萃取和色谱技术

合集下载
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

萃取和色谱技术实验

—菠菜叶中叶绿素的提取和分离

一、实验目的和要求

1.掌握叶绿素提取和分离的原理和方法;

2.学习萃取、薄层层析和柱层析色谱方法的原理及基本操作;

3. 观察菠菜中含有的色素的种类。

二、实验原理:

植物体内的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类,主要包括叶绿素 a (C 55H 72O 5N 4Mg)、叶绿素b(C 55H 70O 6N 4Mg)、β—胡萝卜素(C 40H 56)和叶黄素(C 40H 56O 2)等4种。可利用萃取原理、用有机溶剂将这些化合物从菠菜中提取出来,利用薄层色谱定性鉴定,并通过柱层析的方法将这些化合物分离。

1. 萃取原理:利用有机溶剂从与其不相混溶的液相或固相中把物质提取出来的方法,简称溶剂萃取。它是一种把物质从一个液相转移到另一个液相的过程。

2. 色谱法基本原理:是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能(即分配)的不同,或其它亲和作用性能的差异,使混合物的溶液流经该物质时进行反复的吸附或分配等作用,从而将各组分分开。流动的混合物溶液称为流动相;固定的物质称为固定相(可以是固体或液体)。

3. 薄层层析原理:固定相被均匀铺在玻片上制成薄层板,将样品溶液点加在起点后置于层析缸中用溶剂展开而达到快速分离目的。薄层色谱技术包括制板、点样、展开、显色四个过程。通常用比移值(R f )表示物质在薄层板移动的相对距离,在一定条件下每一种化合物的比移值都为一个特定的数值(介于0~1间),定义为:

的距离

展开剂前沿至原点中心点中心的距离色斑最高浓度中心至原=f R 4. 柱层析原理:根据物质在固定相的吸附力不同,极性较大的物质易被硅胶吸附跑的慢,极性较弱的物质难吸附跑的快,淋洗过程即吸附、解吸、再吸附、再解吸过程而被分离。柱层析技术包括装柱、装样、洗脱、收集四个过程。装柱有湿法和干法装柱两种。如果被分离各组分有颜色,可以根据色谱柱中出现的色层收集洗脱液。如果各组分无色,先依等分收集法收集(该操作可由自动收集器),然后用薄层色谱法逐一鉴定,再将相同组分的收集液合并在一起。蒸除洗脱液溶剂,即得各组分。

三、主要试剂和仪器:

仪 器:研钵,锥形瓶2个,烧杯,试管5根,层析缸(槽),层析柱,硅胶板,毛细管,滴管,分液漏斗,量筒。

试剂耗材:菠菜,沙子,硅胶,石油醚-丙酮展开剂(4:1),饱和NaCl 溶液,无水Na 2SO 4。

四、实验步骤:

五、装置图

图1:分液漏斗的使用图2:薄层层析示意图图3:柱层析示意图

六、注意事项:

[1] 分液漏斗使用前需检漏;分液时,下层液体从漏斗下端流出,上层液体要从漏斗口倾出。

[2] 棉花不要塞的太紧,否则影响洗脱速度;装柱要求吸附剂填充均匀,无断层、无缝隙、无气泡,否则会影响洗脱和分离效果。装样和洗脱过程中,应使洗脱剂始终覆盖吸附剂。

相关文档
最新文档