蚕豆根尖微核检测技术

3．处理
每一处理选取6-8粒初生根生长良好、根长一致的 种子，放入盛有待测物溶液的培养皿中，浸没根尖。 用自来水作对照处理，处理根尖6～24h(处理时间可 视实验需要和被测液浓度而定)。
4．根尖细胞恢复培养
将处理后的种子用蒸馏水浸洗三次，每次2-3min。 将洗净的种子再放入铺好滤纸或脱脂棉的白磁盘内， 25℃温箱中恢复培养22-24小时。
微核检测技术
一、实验目的 1．了解染色体畸变的各种类型、微核测试的原理和 遗传学在实际生活与工作中的应用范围及意义 2．学习蚕豆根尖的微核测试技术
二、实验原理
微核简称(MCN)，是真核生物细胞中的一种异常结 构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。
在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之 外、大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化 学反应性质和主核一样。
蚕豆根尖微核检测记录表
试验号
镜检日期
镜检者
片号
第一片
第二片
第三片
细胞数
各自观察的细胞 数或微核数
微核数
细胞数 微核数 细胞数 微核数
总计 平均微核千分率
放映结束 感谢各位的批评指导！
谢 谢！
让我们共同进步
目前，微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防 护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症 前期诊断等各方面。
利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试，可准确 显示各种处理诱发畸变的效果，并可用于污染程度的 监测。
三、实验材料
蚕豆种子
四、实验器具、药品试剂
实验器具： 显微镜，计数器，镊子，载玻片，盖玻片，烧杯，
9．镜检及微核识别标准
首先在低倍镜下找到分生组织区细胞分散均匀，分 裂相较多的部位，再转高倍镜观察。
微核识别标准： （1）在主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。 （2）小核着色与主核相当或稍浅。 （3）小核形态为圆形、椭圆形或不规则型。
观察3个根尖，每个根尖计数100个细胞中的微核数 并进行记录。
一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片 产生的，但有些实验也证明整条的染色体或多条染色 体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期 被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。
已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积 效应呈正相关，这一点和染色体畸变的情况一样。所 以可用简易的间期微核计数来代替繁杂的中期畸变染 色体计数。
由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各 样工业废物的排出，使人们需要有一套高度灵敏、技 术简单的测试系统来监视环境的变化。
只有真核的测试系统更能直接推测诱变物质对人类 或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是 一种比较理想的方法。
且有研究显示以植物进行微核测试与以动物进行的 一致率可达99%以上。
瓷盘等。 实验药品：
6mol/L盐酸，甲醇，冰乙酸，醋酸洋红， 氟化钠处理液：0.5mmol/L 3种浓度。
五、实验方法
1．实验材料的培育 蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量高，因而对
诱变因子反应敏感。种子成熟后，晒干贮藏于干燥器 内或4℃冰箱内备用。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
2．浸种催芽：
将实验用蚕豆种子按需要量放入盛有蒸馏水的烧杯 中，在25℃下浸泡24小时。种子吸胀后，用纱布松散 包裹置白磁盘中，保持湿度，在25℃恒温箱中催芽1224小时，待初生根长出2-3mm时，再取发芽良好的种 子，放入铺满滤纸的磁盘中，25℃继续催芽，经约3648小时，大部分初生根长至1-2cm左右，根毛发育良 好，这时即可用来进行检测了。
5．固定根尖细胞及制片(参考根尖压片法)
(1)将恢复培养后的种子，从根尖顶端，切下1cm长的 幼根。用卡诺氏液固定24h，固定后如果不及时制片， 可换入70% 的乙醇中，置4℃冰箱内保存备用。
6．酸解：
从70％乙醇中取出固定好的根尖→流水冲洗３ min→吸水纸吸干→放入盛有适量1 mol/L HCl， 60±0.5℃水浴保温的瓶中→解离10min。
7．染色 ：
解离后材料水洗3min并吸干，挑取1个根尖的乳 白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴加1～2滴染液， 染色10～15min，压片。
8．压片
在经染色的材料上加一滴染液，盖上盖玻片，覆 一层吸水纸，用带橡皮头的铅笔垂直敲打，或以拇指 垂直紧压盖片(注意勿使盖片搓动)，使材料分散压平， 便于观察。