温, 2分钟,滴片加盖玻片镜检
实验结果
高倍镜下计数200个细胞中死细胞的百分数。死 细胞呈红色,无光泽且肿胀变大;活细胞不着色,有光泽 且形态正常。
试验管死细胞%-细胞对照管死细胞% 阳性率= -------------------------------------------- ×100% 100%-细胞对照管死细胞%
实验方法
1、小鼠脾细胞悬液的制备:
1）4～6周龄小鼠拉颈椎处死,取出脾脏放入已加入
4ml左右的冷Hanks’液的平皿中，用100目的不锈钢
网研磨后，经尼龙布过滤，放入试管。 2）离心1000 rpm 5分钟，洗1次。 3）将沉淀重悬于6ml冷Hanks’液中，配成1×107/ml 细胞浓度。
补体介导的细胞毒试验
实验原理
带有特异抗原的淋巴细胞(靶细胞)在体外与相
应抗体结合后,•Baidu Nhomakorabea在补体的参与下,引起靶细胞的死
亡。靶细胞的杀伤与否可借助染料(伊红y)排斥现象
判定。利用细胞毒试验可以检查细胞膜抗原,亦可鉴
定抗体的特异活性。 抗原是小鼠脾细胞，在体外利用抗小鼠脾细胞
抗体通过补体的协同作用,可杀伤95%以上的小鼠脾
2、取试管3支,标明顺序，按下表操作：
试验材料
试验管
补体对照
细胞对照
1×107/ml小鼠脾细胞
抗小鼠脾细胞抗体
0.1ml
0.1ml
0.1ml
---
0.1ml
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Hanks’液
1:3补体(经脾细胞吸收) 1%伊红-Y染料
--0.1ml 2d
0.1ml
0.1ml 2d
0.2ml
--2d
混匀, 37℃, 30分钟
混匀,室温, 2分钟,滴片加盖玻片镜检
实验结果
高倍镜下计数200个细胞中死细胞的百分数。死 细胞呈红色,无光泽且肿胀变大;活细胞不着色,有光泽 且形态正常。
试验管死细胞%-细胞对照管死细胞% 阳性率= -------------------------------------------- ×100% 100%-细胞对照管死细胞%