胃肠道感染的病原菌及其检测方法

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A-F多价凝,O9凝,Hd凝为伤寒沙门菌
沙门菌血清型确定流程
1步 系统生化反应符合沙门菌特点 2步 A-F多价O血清凝集不凝 Vi抗原是否凝集,凝集则菌液沸水15-30分钟,
冷却后,继续2-5步 • Vi抗原不凝,①考虑A-F群以外的沙门菌②
直接进行3步 O特异性群抗原凝集,如凝集 可能是A-F多价O血清效价不高原因
最优标本
食管刷 食管活检
培养,直接荧光抗体 (DFA)
核酸扩增(NAAT)
食管刷或食管活检 食管刷或食管活检
转运要求最佳时间
无菌容器,室温2h 福尔马林容器室温214d
病毒转运装置,冰上, 立即
密闭容器,室温,2h
组织病理学检查
食管活检
福尔马林容器室温214d
CMV
培养
食管刷或食管活检 病毒转运装置,冰上,
临床表现
流行病学
• 通过水污染物传播 • 1993年美国威斯康星州密尔沃基市,水源
污染导致37万人感染 • 动物间的传播(羊和牛) • 人与人接触(看护者和被看护者)以及娱
乐用水
实验诊断
隐孢子虫改良抗酸染色
治疗
• 无症状患者和免疫力较强的患者只需补液、 补充电解质
• 1-11岁的儿童患者推荐使用硝唑尼特
大便金黄色葡萄球菌
抗生素相关腹泻(AAD)
• 抗生素引起腹泻的机制
– 肠粘膜对抗生素过敏 – 抗生素的毒性效应 – 胃肠道动力改变(如红霉素) – 正常肠道菌群的改变。导致碳水化合物或者胆汁酸
经肠道菌群代谢障碍,或致致病菌过度繁殖
• 与AAD相关的细菌:产气荚膜梭菌、金黄色葡 萄球菌、产酸克雷伯菌、假丝酵母菌、艰难梭 菌
• TCBS和4号上不生长。分离碱性胨水转血平 板
金黄色葡萄球菌、芽孢杆菌、产气 荚膜梭菌
• 是食物中毒的主要病原 • 典型的胃肠道症状开始于食入污染食物24h
内,比沙门菌、志贺菌、弯曲菌的潜伏期 长。
• 芽孢杆菌有两种不同的肠道症状
– 短潜伏期疾病(呕吐综合征) – 长潜伏期疾病(腹泻综合征)
• 产毒素细菌导致的疾病常在24h内缓解,不 需要抗生素治疗
• SS,MAC平板上生长缓慢,菌落小,25度24h 直径0.1-0.3mm,圆形,扁平,光滑边缘整 齐透明或半透明,无色或淡橘红色菌 落.48hMAC0.5mm,SS1-2mm
• 最佳分离培养基是耶尔森CIN培养基,形成 1mm牛眼样菌落
迟钝爱德华菌
• 肠杆科,爱德华菌属 • MAC,SS上不发酵乳糖,SS上产H2S黑色中心 • 普通营养琼脂平板上24h,35-37度,形成
• 副溶血弧菌所致的肠道感染,症状包括反 胃、腹部疼痛痉挛、呕吐、低烧、寒战、 水样腹泻等。
• 河流弧菌引起散发的人类腹泻 • 豪氏弧菌引起中到中度的腹泻
弧菌和气单胞菌
试验
O/129 (150ug/片) 敏感 TCBS培养基生 长 精氨酸双水解 酶 甘露醇发酵 嗜盐性 氧化酶
外鞘端生鞭毛
弧菌科 S
耶尔森菌属,弧菌属, 气单胞菌,邻单胞菌属, 迟钝爱德华菌,金黄色 葡萄球菌,大肠埃希菌 (ETEC、EIEC、EPEC、 EAggEC)
特殊粪便培养
蜡样芽孢杆菌,产气荚 膜梭菌,金黄色葡萄球 菌
特殊过程进行毒素检测
肉毒梭菌
鼠致死试验
粪便 粪便 粪便
粪便 粪便
源自文库
艰难梭菌
谷氨酸脱氢酶抗原和毒 粪便 素检测,细胞毒素或 NAAT确证
粪便 粪便 粪便
粪便 粪便
艰难梭菌
谷氨酸脱氢酶抗原和毒 粪便 素检测,细胞毒素或 NAAT确证
转运要求最佳时间
密闭容器,RT,2h。CaryBlair转运培养基RT,24h 密闭容器,RT,2h
密闭容器,RT,2h
密闭容器,RT,2h
密闭容器,储存转运,4 度,禁止冷冻 密闭容器,RT,2h
小肠结肠炎耶尔森菌
• C群鲍氏志贺菌 1-19型 • D群 宋内志贺菌 迟缓发酵乳糖,一个血清
型,两个变异相
伤寒副伤寒沙门菌的初步生化
伤寒沙门 菌
甲型副伤 寒沙门菌
乙型副伤 寒沙门菌
斜面/底 层 K/A
K/A
K/A
TSI/KIA
产气
H2S
动力
-
+/-(97%+) +
+
-/+(10%+) +
+
+
+
丙型副伤 K/A
+
+
溶组织阿米巴
虫卵和寄生虫检查
种特异性免疫检查
蓝氏贾地鞭毛虫
酶免疫检查
隐孢子虫属
直接荧光免疫
隐孢子虫,环孢子虫
浓缩标本改良抗酸染色
微孢子虫
浓缩标本改良三色染色
蛲虫
胶带拭取
粪便
粪便 粪便 粪便 粪便 粪便 肛周
转运要求最佳时间
未加固定剂的粪便标本 RT,<1h
RT,2h
钩虫
隐孢子虫概述
形态
致病性
福尔马林容器室温 2-14d
快速尿酶检测
同上
密闭容器,RT,2h
幽门螺杆菌
• 微需氧,初次分离需5-10%O2,5-12%CO2, 5-10%H2,37度,湿度95%,
• 脑心浸液琼脂、布氏琼脂或哥伦比亚琼脂 +5-10%马或羊血
• 改良Skirrow琼脂或在Karmail弯曲菌培养基 上3-5天。
转运要求最佳时间
密闭容器,RT,2h。CaryBlair转运培养基RT,24h 密闭容器,RT,2h
密闭容器,RT,2h
密闭容器,RT,2h
密闭容器,储存转运,4 度,禁止冷冻 密闭容器,RT,2h
志贺菌与沙门菌SS平板
双糖斜面初步观察
粪便培养操作流程
志贺菌、沙门菌重要的生化试验
发酵葡萄糖 乳糖产酸 吲哚
胃肠炎,感染性和中毒性腹泻
病原因子(病毒) 诊断方法
杯状病毒(calicivirus) 诺如病毒(norovirus) 肠道腺病毒 肠道病毒/副埃可病毒 轮状病毒
轮状病毒和肠道腺病毒
NAAT EIA
肠道腺病毒 肠道病毒/副埃可病毒
病毒培养
CMV
杯状病毒(calicivirus) 诺如病毒(norovirus
0.5-1.0mm的较小的菌落。周鞭毛 • 对人可引起胃肠炎和腹泻,类沙门菌肠炎
弧菌属
• O/F(F),氧化酶+,动力+。 • 耐碱不耐酸,霍乱弧菌PH8.8-9.0蛋白胨水
中6-8h表面形成菌膜。 • 硫代硫酸钠-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂
( TCBS )霍乱弧菌黄色,副溶血弧菌绿色 • 4号琼脂上还原亚锑酸钾成金属锑,菌落中
• 氧化酶+,触酶阳性,不发酵葡萄糖,尿素 酶强阳性。
胃粘膜溃疡病理切片革兰染色
胃肠炎,感染性和中毒性腹泻
病原因子(细菌性) 诊断方法
最优标本
沙门菌,志贺菌,弯曲 常规粪便细菌培养 菌
EHEC,包括O157:H7和其 培养O157:H7
他产志贺毒素的大肠埃 志贺毒素免疫学检查
希菌
NAAT测志贺毒素基因
心灰黑色
霍乱弧菌在4号琼脂上
霍乱弧菌的血清型
• 据O抗原的不同,霍乱弧菌现分为155个血 清型
• O1,O139群可引起霍乱 • 其余的血清群分布于地表水中,可引起人
类胃肠炎等疾病,但从未引起霍乱的流行, 称为非O1群,非O139群霍乱弧菌。
副溶血弧菌和其他弧菌
• 副溶血弧菌主要引起肠道感染,通常与食 用生的或未烹饪熟的鱼或甲壳类水生生物 有关。
难辨梭状芽孢杆菌
生存条件
致病机制
致病性
诊断方法
培养方法
艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素 检测
治疗-轻中度感染
治疗—中度/特重
多次复发者治疗
胃肠炎,感染性和中毒性腹泻
病原因子(寄生虫) 诊断方法
最优标本
溶组织阿米巴,人芽囊原虫 ( Blastocystis hominis) 脆弱双核阿米巴( Dientamoeba fragilis), 大肠纤毛虫( Balantidium coli), 蓝氏贾第鞭毛虫, 线虫类包括似蚓蛔线虫② ( Ascaris lumbricoides)、粪类圆 线虫 i、毛首鞭形线虫( Trichuris trichiura) 、钩虫( Hookworms),绦虫 ( Cestodes, Tapeworms),吸 虫( Trematodes)
组织病理学 病毒培养 公共卫生爆发调查
最优标本
粪便
粪便 粪便 活检 活检 粪便
转运要求最佳时间
密闭容器,RT,2h。
密闭容器,RT,2h 病毒转运培养基,置冰 上,2h 福尔马林容器,RT,2-14d 无菌容器,常温立即 密闭容器,RT,2h
小结
• 胃肠道感染的病原菌比较复杂,有细菌、 寄生虫、病毒
去氧胆酸钠琼脂)CSM,Skirrow,Campy-CVA • 氧化酶,触酶阳性,生化不活泼,既不氧
化也不发酵
血培养分离的弯曲菌
常见致腹泻的大肠埃希菌血清型
胃肠炎,感染性和中毒性腹泻
病原因子(细菌性) 诊断方法
最优标本
沙门菌,志贺菌,弯曲 常规粪便细菌培养 菌
EHEC,包括O157:H7和其 培养O157:H7
动力
H2S
产酸
志贺菌
+
-
宋内0%+ -
-
福氏42%+
痢疾40%+
鲍氏37%+
沙门菌
+
-
-
+
+/d
志贺菌的血清分型
• A群痢疾志贺菌 1、2、3、4、5、6、7、8、 9、10、11、12、13、14、15
• B群福氏志贺菌 1a,1b,2a,2b,3a,3b,4a,4b,4c,5a,5b,6Boyd88,6 孟城型,6新城型,X,Y
• 了解感染的种类有助于采取针对性的检测 方法和治疗方法
• 针对我们不熟悉的病原体应多学习了解其 检测方法的新进展
谢谢!
DFA
立即
NAAT
食管刷或食管活检 密闭容器,室温,2h
免疫组织化学染色 食管活检
福尔马林容器室温214d
病原因子 幽门螺杆菌
胃炎
诊断方法
最优标本
转运要求最佳时间
粪便抗原检测 尿素呼吸试验 革兰染色 幽门螺杆菌培养 组织病理学检查
粪便
放射性标记物呼气
胃窦部活检组织2 块 同上
密闭容器,RT,2h 特殊收集装置 无菌容器,RT,立即
+
-/+
+/+/+(麦氏弧菌 除外) +
气单胞菌科 R
+ + + -
邻单胞菌 S
+ + -
发光杆菌属 S
+ + + v -
气单胞菌
• 主要存在水生系统,适宜在盐水和淡水交 界处生活,污水中密度较高
• 病原菌以嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和 维氏气单胞菌最多
• 可产产毒素,引起肠内感染,出现腹泻和 水样便。
他产志贺毒素的大肠埃 志贺毒素免疫学检查
希菌
NAAT测志贺毒素基因
耶尔森菌属,弧菌属, 气单胞菌,邻单胞菌属, 迟钝爱德华菌,金黄色 葡萄球菌,大肠埃希菌 (ETEC、EIEC、EPEC、 EAggEC)
特殊粪便培养
蜡样芽孢杆菌,产气荚 膜梭菌,金黄色葡萄球 菌
特殊过程进行毒素检测
肉毒梭菌
鼠致死试验
胃肠道感染的病原菌及其检测 方法
主要内容
• 食管炎的病原菌 • 胃炎主要的病原菌 • 急性胃肠炎的病原菌
– 细菌性 – 寄生虫 – 病毒
食管炎
• 最常见原因是非感染性的,如胃食管反流 性疾病
• 感染见于免疫功能受损患者
食管炎的实验室诊断
病原因子
白色假丝酵母菌
HSV
诊断方法
KOH,真菌培养,组 织病理学检查
+
寒沙门菌
MIU 吲哚
脲酶
-
-
-
-
-
-
-
-
其它产生H2S的肠杆菌科细菌
• 迟钝爱德华100% • 奇异变形杆菌98%,普通变形95%,潘氏变
形30% • 魏氏枸橼酸杆菌100%,弗劳地枸橼酸杆菌
78%,布氏枸橼酸杆菌60% • 泉居布拉格菌89%
沙门菌血清型确定流程
1步 系统生化反应符合沙门菌特点 2步 A-F多价O血清凝集 3步 O特异性群抗原凝集 4步 H 因子血清第一相定型 5步 H因子第二相辅助定型
A-F群沙门菌特异性群抗原
• A群O2 • B群O4 • C1群O7 • C2群O8 • D群O9 • E群O3,O10 • F群O11
弯曲菌
• 微需氧,有些菌株需氧或厌氧生长 • 初次分离需5%O2,10%CO2,85%N2,35-42
度,含血平板生长良好 • 粪便选择性培养基CCDA(活性炭-头孢哌酮-
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