荧光分析法知识讲解

荧光分析法

荧光分析法

●习题精选

一、选择题（其中1~6题为单选，7~10题为多选）

1．下列化合物中荧光最强、发射波长最长的化合物是( )。

A. B.

C. D.

2．所谓荧光，即指某些物质经入射光照射后，吸收了入射光的能量，从而辐射出比入射光( )。

A. 波长长的光线；

B. 波长短的光线；

C. 能量大的光线；

D. 频率高的光线

3．单光束荧光分光光度计的光路图是( )。

A.

B.

C.

D. 4

A. 1-氯丙烷；

B. 1-溴丙烷；

C. 1-碘丙烷；

D. 1,2-二碘丙烷

5．下列化合物荧光最强的是( )；磷光最强的是( )。 Cl Br

A B C D I

6．下列化合物荧光量子产率最大的是( )

A B C D

COO H

-COO O -O OH COO H

O OH O O

COO -

O -O -

7．下列说法正确的是( )

A 荧光发射波长永远大于激发波长

B 荧光发射波长永远小于激发波长

C 荧光光谱形状与激发波长无关

D 荧光光谱形状与激发波长有关

8．荧光物质的荧光强度与该物质的浓度成线性关系的条件是( )

A. 单色光；

B. ECl ≤0.05；

C. 入射光强度I 0一定；

D. 样品池厚度一定

9．下列化合物中可产生荧光的化合物是( )

A B

C D

N

N N N

10．在相同条件下，荧光、延时荧光、磷光三者波长之间的关系为( )

A. 荧光波长与延时荧光波长相等；

B. 磷光波长比荧光波长、延时荧光波长长；

C. 磷光波长与延时荧光波长相等；

D. 磷光波长比荧光波长、延时荧光波长短

二、填空题

1．荧光寿命与延时荧光寿命相比，寿命短；荧光寿命与磷光寿命相比，寿命长；磷光寿命与延时荧光寿命相比，二者。

2．荧光光谱的形状与激发光谱的形状，常形成。

3．一般情况下，溶液的温度，溶液中荧光物质的荧光强度或荧光量子产率越高。

4．激发光谱的形状与光谱形状极为相似，所不同的只是。

5．荧光分光光度计中光源与检测器呈角度。这是因为。

6．紫外分光光度计与荧光分光光度计的主要区别是（1）。

（2）。

7．荧光分光光度计中，第一个单色器的作用是，第二个单色器的作用是。

8．荧光量子产率，荧光强度越大。具有分子结构的物质有较高的荧光量子产率。

9．处于激发态的分子不稳定，回到基态时常有、去活化过程。

10．选择适当的可以消除或减少散射光对荧光测定的干扰。

三、判断题

1．荧光光谱是荧光物质的特性，所以同一荧光物质在不同的溶剂中具有相同的荧光光谱。

2．荧光光谱的形状与激发光谱的形状常形成镜像对称。

3．溶剂的拉曼光波长与被测溶质荧光的激发光波长无关。

4．在一定条件下，物质的荧光强度与该物质的任何浓度成线性关系。即：

Kc

F 。

5．荧光光谱的形状与激发波长有关。选择最大激发波长，可以得到最佳荧光光谱。

6．荧光分光光度计中光源发出光到检测器检测荧光，其光路为一条直线。

7．发荧光时，电子能量的转移没有电子自旋的改变；发磷光时，电子能量的转移伴随电子自旋的改变。

8．紫外分光光度法和荧光分光光度法都属于分子光谱法范畴，所以两种方法具有相同的灵敏度。

9．荧光量子产率φF＜1。

10．具有π→π*跃迁共轭的化合物，易产生更强的荧光；具有n→π*跃迁共轭的化合物，易产生更强的磷光。

四、名词解释

1．单重态或单线态

2．三重态或三线态

3．振动弛豫

4．内部能量转换

5．荧光

6．外部能量转换

7．体系间跨越

8．磷光

9．延时荧光

10．激发光谱

11．荧光光谱

12．荧光寿命

13．荧光效率

五、计算题

1．用荧光法测定复方炔诺酮片中炔雌醇的含量时，取供试品20片（每片含炔诺酮应为0.54~0.66 mg，含炔雌醇应为31.5~38.5 μg），研细，用无水乙醇溶解，转移至250 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，滤过，弃去初滤液，取续滤液5.00 mL，稀释至10 mL，在λex285nm和λem307 nm处测定荧光强度。已知炔雌醇对照品乙醇溶液的浓度为1.4 μg/mL，在同样测定条件下，测得荧光强度为65，则合格片的荧光读数应在什么范围内？

2．用酸处理1.00 g谷物制品试样，分离出核黄素及少量无关杂质，加入少量KMnO4，将核黄素氧化，过量的KMnO4用H2O2除去。将此溶液移入50 mL容量瓶中，稀释至刻度。吸取25 mL放入样品池中以测定荧光强度（核黄素中常含有发生荧光的杂质叫光化黄）。事先将荧光计用硫酸奎宁调至刻度100。测得氧化液的读数为6.0格。加入少量连二亚硫酸钠（Na2S2O4），使氧化态核黄素（无荧光）重新转化为核黄素，这时荧光计读数为55格。在另一样品池中重新加入24 mL被氧化的核黄素溶液，以及1 mL核黄素标准溶液（0.5 μg/mL），这一溶液的读数为92格，计算试样中核黄素的质量分数（μg/g）。

3．今有化合物SPQ，其分子结构式如下图所示。该分子可作为选择性的细胞内Cl-离子荧光探针，因为Cl-可碰撞淬灭SPQ荧光。已知没有淬灭剂存在下SPQ的寿命为26.3 ns。

H3

N

CH2CH2CH2SO3-

现有实验数据测定如下：

[Cl-]/mmol/L 0 5 15 50

发光强度F 1.0 0.6 0.34 0.15

①根据Stern－Volmer方程，利用表中的数据确定Cl-的淬灭常数。

②假设血清中细胞内的Cl-平均浓度为103 mmol/L，则该血清中SPQ的荧光寿命和荧光相对强度各是多少？

③如果Cl-浓度降低到75 mmol/L，SPQ的荧光寿命和荧光相对强度又是多少？

●习题答案与解析

一、选择题（其中1~6题为单选，7~10题为多选）