植物病毒分子检测方法概述
植物病毒鉴定方法有
植物病毒鉴定方法有
植物病毒鉴定是一种诊断学技术，用于识别植物病毒，鉴定植物病毒是防治植物病害的关键。
目前，植物病毒鉴定在植物病理研究、病原鉴定和其他生物技术领域都得到了很高的应用价值。
植物病毒鉴定可分为微生物学分析、化学分析、生物学分析和分子生物学分析4个方面，以尽可能准确地评估病毒引起的病害发生可能性。
1. 微生物学分析：主要检测病原体的传播性的分布特征，以及病原物的特异性和症状，如植物病理学、扫描电镜网织菌病毒鉴定等。
2. 化学分析：检测病原体的化学物质，如叶绿窿面农物质、唾液核酸酶鉴定等。
3. 生物学分析：采用分子大小分离技术，如集群分析、放射致性等，检测病原体的细胞结构特征。
4. 分子生物学分析：采用分子分析来识别和鉴定不同种类的病毒，如质粒克隆鉴定（PCR）、单克隆抗体试验、DNA杂交等。
植物病毒鉴定可以有效地准确定位病原，及早识别病原体，起到重要的防治作用。
因此，正确无误地使用植物病毒鉴定技术对植物病害的防治至关重要。
植物病毒的鉴别和检测方法研究
植物病毒的鉴别和检测方法研究植物病毒是影响植物健康和产量的主要因素之一。
对于农业和园艺领域，发现和鉴别植物病毒是至关重要的。
然而，由于病毒的微小尺寸、繁殖速度快且具有高度变异性和适应性等特性，在不加以特殊处理的情况下很难鉴别和检测。
因此，开发高效的植物病毒鉴别和检测方法已成为当前研究热点之一。
一、植物病毒的鉴别方法1. 细菌性斑点病法（Bacterial Spot Test）该方法通过施加细菌性斑点病感染物质，并观察植物叶片上斑点的形成来确定是否感染病毒。
该方法操作简单、直观易懂，但只能用于一些植物病毒的初步鉴定，无法确定所感染的具体类型和种类。
2. 酶联免疫吸附检测法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）该方法通过利用特定的抗体与病毒抗原反应，形成免疫复合物，再用酶作为信号反应物进行检测。
该方法的优点在于检测灵敏度高、精准度高、直观易懂，同时适用于多种植物病毒的鉴别。
但是，该方法对于一些种类不太熟悉的病毒，需要提前准备特定的抗体和病毒抗原，且操作过程比较繁琐。
3. 聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）该方法通过利用特定引物和酶，扩增目标病毒基因序列，并通过凝胶电泳等方式进行验证和鉴别。
该方法优点在于操作快速、准确度高、适用范围广，可以扩增低浓度的病毒Ap发现，同时还可以检测多个病毒基因序列，具有一定的实用性。
但是该方法的缺点在于设备成本高，且无法确定扩增物中病毒成分的比例。
二、植物病毒的检测方法1. 病毒杂交法（Virus Hybridization）该方法通过利用核酸探针与目标病毒中特定序列的杂交，形成稳定的杂交产物，并通过凝胶电泳等方式进行检测。
该方法优点在于具有较高的检测敏感性和特异性，同时可以定量分析病毒的含量，而且不受病毒变异性的影响。
该方法的局限性在于需要提前准备特定的核酸探针，对于多个病毒的检测需要分别合成多个核酸探针，操作较为繁琐。
植物类病毒检测技术概述
类 病毒 是一 类 无 外壳 蛋 白 、 能在 受 侵 染 寄 主 植 物 中 自我 复 制 的环 状 单 链 Ｒ ＮＡ 小 分 子 ， ２ ６ 由 ４ ～ ３ ９个核 苷 酸 组 成 ＿ 。到 目前 为 止 ， 病 毒 只在 高 ９ １ ］ 类
毒 蔓 延 的机率 ， 防治带 来很 大 的困难 。因此 ， 早 给 及 发现 病株 以控 制类 病毒 病 害的蔓 延尤 其重要 。而要
维普资讯 http://www.源自河 南 农 业 科 学 刀
植 物 类 病 毒 检 测 技 术 概 述
李桂 芬 ， 明福 ，张永 江 李
（ 国检验检疫科学研究院 动植物检疫研究所 ， 京 １０２） 中 北 ０ ０ ４
摘要 ：类病毒是 一 类无 外 壳蛋 白、 能在 受侵 染 寄主植 物 中 自我 复 制的环 状 单链 ＲＮＡ 小 分子 。文 中
邢 吉 敏 ， 春 泉 ， 维 真 ， ． 外 种 质 × 国 内种 质 玉 蔡 王 等 国
研 究 Ｅ］ 玉 米科 学 ，０ ４ １ （ ）４ —４ ． Ｊ． ２ ０ ，２ ３ ：７ ９
蔡 一 林 ， 久 光 ， 海 燕 ， ． 米 几 个 株 型性 状 的 遗 王 孙 等 玉
米单 交种 产 量 构 成 性 状 的 遗 传 分 析 Ｅ ］ 玉 米 科 学 ， Ｊ．
加 快症 状 的 出现 速 度 以及 提 高类 病 毒 的侵 染 能 力 。 自 １ ６ 年 Ｒ ｙ ｒ 人 ［ 发 现 番 茄 可 作 为 马 铃 薯 ９４ ａ ｍｅ 等 ３
力强 ， 以通过 摩 擦 接 种 传播 。多 数类 病 毒 靠 无 性 可
收 稿 日期 ： ０ ６ １ ２ ２ ０ —１ — １ 作 者 简 介 ： 桂 芬 （ ９７一 ， ， 京 通 州 人 ， 研 究 员 ， 要 从 事 植 物 病 毒 检 疫 研 究 工 作 。 李 １ ６ ）女 北 副 主
植物病害的分子检测技术及其应用
邮 编
２ １ — ２ ０ ００ １－ ８
００ ０ ３ ８１
进行 Ｐ Ｒ扩增 ，获得了区分 Ｖ ａ ｏ ａ Ｃ ．ｌ ＿ － ｂ ｔ ｍ和 Ｖ ｄｈａ 两个种的特异性序列 ， ｒ ｕ ．ａｌｅ ｉ 设计并合成了特异性引物对两者进行了
检测 。
Ｓ Ｒ等在植物病理学和病原真菌研究 中 Ｓ 得到了广泛应用 ，这些技术在很多种病
分子检测
中 图分 类 号 文献标志码
分子诊断应用
￥ １ ３ ４— ０ Ａ
种适合不同条件的 Ｄ Ａ分子标记技术 ， Ｎ
如 限 制 性 片 段 长 度 的 多 态 性 标 记 （Ｆ Ｐ 、 Ｒ Ｌ ）随机 扩增 多 态性 标 记 （ Ａ Ｄ） ＲＰ 、
简单重复序列标记 （Ｓ ）等多种 基于 ＳＲ Ｐ Ｒ的 Ｄ Ａ分子标记技术 ， 已应用于 Ｃ Ｎ 都 植物病害的病原检测和诊断中。
摘
要
本 文主 要 综 述 了 Ｐ Ｒ 技 Ｃ
近年来 ，随着分子生物学的快速发 展 ，在生命科学领域产生了许多新的研 究热点和研究技术 ，Ｃ Ｐ Ｒ就是其中之一。
该 技术 从它诞 生 到现 在 已经开 发 出了 多
年来 国内外应用 Ｄ Ａ分子标记技术开 Ｎ 展植物真菌病原鉴定 、 病害检测 、 遗传多
害和 多种病 原上 都有 研究 报 道 。据不 完 全 统 计 ， 国应 用 Ｐ Ｒ及其 相 关技 术 已 我 Ｃ
基金项 目 作者简 介
山西省 自然科 学基金 李亚立 （９ ４ ， ， １８ 一）女
项 目（０ ６ １０ ０ ２ ０ ０ １８ ）
河北廊坊人 ， 在读硕士研 究生 ， 主 要从事分子模特病理学的研究。
合 酶链 式 反应 、 疫捕 捉 Ｐ Ｒ Ｐ Ｒ 免 Ｃ 、Ｃ 一单 链 构 型 多态 性 、 实 时荧 光 Ｐ Ｒ Ｃ 、随机 扩增 多态 性 Ｄ Ａ和 限制 性 片段 长度 多 Ｎ 态 性 等［ ４ １ 。
植物病毒病检测方法
植物病毒病检测方法植物病毒病是农业生产上一种重要病害，严重影响农作物的产量和质量, 目前还没有1种治疗效果较理想的药剂，对发病植株做到早期诊断及提前检测就显得尤为重要。
植物病毒学历经近百年的发展，植物病毒的检测方法与手段也在不断发展与改进。
常用的方法有侵染力测定法、血清学方法、电子显微镜计数和分子生物学法等。
1.4.1侵染力测定法侵染力测定法是将病毒样本接种在植物上，根据侵染力的大小定量。
它的灵敏度在所有定量法中是比较高的，而且是其他定量法的基础。
设计一种新的定量法，如果不经过侵染力的验证，将无法判断测定的是病毒或者是具有侵染力的病毒。
侵染力测定法包括局部枯斑法、淀粉－碘斑法、系统感染率的测定法等。
侵染力测定多用粗汁液来接种，为了避免抑制物质的作用和使半叶枯斑数目控制在一定范围，须用缓冲液稀释接种物。
局部枯斑法1929年F.O.Holmes发现TMV在心叶烟（Nicotiana glutinosa）接种叶片上引起局部坏死斑点，在一定的病毒浓度范围内，所产生的斑点数目与病毒浓度成正比例。
这一发现成为病毒侵染性定量测定的基础（田波，1987）。
所有机械传染的病毒都有可能应用局部斑点法，但实际上只有少数病毒具有可用于定量测定的局部斑寄主。
一个待测样品所形成的斑点数目除取决于接种物中病毒浓度外，还受试验植物种类、环境条件和接种物中是否含有病毒抑制物质的影响。
淀粉－碘斑法当所研究的病毒没有过敏性枯斑寄主时，采用此法。
Holmes（1931）发现TMV接种的烟叶上有时形成明显的黄化斑块，但不能用于计数。
将这种接种叶用95％乙醇加热到80℃固定，然后用I2和KI混合液（10克I2，30克KI，1500毫升H2O）染色时，则侵染点处出现淀粉－碘的蓝色反应。
当下午采摘叶片，褪色过夜，然后用碘液染色，则侵染点较周围组织着色浅；当采摘叶片前，植株先在黑暗中放几个小时，再用碘液染色，则侵染点组织着色深。
这是由于病毒侵染既降低光合组织中碳水化合物的形成，也降低碳水化合物从光合组织中的运出。
分子检测技术及其在植物检疫检验中的应用
核酸杂交：
斑点杂交 核酸转膜杂交 荧光原位杂交（FISH）
核酸杂交技术
斑点杂交
核酸转膜杂交
荧光原位杂交（FISH）
DNA芯片技术
DNA芯片（DNA chip）也成基因芯片或DNA微阵，是 生物芯片的一种。通过光导原位合成或微量点样等技 术，将数以万计的DNA片段高密度有序地固定在固相 支持物上，产生二维DNA探针阵列，阵列中每个分子 的序列及位置都是已知的。这样可与标记的样品中的 靶分子进行杂交，通过特定的仪器对杂交信号的强度 进行高效、快速的检测分析，从而对检测样品中的靶 分子进行高效判断和定量。 基本过程：样品制备----分子杂交-----结果分析 特点：高通量
分子检测技术 及其在植物检疫检验中的应用
分子检测技术
基于核酸杂交和扩增来达到对特定病原物 或其他目标生物检测的目的。 PCR技术 核酸杂交 DNA芯片 限制性片段长度多态性
PCR技术
聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR )是一种 体外选择性扩增特定DNA片段的核酸合成技术。其原理是 在模板及引物存在和适宜的温度条件下，DNA聚合酶可以 催化单个脱氧核苷酸（dNTP）从引物的3’-OH端引入，并 沿5 ’→3’ 的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。 基本步骤：模板变性---引物退火----延伸反应 特点：特异性强、操作简便、灵敏度高等
行PCR之前，先要在反转录酶的作用下以RNA为模板合 成互补DNA，然后进行常规PCR，该技术称为RT-PCR。 • 鉴于RNA易降解的特性，产生IC-RT-PCR。先在PCR管中 加入一定稀释度的病毒特异性抗体，然后加入待测样品 粗提液，使病毒与抗体特异性结合，再洗涤除去未结合 的物质，加入裂解液释放病毒核酸后，再进行RT-PCR 。 将病毒的抗原与抗体特异性免疫反应与PCR 技术相结合， 称为免疫捕捉RT-PCR。 • 实例：IC-RT-PCR检测苹果褪绿叶斑病毒
植物病毒分子检测方法概述
电 印迹 免 疫 分 析 方 法 首 先 用 Ｓ Ｐ Ｄ ＡＧＥ
分 离 病 毒 Ｃ 把 蛋 白带 转 移 到 膜 上 ， 进 行 Ｐ， 再
Ｅ Ｓ 方法简单 ， 敏 度高 ， 异性 强 ， ＬＩＡ 灵 特
适 于大 量 样 品 的检 测 。 １ ２ 斑 点 免 疫 吸 附 法 ．
烯 酶 联 板 ） 附 ， 免 疫 反 应 和 酶 的高 效 催 化 吸 将 反 应 有 机 结 合 的方 法 。 酶 标 抗 体 （ 或抗 抗 体 ）
与 相 应 抗 原 反 应 时 形 成 酶 标 记 的 免 疫 复 合 物 ， 遇 到 相 应 的 底 物 时产 生 颜 色 反 应 ， 色 酶 颜 深 浅 与 抗 原 量 正相 关 。该 方 法 已被 用 于各 种 植物病毒检测 。 后来 发 展 的 用 酶 标 Ａ 蛋 白 取 代 酶 标 抗
植 物 病 毒 粒 体 主要 由核 酸 和 蛋 白外 壳 构 成 ， 白外 壳 由许 多 外 壳 蛋 白 （ Ｐ 组 成 。 蛋 Ｃ ）
Ｃ Ｐ和 核 酸 因 病 毒 的 不 同 而 异 ， 检 测 、 是
上形 成 有 色 斑 点 ， 点 颜 色 深 浅 与 抗 原 的 量 斑 成 正 比 。也 已用 于 各种 病 毒 检 测 。 斑 点 法 简 便 ， 应 时 间短 ， 应 结 果 可 长 反 反
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２ ０ 年 第 ６期 ０２
植 物检 疫
Ｐ ＡＮＴ Ｌ ＱＵＡＲ ＡＮＴＩ ＮＥ
不适于大量样 品的检测。 １ ５ 伏 安 酶 联 免 疫 分 析 法 ．
时 间 ， 且 可 重 复 性 强 ， 病 毒 检 测 技 术 方 面 并 在 是 一 大 进 步 。但 在 样 品量 极 少 或 病 毒 在 组 织 中含 量 很 低 、 蛋 白外 壳 的 类 病 毒 的检 测 时 ， 无
植物病毒检测技术研究进展详解
植物病毒检测技术研究进展刘茂炎摘要：随着现代技术的发展特别是分子技术的发展，鉴定和检测病毒的方法越来越多，也越来越精确快速。
以PCR为基础的基因工程技术已经广泛应用于病毒核酸分子的鉴定，其高灵敏度和高特异性是与PCR扩增反应的特异性引物相关联的；于此同时传统的鉴定检测技术依然有其发展优势。
不论怎样的方法技术，都是以病毒的理化性质以及侵染性为基础的。
在此基础上，甚至出现了某些边缘技术在病毒鉴定检测方面的应用。
本文主要综述的是对植物病毒鉴定检测技术的研究进展。
关键词：植物病毒；检测技术；PCR病毒在生物学上特征（如病毒的理化性质，包括病毒粒子的形态、大小、对理化因子的耐受性等）以及在寄主上的反应（如寄主范围、症状表现、传播方式等）是对病毒最直观的认识。
常规的对植物病毒的鉴定检测方法有：生物学测定方法、血清学技术、电子显微镜技术、分子生物学技术等。
生物学测定依据病毒的侵染性，观察寄主植株或其它生物的症状表现；血清学技术以病毒外壳蛋白(CP)为基础；电子显微镜技术依据病毒的形状大小的不同；分子生物学鉴定则以病毒核酸为基础。
1.生物学鉴定最直接的方法是目测法，直接观察病毒对植物的病害症状。
如烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus，TMV），病害症状为叶上出现花叶症状，生长陷于不良状态，叶常呈畸形；玉米鼠耳病的诊断主要依据田间症状表现[1]。
目测法因观察的主观性和症状的不确定性的影响而不精准。
1929年美国病毒学家霍姆斯（Holmes）用感病的植物叶片粗提液接种指示植物，2~3天后接种叶片出现圆形枯斑，枯斑数与侵染性病毒的浓度成正比，能测出病毒的相对侵染力，对病毒的定性有着重要的意义，这种人工接种鉴定的方法就是枯斑和指示植物检测法。
国内报道的水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf fijivirus，RBSDV)可侵染28属57种禾本科植物，该病毒的主要传毒介体是灰飞虱(Laodelphax striatella)，玉米是灰飞虱的桥梁寄主而非最适寄主[2]，以玉米作为指示植物可以良好地鉴定RBSDV。
几种常用植物病原细菌分子检测方法
专论与综述R evie ws收稿日期: 20060220 修订日期: 20060418基金项目: 国家自然科学基金项目(39970481);国家“863”计划项目(2001AA249021)3通讯作者E 2mail :jhguo @几种常用植物病原细菌分子检测方法尹燕妮, 黄艳霞, 葛芸英, 郭坚华3(南京农业大学农业部病虫监测与治理重点开放实验室,南京 210095)摘要 植物病原细菌(phytobacteria )是植物上一类重要的病原菌,这些细菌能引起多种农作物、经济作物、花卉、树木及牧草上的病害。
它的快速检测是病害防治、预测预报及植物检疫必不可少的重要工作。
其中,以PCR 为基础的分子检测技术的进步使植物病原细菌的检测更快速、灵敏和可靠。
本文对近年来植物病原细菌分子检测技术进行介绍,尤其是应用广泛的ITS 2PCR (intergenic transcribed space 2PCR )、ARDRA (amplified ribosomal DNA restric 2tion analysis 2PCR )、rep 2PCR (repetitive DNA 2PCR )和实时荧光定量PCR (real 2time quantitative PCR )技术,旨在促进我国植物病原细菌研究的快速发展。
关键词 植物病原细菌; 分子检测; PCR 中图分类号 S 432.42Molecular diagnostic techniques for several commonly used phytobacteriaY in Yanni , Huang Yanxia , Ge Yunying , Guo Jianhua(Key L aboratory of Monitoring and M anagement of Plant Diseases and Pests ,M inist ry of A g riculture ,N anj ing A g ricultural Universit y ,N anj ing 210095,Chi na )Abstract Phytobacteria are widespread and economically important plant pathogens.These bacteria cause severe diseases on many important plants such as field crop s ,economically important crops ,flowers ,trees ,and pasture.Rapid detection of phytobacteria provides a better f ramework for addressing important plant disease problems related to diagnosis and prediction of diseases ,and ultimate management of disease risks.The technology 2driven advances in PCR 2based methods make the detection of bacterial pathogens more rapid ,sensitive and reliable.In this paper ,the molecular diagnostic techniques were introduced ,especially ITS 2PCR ,ARDRA ,rep 2PCR and real 2time quantitative PCR techniques.It was aimed to promote the research of phytobacteria in China.K ey w ords plant pathogenic bacteria ; molecular detection ; PCR 传统病原细菌检测方法主要是依据症状、形态、生理生化反应和血清学等方法。
几种常用植物病原细菌分子检测方法
几种常用植物病原细菌分子检测方法一、几种常用植物病原细菌分子检测方法1.基因扩增技术：基因扩增技术是植物病原细菌的分子检测的一种重要的方法。
它可以通过对植物病原细菌的DNA和RNA进行扩增，从而检测植物病原细菌的特异性基因片段。
具体来说，首先将植物样本中的病原细菌DNA/RNA提取出来，然后使用特定的聚合酶链反应（PCR），在恒温下复制植物病原细菌特异性DNA/RNA片段，最后再进行适当的 DNA 杂交实验，就可以鉴定出病原细菌的特异性DNA片段，从而检测出植物病原细菌。
2.生物信息学分析：生物信息学分析也是一种常用的植物病原细菌分子检测方法。
它可以通过对植物病原细菌的特征基因序列进行分析，从而检测出植物病原细菌的特征基因序列。
具体来说，首先将植物样本中的病原细菌DNA/RNA提取出来，然后通过特定的软件进行序列比对，有效地检索出植物病原细菌的特征基因序列，从而检测出植物病原细菌。
3. 免疫检测：免疫检测是植物病原细菌的分子检测的一种重要的方法，它可以通过检测植物病原细菌的特异性抗原，从而检测出植物病原细菌。
具体来说，首先将植物样本中的病原细菌抗原提取出来，然后使用特定的免疫试剂进行试验，如免疫印迹法（Western Blot），ELISA（Enzyme-linked Immunosorbent Assay）等，从而检测出植物病原细菌的特异性抗原，从而检测出植物病原细菌。
4. 质粒分离技术：质粒分离技术也是一种常用的植物病原细菌分子检测方法，它可以通过检测植物病原细菌的特异性质粒，从而检测出植物病原细菌。
具体来说，首先将植物样本中的病原细菌质粒提取出来，然后使用特定的分离器对质粒进行分离，比如电泳或磁性分离，从而检测出植物病原细菌的特异性质粒，从而检测出植物病原细菌。
总之，上述是几种常用的植物病原细菌分子检测方法，它们都能够有效地检测出植物病原细菌。
不过，在实际应用中，应该根据植物样本的不同特点，选择合适的植物病原细菌分子检测方法，以达到最佳的检测效果。
植物的病毒检测技术
植物的病毒检测技术植物病毒病害是一类重要病害,几乎在各类作物上都有发生,严重影响农作物的产量和质量,用一般的方法难以防治,是生产上的一大难题。
种植无病毒种子、苗木是一种非常有效的防治措施。
因而如何对种子、苗木等无性繁殖材料以及在发病早期对植株进行快速准确地检测诊断就显得尤为重要。
最初植物病毒检测主要依靠生物学性状,但生物学方法费时费力,检测周期长,而且易受环境条件的影响,反应不稳定、重复性差。
目前植物病毒检测主要是血清学检测(以病毒外壳蛋白为基础)和核酸检测,前者主要包括ELISA、快速免疫滤纸测定、免疫胶体金技术、免疫毛细管区带电泳、免疫PCR 等;后者主要有PCR、分子信标、实时RT-PCR和核酸杂交等。
1 血清学检测方法1．1 酶联免疫吸附测定(ELISA)酶联免疫吸附测定是一种采用固相(主要为聚苯乙烯酶联板) 吸附,将免疫反应和酶的高效催化反应有机结合的方法,其基本原理是以酶催化的颜色反应指示抗原抗体的结合。
该方法首先将同源特异抗体吸附在反应器皿底部，加入欲测试的含病毒的样品，病毒与抗体结合，病毒颗粒被固定，再加入标记的特异抗体和酶的底物，酶与底物反应后会出现有颜色的溶液其强度与病毒浓度成正比，用此方法可测定出病毒的浓度。
ELISA方法简单,灵敏度高,特异性强,适于大量样品的检测,目前该方法已被广泛用于植物病毒检测。
在此基础上加以改进又发展了一些新的检测方法,如A 蛋白酶联吸附(SPA-ELISA)、斑点免疫吸附(DIBA)、直接组织斑免疫测定( IDDTB) 、伏安酶联免疫分析[1]、快速ELISA 等。
1．2 快速免疫滤纸测定法(Rapid immuno-filter paper assay , RIPA) 快速免疫滤纸测定类似乳胶凝集反应,其原理是把待测病毒的抗体吸附在乳胶颗粒上,通过大颗粒乳胶间接反应小颗粒病毒的存在。
所不同的是RIPA使用了一种红色乳胶,从而使检测更加简单和直观。
植物病害的分子检
利用病原菌在rDNA 的ITS 区段既具保守性又在科、 属、种水平上均有特异性序列的特性，对ITS 区进行PCR 扩增，测序及序列分析后再设计特异性引物来诊断和检测 植物病原菌，尤其是植物病原真菌的分子检测已越来越被 广泛应用。
Nazar，等针对棉花黄萎病菌（verticillium spp.） 运ITS 区通用引物进行PCR 扩增，获得了区分V. alboatrum和V. dahliae 两个种的特异性序列，设计并合成了特 异性引物对两者进行了检测。
从目前来看，虽然传统诊断方法仍然占主导地位， 分子诊断方法大多数仍停留在实验室水平，但分子诊断技 术因其拥有快速、准确、特异、灵敏等优点已经在实际中 得到了应用，随着基因组学和生物信息学技术的飞速发展， 最终将实现分子诊断技术的广泛应用，实现植物病害的分 子鉴定和早期诊断的目的,以达到更好地控制病害和提高 农业经济效益。
一、PCR技术
聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction，PCR)是 体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低 温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使 目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作 简便、省时等特点。
• PCR进行的基本条件： ⑴DNA模板（在RT-PCR中模板是RNA）； ⑵引物； ⑶dNTP（dATP、dTTP、dGTP、dCTP） ⑷Taq DNA聚合酶 • PCR循环由三个步骤组成： ⑴变性 使模板DNA解离成单链；
据不完全统计，我国应用PCR 及其相关技术已检测
的植物病害达50 余种。特别是近年来国内外应用DNA 分 子标记技术开展植物真菌病原鉴定、病害检测、遗传多态 性和抗病基因分析。如多种植物病原镰刀菌、禾谷类白粉 菌、锈菌、马铃薯晚疫菌、小麦叶枯菌和腐霉菌等多种植 物病原真菌的种、亚种、专化型、生理小种或致病类型应 用DNA 分子标记相关技术进行了鉴定和诊断。
植物的病毒检测技术
植物的病毒检测技术植物病毒病害是一类重要病害,几乎在各类作物上都有发生,严重影响农作物的产量和质量,用一般的方法难以防治,是生产上的一大难题。
种植无病毒种子、苗木是一种非常有效的防治措施。
因而如何对种子、苗木等无性繁殖材料以及在发病早期对植株进行快速准确地检测诊断就显得尤为重要。
最初植物病毒检测主要依靠生物学性状,但生物学方法费时费力,检测周期长,而且易受环境条件的影响,反应不稳定、重复性差。
目前植物病毒检测主要是血清学检测(以病毒外壳蛋白为基础)和核酸检测,前者主要包括ELISA、快速免疫滤纸测定、免疫胶体金技术、免疫毛细管区带电泳、免疫PCR 等;后者主要有PCR、分子信标、实时RT-PCR和核酸杂交等。
1 血清学检测方法1．1 酶联免疫吸附测定(ELISA)酶联免疫吸附测定是一种采用固相(主要为聚苯乙烯酶联板) 吸附,将免疫反应和酶的高效催化反应有机结合的方法,其基本原理是以酶催化的颜色反应指示抗原抗体的结合。
该方法首先将同源特异抗体吸附在反应器皿底部，加入欲测试的含病毒的样品，病毒与抗体结合，病毒颗粒被固定，再加入标记的特异抗体和酶的底物，酶与底物反应后会出现有颜色的溶液其强度与病毒浓度成正比，用此方法可测定出病毒的浓度。
ELISA方法简单,灵敏度高,特异性强,适于大量样品的检测,目前该方法已被广泛用于植物病毒检测。
在此基础上加以改进又发展了一些新的检测方法,如A 蛋白酶联吸附(SPA-ELISA)、斑点免疫吸附(DIBA)、直接组织斑免疫测定( IDDTB) 、伏安酶联免疫分析[1]、快速ELISA 等。
1．2 快速免疫滤纸测定法(Rapid immuno-filter paper assay , RIPA) 快速免疫滤纸测定类似乳胶凝集反应,其原理是把待测病毒的抗体吸附在乳胶颗粒上,通过大颗粒乳胶间接反应小颗粒病毒的存在。
所不同的是RIPA使用了一种红色乳胶,从而使检测更加简单和直观。
植物病毒分子检测方法概述
植物病毒分子检测方法概述邵碧英(福建出入境检验检疫局 福州 350001) 植物病毒粒体主要由核酸和蛋白外壳构成,蛋白外壳由许多外壳蛋白(CP)组成。
CP和核酸因病毒的不同而异,是检测、鉴定植物病毒的主要依据。
广义的植物病毒分子检测方法包括蛋白质检测(或血清学试验)和核酸检测方法,本文分别介绍。
1 以病毒外壳蛋白为基础的检测方法植物病毒的CP具有抗原性,很多病毒可以被提纯并制备成高效价的抗血清,根据特异性的抗原抗体反应可检测植物病毒的存在。
血清学方法有很多,应用较广泛的是酶联免疫吸附反应,在此基础上加以改进也发展了一些新的检测方法。
111 酶联免疫吸附反应(EL ISA)EL ISA是一种采用固相(主要为聚苯乙烯酶联板)吸附,将免疫反应和酶的高效催化反应有机结合的方法。
酶标抗体(或抗抗体)与相应抗原反应时形成酶标记的免疫复合物,酶遇到相应的底物时产生颜色反应,颜色深浅与抗原量正相关。
该方法已被用于各种植物病毒检测。
后来发展的用酶标A蛋白取代酶标抗抗体的EL ISA被称为A蛋白酶联吸附法(SPA-EL ISA)。
几种植物病毒的SPA-EL ISA诊断试剂盒已被研制成功[1]。
EL ISA方法简单,灵敏度高,特异性强,适于大量样品的检测。
112 斑点免疫吸附法20世纪80年代发展的以硝酸纤维素膜(NCM)为固相载体的酶联免疫吸附试验—斑点免疫吸附法,检测原理类似于EL ISA,但酶与底物反应产生不溶性产物,在NCM 上形成有色斑点,斑点颜色深浅与抗原的量成正比。
也已用于各种病毒检测。
斑点法简便,反应时间短,反应结果可长期保存,不需任何特殊设备,也适合于大量样品的测定。
113 直接组织斑免疫测定法(IDD TB)与EL ISA相比,斑点法更为简便,但仍然需要提取病毒的粗提液或提纯制剂,试验过程较繁琐。
改进后的直接组织斑免疫测定是直接把植物组织切块固定于膜上,然后利用抗原抗体特异反应来检测植物病毒。
鞠振林等[2]以IDD TB检测病组织中的马铃薯X病毒Potato virus X等多种病毒获得较好结果。
病毒植物的鉴定方法有哪些
病毒植物的鉴定方法有哪些病毒在植物界中是一种常见病害，能够给农作物的产量和质量带来严重影响。
因此，及早准确地鉴定病毒植物是一项重要的工作。
下面将介绍几种常用的病毒植物鉴定方法。
观察症状法观察病变症状是最常见的病毒鉴定方法之一。
通过观察植物叶片、茎部或果实出现的病变症状，如叶片弯曲、颜色改变、疮痂等，可以初步判断植物是否感染了病毒。
但这种方法只能做出初步判断，不能确定具体的病毒种类。
检测病毒RNA法利用分子生物学技术，如逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和多重逆转录聚合酶链式反应（RT-qPCR），可以检测植物体内是否存在病毒RNA。
通过比对已知的病毒序列，可以确定感染的具体病毒种类，这种方法准确性较高。
酶联免疫吸附试验法酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常用的病毒鉴定方法。
该方法通过使用特异性的抗体来检测植物体内的病毒抗原，从而确定是否感染了特定的病毒。
ELISA 方法快速、简便，广泛应用于病毒鉴定领域。
电子显微镜观察法电子显微镜观察是一种直接观察病毒颗粒的方法，通过该方法可以清晰地观察到病毒在植物细胞内的形态特征，从而确定植物是否感染了病毒。
虽然这种方法需要昂贵的设备和专业的技术，但是对于一些病毒形态较为特殊的情况非常有效。
检测病毒蛋白法有些病毒感染植物后会在其体内表达一些病毒特异性的蛋白，利用这些蛋白可以进行病毒的鉴定。
常用的方法包括Western blot和免疫荧光法等。
这些方法对于特定的病毒鉴定具有很高的准确性。
综上所述，病毒植物的鉴定方法包括观察症状法、检测病毒RNA法、酶联免疫吸附试验法、电子显微镜观察法和检测病毒蛋白法等多种方式。
在实际工作中，可以根据情况选择合适的鉴定方法，以确保病毒植物的及时诊断和治疗。
植物病毒的主要检测方法
植物病毒的主要检测方法植物病毒是一种对农作物和植物造成严重危害的病原体，因此及时准确地检测植物病毒对于保障农作物生产的健康至关重要。
现代生物技术的发展为植物病毒的检测提供了更多更精准的方法。
以下将介绍几种主要的植物病毒检测方法：1. 核酸检测法核酸检测法是目前应用最广泛的植物病毒检测方法之一。
通过提取植物组织中的核酸，利用PCR（聚合酶链式反应）技术扩增目标病毒的特定序列，然后进行电泳分析或基因测序，从而确定是否存在目标病毒。
核酸检测法具有高灵敏度和特异性，能够准确快速地对植物病毒进行检测。
2. ELISA法ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学检测方法，也被广泛应用于植物病毒的检测。
ELISA法通过将植物提取物或纯化的病毒蛋白等与特定抗体结合，再通过酶标记的二抗对检测结果进行信号增强，最终通过颜色变化等方式进行病毒的检测和鉴定。
ELISA法操作简便，且可以同时检测多个病毒。
3. 样品接种法样品接种法是一种传统的植物病毒检测方法，通常用于对植物病毒进行初步筛选或确认。
将待检测样品接种在对病毒易感染的植物上，观察接种植物是否出现症状，并通过传统的病毒学鉴定方法确认病毒的存在。
虽然样品接种法操作简单，但对病毒的检测灵敏度相对较低。
4. 蛋白质检测法蛋白质检测法通过检测植物组织中的病毒蛋白来确定病毒的存在与否。
常用的蛋白质检测方法包括免疫印迹法（Western blot）和质谱法等。
这些方法通过检测植物组织或病毒颗粒中特定的蛋白质结构来准确鉴定植物病毒的种类和数量。
结语植物病毒的及时检测对于预防和控制病毒病害具有重要意义。
以上介绍的几种主要植物病毒检测方法各有优势和局限性，可以根据具体的实验需求选择合适的方法进行检测。
未来随着科技的不断发展，植物病毒的检测方法也将不断更新和完善，为植物病毒防控工作提供更多更好的技术支持。
利用培育技术进行各种动植物的病毒检测方法
利用培育技术进行各种动植物的病毒检测方法对于动植物的病毒检测方法，近年来，人们广泛使用培育技术来加强检测的准确性和效率。
培育技术是一种将待测样品在特定条件下进行培养和繁殖的方法，通过观察培养物的变化和生长情况，可以快速检测出可能存在的病毒。
本文将探讨利用培育技术进行各种动植物的病毒检测方法，并讨论其优势和不足之处。
一、细胞培养法细胞培养法是一种常见的动植物病毒检测方法。
该方法首先从待测样品中提取细胞，并将其培养在含有适当营养物的培养基中。
经过一段时间的培养，如细胞出现异常变化，例如颜色变化、病斑等，就可以判断样品可能存在病毒。
此外，可以使用荧光染料或特定抗体进行标记，以便更准确地观察和鉴定病毒。
细胞培养法的优势在于其对病毒的敏感性较高，能够检测出数量较少的病毒。
此外，该方法还可以提供病毒的纯化和分离，为进一步的研究提供了便利。
然而，细胞培养法也存在一些限制。
首先，培养细胞需要耗费大量时间和资源。
其次，不同的病毒可能需要不同的培养条件，这增加了病毒检测的复杂性和难度。
此外，某些病毒可能无法在体外培养条件下生长，从而导致检测结果的不准确。
二、分子生物学方法分子生物学方法是一种利用DNA或RNA技术进行病毒检测的方法。
其中，PCR（聚合酶链式反应）和RT-PCR（逆向转录聚合酶链式反应）是常用的技术。
通过提取待测样品中的DNA或RNA，并利用特异性引物和聚合酶进行扩增，可以快速、准确地检测出病毒。
PCR和RT-PCR的优势在于其高度特异性和灵敏性。
相较于传统的培养方法，这些分子生物学方法可以更快速、更准确地检测出病毒。
此外，PCR还可以进行定量分析，了解病毒的浓度和变化趋势，对于防控病毒传播具有重要意义。
然而，分子生物学方法也存在一些限制。
首先，这些方法对实验操作技术要求较高，对实验条件的控制也较为苛刻。
其次，PCR和RT-PCR有可能发生假阳性或假阴性结果，需要经过进一步的验证。
此外，这些方法需要在实验室中进行，不具备现场快速检测的能力。
什么是植物病毒检测
什么是植物病毒检测
植物病毒检测是一项重要的农业技术，用于检测植物是否受到了病毒感染。
病毒是一种微生物，能够侵入并破坏植物细胞，导致植物生长发育异常、产量下降甚至死亡。
因此，及早发现和诊断植物病毒感染对于保障农作物的产量和品质至关重要。
植物病毒检测的方法主要包括生物学检测和分子生物学检测两种。
生物学检测通常通过观察植物外部表现（如叶片颜色、形态变化等）来初步判断是否受到病毒感染，但这种方法有时存在主观性和不确定性。
而分子生物学检测则是通过检测植物组织或体液中的病毒核酸来确定是否感染了特定的病毒，具有更加准确和可靠的优势。
常用的分子生物学检测方法包括聚合酶链式反应（PCR）、酶联免疫吸附实验（ELISA）等。
这些方法可以快速、准确地检测出植物是否感染了特定的病毒，并且能够帮助农民采取相应的防控措施，避免病毒进一步传播和危害农作物。
在现代农业中，植物病毒检测已经成为一项不可或缺的技术，可以帮助农民及时发现、诊断和防控病毒病害，保障农作物的产量和质量，实现农业的可持续发展和食品安全。
通过不断改进和应用检测技术，我们可以更好地保护植物生长，提高农作物的产量和质量，为人类的生存和发展做出贡献。
因此，植物病毒检测是一项重要的技术，对于维护农产品安全、农业生产稳定和环境可持续发展具有重要意义。
我们应该高度重视植物病毒检测工作，加强技术创新和人才培养，不断提高检测水平，为建设美丽乡村、促进农业现代化作出更大的贡献。
植物病害的快速检测
植物病害的快速检测植物是人类生活中不可或缺的一部分，它们不仅是我们的食物来源，更是环境中的重要组成部分。
然而，植物在生长过程中也会遭受各种病害的威胁。
植物病害不仅使得产量降低，还可能对环境造成危害。
因此，快速检测并及时识别植物病害变得尤为重要。
目前，植物病害的快速检测技术已经有了很大的发展。
以下会根据不同的检测方法进行分章介绍。
一、生物学检测方法生物学检测方法是利用生物学技术的手段，通过对植物病原菌的生理生化特性、形态学特征等进行研究，以达到快速检测的目的。
其中，酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常用的生物学检测方法。
ELISA技术可以在病原菌分泌的外膜蛋白、产生的抗原等生物学产物中迅速检测出相应的抗体。
该方法具有灵敏度高、特异性强、检测速度快等优点。
因此，ELISA技术已经成为工业化生产中检测病原菌的常用技术。
二、分子生物学检测方法分子生物学检测方法主要是利用分子生物学技术手段，对植物病原菌的基因组进行检测。
其中，聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR技术是常用的分子生物学检测方法。
PCR技术是一种利用酶扩增DNA的产物的方法，它可以在一个反应体系中扩增大量的DNA。
PCR技术的快速检测特点是适用于少量DNA标本，而且检测速度快，灵敏度高，可以检测到微量量的目标序列。
PCR技术在生物检测和医学检测等领域得到了广泛应用。
实时荧光定量PCR技术是一种利用荧光探针来检测PCR反应产物的方法。
该技术通过对PCR反应体系中的荧光信号进行实时监测，可以快速、准确地检测植物病原菌。
实时荧光定量PCR技术具有检测速度快、灵敏度高、准确度高等优点，因此在疫情监测、病原检测等领域得到了广泛应用。
三、纳米技术检测方法纳米技术检测方法是指利用纳米技术通过制备纳米结构来检测植物病原菌，其中，纳米结构材料可以是纳米粒子、纳米管和纳米线等。
纳米技术检测方法具有高效、快速、便携等优点，已经成为植物病原菌检测领域的重要技术。
植物病毒的识别与防治技术
植物病毒的识别与防治技术一、植物病毒的识别技术1.1 基本原理植物病毒的识别主要基于病毒的形态、生物学特性和分子遗传学的方法，其中最常见的方法是通过显微镜观察病毒的形态特征。
1.2 光学显微镜观察光学显微镜可以观察到直径在20-300nm之间的病毒粒子，可以根据病毒的形状、大小和外观特征来初步识别病毒类型。
1.3 电子显微镜观察电子显微镜可以观察到直径小于20nm的病毒粒子，对于一些较小的病毒或病毒颗粒的形态细节较为清晰，因此能够更准确地识别病毒。
1.4 ELISA（酶联免疫吸附试验）ELISA可以通过检测病毒抗原或抗体来进行病毒的识别，该方法具有敏感性高、特异性强、操作简单等优点，在植物病毒的诊断与鉴定中被广泛应用。
1.5 聚合酶链反应（PCR）PCR是一种通过扩增病毒的核酸片段来进行病毒的检测与识别的技术，其具有高灵敏度和高特异性的优点，尤其适用于对低病毒含量的样品进行检测。
二、植物病毒的防治技术2.1 防治措施2.1.1 防治病毒传播途径病毒主要通过介体、种子、锄耕工具、昆虫等传播途径进行传播，因此可以通过限制病毒的传播途径来防治病毒病害。
2.1.2 育种选育抗病品种通过育种选育抗病品种是一种重要的植物病毒防治方法，通过培育具有病毒抵抗力的品种来控制病毒的传播和病害的发生。
2.1.3 消毒灭菌通过对种子、苗木、工具等进行消毒灭菌，可以有效地防止病毒传播。
2.2 防治技术2.2.1 化学防治化学防治是通过使用化学农药来控制病毒病害，但由于病毒的复杂性和变异性，化学防治并非常见的病毒防治方法。
2.2.2 生物防治通过利用天敌、寄生菌等生物控制剂来防治植物病毒病害，具有环境友好、无污染等优点。
2.2.3 身体隔离将患病植物隔离于健康植物之外，以防止病毒的传播。
2.2.4 栽培管理通过加强植物的养分供应、施肥调节、缓解环境压力等栽培管理措施，能够增强植物的抵抗力，减轻病毒病害的发生。
2.2.5 屏蔽技术通过种植防护网等屏蔽技术，可以减少病毒传播途径，从而有效地防治病毒病害。
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植物病毒分子检测方法概述邵碧英(福建出入境检验检疫局 福州 350001) 植物病毒粒体主要由核酸和蛋白外壳构成,蛋白外壳由许多外壳蛋白(CP)组成。
CP和核酸因病毒的不同而异,是检测、鉴定植物病毒的主要依据。
广义的植物病毒分子检测方法包括蛋白质检测(或血清学试验)和核酸检测方法,本文分别介绍。
1 以病毒外壳蛋白为基础的检测方法植物病毒的CP具有抗原性,很多病毒可以被提纯并制备成高效价的抗血清,根据特异性的抗原抗体反应可检测植物病毒的存在。
血清学方法有很多,应用较广泛的是酶联免疫吸附反应,在此基础上加以改进也发展了一些新的检测方法。
111 酶联免疫吸附反应(EL ISA)EL ISA是一种采用固相(主要为聚苯乙烯酶联板)吸附,将免疫反应和酶的高效催化反应有机结合的方法。
酶标抗体(或抗抗体)与相应抗原反应时形成酶标记的免疫复合物,酶遇到相应的底物时产生颜色反应,颜色深浅与抗原量正相关。
该方法已被用于各种植物病毒检测。
后来发展的用酶标A蛋白取代酶标抗抗体的EL ISA被称为A蛋白酶联吸附法(SPA-EL ISA)。
几种植物病毒的SPA-EL ISA诊断试剂盒已被研制成功[1]。
EL ISA方法简单,灵敏度高,特异性强,适于大量样品的检测。
112 斑点免疫吸附法20世纪80年代发展的以硝酸纤维素膜(NCM)为固相载体的酶联免疫吸附试验—斑点免疫吸附法,检测原理类似于EL ISA,但酶与底物反应产生不溶性产物,在NCM 上形成有色斑点,斑点颜色深浅与抗原的量成正比。
也已用于各种病毒检测。
斑点法简便,反应时间短,反应结果可长期保存,不需任何特殊设备,也适合于大量样品的测定。
113 直接组织斑免疫测定法(IDD TB)与EL ISA相比,斑点法更为简便,但仍然需要提取病毒的粗提液或提纯制剂,试验过程较繁琐。
改进后的直接组织斑免疫测定是直接把植物组织切块固定于膜上,然后利用抗原抗体特异反应来检测植物病毒。
鞠振林等[2]以IDD TB检测病组织中的马铃薯X病毒Potato virus X等多种病毒获得较好结果。
徐明全等[3]采用IDD TB法从兰花叶片中检测到建兰花叶病毒Cymbidium mosaic virus。
把石斛兰叶片从叶尖至叶尾每0.5cm切割1次并压印在膜上,检测结果可直接显示出感染病毒的具体部位。
组织印迹法明显比EL ISA和DIBA的试验程序简单、快速。
但病毒在植物的不同部位分布不均匀,同一样品要重复多次,以提高检测的准确性。
114 电印迹免疫分析(EBLA)电印迹免疫分析方法首先用SDS2PA GE 分离病毒CP,把蛋白带转移到膜上,再进行抗原杭体反应,根据CP分子量和吸附特异性抗血清的特殊带来判断该病毒的存在与否。
EBLA和EL ISA、DIBA相比具有明显的优点,通过电泳将植物病毒的CP和植物组织中的其它蛋白分离开来,排除了杂蛋白的干扰,可检测低浓度的植物病毒。
此方法—773—不适于大量样品的检测。
115 伏安酶联免疫分析法伏安酶联免疫分析是将酶催化、免疫技术和伏安法检测相结合的一种免疫分析方法。
焦奎等[4]已研究10个伏安酶联免疫分析新体系,灵敏度均高于EL ISA 。
伏安酶联免疫分析法具备了伏安法的高灵敏度和高准确性,又具备免疫反应的特异性,仪器设备简单,操作方便。
但此方法不适宜于大量样品的分析。
116 胶体金免疫法胶体金颗粒具有高电子密度和能结合生物大分子的特性,将其标记到抗体或SPA 上,再利用抗原抗体反应来检测抗原,增强了可见性,若在金颗粒周围再进行银染色又提高了检测灵敏度。
在膜上进行免疫金、免疫金/银染色时分别称为斑点免疫金(Dot 2IGS )和斑点免疫金/银(Dot 2IGSS )染色。
魏梅生[5]将Dot 2IGS 和Dot 2IGSS 应用于烟草环斑病毒(Tobaccoring 2spot virus )的检测,还将胶体金颗粒标记TRSV 的抗体,制成了免疫层析检测试条[6],试纸条检测操作简便,不需要任何仪器,10mim 之内即有结果,特别适于田间快速诊断和口岸检疫。
117 免疫PCR 新近发展起来的免疫PCR 是将抗原抗体反应的高特异性与PCR 的高录敏度有机结合的检测技术与酶标检测技术相比,免疫PCR 是用DNA 片段取代酶来标记抗体,然后用PCR 扩增DNA 片段从而放大抗原抗体反应,大大提高了检测灵敏度。
Sharman [7]建立一种复合免疫PCR ,可同时检测香蕉和车前草粗提取汁液中的香蕉苞叶花叶病毒(Banana bract mosaic virus ,黄瓜花叶病毒和香蕉束顶病毒(Banana bumchy top virus )。
2 以病毒核酸为基础的检测方法血清学方法检测植物病毒的优点是灵敏、使用方便,与生物学实验相比节省空间、时间,并且可重复性强,在病毒检测技术方面是一大进步。
但在样品量极少或病毒在组织中含量很低、无蛋白外壳的类病毒的检测时,必须用核酸检测法。
211 PCRPCR 是一种DNA 体外扩增技术,大多数植物病毒含的是RNA ,首先要将RNA 反转录成cDNA ,后进行PCR ,此方法称为R T 2PCR 。
近年来,在R T 2RCR 基础上已经发展了多种方法用于植物病毒的检测。
复合R T 2PCR 是在同一R T 2PCR 反应体系中用几对不同的引物同时检测多个目的片段。
Nassuth 等[8]应用复合R T 2PCR 同时检测葡萄藤提取物中的4种病毒。
Nie 等[9]也应用复合R T 2PCR 技术同时检测了马铃薯的5种病毒和1种类病毒。
复合R T 2PCR 和用单一R T 2PCR 做相同数目的病毒检测相比,节约了时间和试剂。
PCR 2EL ISA 是用EL ISA 替代琼脂糖凝胶电泳来检测PCR 产物的方法,录敏度高。
Olmos 等[10]用PCR 2EL ISA 方法检测PPV ,灵敏度比免疫PCR 高100倍。
采用将PCR 和荧光测定相结合的实时荧光定量PCR 不仅可避免假阳性的出现,而且提高了检测灵敏度,还能进行定量检测。
Roberts 等[11]用实荧光定量R T 2PCR 可检测少至500fg 的番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus.)。
Eun 等[12]采用复合荧光定量R T 2PCR 法可同时检测少至5fg 的CymMV 和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot to 2bamovirus )。
PCR 对病毒是的有利条件是它特别灵敏,可检测最低病毒含量达到fg 水平,可直接对任何材料,包括坏死、鲜活、甚至很微量材料进行检测。
但植物病毒多为RNA 病毒,RNA 很容易降解,撮相对困难,只有那些已知序列的病毒才能作PCR ,实验时需要昂贵的试剂和特殊的设备。
—873—核酸探针和固定在膜上的核酸进行杂交,使杂交体带上标记而被是出来。
一般采用核酸点杂交法来检测植物病毒。
朱水芳等、李尉民等[13～14]分别应用核酸杂交成功检测了ToRSV、SBMV。
核酸杂交还可和R T2PCR 结合使用。
Bertolini等[15]采用复合R T2PCR 同时检测能侵染橄榄树的6种RNA病毒,后用这6种病毒的特异Dig标记的探针对PCR产物进行检测。
核酸分子杂交法特异性强,灵敏度高,可检测到lpg的DNA,可检测大量样品。
213 其它核酸检测法RNA病毒、类病毒在寄主体内存在的特异dsRNA有各自的迁移率、分子量、片段数,可用于植物病毒的鉴定,dsRNA分析技术[16]就是以此为检测依据的。
基因芯片是近10年发展起来的应用于分子生物学研究的一项新技术,在核酸序列测定、基因突变的检测、基因表达情况的分析等诸多领域的研究中得到了广泛应用。
国内外学者也正致力于植物病毒检测的基因芯片的研究和开发,相信不久的将来基因芯片会在快速、灵敏地检测大批量样品的植物病毒上发挥重要作用。
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