(完整版)紫外可见分光光度计--原理及使用
可见分光光度计原理、工作环境及使用方法
可见分光光度计原理、工作环境及使用方法一、可见分光光度计工作原理可见分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。
常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
基本原理：分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。
朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即A=kcl式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。
c为吸光物质浓度，l 为透光液层厚度。
二、可见分光光度计正常工作的环境要求1、避开高温高湿环境。
请不要将仪器安装在高温高湿的环境下。
仪器必须在5℃~35℃度温度、≤85%的湿度条件下安装使用。
2、避免仪器受外界磁场干扰。
请尽量远离发出磁场、电场、高频波的电器装置。
3、远离腐蚀气体。
请不要将仪器安装在空气中氯气、盐酸气体、硫化氢气体、亚硫酸气体等腐蚀性气体超标场所。
4、仪器应放置在稳定的工作台上。
放置仪器的工作台应水平、稳定、不能有振动；仪器的风扇附近应留有足够的空间，使其排风顺畅。
5、不要与其他用电设备共用电源插座。
请为仪器单独设计一个电源插座，不要与其它用电设备共用，电源应具备保护地线。
6、不要将仪器放置在阳光直接照射的地方。
7、避免灰尘多环境。
三、可见分光光度计的使用方法1、在接通电源之前，电表的指针必须位于“0”刻线上，否则应旋动电表上的校正螺丝调节到位。
2、打开比色皿室的箱盖和电源开关，使光电管在无光照射的情况下预热15分钟以上。
3、旋转波长调节器，选择测定所需的单色光波长。
选择适当的灵敏度，一般先将灵敏度旋钮至中间位置，用零点调节器调节电表指针至T值为0%处。
若不能调到，应适当增加灵敏度。
4、放入空白溶液和待测溶液，使空白溶液置于光路中，盖上比色皿室箱盖，使光电管受光，调节光量调节旋钮使电表指针在T值为100%处。
紫外可见分光光度计原理及操作.ppt
吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或
测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。 3）紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律(Lambert－Beer)。
朗伯-比耳定律是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法
定量分析的依据和基础。
朗伯-比耳定律
一、透射率T%
dT d lg T 0.434 bdc T
将上两式相比，并将 dT 和 dc 分别换为T 和 c，得
c 0.434T c T lg T
当相对误差 c/c 最小时，求得T=0.368 或 A=0.434。即当A=0.434 时，吸光度读数误差最小！ 通常可通过调节溶液浓度或改变光程 b来控制A的读数在0.15~1.00范类型来自3.比例双光束分光光度计
由同一单色器发出的光被分成两束，一束直接到达检测器，另一束 通过样品后到达另一个检测器。这种仪器的优点是可以监测光源变化带
来的误差，但是并不能消除参比造成的影响
UV-2550的特点
6 挡狭缝可选
PC 控制存储、调用方便 可采用复制、拷贝方法在电子表格和字处理软件中处理数据和打印报 告 可加载膜厚、动力学、多波长、色彩分析等软件 DDM（双闪耀波长双单色器）降低杂散光，提高长波长区的能量响应 （UV-2550）
它的作用是放大信号并以适当方式指示或记录下来。现在一般的紫
外可见分光光度计有计算机控制和主机单片机控制两种类型，功能基本 类似。
类型
紫外-可见分光光度计的类型很多，但可归纳为三种类 型，即单光束分光光度计、双光束分光光度计和比例双光束 分光光度计。
1.单光束分光光度计 经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以 进行吸光度的测定。这种简易型分光光度计结构简单，操作方便，维修 容易，适用于常规分析。
紫外可见分光光度计的结构、工作原理与应用
紫外可见分光光度计紫外可见分光光度计原理是：分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息。
可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。
根据Lambert-Beer定律：A=εbc，（A为吸光度，ε为摩尔吸光系数b为液池厚度，c为溶液浓度）可以对溶液进行定量分析。
你可以用紫外可见分光光度计测定定三种农药的波长在某溶液中的最大、最小吸收波长。
配制溶液－在光谱检测项下进行－调整检测光谱范围及速度－－扫描光谱图－－吸光度最大处对应波长为最大吸收波长，吸光度最小处对应的波长为最小吸收波长。
1.光源灯;2.滤光片;3.球面反射镜;4.入射狭缝;5.保护玻璃;6.平面反射镜;7.准直镜;8.光栅;9.保护玻璃;10.出射狭缝; 11.聚光镜;12.试样室; 13.光门;14.光电管.分光光度计工作原理:由光源灯(1)发出连续辐射光线,经滤光片(2)和球面反射镜(3)至单色器的入射狭缝(4)聚焦成像,光束通过入射狭缝(4)经平面反射镜(6)到准直镜(7)产生平行光,射至光栅(8)上色散后又以准直镜(7)聚焦在出射狭缝(10)上形成一连续光谱,由出射狭缝选择射出一定波长的单色光,经聚光镜(11)聚光后,通过试样室(12)中的测试溶液部分吸收后,光经光门(13)再照射到光电管(14)上.调整仪器,使透光度为100%,再移动试样架拉手,使同一单色光通过测试溶液后照射到光电管上.如果被测样品有光吸收现象,光量减弱放大器处理,将光能的变化程度通过数字显示器显示出来.可根据需要直接在数字显示器上读取透光度(T),吸光度(A)或浓度(C).基本操作:(1)通电---仪器自检----预热20min;(2)用键设置测试方式:透射比(T),吸光度(A),已知标样浓度方式(C)和已知标样浓度斜率(K)方式;(3)波长选择:用波长调节旋钮设置所需的单色光波长;(4)放样顺序:打开样品室盖,在1~4号放置比色皿槽中,依次放入%T校具(黑体),参比液,样品液1和样品液2.(5)校具(黑体)校"0.000":将%T校具(黑体)置入光路,在T方式下按"%T"键,此时仪器自动校正后显示"0.000"(6)参比液校"100"%T或"0.000"A:将参比液拉入光路中,按"0A/100%T"键调0A/100%T,此时仪器显示"BLA",表示仪器正在自动校正,校正完毕后显示"100"%T 或"0.000"A后,表示校正完毕,可以进行样品测定.(7)样品测定:将两样品液分别拉入光路中,此时若在"T"方式下则可依次显示样品的透射比(透光度)若在"A"方式下,则显示测得的样品吸光度.7200型光栅分光光度计的使用注意事项(1)(1) 预热是保证仪器准确稳定的重要步骤.(2) 比色皿的清洁程度,直接影响实验结果.因此,特别要将比色皿清洗干净.先用自来水将用过的比色皿反复冲洗,然后用蒸馏水淋洗,倒立于滤纸片上,待干后再收回比色皿盒中.必要时,还要对比色皿进行更精细的处理,如用浓硝酸或铬酸洗液浸泡,冲洗.(3) 比色皿与分光光度计应配套使用,否则会引起较大的实验误差. 比色皿不能单个调换 1.3 7200型光栅分光光度计的使用注意事项(2)(4) 比色皿内盛液应为其容量的2/3,过少会影响实验结果,过多易在测量过程中外溢,污染仪器. 比色皿中试样装入量应为2/3～3/4之间(5) 拿放比色皿时,应持其"毛面",杜绝接触光路通过的"光面".如比色皿外表面有液体,应用绸布拭干,以保证光路通过时不受影响.(6) 若待测液浓度过大,应选用短光径的比色皿,一般应使吸光度读数处于0.1～0.8范围内为宜.由于测定空白,标准和待测溶液时使用同样光径的比色皿,故不必考虑因光径变化而引起的影响.UV-754型紫外-可见分光光度计正确使用方法2.1 紫外分光光度计法概述(1)2.1.1定义用紫外光源通过分光光度技术对物质进行测定的方法叫作紫外分光光度法.所使用的仪器叫作紫外分光光度计.2.1.2原理因为许多化合物的分子结构中存在共轭双键,在200～400nm的紫外光区具有吸收光的特性,所以无需进行显色反应便能直接测定.2.1.3应用常用于对蛋白质和核酸进行定性,定量测定.蛋白质分子中所含酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸等芳香族氨基酸残基在波长280nm处具有最大吸收峰.故常用波长280nm处的吸光度测定蛋白质的浓度.2.1.4特点(1) 组成核酸的碱基也含有共轭双键,其最大吸收峰的波长在260nm处.但在280nm处也有一定的光吸收,对蛋白质的测定有一定的干扰作用.若分别测定280nm和260nm处的吸光度,可通过经验公式消除核酸对蛋白质测定的影响. (2)可对微量蛋白质(1～10g/L)不需显色,进行直接定量测定.因此操作简便,而且可回收样品.此外,盐类在280nm处无光吸收,少量盐类也不会影响测定结果.(3)紫外分光光度法完全符合Lambert-Beer定律的基本原理.在其它条件保持一致的情况下,被测溶液的吸光度与被测溶液的浓度成正比.2.2 UV-754型分光光度计的结构和工作原理2.2.1仪器结构由光源(钨灯或氚灯),单色器,试样室,接受器(光电管),微电流放大器,A/C 转换器,打印机,键盘和显示器等部件组成.微处理机(CPU)通过输入,输出口(I/O)对微电流放大器,显示器和打印机等部件进行控制,实现仪器的整体功能.2.2.2工作原理UV-7 5 4型紫外-可见分光光度计光学系统1.氚灯;2.钨灯;3.滤光镜;4.聚光镜;5.入射狭缝;6.平面;7.准直镜;8.光栅;9.出射狭缝; 10.聚光镜; 11.试样室; 12.光门; 13.光电管2.2.2工作原理由光源氚灯或钨灯(1或2)发出连续辐射光线经滤光镜(3)和聚光镜(4)至单色器入射狭缝(5)处聚焦成像,再经平面反射镜(6)反射至准直镜(7)产生平行光射至光栅(8)在光栅上色散后又经准直镜(7)聚焦在出射狭缝(9)上成一连续光谱,经出射狭缝射出的光在聚光镜(10)聚光后分别通过试样室 (11)中的空白溶液(或对照溶液),标准溶液或样品溶液,被部分吸收后光经光门(12)再照射到光电管(13)上.被光电管接收的光信号再被转换成电信号,后者通过输入,输出口(I/O).进入微处理机进行调零,变换对数,浓度计算以及打印数据等处理,将检测结果通过显示器和打印系统显示出来.2.3 UV-754型分光光度计使用方法(外型)2.3.1 UV-754型紫外可见分光光度计1.试样架拉手;2.键盘部分;3.数据打印;4.波长刻度盘;5.波长手轮;6.电源汗关;7.氚灯触发按钮;8.光源室.2.3 UV-754型分光光度计使用方法(键盘) UV-754型紫外-可见分光光度计键盘详细内容说明如下:2.3 UV-754型分光光度计使用方法(键盘内容1) ①功能键: F1～F8,暂无功能,备扩展使用. ② T键: 具有三种透光度状态调节功能.③ A/C键:吸光度/浓度转换键,按此键可分别表示"吸光度0～3A","吸光度0～","吸光度0～0.1A"和"浓度"四种状态.④送入键:只在"A/C键"处于"浓度"状态时才起作用. ⑤打印键:手动方式时有效,每按一次,便打印一次数据.⑥控制键:在分别使用"设定+","设定一","倍率","显示方式"和"打印方式"各键时,需与控制键分别联合使用才起作用.⑦设定+键:在"A/C键"处于"浓度"状态时才能设定"标准浓度值","斜率K值"或"斜率B值"等数据.其功能是将设定数值增加.2.3 UV-754型分光光度计使用方法(键盘内容2) ⑧设定- 键:是使设定数值减小,操作与"设定+键"类同.⑨倍率键:用来设定标准溶液浓度的放大倍数.有"1","0.1"和"0.01"三档,与"控制键"同时按下,倍率便发生相应的变化.⑩显示方式键:可表示"积分","浓度"和"样品号"三种状态.(11) 打印方式键:存在"自动"(每移动一次试样架,仪器自动打印一次数据),"方式1"(手动方式,每按一次此键,仪器打印一次数据)和"方式2"(每分钟定时打印一次数据)三种状态.每与"控制键"同时按一次此键便改变一个状态.(12) 送纸键:每按一次此键,仪器移动一次打印纸. (13) TAC:数字显示器显示测定结果或输入的数据. 2.3.2 UV-754型紫外可见分光光度计使用方法(1) (1)测试准备①将盛有"空白"或"对照"溶液的比色皿处于试样室光路位置; ②选择波长旋动波长手轮选定所需波长;③确定光源波长在200～290nm时,选择氚灯为光源;波长在290～360nm时,同时以氚灯和钨灯为光源;波长在360～850nm时,选择钨灯为光源;若使用氚灯,需按氚灯触发按钮启动;④仪器自检显示器显示"754"后,数字显示出现"100.0",表明仪器通过自检程序,此时仪器进入"0～100%","连续"和"自动"状态(打印系统处于自动打印状态)⑤仪器预热30min后方可进行测试.2.3.2 UV-754型紫外可见分光光度计使用方法测试过程①数字显示透光度"100.0"(或吸光度"0.00")2～3s后,将盛有标准溶液的比色皿移至光路,打印系统便自动打印出所得数据;②将盛有样品溶液的比色皿移至光路,打印系统即自动打印出该样品的数据.待第一个样品数据打印完毕后,将第二个样品置于试样室光路………,若有多个样品,操作以此类推。
紫外可见分光光度计的原理与使用方法
紫外可见分光光度计的原理与使用方法单光束分光光度计的原理是：光源发出光束通过准直系统，经过光栅
的分光作用后进入样品池，与样品发生相互作用后经过检测器，最后由显
示器显示吸光度数值。
双光束分光光度计的原理是：光源发出光束，一部分经过参比池进行
比较，另一部分经过样品池与样品相互作用，分别被检测器检测后与参比
值进行比较，最后由显示器显示吸光度数值。
使用紫外可见分光光度计的方法如下：
1.准备工作：
-检查仪器是否处于正常工作状态，确认光源、检测器和显示器的功
能正常。
-清洁样品池，确保无杂质和残留。
2.样品处理：
-准备需要测量的样品溶液，并将其转移到清洁的样品池中。
-如果样品浓度过高，可能会引起光透过度低，此时可进行适当稀释。
3.测量步骤：
-打开仪器电源，进行预热，通常需要一段时间让光源稳定。
-选择合适的波长范围和检测模式（吸光度/透过度）。
-调节仪器，使得显示器上的示数为零或基线稳定。
-将样品池放入样品室，尽量避免空气泡存在。
-记录或保存测量数据，可以进行后续数据处理和分析。
4.清洁和维护：
-测量完成后，及时清洁样品池和其他相关部件，防止污染和积累。
-关闭仪器电源，注意安全操作。
总结一下，紫外可见分光光度计是一种基于比尔－朗伯定律原理的实验仪器，主要用于测量物质溶液或气体的光吸收特性。
使用时需要进行准备工作，处理样品并进行测量，同时注意仪器的清洁和维护。
紫外-可见分光光度计工作原理
紫外-可见分光光度计工作原理
紫外-可见分光光度计（UV-Vis spectrophotometer）是一种用
于测量物质吸光度的仪器。
它的工作原理基于比尔-朗伯定律，即吸光度与溶液中物质浓度之间的线性关系。
下面是紫外-可见分光光度计的工作原理：
1. 光源：紫外-可见分光光度计使用可见光或紫外光作为光源。
这些光源通常是氘灯（白炽灯带有氘灯或钨灯）、氙灯或者LED等Xe光源。
光源发出的宽谱光经过光学系统聚焦形成一
束平行光通过物质样品。
2. 样品室：样品室是光路中的一个空间，用于容纳待测样品。
样品可以是液体、溶液或者固体经过适当的预处理后放置在样品室中。
待测样品能够吸收一定波长范围内的光。
3. 分光器：分光器将平行进入的光束按照不同的波长进行分离。
这通常是通过光栅、光柱或者棱镜等光学元件完成的。
分光器可以调节光束的波长范围。
4. 选择性检测器：分光器将不同波长的光分离后，光束通过选择性检测器进行探测。
可见光范围内常见的检测器包括光电二极管（Photodiode）和光电倍增管（Photomultiplier tube，PMT），紫外光范围内常用的检测器是具有UV增益的PMT。
5. 数据采集和显示：分光光度计通过检测器获取到的光强度信号通过转换电路转换成电信号，然后将其输入数显器、计算机
等数据采集和显示设备。
在数显器上，用户可以观察到吸光度值随波长变化的光谱曲线。
根据比尔-朗伯定律，吸光度与样品中的物质浓度之间有一个线性关系。
因此，通过测量样品的吸光度，可以得到物质在不同波长下的吸光度光谱，从而研究物质的颜色、浓度、变化等信息。
(完整版)紫外可见分光光度计--原理及使用
应用分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。
常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或者酶活。
基本原理分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。
朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即A= kcl式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。
c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。
组成各种型号的紫外－可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。
1.光源在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。
热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。
2．单色器单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。
单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。
色散元件常用棱镜和光栅。
3.吸收池吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。
吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。
4、检测器检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。
现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。
5、信号显示系统常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自动记录和数字显示装置等。
操作步骤操作之前1.1开启电源进行初始化开启主机电源，分光光度计将按屏幕所显示的项目进行自检和初始化，如下图所示。
所有项目检测完毕，初始化结束，整个过程大约需要4min（若使用多池检测需5min）。
每个项目进行初始化操作时将被加亮显示，当初始化完成后，该项右边的星标也将加亮显示。
紫外可见分光光度计实验原理
紫外可见分光光度计实验原理紫外可见分光光度计是一种用于分析化学样品中有机分子含量的仪器。
其原理是将样品溶液通过一束具有不同波长的电磁辐射，并通过光栅的分光作用将其分离成不同的波长分量，进而进行测量。
光谱分析在分光光度计中，光谱分析是一个重要的步骤。
光谱分析是在样品通过光栅之后进行的，它将分离的光波按照波长进行分类，形成一个连续的光谱。
光谱分析可以提供有关样品中有机物分子的信息，例如它们的分子结构和化学性质。
吸收光谱在吸收光谱中，样品溶液中的有机分子会吸收特定波长的光线。
吸收的光子被分子中的电子吸收，并跃迁到更高的能级。
吸收的波长取决于分子中的化学基团和它们之间的化学键。
因此，吸收光谱可以提供关于分子的化学结构的信息。
工作原理在紫外可见分光光度计中，样品通过一个光谱仪，该仪器通过一束具有不同波长的电磁辐射，并使用光栅将其分离。
然后，样品通过一个样品室，在该室中光线与样品相互作用。
样品中的有机分子吸收特定波长的光线，从而降低了光的强度。
消减的光强度与化合物的浓度成比例。
通过将样品与参考溶液进行比较，可以确定化合物的浓度。
使用此方法可以测定许多不同类型的有机化合物，包括药物、植物中的成分以及环境污染物。
仪器操作使用紫外可见分光光度计需要注意的几个要点：1.在测量之前，应该调节仪器，以确保灯的亮度和波长的准确度。
2.在将样品与参考溶液混合之前，应该调整样品室的光路，以确保光路对准。
3.在测量之前，应该确定所使用的波长范围。
不同的波长范围适用于不同类型的有机化合物。
4.在测量时，应该选择一个合适的测量时间，以确保结果的准确性。
结论紫外可见分光光度计是一种有用的仪器，可用于测量许多不同类型的有机化合物。
通过了解其工作原理和正确操作，可以获得准确的结果，并提供有关分子结构和化学性质的信息。
紫外可见分光光度计 原理
紫外可见分光光度计原理
紫外可见分光光度计是一种用于分析物质吸收和发射光的仪器。
它通过测量样品在紫外和可见光范围内吸收或透射的光的强度，来确定样品的化学组成或浓度。
该仪器的工作原理基于比尔—朗伯定律，即光的吸收和透射与物质的浓度成正比。
紫外可见分光光度计由光源、样品室、单色器、光电检测器和信号处理器等组成。
光源产生紫外和可见光，并通过单色器选择所需的波长范围。
选定波长的光线通过样品室，在进入光电检测器之前，与样品相互作用。
样品吸收了特定波长的光，使得进入光电检测器的光强度减弱。
光电检测器将光信号转换为电信号，并传送给信号处理器。
信号处理器接收电信号，并计算出吸收或透射的光强度。
通常使用参比媒介，例如纯溶剂或标准溶液作为比较，以便准确测量样品吸收或透射的光强度。
根据测量的光强度值和比尔—朗伯定律，可以计算出样品的吸光度（Absorbance）。
吸光度与样品的浓度成正比关系，可以
根据已知浓度的标准溶液绘制标准曲线，通过比较样品的吸光度和标准曲线，可以确定样品的浓度。
紫外可见分光光度计在科学研究、制药、环境监测、食品安全和生物化学等领域得到了广泛应用。
它可以快速、准确地测量样品中的化学物质浓度，对于分析和质量控制非常重要。
紫外可见分光光度计介绍
紫外可见分光光度 计可以用于定性分 析，确定物质是否 存在或含量多少。
定性分析可以帮助 研究人员了解物质 的性质、结构、组 成等信息。
定性分析可以应用于 化学、生物、医学、 环境等领域，对物质 进行定性分析。
定性分析还可以用 于检测物质的纯度、 杂质等，确保产品 质量和安全。
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定量分析
电信号经过放大和处理，得 到样品的吸光度。
吸光度与样品浓度之间存在 一定的关系，通过标准曲线
可以计算出样品的浓度。
光路结构
光源：提供紫外可见光 单色器：将光源分解为单色光 样品池：放置待测样品 检测器：接收样品吸收后的光信号 信号处理：将检测到的信号转换为吸光度或透光率 显示与记录：显示测量结果，记录数据
测量方法
光源：提供紫外可 见光，激发样品中
的分子或原子
检测器：检测样品 吸收光后的强度变 化，转化为电信号
单色器：将光源发 出的光分解成单色
光
样品池：放置样品， 吸收单色光
数据处理：将电信 号转化为吸收光谱，
进行分析和计算
结果输出：显示样 品的紫外可见吸收 光谱，提供定量和
定性分析结果
定性分析
定量分析：
1 通过测量吸 光度值，计 算样品浓度
应用领域：
2 化学、生物、 医学、环境 等领域
定量分析方法：
3 标准曲线法、 标准加入法、 内标法等
定量分析特
4 点：准确、 快速、灵敏、 稳定
应用领域
01
化学分析：用于分析化学物质，如蛋 02
环境监测：用于监测水质、大气、土
白质、核酸、氨基酸等
壤等环境因素
光源故障：检查光源是否正常， 必要时更换光源
紫外可见分光光度计原理及操作
处理方法
这些项目的初始化失败需要 通过岛津制作所或其指定代 理商来处理。
关闭光度计和电脑，再次开 始启动过程。观察灯是否亮 ，如果不，则此灯应更换。 碘钨灯可使用2000小时，氘 灯可使用500小时间。 更换后重新启动。
去掉杂物重新初始化。
纠正样品室门，重新初始化 。
.
31
故障修理
2、扫描故障
1）扫描或数据杂乱（不在指定的范围内）
成正比，即
Ak bc
k 为比例系数，与溶液性质、温度和入射波长有关。 当浓度以 g/L 表示时，称 k 为吸光系数，以 a 表示，即
Aabc
当浓度以mol/L表示时，称 k 为摩尔吸光系数，以 表示，即
Abc
比a更常用。越大，表示方法的灵敏度越高。与波长有关，因
此， 常以表示。
.
7
二、紫外-可见分光光度计 结构及类型
紫外 可见
红外
微波 无线电
真空紫外
近红外
核磁共振
波长越短，能量越高
.
4
原理
1）分子吸收光谱的形成过程：
运动的分子外层电子----吸收外来外来辐射----产生电子能级跃迁---分子 吸收谱。
2）由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸 收 光能量的情况也就不会相同。因此，每种物质就有其特有的、固定的 吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或 测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
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保养
二、工作台要求 １、可承受压力 35Kg+25Kg（PC） ２、最小尺寸 ：长：1120mm，宽：710mm，高：520mm
三、电源要求 １、供电电压：100/120/220/230/240V 交流±5% 50/60Hz ２、功率消耗：约190VA ３、保险丝使用：100 - 120V供电，5A ；220 - 240V供电，3.15A ４、安装地点具备可靠的仪器接地端子
紫外可见分光光度计实验原理
紫外可见分光光度计实验原理光源：光源发出的光经过分光器会被分成不同波长的光。
紫外可见分光光度计中常用的光源有白炽灯、氘灯和钨灯等。
白炽灯的光源范围较宽，适用于可见光范围的分析。
氘灯和钨灯则适用于紫外光区域的分析。
分光器：分光器用于将光源发出的光按照不同的波长进行分离，使得每个波长的光经样品后能分别被检测。
样品室：样品室通常是一根玻璃或石英的试管，它能够容纳样品溶液。
光在样品室中经过样品后，一部分被吸收，一部分被透射。
检测器：检测器用于测量透射光和吸收光的强度。
常用的检测器包括光电二极管（PD）、光电倍增管（PMT）和光电导探测器等。
在实验中，首先要校准光度计。
校准时需要使用可调溶液或基准溶液，其吸光度已经知晓。
通过调整光度计的控制器，使得光度计读取到与预期吸光度相等的数值。
然后，将待测溶液放入样品室中，用光度计测量其吸光度。
测量过程中，分光器会分成多个波长的光通过样品室，这些光的强度会被入射到检测器中，检测器通过将强度转化为电信号。
这些信号进一步被放大、数字化并输出到显示器上。
在显示器上，可以看到溶液的吸光度数值。
根据比尔-朗伯定律，吸光度与溶液中溶质的浓度和光程有关。
吸光度越大，表示溶质的浓度越高或光程越短。
基于比尔-朗伯定律的原理，可以借助标准曲线来确定溶质浓度，从而进行定量分析。
总之，紫外可见分光光度计基于光的吸收和透射原理，通过测量样品溶液的吸光度来定量分析样品中的化合物含量。
实验中需要校准光度计，并通过分光器、样品室和检测器等组成部分进行测量。
通过比尔-朗伯定律，可以得到溶质浓度与吸光度之间的关系，并通过标准曲线进行定量分析。
4紫外-可见分光光度法
• 2.参比溶液的选择原则：
• (1)溶剂参比：试样组成简单、共存组份少（基体干扰少）、显色剂 不吸收时，直接采用溶剂（多为蒸馏水）为参比；
• (2) 试样参比：如试样基体在测定波长处有吸收，但不与显色剂反 应时，可以试样作参比（不能加显色剂）。
紫外-可见分光光度法
紫外-可见分光光度法
一、紫外-可见分光光度法原理 二、紫外-可见分光光度计 三、紫外-可见分光光度法应用
紫外-可见分光光度法
分子的能量变化E为各种形式能量变化的总和：
ΔΕ ΔΕe ΔΕv ΔΕr
电子能级间隔比振动能级和转 动能级间隔大1~2个数量级， 在发生电子能级跃迁时，伴有 振-转能级的跃迁，形成所谓的 带状光谱。
第一节 基本原理
二 Lambert- Beer 定律
Lambert-Beer 定律适用范围： ①入射光为单色光，适用于可见、红外、紫外光。 ②均匀、无散射溶液、固体、气体。
吸光度具有加和性：
不仅适用于紫外光、可见光，也适用红外光；在同一波长下， 各组分吸光度具有加和性
A=A1+A2++An
（1）入射光必须为单色光 （2）被测样品必须是均匀介质 （3）在吸收过程中吸收物质之间不能发生相
偏离Lambert-Beer 定律的因素 1. 样品性质影响
1）待测物高浓度--吸收质点间隔变小—质点间相互作用—对特定辐射的吸收 能力发生变化--- 变化；
2）溶剂的影响：对待测物生色团吸收峰强度及位置产生影响； 3）被测溶液不均匀导致的偏离
第一节 基本原理
二 Lambert- Beer 定律
紫外可见分光光度计原理及操作
紫外可见分光光度法的原理及应用原理：紫外可见分光光度法基于物质对紫外-可见光的吸收特性进行测定。
当光线通过样品时，样品中的分子会吸收特定波长的光，从而产生吸收峰。
通过测量样品吸收的光强，可以得到样品在不同波长下的吸光度。
常用的光谱仪器是分光光度计，它能够实现对不同波长光的选择和测量。
应用：1.定量分析：紫外可见分光光度法可以用于定量分析各种物质。
根据比尔定律，吸光度与物质浓度之间存在一定的线性关系，因此可以根据吸光度测量值推算出物质的浓度。
这在医药、环境监测、食品安全等领域中具有重要意义。
2.药物分析：紫外可见分光光度法广泛应用于药物分析中。
例如，可以利用紫外光谱测定药物的浓度、纯度和含量，评价药物的质量。
同时，通过分析药物在不同波长下的吸收特性，可以了解药物的结构和反应机理，为新药的研发提供重要的信息。
3.生化分析：生物体内的很多生物分子都具有紫外可见吸收特性，这使得紫外可见分光光度法成为生化分析中常用的工具。
例如，可以通过测定蛋白质和核酸在特定波长下的吸光度来研究其构象和浓度。
此外，也可以用于测定血液中的代谢产物、激素和维生素等的浓度。
4.环境监测：在环境监测中，紫外可见分光光度法可用于分析水质、空气中的有害物质和污染物。
例如，可以利用其测定水中化学需氧量（COD）、氨氮（NH3-N）和磷酸盐等的浓度。
这对于环境保护和水质安全具有重要意义。
5.食品检测：紫外可见分光光度法在食品行业中也具有广泛应用。
可以通过测定食品中的营养成分和添加剂的含量来评价食品质量和安全性。
例如，可以测定维生素、氨基酸、酚类和色素等在食品中的含量。
总之，紫外可见分光光度法具有简单、快速、高灵敏度和高选择性等优点，且适用范围广泛。
它在化学、制药、环保、医疗和食品等领域中都有不可替代的地位，对于研究物质性质和反应机理，以及保障人类健康和环境安全都起着重要作用。
紫外可见分光光度计操作步骤及工作原理
紫外可见分光光度计操作步骤及工作原理紫外可见分光光度计操作步骤紫外可见分光光度计属于精密光学仪器，出厂前经过精细的装配和调试，假如能对仪器进行恰当的维护和修理与保养，不仅能保证仪器的牢靠性和稳定性，也可以延长仪器的使用寿命。
1、工作环境检查：1）放置要求：仪器应平稳的摆放在水平固定的桌面上。
（由于分光光度计为精密光学仪器,在运行的过程中假如桌面不稳，会影响其工作状态,且仪器处在工作状态时，灯丝处于高温状态,此时假如有猛烈的震动会导致灯丝折断。
）2）温度要求：工作环境的温度在5—35度之间。
（仪器在工作状态时内部较热需要用仪器自身的散热风扇与外界空气进行热交换散热,假如外界温度过高,会导致仪器内部温度过高,从而加速仪器电器件与灯的老化速度,从而影响仪器的使用寿命。
）3）湿度要求：工作环境的相对湿度不超过85%。
（仪器内部有很多电器元件与光学件，在湿度太高的情况下，电器件简单老化或烧坏，光学件表面的镀铝膜也简单发霉。
）4）空气情形：空气中不应有足以引起腐蚀的有害气体和过多的尘土存在。
2、样品室检查：1）在开机之前，先要检查样品室中是否有比色皿或其他物品，由于仪器在开机后要进行一系列的功能自检，假如有物品放在样品室中会导致自检出错。
2）每次使用后应检查样品室是否积存有溢出溶液，须常常擦拭样品室，以防止废液对部件或光路系统的腐蚀。
3）在测试完成后，请适时将样品从样品室中取出，否则，液体挥发会导致镜片发霉。
对易挥发和腐蚀性的液体，尤其要注意！假如样品室中有漏液，请适时擦拭干净，否则会引起样品室内的部件腐蚀和螺钉生锈。
3、仪器的表面清洁：仪器外壳表面经过喷漆工艺处理过，假如不当心将溶液漏洒在外壳上，请立刻用湿毛巾擦拭干净，杜绝使用有机溶液擦拭。
假如长时间不用时，请注意适时清理仪器表面的灰尘。
4、比色皿清洗：在每次测量结束或溶液更换时，您需要对比色皿进行适时清洗，然后放在低浓度酸性溶液里浸泡，浸泡后用蒸馏水冲洗比色皿的内外壁，否则比色皿壁上的残留溶液会引起测量误差。
紫外可见分光光度计原理及应用
紫外可见分光光度计原理及应用紫外可见分光光度计是一种常用的光谱仪器，主要用于测量样品溶液的吸光度。
它利用紫外可见光的吸收特性来分析物质的结构和浓度，并在化学、生物、药学和环境监测等领域有广泛的应用。
紫外可见分光光度计的原理基于比尔-朗伯定律和兰伯特-比尔定律。
紫外可见分光光度计的工作原理是利用可见光和紫外光穿过溶液时，溶液中的分子或离子会吸收特定波长的光线。
光的吸收会使得光通过溶液的强度减弱，即溶液中的吸光度增加。
光度计测量的就是经过溶液前后的光强度差值，也就是吸光度。
从而根据吸光度的变化来推断溶液中所含的分析物的浓度或结构。
紫外可见分光光度计可以在190nm至1100nm的波长范围内测量光强度的变化。
常用波长为190nm至800nm之间。
紫外可见分光光度计的光源通常是一束连续的白光，经过光栅或棱镜分散成不同波长的光束，然后通过一个进样室和样品溶液接触。
样品溶液会吸收特定波长的光，其余波长的光会通过样品溶液，最后被一个光敏探测器接收。
光敏探测器会将光信号转换成电信号，并转化成数字信号通过计算机处理。
应用方面，紫外可见分光光度计广泛应用于化学、生物、药学和环境监测等领域。
在化学领域，它可以用于分析溶液中化合物的浓度，并用于酸碱度的测量。
生物领域常用紫外可见分光光度计来测量DNA和蛋白质的浓度，以及酶促反应的速率。
在药学领域，它用于药物的质量控制，测量药物和其他添加剂在制剂中的含量。
在环境监测领域，紫外可见分光光度计被用于测量水体和大气中污染物的浓度，如有机物、重金属和氮浓度等。
总之，紫外可见分光光度计利用吸光度的测量原理，能够准确测量样品溶液中特定波长的光线的吸收程度，从而推断出溶液中所含的分析物的浓度或结构。
它在化学、生物、药学和环境监测等领域中都有重要的应用价值，并在科学研究和工业生产中发挥着重要的作用。
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应用
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。
常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或者酶活。
基本原理
分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。
朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即
A= kcl
式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。
c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。
组成
各种型号的紫外－可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。
1.光源
在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。
热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。
2．单色器
单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。
单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。
色散元件常用棱镜和光栅。
3.吸收池
吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。
吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。
4、检测器
检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。
现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。
5、信号显示系统
常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自动记录和数字显示装置等。
操作步骤
操作之前
1.1开启电源进行初始化
开启主机电源，分光光度计将按屏幕所显示的项目进行自检和初始化，如下图所示。
所有项目检测完毕，初始化结束，整个过程大约需要4min（若使用多池检测需5min）。
每个项目进行初始化操作时将被加亮显示，当初始化完成后，该项右边的星标也将加亮显示。
但是，如果检测到任何异常，初始化过程将立即中止，星标也不会加亮显示。
1.2屏幕显示和触摸键盘
UV-1700的触摸键盘图可用数字键0~9和功能键F1~F4选择不同屏幕中的模式和设置。
波长设置或显示模式等，必须按
下面介绍每个键的基本功能，在不同屏幕下有一些键可能被赋予特殊的功能。
①START/STOP键
一旦参数设置完成，可用该键开始和停止测量过程。
②AUTO ZERO键
按该键，当前波长的吸光度自动调整为0（100%T）。
测量前，必须确保在样品侧和参比侧中都放有盛有空白的比色池。
③GOTOWL键
该键可用来改变当前的波长。
④ENTER键
输入数值后，按该键确认。
⑤Cursor光标键（＜（-），＞）
这组键可控制液晶显示屏幕中光标的左右移动。
输入数值时，左光标键还可以用来输入负值（-）。
⑥Function功能键（F1~F4）
这组键的功能与液晶显示屏幕下方所显示的功能相对应。
⑦RETURN键
按下该键可返回当前屏幕的前一屏。
⑧MODE键
用该键可从每种测量模式的参数设置屏返回到主模式屏。
⑨Print打印键
用该键可输出当前屏幕显示的硬拷贝。
⑩Numeric数字键
用该键可输入数值。
⑪CE键
用该键可清除数值输入错误。
按该键，已输入的数值将被清除，可重新输入正确的数值。
模式选择和共享操作
初始化完成后即显示模式选择屏幕
各种模式概述：
在模式选择屏幕下选择各种测量模式，即显示各自的参数配置屏幕。
①光度模式
在固定波长下测量样品的吸光度或%透光率。
②光谱模式
扫描波长范围以测量随波长变化的样品的吸光度和%透光率。
也可进行单光束能量测量。
对测得光谱可进行数据处理，如峰检出、平滑处理和数学计算等。
③定量模式
用标准样品建立校正曲线，并对未知样品进行定量测量。
测量方法有：1、波长法；2、波长法；3、波长法；4、微分定量法。
另外，可用下列方法建立校正曲线：K-系数法、单点校正曲线法、多点校正曲线法。
④动力学模式
由吸光度随时间的变化计算酶的活性。
若使用多池支架（可选配），最多可测量16个样品。
以下是可供选用的测量方法：
1、波长动力学测量；
2、波长动力学测量；
3、多池动力学测量；
4、速率测量。
⑤时间扫描模式
该功能用于测量固定波长下吸光度、透光率或能量随时间的变化。
使用多池支架（可选配）最多可测量16个样品，还可以对测得数据进行数学计算等数据处理。
⑥多组分测量模式
可定量分析最多8种组分的样品。
使用每种组分的纯品作标准样品，制作校正曲线，进行定量测量。
⑦光度测量（多波长）
最多可指定8个任意波长，然后分别测量每个波长处的吸光度和透光率。
测得吸光度后，可选择三个计算式中的一个，对最多为四个波长下的测得数据进行计算，并输出测量结果。
·2波长处测得值间的比值/差值和3波长测量值的计算
·用四数据计算式进行计算：(K1A1+K2A2+K3A3+K4A4)×K5
·用四数据计算式进行计算：K5×(K1A1+K2A2)/(K3A3+K4A4)
Kn：相关系数；An：吸光度。
⑧可选配程序包
使用可选配程序包时选用此模式。
可选配DNA/蛋白质程序包。
⑨公用模式
在该模式下可设置和改变仪器的基本操作参数。
光度测量
操作步骤如下：
1、在模式选择屏幕中选择＜1. Photometric光度＞选项，将显示参数配置屏幕。
2、用
3、按F2键设定进样控制。
3、按
4、如需做空白校正，应在测量前先设置空白样品，然后按
置为0ABS（100%）。
注意事项
•1、比色皿使用时注意不要沾污或将比色皿的透光面磨损，应手持比色皿的毛面。
•2、待测液制备好后应尽快测量，避免有色物质分解，影响测量结果。
•3、测得的吸光度A最好控制在0.2~0.8之间，超过1.0时要做适当稀释。
•4、开关试样室盖时动作要轻缓。
•5、不要在仪器上方倾倒测试样品，以免样品污染仪器表面，损坏仪器。
•6、比色皿在盛装样品前，应用所盛装样品冲洗两次，测量结束后比色皿应用蒸馏水清洗干净后倒置晾干。
若比色皿内有颜色挂壁，可用无水乙醇浸泡清洗。
•7、向比色皿中加样时，若样品流到比色皿外壁时，应以滤纸點干，镜头纸擦净后测量，切忌用滤纸擦拭，以免比色皿出现划痕。
•8、测定紫外波长时，需选用石英比色皿。
•9、测量过程中不可打开测量室的窗门，否则会影响测量结果的准确性。
维护和保养
•1、仪器使用一定周期后,内部会积累一定量的尘埃,最好由维修工程师或在工程师指导下定期开启仪器外罩对内部进行除尘工作,同时将各发热元件的散热器重新紧固,对光学盒的密封窗口进行清洁,必要时对光路进行校准,对机械部分进行清洁和必要的润滑,最后,恢复原状,再进行一些必要的检测、调校与记录.
•2、环境中的尘埃和腐蚀性气体亦可以影响机械系统的灵活性、降低各种限位开关、按键、光电偶合器的可靠性,也是造成必须学部件铝膜锈蚀的原因之一.因此必须定期清洁,保障环境和仪器室内卫生条件,防尘.
•3、温度和湿度是影响仪器性能的重要因素.他们可以引起机械部件的锈蚀,使金属镜面的光洁度下降,引起仪器机械部分的误差或性能下降;造成光学部件如光栅、反射镜、聚焦镜等的铝膜锈蚀,产生光能不足、杂散光、噪声等,甚至仪器停止工作,从而影响仪器寿命.维护保养时应定期加以校正.
应具备四季恒湿的仪器室,配置恒温设备,特别是地处南方地区的实验室.。