04 动物细胞融合实验
细胞融合实验
动物细胞融合**班姓名：*** 实验时间：2013.09.16 同组者：***一、实验目的1、了解动物细胞融合的常用方法2、学习化学融合和电融合的基本操作过程3、观察动物细胞融和过程中细胞的行为和变化二、实验原理细胞融合是指在自发或诱导的条件下两个或两个以上细胞合并为双核或多核细胞的过程。
融合得到的细胞可以是同核体（成活率高），也可以是异核体（成活率低）。
融合方法有以下几种：1、病毒诱导融合（1958）原理：改变细胞膜的结构。
2、化学诱导融合（1975）以聚乙二醇（PEG)为例。
原理：结构相对稳定；相似相溶，亲脂剂扰乱破坏酯双分子层的分子结构；与氢键结合导致细胞脱水。
分子量越大，融合率越高，PEG分子量一般400~6000，科研中多使用800~1000，本实验使用4000。
PEG浓度一般40%~60%。
作用时间1~5min。
控制PH值8.0~8.2。
温度38~40℃。
3、电激诱导融合（1978）原理：电诱导是先使细胞在电场中极化为偶极子（细胞通常带负电），沿电场线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜由于张力作用，两细胞融合。
优点：易控制；高效；无毒。
二、细胞融合的应用1、动物细胞融合：杂合抗生素生产；动物疾病防治；生产单克隆抗体（骨髓瘤与淋巴细胞杂交瘤，发现致病细胞，制作靶向药物，作为免疫试剂）；改良创造新菌种；基因定位和绘制人类基因图谱（杂种细胞中某一染色体或其片段的存在与否细胞的某一性状表达与否相联系，从而可以实现把基因定位于某一染色体或某一区段上）；生产树突状细胞抗肿瘤疫苗；用于动物育种；用于细胞疗法（将患者的任何体细胞与去核卵细胞融合，融合子进行有丝分裂形成囊胚，囊胚的内细胞团是多能干细胞，对多能干细胞进行诱导使其定向分化可形成所需的组织和器官用于器官移植，不仅解决了器官和组织来源问题，并且也避免了宿主对外来物的免疫排斥。
）2、植物细胞融合：植物病害防治；新品种开发。
三、实验用品1、材料鸡血红细胞2、试剂50%PEG、Hank’s溶液（pH7.4）、Alsever’s细胞保存液（氯化钠、柠檬酸钠、葡萄糖，抗凝血）、0.6mol/L 甘露醇溶液、0.85%氯化钠溶液3、器材倒置显微镜、离心机、恒温水浴锅、电融合仪、血细胞计数器、量筒、注射器、烧杯、载玻片、盖玻片、200μL及1mL微量移液器、枪头、离心管、废液缸等。
动物细胞融合的方法
动物细胞融合的方法
动物细胞融合是一种重要的生物学技术，它可以用于细胞生物学研究、生物医
学研究以及生物技术领域。
动物细胞融合的方法有多种，下面将介绍几种常用的动物细胞融合方法。
首先，电融合是一种常用的动物细胞融合方法。
它利用高压脉冲或直流电场的
作用，使细胞膜通透性增加，从而促进细胞融合。
电融合方法操作简单，融合效率高，可以用于不同种类细胞的融合，因此在细胞生物学研究中得到广泛应用。
其次，化学融合是另一种常用的动物细胞融合方法。
化学融合利用化学物质
（如聚乙二醇）破坏细胞膜，使细胞融合。
化学融合方法操作简单，成本低廉，可以用于大规模的细胞融合实验，因此在生物医学研究和生物技术领域得到广泛应用。
另外，病毒介导的融合是一种新兴的动物细胞融合方法。
该方法利用病毒载体
介导细胞融合，可以实现特定细胞的融合，具有较高的选择性和特异性。
病毒介导的融合方法在基因治疗和细胞修复方面具有潜在的应用前景。
除了上述几种方法，还有许多其他动物细胞融合方法，如光融合、磁场融合等。
这些方法各有特点，可以根据具体的研究需求选择合适的融合方法。
总的来说，动物细胞融合是一项重要的生物学技术，不同的融合方法各有特点，可以根据具体的研究需求选择合适的方法。
随着生物技术的不断发展，相信动物细胞融合方法会得到进一步的完善和创新，为生物医学研究和生物技术应用提供更多的可能性。
细胞融合技术实验方案
二、实验原理
这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有 的有序结构 在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合 ，胞质流通，发生融合 化学诱导方法操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对 细胞具有一定的毒性 PEG是被广泛使用的化学融合剂
二、实验原理
化学法以其成本低廉、 设备要求低、可大规模 诱导、没有种属限制等 优点，已成为人工诱导
细胞融合的主要手段
其中，PEG 法是使用最广 的细胞融合方法
PEG 诱导法具有操作简单， 融合效果相对较好，容易 获得 融合体的优点，不仅 在实验室经常使用，而且 PEG 诱导鸡血细胞融合实 验是细胞生物学本科实验
实验步骤
实验步骤
1、鸡血红细胞的制备和保存
用无面注射落先吸入Alesver溶液1ml，再从鸡翼下静脉取血0.5-1mL，取出后放人刻度离 心管中，再加入2-3mLAlesver溶液，使总量为4-5 mL，混匀并封口，置于4℃冰箱内(可供 一周内使用)
实验步骤
2、PEG诱导融合
(1)取保存的鸡血，离心去除Alsever溶液，以0.85%氯化钠溶液制成5%-10%的悬液 (2)称取1gPEG(相对分子质量4000)放入试管内，在沸水浴中融化后，加入1mL预热的Hanks 溶液，混匀，制成50%的PEG溶液。放入37℃水浴中待用
院学 报 ,2007,29(5):79
-82
[5] 马云 , 何昆 , 王晓玉 , 等 .PEG 诱导鸡红细胞融合 影响因素探讨 [J].
动物细胞融合实验实验报告
动物细胞融合实验实验报告
实验目的：1、了解动物细胞融合的常用方法
2、学习化学融合的基本操作过过程
3、观察动物细胞融合过程中的细胞行为和变化
实验材料：鸡血红细胞、50%PEG溶液、0.85%氯化钠溶液、显微镜、离心机、载玻片、盖玻片等
实验原理：聚乙二醇（PEG）能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分
子层的互相亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
实验步骤：1、取鸡血，离心后去除上清液，以0.85%氯化钠溶液制成5%~10%的悬液
2、加入GKN液4ml，混匀
3、加入14滴PEG液，静置3~5min后混匀，放于显微镜下观察
实验结果：显微镜下可观察到有些细胞发生质膜融合
分析与讨论：细胞融合的应用有微生物原生质体融合构成新菌株、利用原生质体融合和培养技术培育新植物、细胞杂交瘤技术与单克隆抗体、用于基因定位和绘制人类基因
图谱、用于生产树突状细胞抗肿瘤疫苗、用于动物育种、用于细胞疗法等。
动物细胞的融合(完整版)
预冷得0.25mol/L蔗 （3）匀浆：加入 ）匀浆：加入8ml预冷得 预冷得 蔗 糖-0.003mol/L氯化钙溶液于烧杯中，尽 氯化钙溶液于烧杯中， 氯化钙溶液于烧杯中 量剪碎肝组织， 量剪碎肝组织，将剪碎的肝组织倒入玻璃 匀浆器， 匀浆器，使匀浆器下端侵入盛有冰块的器 如冰盘）。左手握匀浆器， ）。左手握匀浆器 皿（如冰盘）。左手握匀浆器，右手将匀 浆捣杆垂直插入管中匀浆， 浆捣杆垂直插入管中匀浆，直至看不到明 显的组织块。 显的组织块。 层纱布（ （4）过滤：用8层纱布（先用少量生理盐 ）过滤： 层纱布 水或蔗糖液润湿纱布） 水或蔗糖液润湿纱布）过滤匀浆液于离心 管中。 管中。 （5）离心：在天平上平衡每对离心管， ）离心：在天平上平衡每对离心管， 2500r/min离心 离心15min，取上清液于另一 离心 ， 离心管中，大约剩余1ml左右的上清液。 左右的上清液。 离心管中，大约剩余 左右的上清液
6.细胞融合诱导剂种类很多，一般可分为生物性 细胞融合诱导剂种类很多， 细胞融合诱导剂种类很多 和化学性两类。常用的主要有灭活的仙台病毒和 和化学性两类。 聚乙二醇等， 是一种去垢剂， 聚乙二醇等，PEG是一种去垢剂，易得，用法简 是一种去垢剂 易得， 融合效果稳定， 单、融合效果稳定，是目前运用的比较多得一种 诱导剂。 诱导剂。
（2）将悬液移入离心管中，以800r/min离心7将悬液移入离心管中， 800r/min离心7 离心 8min，倾去上清液，加入8~10mlHanks 8~10mlHanks， 8min，倾去上清液，加入8~10mlHanks，再次悬浮 细胞，离心洗涤一次， 细胞，离心洗涤一次，倾去上清液后将离心管倒 置于滤纸上，尽量流尽剩余液体。（这一步很重 置于滤纸上，尽量流尽剩余液体。（这一步很重 。（ 因为残留液体会改变PEG的浓度） PEG的浓度 要，因为残留液体会改变PEG的浓度） （3）用手指轻弹离心管底壁，使沉淀物松散。然 ）用手指轻弹离心管底壁，使沉淀物松散。 后吸取制备好的50%PEG0.4ml，在37水浴中， 水浴中， 后吸取制备好的 ， 水浴中 于90s内逐滴加入离心管中，边加边振荡离心管， 内逐滴加入离心管中，边加边振荡离心管， 内逐滴加入离心管中 使之与细胞混匀，然后加入8~10mlHanks液，轻 使之与细胞混匀，然后加入 液 轻吸打混匀， 以稀释PEG。 轻吸打混匀，在37℃水浴中静置 ℃水浴中静置5min以稀释 以稀释 。 离心弃上清液后，加入2~3ml含小牛血清人 含小牛血清人1640 离心弃上清液后，加入 含小牛血清人 培养液， 培养液，在37℃水浴中孵育 ℃水浴中孵育30min。 。
动物细胞融合法
动物细胞融合法
动物细胞融合法指的是利用细胞膜融合的原理，将两个或多个动
物细胞的细胞膜融合在一起，使它们成为一个大细胞。
这样的方法被
广泛应用于细胞学研究，特别是在细胞生物学和生理学领域。
通过动物细胞融合法，科学家们可以研究细胞内部的过程，如细
胞质流动、酶催化和细胞膜的作用等。
同时，动物细胞融合法也可以
用于生殖医学和遗传学的研究。
此外，动物细胞融合法还可以应用于细胞疫苗和基因治疗等领域。
在细胞疫苗制备方面，科学家们可以将病原体与宿主细胞融合，使得
宿主细胞产生病原体特异性抗原，从而制备出相应的疫苗。
在基因治
疗方面，动物细胞融合法可以使患者的细胞与健康捐献者的细胞融合，将健康的基因导入患者的细胞内，从而达到治疗效果。
总之，动物细胞融合法是一种重要的研究工具和应用手段，为人
类科学研究和医学进步做出了重要的贡献。
动物细胞融合
动物细胞融合
动物细胞融合是一种重要的生物学技术，它能够促进基因编辑和疾病研究。
本
文将介绍动物细胞融合的原理、应用和潜在风险。
原理
动物细胞融合是指将两个或多个动物细胞融合成一个细胞的过程。
这种技术通
常通过融合剂（如聚乙二醇）或电脉冲的方式实现。
一旦细胞融合成功，细胞的核和细胞质将合并成一个新的细胞。
应用
动物细胞融合在生物学研究中有着广泛的应用。
一项主要的应用是制造杂交动物，这对基因工程和疾病研究都具有重要意义。
动物细胞融合还被用于体细胞核移植和克隆技术中，为科学家们提供了在实验室中研究和改变动物基因的平台。
潜在风险
尽管动物细胞融合在生物学研究中有着重要作用，但它也存在一些潜在的风险。
首先，由于技术上的复杂性，动物细胞融合的成功率并不高，有时会导致细胞死亡或克隆动物的出现异常。
此外，动物细胞融合还可能导致遗传信息的混合和基因组的不稳定性，这可能会引发不可预测的后果。
在未来，科学家们需要继续研究动物细胞融合的机制和影响，以更好地利用这
一技术。
同时，应该加强对动物细胞融合过程中潜在风险的监管，以确保其在生物学研究中的安全应用。
动物细胞融合作为一种重要的生物学技术，为基因编辑和疾病研究提供了重要
的工具。
然而，科学家们仍需不断探索其机制和潜在风险，并采取适当的措施确保其安全应用。
细胞融合实验
LOGO
实验结果:
第9页
恳请各位同学批评指正！
汇报人：玉苏普·胡加阿布拉 2019年11月22日
LOGO
三，实验材料与用品：
第5页
1、材料： 鸡血红细胞
2、试剂 ： 50%PEG、GKN溶液、Alsever's细胞保存液、0.85%氯化钠 溶液。
3、 器材 ： 倒置显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、离心管、废液缸、 滴管等。
四，实验步骤：
在本次实验中采用 的是化学诱导融合 的方法，利用PEG使 鸡血红细胞发生融 合。具体实验步骤
3、化学诱导融合
很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、 磷脂酰丝氨酸等。这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向 于恢复原有的有序结构。在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面 张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高， 效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。PEG是广泛使用的化学融合剂。
如下：
取鸡血 2ml+2mlAlsever液， 再加入6mlAlsever 液，混匀后制悬液
（4℃保存）
老师已做 好，可直 接使用
LOGO
四，实验步骤：
第7页
第二步
第三步
第四步
第五步
取（1）中悬液1ml+4ml的 0.85%的NaCl溶液，进行以下 三次离心处理：
①在1200r/min下离心5min，去 掉上清液，再加入0.85%的NaCl 溶液至5ml； ②1000-1200r/min下离心5min， 去掉上清液，再加入0.85%的 NaCl溶液至5ml； ③1000-1200r/min下离心7min
动物细胞融合、细胞核的分离与鉴定
二、细胞核的鉴定
细胞来源： 细胞来源：
本次试验细胞选择的是小白鼠的肝细胞， 本次试验细胞选择的是小白鼠的肝细胞， 肝细胞 这是因为肝细胞分裂旺盛。 这是因为肝细胞分裂旺盛。
鉴定试剂： 鉴定试剂：Fra bibliotek甲苯胺蓝
甲苯胺蓝是常用的人工合成染料的一种 属于醌 甲苯胺蓝是常用的人工合成染料的一种,属于醌 是常用的人工合成染料的一种 亚胺染料类,这类染料一般含有两个发色团 这类染料一般含有两个发色团,一个是胺 亚胺染料类 这类染料一般含有两个发色团 一个是胺 一个是醌型苯环,来构成色原显色 基,一个是醌型苯环 来构成色原显色。染料除有发色 一个是醌型苯环 来构成色原显色。 团外,还要有能使色原对组织及其他被染物产生亲和 团外 还要有能使色原对组织及其他被染物产生亲和 力的原子团即助色。 力的原子团即助色。助色团能促使染料产生电离成盐 帮助发色团对组织产生染色力, 类,帮助发色团对组织产生染色力 使切片上的组织细 帮助发色团对组织产生染色力 胞着色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团,还含有两个 胞着色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团 还含有两个 助色团,为碱性染料 为碱性染料,因此可以和组织细胞的酸性物质 助色团 为碱性染料 因此可以和组织细胞的酸性物质 结合而使其染色。即可染细胞核使之呈蓝色。 结合而使其染色。即可染细胞核使之呈蓝色。 另外， 另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色 性物质遇到甲苯胺蓝可呈易染性紫红色， 性物质遇到甲苯胺蓝可呈易染性紫红色，因此可用于 肥大细胞的检测，例如色素性荨麻疹。 肥大细胞的检测，例如色素性荨麻疹。
动物细胞融合、细胞核的分离与鉴定 实验设计报告
动物细胞融合
细胞融合是正常的生命活动
受精作用
两个细胞正在融合
动物细胞融合基本过程： 动物细胞融合基本过程：
细胞融合实验报告
【实验题目】动物细胞融合【实验目的】1.了解动物细胞融合的常用方法。
2.学习化学融合的基本操作过程。
3.观察动物细胞融合过程中细胞的行为与变化。
【实验材料与用品】1、材料鸡血红细胞2、试剂50%PEG、GKN溶液、Alsever’s细胞保存液、0.85%氯化钠溶液。
3、器材倒置显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、离心管、废液缸、滴管等。
【实验原理】细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。
目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括：病毒诱导融合、化学诱导融和和电激诱导融合。
1、病毒诱导融合仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融时也可介导细胞与细胞的融合。
用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。
2、化学诱导融合很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。
这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。
PEG是广泛使用的化学融合剂。
3、电激诱导融合包括电诱导、激光诱导等。
其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。
电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。
【实验步骤】在本次实验中采用的是化学诱导融合的方法，利用PEG 使鸡血红细胞发生融合。
具体实验步骤如下：1、取鸡血2ml+2mlAlsever 液，再加入6mlAlsever 液，混匀后制悬液（4℃保存）【老师已做好，可直接使用】2、取（1）中悬液1ml+4ml 的0.85%的NaCl 溶液，进行以下三次离心处理：①在1200r/min 下离心5min ，去掉上清液，再加入0.85%的NaCl 溶液至5ml ；②1000-1200r/min 下离心5min ，去掉上清液，再加入0.85%的NaCl 溶液至5ml ；③1000-1200r/min 下离心7min 【因时间关系此次实验只离心一次】3、 将离心后的沉降血球（去上清后约0.1-0.2ml ）加入GKN 至1-2ml ，使之成为10%的细胞悬液；4、 取上述10%的血球悬液1ml,加入3mlGKN 液，使每毫升含血球15000000个；5、分别取（4）1ml+0.5ml50%PEG ，（4）0.5ml+0.5ml50%PEG ，（4）0.5ml+1.0ml50%PEG ， 混匀滴片，编号分别为①②③号溶液。
实验五 动物血细胞融合实验
实验五 动物血细胞融合实验一、实验目的：掌握利用聚乙二醇为介导物对鸡血细胞的融合方法．二、实验原理：两个或两个以上的细胞合并成一个双核或多核细胞的现象称为细胞融合，也称细胞杂交，在自然情况下的受精过程即属这种现象。
诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电融合。
化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚已二醇（PEG ）。
PEG 用于细胞融合至少有两方面的作用：①可促使细胞凝结；②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个双核或多核融合细胞。
三、实验器具及试剂1．器具显微镜、天平、擦镜纸、普通离心机、载片、盖片、吸管、烧杯2个, 250ml 量筒1个, 滴管20支, 10ml 刻度离心管20支, 试管架5个，移液管，恒温水浴锅, 2ml 离心管20支。
2．材料与试剂(1)材料新鲜鸡血(2)试剂詹纳斯绿染液；0.85％生理盐水；Alsever 溶液：葡萄糖2.05g ，柠檬酸钠0.80g ，NaCl 0.42g ，溶于100ml 双蒸水中。
GKN 溶液：NaCl 8g ，KCl 0.4g ，Na 2HPO4·2H 2O 1.77g ，NaH 2PO4·H 2O 0.69g ，葡萄糖2g ，酚红0.01g ，溶于1000ml 水中。
50％PEG 溶液：称取一定量的PEG （WM ＝4000）放入烧杯中，沸水浴加热，使之熔化，待冷却至50℃时，加入等体积预热至50℃的GKN 溶液，混匀，置37备用。
四、实验步骤1.在公鸡翼下静脉抽取2ml鸡血，加入盛有8ml的Alsever液中，使血液与Alsever液的比例达1∶4，混匀后可在冰箱中存放一周；2.取此储存鸡血0.4ml加入1.6ml的0.85％生理盐水，充分混匀，1500r/min 离心5min，弃去上清，加入2ml的0.85％生理盐水，重复上述条件离心两次。
细胞生物学实验报告——动物细胞融合
细胞生物学实验报告——动物细胞融合实验目的：通过动物细胞融合实验，研究细胞融合对细胞形态和功能的影响。
实验原理：动物细胞融合是将两个或多个不同细胞融合在一起，形成一个新的细胞。
这种细胞融合可以通过化学物质、电融合或病毒介导等方式实现。
在本实验中，我们将使用化学方法进行细胞融合。
实验材料：1.小鼠胚胎纤维化细胞2.小鼠癌细胞3.融合剂（聚乙二醇）4.培养基5.显微镜实验步骤：1.将小鼠胚胎纤维化细胞和小鼠癌细胞分别培养至对数生长期。
2.用PBS洗涤细胞，加入适量的融合剂（聚乙二醇）。
3.用无菌吸管轻轻吹气使细胞悬浮液均匀混合。
4.将细胞悬浮液转移至培养皿中，并继续培养在37°C的培养箱中。
5.观察细胞的变化，使用显微镜观察细胞形态和细胞数量的变化。
实验结果：经过细胞融合，观察到融合细胞表现出不同于原始细胞的形态特征。
例如，融合细胞可能会表现出更大的细胞体积、不规则的形状以及异常的细胞核形态。
此外，融合细胞通常比原始细胞更抵抗外界环境的压力，更能适应培养基中的低营养条件。
讨论与分析：细胞融合是一种重要的实验手段，用于探究细胞形态和功能的变化。
通过将不同类型的细胞融合在一起，可以观察到融合细胞的形态和功能发生的改变。
这些变化可能包括细胞体积的增加、细胞形态的改变以及细胞功能的增强等。
细胞融合实验不仅可以帮助我们了解细胞的组成和特性，还可以为研究癌细胞的形成和功能提供重要的线索。
在本实验中，我们选择了小鼠胚胎纤维化细胞和小鼠癌细胞进行融合实验。
由于癌细胞的特殊性质，融合后的细胞可能会表现出更强的生长能力和侵袭性，这有助于我们研究癌细胞的形成机制。
然而，需要注意的是，细胞融合对于细胞的形态和功能的影响是非特异性的。
这意味着融合细胞的形态和功能不仅取决于融合的细胞类型，还取决于融合过程中的其他因素，如融合剂的用量和融合时间等。
因此，在进行细胞融合实验时，需要进行严密的实验设计和控制，以确保观察到的变化是由细胞融合引起的，而不是其他因素导致的。
细胞生物学实验报告——动物细胞融合
山东大学细胞生物学实验报告聚乙二醇（PEG ）法诱导的动物细胞融合实验2012/9/11实验目的：了解细胞融合技术的发展过程和主要方法的基本原理，用聚乙二醇(PEG)化学诱导法进行鸡血红细胞的融合实验，掌握实验的基本操作，观察鸡血红细胞融合的不同时期。
实验原理：1. 细胞融合的概念两个或两个以上的细胞或原生质体在自然或人为诱导的情况下细胞质膜相互融合，细胞质相互混合成为一个整体杂合细胞的现象被称为细胞融合。
细胞融合可以发生在同种细胞之间也可以在不同物种间实现。
2. 细胞人工融合的主要方法及基本原理细胞体外融合的主要方法分为病毒诱导，化学诱导和物理诱导。
1953年，M. Kuroya 在临床中第一次分离到仙台病毒（HVJ ）[1]。
1958年，日本学者Okada 发现仙台病毒（HVJ ）能诱导动物细胞融合[2]，其基本原理是仙台病毒的衣壳上有细胞表面受体的结合位点，可以诱导不同细胞凝集，最终使不同细胞的细胞膜相互融合。
1974年，加拿大学者高国楠发明了细胞的聚乙二醇（Polyethyleneglycol ，PEG ）化学融合法，由于该方法对实验条件要求极低，试剂易得，操作简单，成为应用最广泛的细胞融合方法。
化学诱导细胞融合的基本原理是PEG 等化学物质能够诱导细胞膜磷脂分子的极性基团发生结构重排，相互接触的细胞在细胞膜恢复过程中借助磷脂分子的亲和作用和表面张力实现融合。
比之于仙台病毒诱导法，PEG 诱导法的效率提高了几百倍。
80年代，科学家发明了细胞电融合法[4, 5]，电融合法将细胞融合的产率提高到了50%-80%。
电融合法的建立是基于细胞膜表面带电荷的性质。
当在细胞悬液周围加入特定方向的电场时，细胞表面会发生极化现象，相邻的细胞将吸附在一起。
这时突然提高电场强度，细胞间彼此接触的细胞膜会被击穿，细胞膜修复时受到磷脂分子间的亲和作用和细胞膜表面张力的作用将会发生融合。
图2. 以电融合方法得到的3T3-C2融合细胞 （引自J. Teissie 等，1982 )。
动物细胞融合
动物细胞融合实验二十六动物细胞融合实验目的了解动物细胞融合的常用方法。
学习化学融合的基本操作过程及其应用。
观察动物细胞融合过程中细胞的行为和变化。
①细胞融合：指在培养或诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程；又叫细胞杂交,分为同核和异核。
成功的标志为：融合后的细胞能正常分裂、生长。
动物细胞融合的方法：②病毒诱导融合：利用仙台病毒等被膜中含有融合蛋白的病毒，通过改变动物细胞细胞膜的脂双层促使动物细胞融合。
化学诱导融合：利用化学试剂如聚乙二醇（PEG），利用相似相溶的原理，改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞融合，胞质流通，发生融合。
融合过程：细胞接触——膜融合——形成哑铃型细胞。
化学诱导融合方法，操作方便，融合效率高。
PEG的分子量：400-6000道尔顿，其中科研时采用800-1000道尔顿。
PEG的浓度：40%-60%作用时间：1分钟（科研）PH：8.0-8.2 温度：38-40℃③电激诱导融合：基于显微镜下的细胞融合，其中电诱导（激光诱导）是先使细胞在电场中极化成为电偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲（激光）击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。
电激诱导融合方法具有无毒高效的优点。
本次实验选用化学诱导融合方法。
材料：鸡血红细胞。
试剂：0.85%氯化钠溶液，GKN溶液（磷酸缓冲液），Alsever’s细胞保存液，50%PEG。
器材：显微镜、离心机、离心管、载玻片、盖玻片。
① 取鸡血2ml+2ml Alsever 液，再加入6ml Alsever 液，混匀后制悬液。
（可在4℃保存）② 往离心管中取①1ml+4ml0.85%的NaCl溶液，进行一次1000r/min、5min离心③ 取出离心管，抽出上清液，加入GKN液4ml使细胞浓度适宜，采用吹气泡等方法混匀，制成悬液。
细胞融合实验报告
细胞融合Cell Fusionxx 201100140120 同组者：xx 2013年3月14号【实验目的】1、了解动物细胞融合的常用方法Learn common methods of cell fusion2、学习用PEG进行细胞融合的基本操作过程Use PEG to induce cell fusion3、注意动物细胞融合的过程中细胞的行为和变化Pay attention to the action and change of cells during the process of cell fusion【实验原理】细胞融合是指把相同或不同类型的两个或多个细胞融合成一个具有共同细胞质和单一、连续细胞膜的细胞。
Cell fusion is that two or more cells ，of same or different types，be fused by certain technique to produce one cell with a common cytoplasm and a single continuous cell membrane.目前用于细胞融合的有以下三种常用的方法：1、Virus 病毒2、PEG 聚乙二醇3、Electric shock 电击通过结合化学和电击的方法，可以使细胞融合率高达70%Up to 70% cell fusion efficiencies by combining both chemical and electrical fusion protocols.细胞融合率=已融合的细胞核总数/所有细胞的细胞核总数*100%Cell fusion efficiency is the ratio of the total number of fused nucleus over that of all the cells in the vision，usually shown as percentage.除了诱导剂外，其他因素，如细胞类型和性质、温度、PH值、离子强度等也会影响细胞融合率。
细胞生物学实验报告——动物细胞融合
细胞生物学实验报告——动物细胞融合
动物细胞融合是一种常用的细胞生物学实验方法，它可以将两个不同的细胞融合成一个杂种细胞，进而研究细胞的生理和遗传特性。
本实验的目的是通过融合人类流感病毒感染细胞和未感染细胞，观察融合细胞的形态变化、遗传特性等。
实验方法：
1. 实验材料：已感染人类流感病毒的细胞株、未感染细胞株、聚乙二醇（PEG）。
2. 细胞准备：将已感染人类流感病毒的细胞株和未感染细胞株分别培养至70%的密度。
3. 融合操作：
①将两种细胞株的培养液分别吸取5ml加入两个离心管中，并分别离心3分钟；
②用无菌PBS缓冲液吸取上清，将细胞沉淀重悬于10ml的PBS中；
③分别用5ml管将两种细胞混合，加入5ml含0.4% PEG的PBS保存20秒，然后将混合物慢慢加入10ml的PBS中，缓慢搅拌2分钟；
④取出3次稀释后的混合物分别接种于已涂有明胶的平皿上，移到温度为37°C的恒温箱中，培养至细胞生长至密度差不多可见。
4. 实验结果：
融合细胞的形态和生长速度与两种细胞有很大的差异。
5. 结论
通过本实验，发现融合细胞的形态和生长速度与两种细胞有很大的差异。
这表明细胞融合发生后，不同的细胞融合成的杂种细胞可能会表现出新的特性和功能，这些新特性可能与导致疾病或从事生理过程有关。
细胞融合，从而创造出的杂种细胞，对于研究肿瘤病因、荷尔蒙受体、病毒感染机制等领域都有很大的应用价值。
动物细胞融合技术流程
动物细胞融合技术流程动物细胞融合技术听起来就很酷炫呢！一、细胞融合的基础。
咱们得先知道啥是动物细胞融合。
简单来说呀，就是把两个或者好几个动物细胞弄到一起，让它们变成一个细胞。
就像是几个小伙伴手拉手，然后融合成一个超级小伙伴一样。
这细胞融合可是很有意义的哦。
比如说可以创造出一些新的细胞类型，对于研究疾病、生产新的药物之类的都有很大的帮助呢。
二、融合前的准备。
1. 细胞的选择。
那在进行融合之前，我们得精心挑选细胞。
就像选参加比赛的选手一样。
这些细胞得是健康的、活跃的。
比如说我们可能会选择一些免疫细胞呀，或者是一些特定功能的细胞。
不同的细胞就像是不同性格的小伙伴，它们融合之后可能会产生意想不到的效果哦。
2. 培养细胞。
选好细胞之后呢，就得好好培养它们。
就像照顾小宝贝一样。
要给它们合适的营养物质，像葡萄糖、氨基酸这些都是细胞爱吃的“食物”。
还要有合适的温度、湿度和二氧化碳浓度呢。
就像人需要一个舒适的环境一样，细胞也需要在适宜的环境里才能茁壮成长。
三、融合的方法。
1. 物理方法。
这里有一种物理的方法叫电融合。
想象一下，就像是给细胞来一场小小的电击派对。
通过合适的电场强度，让细胞们在电场的作用下靠得更近，然后细胞膜就有可能融合在一起啦。
这个方法呢，相对来说比较简单直接，但是对设备的要求比较高哦。
2. 化学方法。
还有化学方法呢。
最常用的就是用聚乙二醇（PEG）。
PEG就像是一个超级黏合剂。
把细胞放在含有PEG的溶液里，PEG就会让细胞的膜变得黏黏的，然后细胞就有可能融合在一起啦。
不过呢，PEG可能对细胞有点小伤害，就像太黏的东西可能会把细胞弄得有点不舒服一样。
四、融合后的筛选。
融合之后可不能就这么不管了。
我们得把真正融合成功的细胞找出来。
这就像是在一群小伙伴里找出那些真正合作成功的小组一样。
通常会有一些筛选的方法。
比如说利用细胞的一些特殊标记。
如果融合的细胞有了新的标记，我们就可以通过检测这个标记来确定哪些是融合成功的细胞。
实验八动物细胞融合
四、实验材料、设备
鸡血红细胞悬液、GKN溶液、0.85％生理盐水、 50％PEG溶液、0.6M蔗糖溶液
光学显微镜、离心机、恒温水浴锅、载玻片、 盖玻片、移液器、离心管、吸管等
GKN溶液: 8gNaCl+0.4g KCL+1.77g NaH2PO4.2H2O + 0.69g Na2HPO4.12H2O+2g 葡萄糖+0.01g酚红，加水至1000ml
动物细胞融合影响因素
动物细胞融合中，除促融剂外，其他如细胞性质、温度、 pH、离子强度及离子种类等均全影响细胞融合效率。
①亲本细胞表面性质影响较大
②细胞种类不同，融合效果也不同，如腹水癌及株
化细胞较易融合，而淋巴细胞或血球细胞几乎不融合。
③细胞融合时需要适宜温度和运动状态。
如仙台病毒诱导-腹水癌细胞融合时，于37℃ 振摇时易于 融合，且融合效率与病毒量呈正比。但在34℃振摇则融合 率下降。在37℃时不振摇则-不融合。
使用方便，诱导细胞融合的频率比较高， 效果稳定，适用于动植物，但是具有毒 性。
编辑课件
3、电脉冲诱导融合
发展于20世纪80年代，在高频交变电场作 用下, 细胞发生极化作用形成偶极子,受 电场力的作用进而沿电力线方向运动彼此 粘连成串;对成串细胞施加瞬时高压脉冲, 质膜在高电压作用下发生瞬时可逆性的电 穿孔,进而发生细胞的融合。
1.在显微镜下观察细胞融合情况，可看到不同 融合状态的细胞：两细胞的细胞膜间相互接触、 粘连；接触部位的细胞膜崩解，两细胞间的细胞 质相通，形成细胞质通道；通道扩大，两个细胞 连成一体；细胞合并完成，形成一个含有两个或 多个核的圆形细胞。
编辑课件
[注意事项]
1.滴加50％PEG时，应缓慢、逐滴加入，而且每 加一滴应轻摇离心管以混匀，滴加完毕后可用 滴管温和混匀。
动物细胞融合实验报告
动物细胞融合实验报告动物细胞融合_实验报告实验二:动物细胞融合一、实验目的1、了解动物细胞融合的常用方法——聚乙二醇诱导细胞融合的基本原理。
2、学习化学融合的基本操作过程。
二、实验用品1、材料鸡血红细胞2、试剂50%PEG、Hank’s溶液(pH7.4)、Alsever’s细胞保存液0.85%氯化钠溶液。
3、器材普通光学显微镜、离心机、量筒、载玻片、盖玻片离心管、废液缸等。
三、实验原理细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。
目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括病毒诱导融合、化学诱导融和和电激诱导融合。
1、病毒诱导融和仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融时也可介导细胞与细胞的融合。
用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。
2、化学诱导融合很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。
这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。
PEG是广泛使用的化学融合剂。
3、电激诱导融合包括电诱导、激光诱导等。
其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。
电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。
PEG，又名聚乙二醇，是目前应用做多的一种化学促溶剂。
其优点是使用方便，活动稳定，容易制备和控制。
四、实验步骤1、鸡血细胞的制备与保存。
2、取鸡血1ml+0.85%的NaCl溶液4ml，在1000r/min的离心机内离心5分钟。
动物细胞融合的例子
动物细胞融合的例子引言动物细胞融合是一种重要的实验技术，在生物学研究中得到了广泛的应用。
通过将两个或多个动物细胞融合成一个细胞，可以产生一系列有趣的现象和效应。
本文将介绍一些动物细胞融合的例子，并探讨其在科学研究和应用中的意义。
人类和小鼠胚胎细胞融合实验实验目的通过将人类和小鼠胚胎细胞进行融合，研究不同物种之间的细胞相互作用和差异。
实验方法1.分离人类和小鼠的胚胎细胞。
2.将两种胚胎细胞放置在一起，并施加电脉冲使其融合。
3.观察融合后细胞的形态变化和特征表达。
实验结果通过人类和小鼠胚胎细胞融合实验，可以观察到以下现象： - 融合细胞的形态特征介于人类和小鼠之间，具有混合特征。
- 融合细胞中的基因表达模式发生变化，出现新的表达特征。
- 可能会发现某些人类细胞的特征在融合后得到抑制或增强。
意义和应用人类和小鼠胚胎细胞融合实验在以下方面具有重要意义： 1. 研究不同物种之间的细胞相互作用，了解基因表达调控的机制和差异。
2. 研究人类疾病发生的机制，探索新的治疗方法。
3. 提供了一种可行的方法来制备具有人类细胞特性的小鼠模型，用于疾病研究和药物筛选。
细胞融合在种质改良中的应用背景种质改良是农业领域中一项重要的工作，旨在培育出具有良好性状的新品种。
细胞融合技术在种质改良中发挥着重要的作用。
细胞融合在植物种质改良中的应用1.基因转移：通过将两个不同品种的植物细胞融合，可以实现基因的交换和转移。
这样可以将优良的性状从一个品种转移到另一个品种，加快育种进程。
2.异源杂交：通过细胞融合技术，可以实现植物之间的异源杂交。
这样可以克服种间杂交的难度，产生具有丰富遗传变异的后代，为育种提供更多的选择和可能性。
3.病害抗性提高：通过将具有抗病性的植物细胞和具有优良性状的植物细胞进行融合，可以获得既具有优良性状又具有抗病能力的新品种。
细胞融合在畜禽种质改良中的应用1.优质肉类的培育：通过将两个优质肉类品种的动物细胞进行融合，可以产生出具有更好品质的后代，提高肉类的产量和质量。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
山东大学实验报告2018年4月9日________________________________________ _________________________姓名：丁志康系年级：2016级组别：1-1科目：细胞生物学实验题目：动物细胞融合实验学号：201600140055 实验序号：4一、目的要求1.了解动物细胞融合的常用方法。
2.学习化学融合的基本操作过程。
3.观察动物细胞融合过程中细胞的行为和变化。
二、实验原理1、细胞融合的概念细胞融合(cell fusion)，细胞遗传学名词，是在自发或人工诱导下，两个细胞或原生质体融合形成一个双核或多核的杂种细胞的过程，也被称为细胞杂交（cell hybridization）。
基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体（homokaryon）；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体（heterokaryon）。
同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并，称自发融合；异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合，称诱导融合。
2、细胞融合的方法及发展简史①诱导细胞融合的方法：a.生物法（病毒诱导融合）：某些病毒因为其被膜中含有融合蛋白，可以介导病毒同宿主细胞融合，同时也可以介导细胞与细胞的融合，所以这些病毒经紫外线灭活后可作为细胞融合的生物诱导剂使用，例如仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等。
b.化学法（化学诱导融合）：很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。
这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。
PEG是广泛使用的化学融合剂。
c.物理法（电激诱导融合）：包括电诱导、激光诱导等。
其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。
电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。
②细胞融合的发展简史Muller于1838年观察到脊椎动物肿瘤细胞能在体内自发地融合产生多核的肿瘤细胞。
Virchow于1858年描述了正常组织、发炎组织以及肿瘤组织中的多核细胞现象。
Luginbuhl于1873年观察到天花病人的血液中也有多核的血细胞存在。
Lange于1875年第一个观察到脊椎动物（蛙类）的血液细胞发生融合的过程。
Cienkawski(1876）、Buck(1877）、Geddes(1880）在无脊椎动中发现了细胞合并现象。
1958年日本学者冈田（Okada）发现仙台病毒具有触发动物细胞融合的效应。
1974年华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇（PEG）化学融合法。
1975年Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴细胞和骨髓瘤细胞而产生能分泌稳定单克隆抗体的杂交瘤细胞。
1978年Ulrich Zimmermann（德国）发明并制造出世界上第一台“电融合仪”，首次报道了电融合技术。
其融合率又提高数百倍。
有效融合率达50-80%。
1984年日本的柏屋高弘（Takahrio kasuya）等研制成功世界上第一台“激光融合仪”，使细胞融合更快捷。
3、聚乙二醇（PEG）介导的细胞融合◆聚乙二醇（PEG）是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子量的多聚体。
◆PEG是一种亲脂剂，能扰乱和破坏脂双层的分子结构，使两细胞接触点处膜质的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，进而细胞质沟通，形成一个大的双核或多核或多核融合细胞。
◆PEG可与水分子借氢键结合，导致细胞脱水而发生质膜结构的变化，从而引起细胞融合。
4、细胞融合的应用◆细胞工程基础：动物细胞——单克隆抗体制备；植物细胞——繁育新品种。
◆研究细胞的遗传和发育：基因表达和激活观察。
◆核质关系研究核起主导作用但收到质的影响。
三、实验用品1. 材料：鸡血红细胞，兔血红细胞。
2. 试剂：50%PEG、GKN溶液、Alsever’s细胞保存液、0.85%氯化钠溶液。
3. 器材：普通光学显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、离心管、废液缸等。
四、实验步骤1、取鸡血2ml+2ml Alsever液，再加入6mL Alsever液，混匀后制悬液（4℃保存），即为鸡血红细胞母液（此步骤已由老师完成）。
2、取1ml母液+4ml的0.85%的NaCl溶液，在1200r/min下离心5min，去上清液，再加入5 mL 0.85%的氯化钠溶液。
3、1200 r/min 离心5分钟，去上清液。
4、将离心后的沉降血球（去上清后约0.1-0.2ml）加入GKN液至1-2ml，使之成10%的细胞悬液。
5、取上述10%的血球悬液1ml,加入3mL GKN液，使每毫升含血球15,000,000个（即1500万个），混匀后即得到血红细胞稀释液。
6、分别按照如下的比例吸取鸡红细胞稀释液、50% PEG液、及兔血，混匀常温下静置2-3分钟后显微镜下观察，记录下观察结果：a)1mL鸡血红细胞稀释液+0.5mL 50% PEG；b)0.5mL鸡血红细胞稀释液+0.5mL 50% PEG；c)0.5mL鸡血红细胞稀释液+1mL 50% PEG；d)0.25mL鸡血红细胞稀释液+0.25mL兔血+0.5mL 50% PEG。
五、实验结果1、在三个不同浓度的鸡血红细胞与50%PEG的混合溶液中，都可以看到鸡血红细胞相互之间出现一些黏着甚至融合的现象，其中PEG浓度最高的c液中细胞融合的程度更深，现象更明显，以下附上试验照片，拍摄时间为4月9日下午。
图1 鸡血红细胞融合整体结果（10×40）图2 两鸡红细胞初步开始融合（10×40）图3 两鸡红细胞之间膜逐渐融合（10×40）图4 两鸡红细胞基本融合为一体（10×40）图5 两鸡红细胞融合完毕（10×40，示双核）图6 三个鸡红细胞基本融合为一体（10×40）图7 四个鸡红细胞发生细胞融合（10×40）图8 多个鸡红细胞发生细胞融合（10×40）图9 大量鸡红细胞融合成不规则状团块（10×40）2、在鸡红细胞和兔红细胞及50%PEG的混合溶液中既可以观察到鸡红细胞之间的融合现象、又可以观察到兔红细胞之间的融合现象，还可以观察到鸡红细胞与兔红细胞发生细胞融合的现象，以下为相关试验照片，拍摄时间为4月9日下午。
图10 鸡红细胞与兔红细胞混合液细胞融合现象整体结果（10×40）图11 两兔红细胞发生细胞融合（10×40）图12 两兔红细胞融合成哑铃型（10×40）图13 两兔红细胞基本融合完毕（10×40）图14 多个兔红细胞发生细胞融合（10×40）图15 鸡、兔红细胞相互黏着（10×40）图16 鸡、兔红细胞开始发生细胞融合（10×40）图17 鸡、兔红细胞进一步融合（10×40）图18 鸡、兔红细胞基本融合为一体（10×40）图19 鸡、兔红细胞分别发生细胞融合的横向比较（10×40）六、注意事项1、取鸡血时应注意加入Alsever液，给鸡红细胞提供养分，使其可以在实验前持续保持生理活性。
2、离心前要注意加入等渗的氯化钠溶液，而不能使用蒸馏水。
3、配置10%细胞悬液时应根据离心管底部红细胞的量来决定加入的GKN液的量，以保证细胞悬液的浓度在10%左右。
4、当PEG的加量较大时（比如b液和c液），应在加入50%PEG液后稍等40s，让密度较大的PEG液沉在试管底部，之后在震荡摇匀，以防密度较大的PEG液在溶液上方直接离心，对红细胞产生较大压力，导致细胞破裂或融合成团块，影响实验结果。
5、加完PEG液后，应稍等2-3min等待细胞充分融合后再观察。
七、思考与讨论1、实验过程中，发现PEG浓度高的c液中细胞融合程度比a液和b液稍高，但不明显，重新取鸡红细胞悬液和兔红细胞悬液各0.25mL，加入3mLPEG溶液，混匀，等待两分钟后显微镜下观察，发现红细胞融合现象极为明显，大量红细胞融合结成巨大的团块，以至于甚至形成类似于细胞凝集反应中肉眼可见的红色粉状颗粒，推测加大PEG的加量很可能能够使细胞融合更剧烈。
2、实验过程中，先取加入PEG混匀后2min的细胞悬液观察，之后再从试管中取反应10min的细胞悬液观察，理论上发现反应10min的细胞悬液中细胞融合现象会更明显，但实际上差别并不明显，尤其在PEG加量少的a液中，推测可能是由于反应的时间还不够长，或者加入PEG后的混匀阶段就已经使细胞间进行了比较充分的接触和反应，致使之后静止期间细胞融合反应发生的较为缓慢。
3、发现用振荡器进行更长时间震荡后的细胞悬液内细胞融合现象会更明显，推测是在高速的震荡中红细胞之间相互碰撞，细胞融合发生的概率增大，建议可以增加一组实验内容，用加入等量红细胞悬液和50%PEG液的三组悬液，分别用振荡器震荡5s,20s,60s，之后显微镜下观察，比较各悬液之间细胞融合的程度有无明显差别。
4、实验过程中发现加入等量鸡血红细胞悬液和兔红细胞悬液的那组装片中，显微镜下观察到兔红细胞的数量比鸡红细胞多，推测可能是鸡红细胞悬液的稀释倍数比兔红细胞悬液的稀释倍数大，或者兔血中红细胞含量原本就比鸡血高，或者稀释是按照离心后红细胞体积进行的稀释，而兔红细胞个体小，等体积情况下数目更多。
5、观察到兔红细胞发生细胞融合的比例比鸡红细胞高，且兔红细胞在混合细胞悬液中呈球状而非圆盘状，推测兔红细胞在0.85%的氯化钠溶液中发生低渗吸水现象，导致细胞膨大呈球状，细胞形状的改变使兔红细胞间更容易发生细胞融合，而鸡红细胞在0.85%的氯化钠等渗溶液依然呈圆盘状，细胞性状不利于细胞融合的发生，建议尝试使用0.8%的氯化钠溶液作为鸡红细胞的稀释液，使鸡红细胞发生吸水膨胀，看能否提高鸡红细胞发生细胞融合的概率。