抗核抗体测定课件
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优质课件抗核抗体谱免疫印迹法
抗核小体抗体（ANuA）
核小体是真核细胞染色质的基本 复制单位，含组蛋白二聚体H2AH2B和H3-H4，其外面为146个碱 基对组成的双链DNA。
参与SLE发病机制：多克隆B细胞 活化剂产生ANuA，先于其他ANA 促进抗dsDNA与AHA形成参与LN的 发生。
抗核小体抗体（ANuA）
核小体抗体是SLE的诊断标记，其诊断灵敏度为70-90%。 在SLE的活性期，此抗体的检出率几乎为100%，在非活动期的 SLE中为62%（相应的dsDNA抗体检出率仅为3.3%）。
者出现核糖体P蛋白抗体与中枢神经系统、肝脏或肾脏受累有 关。在抗核抗体阴性的SLE患者，抗核糖体抗体阳性有重要诊 断价值。
抗ds-DNA抗体
SLE 的血清特异性抗体。 多有致病性（IgG型），与亲和力（高）有关。 与LN与SLE疾病活动性相关，活动期达90％。可用于SLE 疾
病活动期判断＆药物疗效观察。 与SLE急性皮疹、血管炎、浆膜腔炎、白细胞减少等有关。
类风湿关节炎中的抗核抗体
抗原
阳性率
组蛋白
15-50%
单链DNA（ssDNA）
8%
U1-nRNP
Hale Waihona Puke 3%RANA90-95%
干燥综合征（SS）
外分泌腺受累的自身免疫疾病
症状: - 口腔干燥 - 唾液及眼泪减少 - 腮腺肿胀 - 胰腺外分泌腺分泌不足
口腔干燥
腮腺肿胀
ANAs与干燥综合征（SS）的相关性
原发性干燥综合征中的自身抗体
整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期 蛋白等。
自身免疫性疾病与ANAs的相关性
第二章
2 自身免疫性疾病与ANAs的相关 性 单击添加文本 … …
抗核抗体课稿课件
结缔组织病的诊断
结缔组织病是一类以结缔组织病 变为主要表现的疾病，抗核抗体 在结缔组织病的诊断中也具有重
要价值。
抗核抗体在结缔组织病中的阳性 率较高，如系统性红斑狼疮、类
风湿性关节炎等。
通过检测抗核抗体，可以协助诊 断结缔组织病，并对其活动性和
预后做出判断。
系统性红斑狼疮的诊断
系统性红斑狼疮是一种典型的 自身免疫性疾病，抗核抗体在 系统性红斑狼疮的诊断中具有 重要地位。
害密切相关。
在临床实践中的应用价值和发展前景
指导治疗和判断预后
抗核抗体检测在临床实践中可以帮助医生判断疾病的严重程度、 活动性和预后，从而指导治疗。
预测疾病风险
抗核抗体检测可以预测某些自身免疫性疾病的风险，如预测SLE的 风险。
评估治疗效果
抗核抗体检测可以评估治疗效果，例如在RA的治疗中，抗核抗体 滴度的变化可以反映治疗效果。
抗核抗体检测的临床意 义与评估
抗核抗体检测的临床意义
1 2
自身免疫性疾病的诊断
抗核抗体检测对于诊断自身免疫性疾病具有重要 的价值，如系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿关 节炎（RA）等。
多种疾病的辅助诊断
抗核抗体检测可辅助诊断多种疾病，如干燥综合 征（SS）、硬皮病（SSc）等。
3
判断疾病的活动性和预后
抗核抗体的产生原因
01
02
03
04
ANA的产生原因尚不明确， 可能与遗传、环境、感染等因
素有关。
遗传因素在ANA的产生中起 着重要作用，如SLE患者的遗
传易感性较高。
环境因素如长期吸烟、接触化 学物质等也可能导致ANA的
产生。
感染因素如病毒或细菌感染也 可能诱发ANA的产生。
抗核抗体检测及临床意义精品PPT课件
❖ 其他结缔组织病：23-30%
如：RA、PBC、SSc等
30
抗核小体抗体（ANuA）
核小体是真核细胞染色质的基 本复制单位，由组蛋白与DNA 组成。
参与SLE发病机制： 多克隆B细胞活化剂 产生ANuA，先于其他ANA 促进抗dsDNA与AHA形成 参与LN的发生
31
抗核小体抗体临床意义
❖ SLE标记性/高特异性自身抗体 敏感性：58%-66% （优于抗dsDNA及抗Sm） 特异性：98%-100% （与抗dsDNA相当）
❖ 有助于弥漫性结缔组织病的分类和诊断 抗Sm抗体是SLE的标记抗体； 抗Scl-70抗体是SSc的标记抗体； 抗Jo-1抗体是PM/DM的标记抗体；
❖ 观察疾病活动度和治疗反应 抗dsDNA抗体
❖ 研究发病机理 抗核小体抗体、抗dsDNA抗体
4
❖基本概念 ❖ANA荧光核型 ❖ANAs中的常见抗体
❖ 用于SLE的早期诊断 ANuA 的产生早于抗dsDNA、AHA 抗dsDNA阴性者有1/4～1/2 ANuA阳性
❖ 与LN相关，用于SLE疾病活动性监测
❖ 出现在SSc中
16
核 仁 型 (N)
17
着 丝 点 型(ACA)
❖ 与抗着丝点染色质有关 存在于有丝分裂期
❖ 出现在SSc、CREST综合征等中
18
着 丝 点 型(ACA)
19
胞 浆 型 (C)
❖ 与抗胞浆成分有关 ❖ 抗核糖体P蛋白（rRNP）：出现在SLE中 ❖ 抗合成酶：Jo-1、PL-12、PL-7、OJ、EJ ❖ 抗信号识别颗粒（SRP) ❖ 抗线粒体：出现在PBC中 ❖ 抗高尔基体 ❖ 抗溶酶体 ❖ 等等
风湿免疫性疾病诊断方法
抗核抗体谱解析ppt课件
抗核抗体
ห้องสมุดไป่ตู้风湿
1
定义
• 抗核抗体(ANA)是对细胞核抗原具有不同特
异性的自身抗体的总称 • 一般分为可提取性核抗原(ENA)抗体、不可 提取性核抗原抗体和胞浆抗体
2
意义
• ANA和ENA抗体的检测，对胶原病，尤其是
SLE (系统性红斑狼疮), 与SLE密切相关的 MCTD（混合结缔组织病 ），及其它风湿性 疾病的诊断有重要的意义。
16
抗ACA抗体
• 抗ACA抗体可在25%的表现出Raynaud现象
的患者中检测到。由于它与胶原病的发生 有关，ACAs的测定对此病的预测极为重要。 • 抗ACA（抗着丝点抗体）也可见于原发性胆 汁性肝硬化（10%-20％）。 • 但在单独的肺动脉高压症，SLE和原发性干 燥综合征患者中，此抗体极少出现。
10
抗Sm抗体
• 尽管如此，此抗体的诊断灵敏度相当低。 • 此检测灵敏度与其对SLE的高度特异性相对
应。在其它的疾病如干燥综合症，MCTD， 进行性硬皮病和风湿性关节炎中，只有个 别病人抗Sm抗体阳性。高浓度的抗Sm抗体 只见于SLE病人。
11
抗剪接体复合蛋白U1-snRNP抗体
• 抗剪接体复合蛋白U1-snRNP抗体具有极为
4
抗SSA/Ro抗体
• 在超过60%的原发性干燥综合症病人中可
单独检测到Ro52自身抗体，而只有5%的 SLE病人可单独检测到此抗体。 • 抗SSA/Ro抗体也见于系统性红斑狼疮病人 （45%-60%）。此类病人比其它的SLE病 人更易于并发肾炎。
5
抗SSA/Ro抗体
• 因为此抗体尤其见于没完全表现出干燥综
几乎为100%。此抗体阳性与先天性心脏传 导阻滞有极大的相关性。 • 抗SS-A/Ro抗体可见于风湿性关节炎、进行 性系统性硬化症、多发性肌炎（5%-7%）、 原发性胆汁性肝硬化（4%），盘状LE （3%）的病人，及0.1%的正常人群中。
ห้องสมุดไป่ตู้风湿
1
定义
• 抗核抗体(ANA)是对细胞核抗原具有不同特
异性的自身抗体的总称 • 一般分为可提取性核抗原(ENA)抗体、不可 提取性核抗原抗体和胞浆抗体
2
意义
• ANA和ENA抗体的检测，对胶原病，尤其是
SLE (系统性红斑狼疮), 与SLE密切相关的 MCTD（混合结缔组织病 ），及其它风湿性 疾病的诊断有重要的意义。
16
抗ACA抗体
• 抗ACA抗体可在25%的表现出Raynaud现象
的患者中检测到。由于它与胶原病的发生 有关，ACAs的测定对此病的预测极为重要。 • 抗ACA（抗着丝点抗体）也可见于原发性胆 汁性肝硬化（10%-20％）。 • 但在单独的肺动脉高压症，SLE和原发性干 燥综合征患者中，此抗体极少出现。
10
抗Sm抗体
• 尽管如此，此抗体的诊断灵敏度相当低。 • 此检测灵敏度与其对SLE的高度特异性相对
应。在其它的疾病如干燥综合症，MCTD， 进行性硬皮病和风湿性关节炎中，只有个 别病人抗Sm抗体阳性。高浓度的抗Sm抗体 只见于SLE病人。
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抗剪接体复合蛋白U1-snRNP抗体
• 抗剪接体复合蛋白U1-snRNP抗体具有极为
4
抗SSA/Ro抗体
• 在超过60%的原发性干燥综合症病人中可
单独检测到Ro52自身抗体，而只有5%的 SLE病人可单独检测到此抗体。 • 抗SSA/Ro抗体也见于系统性红斑狼疮病人 （45%-60%）。此类病人比其它的SLE病 人更易于并发肾炎。
5
抗SSA/Ro抗体
• 因为此抗体尤其见于没完全表现出干燥综
几乎为100%。此抗体阳性与先天性心脏传 导阻滞有极大的相关性。 • 抗SS-A/Ro抗体可见于风湿性关节炎、进行 性系统性硬化症、多发性肌炎（5%-7%）、 原发性胆汁性肝硬化（4%），盘状LE （3%）的病人，及0.1%的正常人群中。
抗核抗体检测与临床应用PPT【42页】
52KD, 60KD。
健康人
17%
抗SSA抗体阳性SLE和SS一级亲属 25%
• 抗SSB抗体： 常与抗 SSA抗体伴随出现
• Ro-52 为线性结构 ，可以非特异的与血 清中蛋白结合
(3)抗核糖体P蛋白抗体
抗原: 核糖体60S 亚基中的3种蛋白质
SLE
10%～40%
SLE的高特异性血清标志抗体，特异性为100％
抗nRNP/Sm和Sm抗体的结果解释
抗nRNP/Sm抗 体
73KD RNP
阴性
60KD
55KD
52KD
阳性 5 2 K D
D
32KD RNP
RNP
sm 2 9 K D
28KD
阳性
RNP 1 7 .5 K D
13.5KD
阴性 CO
阳性
Sm、 U1R N P、 RA、
SSA抗 体 阳 性
SSA抗 体 阳 性
Stinton et al., Lupus 15: 394-400, 2007
(3)抗组蛋白抗体
抗原: 组蛋白H1, H2A, H2B, H3, H4 (主要的靶抗原为H1和H2B)
功能: 核小体的组成结构
临床意义: 药物诱导性LE: 100%
(抗组蛋白抗体是该病唯一的标志性抗体)
SLE:
40% - 80%
抗原：动粒中的4种蛋白：A (17 kDa), B(80 kDa), C(140 kDa), D蛋白(50 kDa)。 着丝点蛋白B为主要的靶抗原
功能: 分裂期纺锤体的附着点
相关疾病: 硬化症: 局限型: (CREST综合征) 原发性胆汁性肝硬化
18% 80% - 95%
10%～20%
抗核抗体基本概念及对应临床疾病概述ppt课件
抗体滴度
临床意义
1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560
阳性，需结合临床表现综合判断 阳性，提示可能存在相关疾病 明确阳性，提示可能存在相关疾病 中等阳性，提示可能存在相关疾病 强阳性，高度提示存在相关疾病 极强的阳性，高度提示存在相关疾病。
H
14
HHOEBp公-2司细间胞接产免品疫系荧列光法（产举品例系）列
考虑到荧光法筛查试验存在主观性强的特点，因此应 以一种客观和现实的态度去面对筛查试验结果
H
10
几个相对常见且重要的荧光核型
均质型
粗颗粒型
着丝点型
核仁型
核膜型.
核点型
核糖体P蛋白
线粒体型
肌动蛋白
H
常见且重要核型的标准 核型表现相对典型 阳性率相对较高 靶抗原相对明确
11
应重视ANA滴度的检测
抗体滴度的临床意义 1、明确界定自身免疫性疾病患者； 2、作为疾病进程、临床疗效和病情预后及转归等的判断指标
类风湿性关节炎 进行性系统性硬化症 多发性肌炎及皮肌炎
干燥综合征 慢性活动性肝炎
溃疡性结肠炎 其它风湿病 正常人
95－100 80－100 100 100 20－40 20－50 85－95 30－50 70－80 30－40 26 5-10
H
4
ANA实验室检测策略推荐
H
5
ANA间接免疫荧光法筛查实验
40 S 亚基
P1 P1
P0
60 S
亚基
P2 P2
▪相关疾病: SLE: 为SLE的高特异性指标，阳性率为5-15%，常见于神经狼疮。
H
31
AMA与AMA-M2
抗核抗体PPT课件
10
ANA阳性核型示意图
11
1、CTD:SLE、RA、SSc、PM/DM、SS、MCTD、 DIL等 2、SLE、SSc、SS的一级亲属中近一半者 3、肺疾病：原发性肺纤维化、原发性肺动脉高
压、石棉肺等 4、肝脏病：慢性活动性肝炎（CAH）、原发性
胆汁性肝硬化（PBC）酒精性肝病、自身免 疫性肝炎（AIH）等
抗核抗体谱及其临床意义
中国医科大学附属第一医院 风湿免疫科 侯平
1
常见的结缔组织病（CTD） 系统性红斑狼疮SLE 类风湿关节炎RA 系统性硬化症SSc 多发性肌炎/皮肌炎 PM/DM 干燥综合征 Sjögren sydrome, SS 混合性结缔组织病mixed CTD, MCTD 重叠综合征overlapping syndrome,OLS 药物性狼疮drug-induced lupus,DIL
5
三 对流免疫电泳法（counter immunoelectrophorsesis, CIE）
ID的改良方法，是其它检测方法的补充试验 四、免疫印迹法（immuno blot test, IBT）
从分子水平测定各种抗体，但不能作滴度测 定 五、酶联免疫吸附法（ELISA） 是一种定量检测法，敏感性高，特异性较强
15
抗DNA抗体及其临床意义 抗脱氧核糖核酸抗体 简称抗DNA抗体。
分为两种。 (一)抗双链DNA(double-stranded DNA)抗体
即 抗ds-DNA抗体。用马疫锥虫间接免疫荧光 方法（TE-IIF），在SLE阳性率40%。 临床意义： 1、是SLE的标志抗体 2、抗体效价的高低与疾病活动程度呈正相关。 3、用于观测SLE病情变化及药物治疗效果。 4、此抗体阳性易致狼疮性肾炎（LN）
ANA阳性核型示意图
11
1、CTD:SLE、RA、SSc、PM/DM、SS、MCTD、 DIL等 2、SLE、SSc、SS的一级亲属中近一半者 3、肺疾病：原发性肺纤维化、原发性肺动脉高
压、石棉肺等 4、肝脏病：慢性活动性肝炎（CAH）、原发性
胆汁性肝硬化（PBC）酒精性肝病、自身免 疫性肝炎（AIH）等
抗核抗体谱及其临床意义
中国医科大学附属第一医院 风湿免疫科 侯平
1
常见的结缔组织病（CTD） 系统性红斑狼疮SLE 类风湿关节炎RA 系统性硬化症SSc 多发性肌炎/皮肌炎 PM/DM 干燥综合征 Sjögren sydrome, SS 混合性结缔组织病mixed CTD, MCTD 重叠综合征overlapping syndrome,OLS 药物性狼疮drug-induced lupus,DIL
5
三 对流免疫电泳法（counter immunoelectrophorsesis, CIE）
ID的改良方法，是其它检测方法的补充试验 四、免疫印迹法（immuno blot test, IBT）
从分子水平测定各种抗体，但不能作滴度测 定 五、酶联免疫吸附法（ELISA） 是一种定量检测法，敏感性高，特异性较强
15
抗DNA抗体及其临床意义 抗脱氧核糖核酸抗体 简称抗DNA抗体。
分为两种。 (一)抗双链DNA(double-stranded DNA)抗体
即 抗ds-DNA抗体。用马疫锥虫间接免疫荧光 方法（TE-IIF），在SLE阳性率40%。 临床意义： 1、是SLE的标志抗体 2、抗体效价的高低与疾病活动程度呈正相关。 3、用于观测SLE病情变化及药物治疗效果。 4、此抗体阳性易致狼疮性肾炎（LN）
抗核抗体(ANA)报告解读及核型判读PPT课件
ANA的临床意义
ANA阳性
常见于系统性红斑狼疮、混合性结缔组织病、干燥综合征、 硬皮病、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病。在这些疾病中 ，ANA的滴度往往与疾病活动性相关。
ANA阴性
正常人血清中ANA一般为阴性。但是需要注意的是，ANA阴 性并不能完全排除自身免疫性疾病的可能，因为一些自身免 疫性疾病患者的ANA可能为阴性。因此，需要结合其他临床 表现和实验室检查结果进行综合判断。
表示抗体在血清中的浓度，通常以1:40、1:80、1:160等比例呈现。滴度越高 ，抗体浓度越大，提示自身免疫性疾病的可能性增加。
核型
指ANA与细胞核内不同成分结合形成的特定荧光染色模式。常见核型包括均质 型、斑点型、核膜型、着丝点型等。不同核型与特定疾病相关联。
ANA与疾病关联性的解读
ANA阳性与多种自身免疫性疾病相关，如系统性红斑狼疮（SLE）、混 合性结缔组织病（MCTD）、干燥综合征（SS）等。
ANA核型的变化与疾病活动性
某些ANA核型的变化也与疾病活动性密切相关。例如，在SLE患者中，随着病情的好转 ，均质型ANA可能转变为斑点型或核仁型。因此，观察ANA核型的变化有助于评估疾
病的活动性。
在治疗选择和预后评估中的价值
指导治疗选择
ANA检测和核型判读可以为临床医生提 供治疗选择的依据。例如，对于ANA阳 性且滴度较高的患者，可能需要采用更 积极的治疗措施，如使用免疫抑制剂等 。
ANA核型的特异性
不同ANA核型与不同自身免疫性疾病的关联程度不同，如均质型ANA与SLE密切相关，而斑点型ANA则与混合性 结缔组织病（MCTD）等相关。因此，ANA核型的判读有助于自身免疫性疾病的精确诊断。
在疾病活动性评估中的价值
间接免疫荧光法检测血清中抗核抗体PPT教案课件(临床免疫学)
印片
37℃30′
洗涤
37℃30′
洗涤
待测血清 （ANA?） 荧光标记的 羊抗人IgG
荧光显微镜检测
实验步骤
1、小鼠断颈处死取肝， PBS或NS漂洗，剪取肝横断面印 片于玻片上，左右各一处，自然干燥；滴加无水乙醇固定， 室温凉干；
2、左右印片处分别盖上一片小纸片，分别滴加阳性血清 和阴性血清各1滴，37℃30′；
免疫实验室注意事项：
1、必须穿白大衣进实验室； 2、实验中注意实验室秩序； 3、如发生意外如损坏玻璃器材等，要及时报告； 4、要节约实验药品； 5、实验后要回收的玻璃器材如载玻片等，放于指定陶瓷 缸内；废纸及一次性用品弃于垃圾桶内。 6、实验完毕，清理桌面，保证实验试剂和器械放回原位。
抗原 抗体
标记 抗体
荧光 光原
间接免疫荧光法原理示意图
免疫荧光检测制备的总体方法
标本制作 荧光抗体染色 荧光显微镜检查
标本的制作
标本类型
组织切片：冷冻切片、石蜡切片（最常用）。 印片：肝、脾等细胞。 涂片：各种体液、穿刺液、细菌培养物和细胞悬
液等。
荧光抗体染色
间接法
特异性抗体与相应 抗原反应，荧光素 标记的抗抗体再与 第一抗体结合。
实验一
间接免疫荧光法 检测血清中抗核抗体
间接免疫荧光技术原理
免疫荧光技术是免疫标记技术中发展最早的技术。
本实验是利用荧光标记第二抗体（羊抗人IgG） 检测未知抗体（一抗）的方法。以检测人血清 中抗核抗体（ANA）为例。 病人血清中ANA（Ab）能与各种系细胞核成 分（Ag）特异性结合，此种结合的Ab（IgG型） 能与荧光标记的羊抗人IgG（二抗）结合，在 荧光显微镜下，细胞核显示荧光，提示血清中 ANA的存在。
37℃30′
洗涤
37℃30′
洗涤
待测血清 （ANA?） 荧光标记的 羊抗人IgG
荧光显微镜检测
实验步骤
1、小鼠断颈处死取肝， PBS或NS漂洗，剪取肝横断面印 片于玻片上，左右各一处，自然干燥；滴加无水乙醇固定， 室温凉干；
2、左右印片处分别盖上一片小纸片，分别滴加阳性血清 和阴性血清各1滴，37℃30′；
免疫实验室注意事项：
1、必须穿白大衣进实验室； 2、实验中注意实验室秩序； 3、如发生意外如损坏玻璃器材等，要及时报告； 4、要节约实验药品； 5、实验后要回收的玻璃器材如载玻片等，放于指定陶瓷 缸内；废纸及一次性用品弃于垃圾桶内。 6、实验完毕，清理桌面，保证实验试剂和器械放回原位。
抗原 抗体
标记 抗体
荧光 光原
间接免疫荧光法原理示意图
免疫荧光检测制备的总体方法
标本制作 荧光抗体染色 荧光显微镜检查
标本的制作
标本类型
组织切片：冷冻切片、石蜡切片（最常用）。 印片：肝、脾等细胞。 涂片：各种体液、穿刺液、细菌培养物和细胞悬
液等。
荧光抗体染色
间接法
特异性抗体与相应 抗原反应，荧光素 标记的抗抗体再与 第一抗体结合。
实验一
间接免疫荧光法 检测血清中抗核抗体
间接免疫荧光技术原理
免疫荧光技术是免疫标记技术中发展最早的技术。
本实验是利用荧光标记第二抗体（羊抗人IgG） 检测未知抗体（一抗）的方法。以检测人血清 中抗核抗体（ANA）为例。 病人血清中ANA（Ab）能与各种系细胞核成 分（Ag）特异性结合，此种结合的Ab（IgG型） 能与荧光标记的羊抗人IgG（二抗）结合，在 荧光显微镜下，细胞核显示荧光，提示血清中 ANA的存在。
自身抗体的检测演示幻灯片
ANA检测的临床意义
ANA可见于多种自身免疫性疾病， 特别是结缔组织疾病，常作为结缔 组织疾病的诊断，病情判断和疗效 观察的指标
已证实ANA对很多自身免疫性疾病有 诊断价值。ANA的靶抗原为细胞核内的不 同生化成份，包括核酸、细胞核蛋白和核 糖体蛋白。在不同疾病中，特别是风湿性 疾病，其抗体谱有一定的特意性。在炎症 性风湿病中ANA阳性率在20%-100%之间， 其中类风湿性关节炎中ANA阳性率最低， 为20%-40%。所以，检测ANA对于不同类 型风湿病意义重大。
临床意义：cANCA可见于多种系统性血管炎。 主要见于Wengener’s肉芽肿，约占ANCA阳性 率的80~95%。cANCA被认为是活动性 Wengener’s肉芽肿和微多动脉炎的特异和敏 感的标志性抗体。还见于Churg-Strauss综合 征。
抗中性粒细胞胞浆抗体（核周型）
pANCA
荧光模式：
正常的健康人
女性＞男性，出现率 随年龄而增加
风湿性疾病患者亲属 ？孕妇
SLE患者使用IIF法测定ANA阴性的一些解释
技术方面
临床方面
经皮质激素或免疫抑制剂治疗。
终末期肾病。
隐蔽ANA：与循环中免疫复合物结合，沉积于组 织。
由于大量蛋白尿而从肾脏丢失。
ANA的荧光染色型别
根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：
抗SSA／SSB抗体
自身抗原：SSA抗原是一个小核糖核蛋白，由 一个RNA分子和两种不同的蛋白质组成。蛋白 质的分子量为52KD和60KD。抗体直接针对蛋 白质的抗原决定簇。SSB抗原是分子量为48kD 的磷酸化蛋白。
临床意义；最常见于干燥综合征（SS）,也见 于SLE、原发性胆汁性肝硬化（PBC），偶见 于慢活肝。抗SSA抗体在新生儿红斑狼疮的发 生率几乎为100%。
抗核抗体检测的质量要求及结果的合理判读ppt课件
25
Mariz.Arth Rheumatol, 2011, 63: 191
ANA-IFA核型有助 于区别正常人 ANA+和ARD ANA+? 密而细颗粒型
26
抗核膜抗体(抗板层素抗体)
荧光模式: 在核膜区呈现线状荧光, 中心区域荧光强度弱(Hep2), 而肝细胞片:中心区域发暗,无荧光, 此点可与核均 质荧光相区别. 靶抗原: 包括60kD, 68kD和74kD 3种蛋白组分,与中间丝相关, 以网状形式包被在核内膜的内部. 相关疾病: 慢性活动性自身免疫性肝炎的活动期.
19
阳性预测值（PPV） 阴性预测值（NPV）
PPV：试验结果阳性者中真正患病的概率 NPV：试验结果阴性者中未患病的概率
PPV和NPV是临床试验中对试验有用性的正确评价指标 PPV和NPV受人群患病率的影响：
患病率↓： PPV↓ ，NPV↑ 理想的ANA试验： 高PPV：大部分阳性结果者是CTD患者 高NPV：大部分阴性结果者不患CTD
特异性: 某检验项目排除无某病的能力 非患者阴性结果的百分比
敏感性和特异性取决于所选用的cut-off值 某法敏感性越高，特异性就越低，反之亦然 应优选能获得最佳敏感性和特异性组合的cut-off值
18
敏感性和特异性并不能告诉医生阳性结 果的个体是否患某种疾病，阴性结果的个体 是否不患某种疾病
而临床医生关心的是，ANA阳性者中有 多少是CTD患者；ANA阴性者中有多少不是 CTD患者。PPV和NPV即回答这一问题
ENA抗体，以期对CTD作出特异性地诊断。 ３）不主张单独用抗—ENA抗体作为筛查实验
22
ANA免疫学测定方法
琼脂双向扩散或对流免疫电泳 -----抗ds-DNA，抗Sm，抗U1RNP
Mariz.Arth Rheumatol, 2011, 63: 191
ANA-IFA核型有助 于区别正常人 ANA+和ARD ANA+? 密而细颗粒型
26
抗核膜抗体(抗板层素抗体)
荧光模式: 在核膜区呈现线状荧光, 中心区域荧光强度弱(Hep2), 而肝细胞片:中心区域发暗,无荧光, 此点可与核均 质荧光相区别. 靶抗原: 包括60kD, 68kD和74kD 3种蛋白组分,与中间丝相关, 以网状形式包被在核内膜的内部. 相关疾病: 慢性活动性自身免疫性肝炎的活动期.
19
阳性预测值（PPV） 阴性预测值（NPV）
PPV：试验结果阳性者中真正患病的概率 NPV：试验结果阴性者中未患病的概率
PPV和NPV是临床试验中对试验有用性的正确评价指标 PPV和NPV受人群患病率的影响：
患病率↓： PPV↓ ，NPV↑ 理想的ANA试验： 高PPV：大部分阳性结果者是CTD患者 高NPV：大部分阴性结果者不患CTD
特异性: 某检验项目排除无某病的能力 非患者阴性结果的百分比
敏感性和特异性取决于所选用的cut-off值 某法敏感性越高，特异性就越低，反之亦然 应优选能获得最佳敏感性和特异性组合的cut-off值
18
敏感性和特异性并不能告诉医生阳性结 果的个体是否患某种疾病，阴性结果的个体 是否不患某种疾病
而临床医生关心的是，ANA阳性者中有 多少是CTD患者；ANA阴性者中有多少不是 CTD患者。PPV和NPV即回答这一问题
ENA抗体，以期对CTD作出特异性地诊断。 ３）不主张单独用抗—ENA抗体作为筛查实验
22
ANA免疫学测定方法
琼脂双向扩散或对流免疫电泳 -----抗ds-DNA，抗Sm，抗U1RNP
抗核抗体测定
1.荧光免疫法
形成胞核基质—ANA—抗人Ig ·FITC 将患者血清先进行稀释，可以做定量实验，在1:80
稀释仍呈阳性时，对SLE旳诊断有较大旳参照价值。
第13页
间接法： 第一步：荧光素标记抗抗体
第二步：已知Ag固定＋待测Ab——洗涤
再加入抗Ab* ——洗涤——镜检。
Ag Ab（？）
抗－
Ab*
特点： 1.制备一种荧光抗体，可检测多种Ag或Ab。 2.既可检测Ag，又可检测Ab。 3.敏捷度高，但易产生非特异性荧光
第10页
检出 百分 率
100
80
60
40
20
抗DNP抗体
抗DNP抗体（抗核蛋白抗体）：核蛋白(DNP) 抗原由DNA和蛋白质构成。DNP抗原有不溶性 和可溶性两种，可分别产生相应旳抗体。
SLE 非活动期
SLE 活动期
RA滑 膜液中
抗 抗 DNP DNP
抗 DNP
抗不溶性DNP抗体
抗 DNP
抗可溶性DNP抗体
在某些因素作用下变化细胞核某些成分性质， 激发机体产生许多抗不同核成分旳抗体；
第2页
抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同限度旳 阳性率 如系统性红斑狼疮（SLE，95%~100%）、 类风湿性关节炎（RA，10%~20%）、 混合性结缔组织病（MCTD，80%~100%）、 干燥综合症（SS,10%~40%）、 全身性硬皮病（85%~90%）、 狼疮性肝炎（95%~100%）、 原发性胆汁性肝硬化（95%~100%）等，
第11页
抗核小体抗体
抗核小体抗体（anti-nucleosome antibody，AnuA) 是细胞核染色质旳基本单位; 细胞凋亡而致核小体大量蓄积，
形成胞核基质—ANA—抗人Ig ·FITC 将患者血清先进行稀释，可以做定量实验，在1:80
稀释仍呈阳性时，对SLE旳诊断有较大旳参照价值。
第13页
间接法： 第一步：荧光素标记抗抗体
第二步：已知Ag固定＋待测Ab——洗涤
再加入抗Ab* ——洗涤——镜检。
Ag Ab（？）
抗－
Ab*
特点： 1.制备一种荧光抗体，可检测多种Ag或Ab。 2.既可检测Ag，又可检测Ab。 3.敏捷度高，但易产生非特异性荧光
第10页
检出 百分 率
100
80
60
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抗DNP抗体
抗DNP抗体（抗核蛋白抗体）：核蛋白(DNP) 抗原由DNA和蛋白质构成。DNP抗原有不溶性 和可溶性两种，可分别产生相应旳抗体。
SLE 非活动期
SLE 活动期
RA滑 膜液中
抗 抗 DNP DNP
抗 DNP
抗不溶性DNP抗体
抗 DNP
抗可溶性DNP抗体
在某些因素作用下变化细胞核某些成分性质， 激发机体产生许多抗不同核成分旳抗体；
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抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同限度旳 阳性率 如系统性红斑狼疮（SLE，95%~100%）、 类风湿性关节炎（RA，10%~20%）、 混合性结缔组织病（MCTD，80%~100%）、 干燥综合症（SS,10%~40%）、 全身性硬皮病（85%~90%）、 狼疮性肝炎（95%~100%）、 原发性胆汁性肝硬化（95%~100%）等，
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抗核小体抗体
抗核小体抗体（anti-nucleosome antibody，AnuA) 是细胞核染色质旳基本单位; 细胞凋亡而致核小体大量蓄积，
抗核抗体基本概念及对应临床疾病概述ppt课件
抗体梯度稀释 起始稀释：1:80 梯度稀释（稀释因子2） 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 …直至抗体转阴
ANA荧光滴度判读举例
各稀释度的反应性
1:80 阳性+ 阳性++ 阳性++ 阳性+++ 阳性+++ 阳性++++
1:640 — — 弱+ 阳性+ 阳性++ 阳性+++
SLE：高特异性指标，阳性率为50-95%，特异性几乎 100%，抗核小体抗体可独立于抗dsDNA抗体单独出现 ，因而抗核小体抗体与抗dsDNA抗体联合检测，可提 高SLE的血清学检出率。
核糖体 P蛋白
抗原:
核糖体60S 亚基中的3种蛋白质: P0, P1, P2. 具备相同的碳端抗原位点
40 S 亚基
均质型
核点型
着丝点型
核仁型
Scl-70
粗颗粒型 细颗粒型
核膜型.
核糖体P蛋白 线粒体型
高尔基体
溶酶体
肌动蛋白
波形蛋白
ANA间接免疫荧光法筛查试验的实际价值
初步甄别自身免疫性疾病患者（阴阳性结果） 尽可能判断荧光核型（缩小靶抗原确认实验范围） 获取抗体滴度信息（判断病情进展、预后等）
考虑到荧光法筛查试验存在主观性强的特点，因此应 以一种客观和现实的态度去面对筛查试验结果
主要相关疾病:
PBC: 病（
（高滴度AMA M2）85% - 95%。在其他慢性肝脏疾 30%）和进行性系统性硬化症（7-25%）中也
可检出AMA
M2，但滴度较低。
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6
.
抗组蛋白抗体
抗组蛋白抗体（anti-histonic antibody,AHA）： 由H1、H2A、H2B、H3和H4五个亚单位，各自都 有特异性抗体；
检 出 百 分 率
100
90
药物诱导 性狼疮只 能检出此
SLE
70 AHA
AHA
抗 dsDNA
50
AHA
7
.
抗ENA抗体
可提取性核抗原 (extractable nuclear antigen,ENA) 是盐水或磷酸盐缓冲液可提取性核抗原的总称，是非 组蛋白的核蛋白，属酸性核蛋白抗原，由许多小分子量 的RNA和多肽组成。
1.荧光免疫法
形成胞核基质—ANA—抗人Ig ·FITC 将患者血清先进行稀释，可以做定量试验，在1:80
稀释仍呈阳性时，对SLE的诊断有较大的参考价值。
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间接法： 第一步：荧光素标记抗抗体
第二步：已知Ag固定＋待测Ab——洗涤
再加入抗Ab* ——洗涤——镜检。
Ag Ab（？）
抗－
Ab*
特点： 1.制备一种荧光抗体，可检测多种Ag或Ab。 2.既可检测Ag，又可检测Ab。 3.灵敏度高，但易产生非特异性荧光
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Thank you!
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在某些因素作用下改变细胞核某些成分性质， 激发机体产生许多抗不同核成分的抗体；
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抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同程 度的阳性率
如系统性红斑狼疮（SLE，95%~100%）、 类风湿性关节炎（RA，10%~20%）、 混合性结缔组织病（MCTD，80%~100%）、 干燥综合症（SS,10%~40%）、 全身性硬皮病（85%~90%）、 狼疮性肝炎（95%~100%）、 原发性胆汁性肝硬化（95%~100%）等，
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. 20
. 21
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核型 核膜型 均质型
斑点型
核仁型
抗核抗体核型与相关疾病
荧光图形 核周环状荧光
抗体 抗dsDNA
相关疾病 SLE、慢活肝炎
核呈均质荧光
抗DNA、AHA SLE、RA、PSS、慢性
、 AnuA
肝病
8
.
有特异诊断价值的有以下七种： ①抗nRNP(nuclear RNP,nRNP)抗体； ②抗Sm抗体； ③抗SSA抗体； ④抗SSB抗体； ⑤抗Scl-70抗体； ⑥抗Jo-1抗体； ⑦抗核糖体抗体 。
9
.
• 抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%~40%） • 抗U1-RNP抗体：MCTD 95%~100%（高 滴度） • 抗SSA抗体：SS 40%~95%，其它CTD • 抗SSB抗体： SS 40%~90%，其它CTD • 抗Scl-70抗体：PSS25%~70%, 标记性抗体 • 抗Jo-1抗体：PM/DM 25%，标记性抗体 • 抗rRNP（Rib）抗体： SLE特异性抗体 （10%~20%）
3
.
ANA主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和 IgE；
ANA无器官特异性和种属特异性； ANA主要存在于血清中； 将检出ANA作为AID存在的依据。
4
.
（一）ANA的类型和临床意义
ANA谱
抗DNA抗体：抗dsDNA/抗nDNA、抗ssDNA/抗dDNA等 抗组蛋白抗体(AHA)：抗H1、抗H2A、抗H2B、 抗H3、抗H4抗体等 抗非组蛋白抗体：抗nRNP/抗U1RNP、抗Scl-70、 抗SSA、抗Sm、抗SSB、抗Jo-1、抗Rib抗体、 AnuA、抗DNP、抗D’E多肽抗体、抗DM53抗体 抗RANA抗体、抗着丝点、抗Ku抗体等 抗核仁抗体：抗PM-Scl抗体、抗Th/To抗体、 抗U3-RNP、抗4-6-S-RNA抗体等
5
.
抗DNA抗体
①抗天然DNA (native DNA,nDNA) 抗体，又称抗双 链DNA (double stranded DNA,dsDNA) 抗体。
对SLE有高特异性; SLE诊断标准之一。
缓解期降低 药物疗效
70%～90%SLE
活动期增高
②抗变性DNA (denatured DNA,dDNA) 抗体，又称抗单链 DNA (single stranded DNA,ssDNA)抗体。
11
.
抗核小体抗体
抗核小体抗体（anti-nucleosome antibody，AnuA) 是细胞核染色质的基本单位; 细胞凋亡而致核小体大量蓄积，
诱导B细胞产生的AnuA是SLE 特异性的标志抗体。
抗dsDNA和抗Sm阴性的SLE阳性 率为60%～80%，特异性＞97%。
12
.
（二）ANA的检测方法
.
抗核抗体的测定
.
（antinuclear antibody，ANA）又称抗核酸抗 原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱 氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗 原（ENA）和RNA等作为靶抗原的自身抗体的 总称，能与所有动物的细胞核发生反应，主要 存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜液 和尿液中。
核内颗粒状荧光 核仁有荧光
抗ENA 抗核仁抗体
MCTD、SLE、PSS、SS 、PM
PSS、雷诺现象、SLE
着丝点型 核浆细小相同颗粒 抗着丝点 荧光
PSS、CREST综合征
25
.
周边型
可见于胶原病、PBC、CAH等患者
26
.
2. ELISA法
用ELISA间接法检测抗dsDNA抗 体、抗组蛋白抗体和抗核小体 抗体。3. 免疫印记法
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检出 百分 率
100
80
60
40
20
.
抗DNP抗体
抗DNP抗体（抗核蛋白抗体）：核蛋白(DNP) 抗原由DNA和蛋白质组成。DNP抗原有不溶性 和可溶性两种，可分别产生相应的抗体。
SLE 非活动期
SLE 活动期
RA滑 膜液中
抗 抗 DNP DNP
抗 DNP
抗不溶性DNP抗体
抗 DNP
抗可溶性DNP抗体
.
抗组蛋白抗体
抗组蛋白抗体（anti-histonic antibody,AHA）： 由H1、H2A、H2B、H3和H4五个亚单位，各自都 有特异性抗体；
检 出 百 分 率
100
90
药物诱导 性狼疮只 能检出此
SLE
70 AHA
AHA
抗 dsDNA
50
AHA
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抗ENA抗体
可提取性核抗原 (extractable nuclear antigen,ENA) 是盐水或磷酸盐缓冲液可提取性核抗原的总称，是非 组蛋白的核蛋白，属酸性核蛋白抗原，由许多小分子量 的RNA和多肽组成。
1.荧光免疫法
形成胞核基质—ANA—抗人Ig ·FITC 将患者血清先进行稀释，可以做定量试验，在1:80
稀释仍呈阳性时，对SLE的诊断有较大的参考价值。
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间接法： 第一步：荧光素标记抗抗体
第二步：已知Ag固定＋待测Ab——洗涤
再加入抗Ab* ——洗涤——镜检。
Ag Ab（？）
抗－
Ab*
特点： 1.制备一种荧光抗体，可检测多种Ag或Ab。 2.既可检测Ag，又可检测Ab。 3.灵敏度高，但易产生非特异性荧光
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Thank you!
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在某些因素作用下改变细胞核某些成分性质， 激发机体产生许多抗不同核成分的抗体；
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抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同程 度的阳性率
如系统性红斑狼疮（SLE，95%~100%）、 类风湿性关节炎（RA，10%~20%）、 混合性结缔组织病（MCTD，80%~100%）、 干燥综合症（SS,10%~40%）、 全身性硬皮病（85%~90%）、 狼疮性肝炎（95%~100%）、 原发性胆汁性肝硬化（95%~100%）等，
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核型 核膜型 均质型
斑点型
核仁型
抗核抗体核型与相关疾病
荧光图形 核周环状荧光
抗体 抗dsDNA
相关疾病 SLE、慢活肝炎
核呈均质荧光
抗DNA、AHA SLE、RA、PSS、慢性
、 AnuA
肝病
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有特异诊断价值的有以下七种： ①抗nRNP(nuclear RNP,nRNP)抗体； ②抗Sm抗体； ③抗SSA抗体； ④抗SSB抗体； ⑤抗Scl-70抗体； ⑥抗Jo-1抗体； ⑦抗核糖体抗体 。
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• 抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%~40%） • 抗U1-RNP抗体：MCTD 95%~100%（高 滴度） • 抗SSA抗体：SS 40%~95%，其它CTD • 抗SSB抗体： SS 40%~90%，其它CTD • 抗Scl-70抗体：PSS25%~70%, 标记性抗体 • 抗Jo-1抗体：PM/DM 25%，标记性抗体 • 抗rRNP（Rib）抗体： SLE特异性抗体 （10%~20%）
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ANA主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和 IgE；
ANA无器官特异性和种属特异性； ANA主要存在于血清中； 将检出ANA作为AID存在的依据。
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（一）ANA的类型和临床意义
ANA谱
抗DNA抗体：抗dsDNA/抗nDNA、抗ssDNA/抗dDNA等 抗组蛋白抗体(AHA)：抗H1、抗H2A、抗H2B、 抗H3、抗H4抗体等 抗非组蛋白抗体：抗nRNP/抗U1RNP、抗Scl-70、 抗SSA、抗Sm、抗SSB、抗Jo-1、抗Rib抗体、 AnuA、抗DNP、抗D’E多肽抗体、抗DM53抗体 抗RANA抗体、抗着丝点、抗Ku抗体等 抗核仁抗体：抗PM-Scl抗体、抗Th/To抗体、 抗U3-RNP、抗4-6-S-RNA抗体等
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抗DNA抗体
①抗天然DNA (native DNA,nDNA) 抗体，又称抗双 链DNA (double stranded DNA,dsDNA) 抗体。
对SLE有高特异性; SLE诊断标准之一。
缓解期降低 药物疗效
70%～90%SLE
活动期增高
②抗变性DNA (denatured DNA,dDNA) 抗体，又称抗单链 DNA (single stranded DNA,ssDNA)抗体。
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抗核小体抗体
抗核小体抗体（anti-nucleosome antibody，AnuA) 是细胞核染色质的基本单位; 细胞凋亡而致核小体大量蓄积，
诱导B细胞产生的AnuA是SLE 特异性的标志抗体。
抗dsDNA和抗Sm阴性的SLE阳性 率为60%～80%，特异性＞97%。
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（二）ANA的检测方法
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抗核抗体的测定
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（antinuclear antibody，ANA）又称抗核酸抗 原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱 氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗 原（ENA）和RNA等作为靶抗原的自身抗体的 总称，能与所有动物的细胞核发生反应，主要 存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜液 和尿液中。
核内颗粒状荧光 核仁有荧光
抗ENA 抗核仁抗体
MCTD、SLE、PSS、SS 、PM
PSS、雷诺现象、SLE
着丝点型 核浆细小相同颗粒 抗着丝点 荧光
PSS、CREST综合征
25
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周边型
可见于胶原病、PBC、CAH等患者
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2. ELISA法
用ELISA间接法检测抗dsDNA抗 体、抗组蛋白抗体和抗核小体 抗体。3. 免疫印记法
10
检出 百分 率
100
80
60
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抗DNP抗体
抗DNP抗体（抗核蛋白抗体）：核蛋白(DNP) 抗原由DNA和蛋白质组成。DNP抗原有不溶性 和可溶性两种，可分别产生相应的抗体。
SLE 非活动期
SLE 活动期
RA滑 膜液中
抗 抗 DNP DNP
抗 DNP
抗不溶性DNP抗体
抗 DNP
抗可溶性DNP抗体