教学课件-显微镜直接计数法.
《显微镜直接计数法》课件
数据处理
根据观察到的微生物数 量，进行数据处理和分 析，推算样品中微生物
的数量。
03
显微镜直接计数法的应用
在生物学中的应用
微生物计数
显微镜直接计数法常用于 微生物计数，如细菌、酵 母和原生动物等。
细胞计数
在细胞生物学研究中，显 微镜直接计数法可用于细 胞计数，如血细胞、组织 细胞等。
定义与特点
定义
显微镜直接计数法是通过显微镜 直接观察微生物的数量并进行计 数的方法。
特点
该方法具有操作简便、快速、准 确等优点，但也存在一定的局限 性，如需要经验丰富的操作人员 和较高的样品浓度。
02
显微镜直接计数法的原理
原理概述
显微镜直接计数法是一种利用显 微镜直接观察和计数微生物数量
的方法。
对观察者要求较高
显微镜直接计数法需要观察者具备较高的专业知识和技能，否则容易 出现误差和误判。
05
显微镜直接计数法的改进和发展趋势
பைடு நூலகம்
技术改进
自动化技术
通过引入自动化技术，减少人工 操作，提高计数准确性和效率。
高分辨率成像
采用高分辨率成像技术，提高显 微镜的分辨率和清晰度，使计数
更加准确。
图像处理算法
显微镜直接计数法可以直接观察样本，能 够直观地看到微生物的数量和形态，有助 于快速判断和识别。
显微镜直接计数法通过直接观察样本，能 够较为准确地计算出微生物的数量，避免 了间接计数法的误差。
灵活性
操作简便
显微镜直接计数法可以根据需要选择不同 的观察区域和样本，灵活性较高，适用于 多种不同类型的微生物计数。
涂片法
将样品涂抹在载玻片上， 利用显微镜观察和计数微 生物的数量。
实验八微生物数量的测定――――显微镜直接计数法
实验八微生物数量的测定――――显微镜直接计数法一目的要求了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算；二实验原理镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质常不易分辨。
菌体较大的酵母菌或霉菌泡子可采用血球计数板；一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petroff Hausser)细菌计数板。
两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个方格网(图Ⅳ-2)。
每个方格网共分9大格，其中间的一大格(又称为计数室)常被用作微生物的计数。
计数室的刻度有两种：一种是大方格分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。
但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即每个大方格都由400个小方格组成(图5)。
每个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，每个小方格的面积为1／400mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与计数室底部之间的高度为0.1mm，所以每个计数室(大方格)的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为l／4000mm3。
使用血球计数板直接计数时，先要测定每个小方格(或中方格)中微生物的数量，再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。
图Ⅳ-2 血球计数板的构造a.平面图(中间平台分为两半，各刻有一个方格网)b.侧面图(中间平台与盖玻片之间有高度为0.1毫米的间隙)图Ⅳ-3 血球计数板计数网的分区和分格三实验材料1、菌种：酿酒酵母；2、血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细滴管；3、菌种：大肠杆菌菌悬液。
4、1ml无菌吸管，无菌平皿，无菌水，试管，恒温培养箱牛肉膏蛋白胨培养基。
显微镜直接计数法
……………………………………………………………最新资料推荐…………………………………………………血球计数板计数法利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。
此法的优点是直观、快速。
将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。
由于计数室的容积是一定的（0.1㎜3），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。
由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。
血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。
中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，共400小格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格，总共也是400小格。
所以无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的。
每一个大方格边长为1㎜，则每一大方格的面积为1㎜2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1㎜，所以计数室的容积为0.1㎜3。
其计算方法如下：1．16×25的计数板计算公式细胞数/ml=(100小格内的细胞数/100)×400×1000×稀释倍数2．25×16的计数板计算公式细胞数/ml=(80小格内的细胞数/80)×400×1000×稀释倍数器材酵母菌悬液，血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管等。
操作步骤1．稀释：将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。
2．镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3．加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
(1)先将计数板盖上盖片在显微镜下，从低倍找到计数器位 置，不动。
(2)将稀释好菌悬液摇匀，用滴管吸入由盖玻片边缘滴入让 其自行渗透，使室充满（不宜过多，也不可有气泡）。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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(3)静止3-5分钟，先在低倍镜观察，然后换成高倍 镜进行计数。样品不宜太浓或太稀，最好每小格 控制在5-10个菌体为宜，计数需要重复二次。取 平均值。先后二次误差太大，需再重复计数。
2.微生物大小测定
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微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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三、器材
显微镜；血球计数板；手揿计数器；盖玻片； 目镜测微尺；镜台测微尺。
酵母菌菌悬液； 枯草杆菌和金黄色葡萄球菌染色标本。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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四、操作步骤
在计数时，通常以五个中方格总菌数（每个中方格中数四 个小方格）即20个小方格总菌数（求平均值）。
比如：设20个小方格中总菌数为A，悬液稀释度B，那么 大格（0.1立方毫米总菌数） A/20×400×B。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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测量枯草杆菌长和宽及金黄色葡萄球菌直径。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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五、试验结果
1、P48题1 2、P92题1
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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六、思索题
1、依据你体会，用血球计数板误差主要来自 那些方面？应怎样防止误差，力争准确？
2、当接目镜不变，目镜测微尺也不变，只改 变接物镜，目镜测微尺每格所量镜台上物体 实际长度是否相同？为何？
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实验十 显微镜直接计数技术
三、实验材料：
1.实验菌种及培养基：酿酒酵母菌细胞稀释 液； 2. 实验设备及器材：恒温培养箱；恒温干燥 箱；高压蒸汽灭菌锅；显微镜；酒精灯；接 种环；滴瓶；试剂瓶；双层瓶；镊子；载玻 片；φ90mm培养皿；500ml标本缸；15×150 试管；火柴（或打火机）；吸水纸；镜头纸； 棉花；
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实验十 显微镜直接计数技术
计数室是一个边长为1mm的正方形，其面积 为1mm2。每个计数室被辅助线划分为25 （中格）×16（小格）个小格，以方便计数。 图10-2为计数室（红色双线围成的即为由25 个中格组成的计数室。）
＋
加样处
＋
图10-1 计数板俯视图
二、基本原理：
显微镜直接计数技术可以对含菌样品所含的 总菌数做出统计，是常用的、较快捷的一种 统计微生物数量的方法和技术。 显微镜直接计数技术使用一特制的、专用的 计数工具——血球计数板进行计数操作。 血球计数板上有四条槽，把计数板分为三个 平台，两侧的平台用于搭放盖玻片，中间的 平台又被分为两个较小的、每个平台上各有 一个计数室的平台。如图10-1
1.将统计、计数结果填入下表：
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实验十 显微镜直接计数技术
2.影响显微镜直接计数结果的因素有哪些， 如何避免？ 3. 整理实验设备，清理实验台。
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1、快乐总和宽厚的人相伴，财富总与诚信的人相伴，聪明总与高尚的人相伴，魅力总与幽默的人相伴，健康总与阔达的人相伴。 2、人生就有许多这样的奇迹，看似比登天还难的事，有时轻而易举就可以做到，其中的差别就在于非凡的信念。 3、影响我们人生的绝不仅仅是环境，其实是心态在控制个人的行动和思想。同时，心态也决定了一个人的视野和成就，甚至一生。 4、无论你觉得自己多么了不起，也永远有人比更强;无论你觉得自己多么不幸，永远有人比你更不幸。 5、也许有些路好走是条捷径，也许有些路可以让你风光无限，也许有些路安稳又有后路，可是那些路的主角，都不是我。至少我会觉得，那些路不是自己想要的。 6、在别人肆意说你的时候，问问自己，到底怕不怕，输不输的起。不必害怕，不要后退，不须犹豫，难过的时候就一个人去看看这世界。多问问自己，你是不是已经为了梦想而竭尽全力了? 7、人往往有时候为了争夺名利，有时驱车去争，有时驱马去夺，想方设法，不遗余力。压力挑战，这一切消极的东西都是我进取成功的催化剂。 8、真想干总会有办法，不想干总会有理由;面对困难，智者想尽千方百计，愚者说尽千言万语;老实人不一定可靠，但可靠的必定是老实人;时间，抓起来是黄金，抓不起来是流水。 9、成功的道路上，肯定会有失败;对于失败，我们要正确地看待和对待，不怕失败者，则必成功;怕失败者，则一无是处，会更失败。1、快乐总和宽厚的人相伴，财富总与诚信的人相伴，聪明总与高尚的人相伴，魅力总与幽默的人相伴，健康总与阔达的人相伴。 2、人生就有许多这样的奇迹，看似比登天还难的事，有时轻而易举就可以做到，其中的差别就在于非凡的信念。 3、影响我们人生的绝不仅仅是环境，其实是心态在控制个人的行动和思想。同时，心态也决定了一个人的视野和成就，甚至一生。 4、无论你觉得自己多么了不起，也永远有人比更强;无论你觉得自己多么不幸，永远有人比你更不幸。 5、也许有些路好走是条捷径，也许有些路可以让你风光无限，也许有些路安稳又有后路，可是那些路的主角，都不是我。至少我会觉得，那些路不是自己想要的。 6、在别人肆意说你的时候，问问自己，到底怕不怕，输不输的起。不必害怕，不要后退，不须犹豫，难过的时候就一个人去看看这世界。多问问自己，你是不是已经为了梦想而竭尽全力了? 7、人往往有时候为了争夺名利，有时驱车去争，有时驱马去夺，想方设法，不遗余力。压力挑战，这一切消极的东西都是我进取成功的催化剂。 8、真想干总会有办法，不想干总会有理由;面对困难，智者想尽千方百计，愚者说尽千言万语;老实人不一定可靠，但可靠的必定是老实人;时间，抓起来是黄金，抓不起来是流水。14、成长是一场和自己的比赛，不要担心别人会做得比你好，你只需要每天都做得比前一天好就可以了。 15、最终你相信什么就能成为什么。因为世界上最可怕的二个词，一个叫执着，一个叫认真，认真的人改变自己，执着的人改变命运。只要在路上，就没有到不了的地方。 16、你若坚持，定会发光，时间是所向披靡的武器，它能集腋成裘，也能聚沙成塔，将人生的不可能都变成可能。 17、人生，就要活得漂亮，走得铿锵。自己不奋斗，终归是摆设。无论你是谁，宁可做拼搏的失败者 9、成功的道路上，肯定会有失败;对于失败，我们要正确地看待和对待，不怕失败者，则必成功;怕失败者，则一无是处，会更5、别着急要结果，先问自己够不够格，付出要配得上结果，工夫到位了，结果自然就出来了。 6、你没那么多观众，别那么累。做一个简单的人，踏实而务实。不沉溺幻想，更不庸人自扰。 7、别人对你好，你要争气，图日后有能力有所报答，别人对你不好，你更要争气望有朝一日，能够扬眉吐气。 8、奋斗的路上，时间总是过得很快，目前的困难和麻烦是很多，但是只要不忘初心，脚踏实地一步一步的朝着目标前进，最后的结局交给时间来定夺。 9、运气是努力的附属品。没有经过实力的原始积累，给你运气你也抓不住。上天给予每个人的都一样，但每个人的准备却不一样。不要羡慕那些总能撞大运的人，你必须很努力，才能遇上好运气。 10、你的假装努力，欺骗的只有你自己，永远不要用战术上的勤奋，来掩饰战略上的懒惰。 11、时间只是过客，自己才是主人，人生的路无需苛求，只要你迈步，路就在你的脚下延伸，只要你扬帆，便会有八面来风，启程了，人的生命才真正开始。 12、不管做什么都不要急于回报，因为播种和收获不在同一个季节，中间隔着的一段时间，我们叫它为坚持。失败。11、学会学习的人，是非常幸福的人。——米南德 12、你们要学习思考，然后再来写作。——布瓦罗 13、在寻求真理的长河中，唯有学习，不断地学习，勤奋地学习，有创造性地学习，才能越重山跨峻岭。——华罗庚 14、许多年轻人在学习音乐时学会了爱。——莱杰 15、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基 16、我们一定要给自己提出这样的任务：第一，学习，第二是学习，第三还是学习。——列宁 17、学习的敌人是自己的满足，要认真学习一点东西，必须从不自满开始。对自己，“学而不厌”，对人家，“诲人不倦”，我们应取这种态度。——毛泽东 18、只要愿意学习，就一定能够学会。——列宁 19、如果学生在学校里学习的结果是使自己什么也不会创造，那他的一生永远是模仿和抄袭。——列夫· 托尔斯泰 20、对所学知识内容的兴趣可能成为学习动机。——赞科夫 21、游手好闲地学习，并不比学习游手好闲好。——约翰· 贝勒斯 22、读史使人明智，读诗使人灵秀，数学使人周密，自然哲学使人精邃，伦理学使人庄重，逻辑学使人善辩。——培根 23、我们在我们的劳动过程中学习思考，劳动的结果，我们认识了世界的奥妙，于是我们就真正来改变生活了。——高尔基 24、我们要振作精神，下苦功学习。下苦功，三个字，一个叫下，一个叫苦，一个叫功，一定要振作精神，下苦功。——毛泽东 25、我学习了一生，现在我还在学习，而将来，只要我还有精力，我还要学习下去。——别林斯基、学习外语并不难，学习外语就像交朋友一样，朋友是越交越熟的，天天见面，朋友之间就亲密无间了。——高士其 2、对世界上的一切学问与知识的掌握也并非难事，只要持之以恒地学习，努力掌握规律，达到熟悉的境地，就能融会贯通，运用自如了。——高士其 3、学和行本来是有联系着的，学了必须要想，想通了就要行，要在行的当中才能看出自己是否真正学到了手。否则读书虽多，只是成为一座死书库。——谢觉哉、你的假装努力，欺骗的只有你自己，永远不要用战术上的勤奋，来掩饰战略上的懒惰。 11、时间只是过客，自己才是主人，人生的路无需苛求，只要你迈步，路就在你的脚下延伸，只要你扬帆，便会有八面来风，启程了，人的生命才真正开始。 12、不管做什么都不要急于回报，因为播种和收获不在同一个季节，中间隔着的一段时间，我们叫它为坚持。 13、你想过普通的生活，就会遇到普通的挫折。你想过最好的生活，就一定会遇上最强的伤害。这个世界很公平，想要最好，就一定会给你最，取平均值； 6.计算样品所含总菌数：根据统计、计数结 果，计算样品所含的总菌数； 7.清洗处理计数板：实验完成后，及时按 规定清洁处理技术板。 本实验所用计数板，可用清水清洁处理后， 吸干水分，妥善保存。
实验10-细菌计数
实验10 细菌计数返回目录一、显微镜直接计数法【原理】显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌板)，于显微镜下直接计数细菌的一种简便、快速、直观的方法。
该法适用于各种单细胞菌体的纯培养悬浮液，目前国内外常用的计菌板有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌板以及Hawksley计菌板等，血球计数板适用于菌体较大的酵母菌或霉菌孢子的计数，后两种计菌板适用于一般细菌的计数。
这几种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，盖玻片和载玻片之间的距离只有0.02mm，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不能使用油镜。
这里介绍血球计数板方法计数酵母菌数量。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽所构成的3个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区，计数区的刻度有两种：一种是一个大方格分为16个中方格(四角的四个大方格)，每个中方格又分25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格(中央的一个大方格)，而每个中方格又分成16个小方格，即计数区都由400个小方格组成(图1-3-12)。
图1-3-12 血细胞计数板构造计数区（一个大方格）边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。
盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为l/4000mm3。
使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每mL菌液(或每g样品)中微生物细胞的数量。
已知：1ml体积＝10mm×10mm×10mm＝1000mm3所以：1ml体积应含有小方格数为1000mm3／(1／4000mm3)＝4×106个小方格。
因此：每ml菌悬液中含有细胞数＝4×106×每个小格中细胞平均数×菌液稀释倍数。
微生物实验显微镜直接计数法
1.血球计数板法
利用计数板上有固定体积和精确刻度的两个计数室进行
计数，是常用的在显微镜下对细胞数目进行计数的方法。
（1）计数室体积：正方形，边长为1mm，深0.1mm→盖上 盖玻片后，容积为0.1mm3。 （2）计数室刻度的规格
具有直观、快速等优点，但误差较大，不适合细菌计数。
16×25型：16个中方格，每个中方格分25个小格；
25×16型：25个中方格，每个中方格分16个小格。
计数室
（3）计数和计算方法
我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总
菌数。如图：
5个方格的总菌数
计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B
稀释倍数
1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B
=50,000A×B个
三、实验材料
1.菌种：酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）悬液(已
稀释100倍)
2.器具：显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。
四、实验步骤
1.检查计数板
检查计数板是否有破损。
2.镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物， 则需清洗后才能进行计数。
3.加样品
在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管 让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般
六、作业
显微直接计数结果
÷Ð · Ö · ½ · ñ Ö Ð ¾ ú Ê ý 1 Ú Ò µ » Ê Ò Байду номын сангаас ¶ µ þ Ê Ò 2 3 4 5
5个中格总数
þ Ê ¶ Ò
A
B
100
ú Ê ¾ ý /ml Æ ½ ¾ ù Ö µ
微生物显微镜直接计数法
执行【display flash:/sup.bin flash:/sup.bin
Next startup system software:
flash:/sup.bin
Startup saved-configuration file:
flash:/vrpcfg.zip
//本次启动配置文件
Next startup saved-configuration file: flash:/vrpcfg.zip
天凌晨3点结束。
设备环境基本配置
用户级别切换
用户从高级别切换到低级别时，不需要使用密码。 如果用户从低级别切换到高级别时，必须输入正 确的级别切换密码。
切换用户级别的环境配置包含两个步骤：
使用高级别用户配置切换用户级别的密码 低级别用户登录系统后，切换用户级别。
设备环境基本配置
用户级别切换示例
1. 酵母菌液 2. 显微镜、血球计数器、目镜测微尺、镜台测微尺 3. 载玻片、盖玻片、接种环、胶头吸管等
图5-1 Thoma血球计数板
A.正面图 B.纵切面图 1.血球计数板 2.盖玻片 3.计数室
16小格 × 25大格计数室
25小格 × 16大格计数室
图5-2 计数室的两种刻度形式
四、实验内容
（一）酵母菌数量的检测
1. 显微镜直接计数法（每人1片） 注意事项: A. 取样时先要摇匀菌液;加样时计数室不可有气
泡产生。 B. 调节显微镜光线的强弱适当。 2. 平板菌落计数法 (实验八)
（二）酵母菌大小的检测
注意事项：观察时光线不宜过强,否则难以找到镜台测微尺的刻 度;换高倍镜和油镜校正时,务必十分小心,防止接物镜压坏镜台测 微尺和损坏镜头。
Password: Now user privilege is level 3, and only those commands whose level is equal to or less than this level can be used. Privilege note: 0-VISIT, 1-MONITOR, 2-SYSTEM, 3-MANAGE <Huawei>system-view Enter system view, return user view with Ctrl+Z. [Huawei]
2024版微生物实验显微镜直接计数法课件
微生物实验显微镜直接计数法课件•微生物实验概述•显微镜直接计数法简介•显微镜直接计数法操作步骤•显微镜直接计数法结果分析与解读目录•显微镜直接计数法注意事项与常见问题解答•显微镜直接计数法实验报告撰写要求微生物实验概述01010204微生物实验目的与意义了解微生物的形态、结构、生理生化特性掌握微生物的分类鉴定方法研究微生物与环境、人类的关系应用于医学、工业、农业、环保等领域03显微镜直接计数法是通过显微镜观察微生物细胞并直接计数的方法利用特定染色技术使微生物细胞在显微镜下可见通过计算单位面积或体积内的微生物细胞数量来推算总体数量微生物实验基本原理取样并制备微生物悬液，注意保持无菌操作对微生物悬液进行适当稀释，以获得合适的细胞密度准备实验器材和试剂，包括显微镜、计数板、盖玻片、染色剂等在计数板上滴加稀释后的微生物悬液，盖上盖玻片将计数板置于显微镜下观察并计数，注意选择合适的放大倍数和视野根据计数结果计算微生物细胞数量，并进行分析和讨论注意事项包括保持无菌操作、避免污染、控制实验条件等01020304显微镜直接计数法简02介显微镜直接计数法定义与特点定义显微镜直接计数法是一种通过显微镜观察并直接计数微生物数量的方法。
特点直观、准确、可重复性好，但需要较高的操作技能和经验。
显微镜直接计数法适用范围及局限性适用范围适用于各种形态和大小的微生物计数，如细菌、真菌、藻类等。
局限性对样品处理要求较高，如需要均匀涂布、避免细胞重叠等；对操作人员的技能和经验要求较高；无法区分死细胞和活细胞。
显微镜直接计数法与其他方法比较与平板计数法比较01平板计数法通过培养微生物后计数菌落数来推算微生物数量，结果较为准确但耗时较长；显微镜直接计数法快速但可能受操作技能和经验影响。
与流式细胞术比较02流式细胞术是一种自动化、高通量的细胞计数方法，具有快速、准确、灵敏度高等优点，但需要昂贵的仪器设备和专业的操作人员；显微镜直接计数法相对简单、经济，但通量较低。
实验六 微生物的显微直接计数一等奖公开课ppt课件
出芽菌计数
压线菌计数
（5）清洗血球计数板
使用完毕后，将血球计数板在水龙头 上用水柱冲洗，切勿用硬物洗刷，洗完后 自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每 小格内是否有残留菌体或其化沉淀物。若 不干净，则必须重复洗涤至干净为止。
五、实验报告
1. 将结果记录于下表中。
第一室
各个中格中菌数 1 2 34 5
血球计数板正面结构图Leabharlann 4-2计数室放大图
计数板结构
计菌器高度 0.02mm
血球计数板 高度0.1mm
（二）区分酵母菌死活细胞基本原理
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型 呈蓝色，还原型是无色。
用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于 细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原 能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成无色的还 原型。
(2)将标本片放3分钟后，先用低倍镜然后用
高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况，并
2. 酵母菌液的计数
（1）稀释 将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如
不浓，可不必稀释。 （ 2）镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行 镜检。若有污物，则需清洗后用电吹风吹 干后 才能进行计数。
（3）加样品
在血球计数板上盖上盖玻片, 用滴 管将摇匀的酵母菌液由盖玻片边的小槽滴 一小滴,菌液会自动进入计数室，静置5分 钟。
实验六 微生物的显微直接计数
一、目的要求
1. 了解血球计数板的计数原理，掌握 血球计数板的计数方法。
2. 观察酵母菌的形态，学习区分酵母 菌死活细胞的方法。
二、基本原理
（一）血球计数板计数原理
血球计数板是一块特制的载玻片，有四条竖槽和一条 横槽。横槽两边的平台上各有一个有九个大方格的方格网， 中间大方格为计数室：边长为１ｍｍ，深为0.1mm，容积 为0.1mm3(10-4ml)。计数室有两种规格：一是分为16个中 方格，每中方格中有25个小方格；另一种是分为25个中方 格，每中方格有16个小方格。两种都共有400个小方格。
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酵母菌细胞的镜检计数
原理：主要采用显微镜直接计数法，该方法是将小量待测 样品的悬浮液置于一种特别的具有特定面积和容积的载玻 片上(又称计菌器），于显微镜下直接计数的一种简便、快 速、直观的方法。目前国内常用的计菌器：血细胞计数板
血球计数板的构造
四条槽构成三个平台， 中间较宽的平台被一短
0.1毫米，所以计数室的容积为0.1mm3（万分之一毫升）
计数方法
数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值， 再乘上25或16，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换 算成毫升菌液中的总菌数。设五个中方格中总菌数A，菌液 稀释倍数B，如果是25个中方格的计数板，则
1ml菌液中的总菌数=A/5×25×104×B=50000AB 同理，如果是16个中方格的计数板，则
1ml菌液中的总菌数=A/4×16×104×B=50000AB
操作步骤见视频
①、菌悬液的制备 ②、镜检计数室
பைடு நூலகம்
③、加样品：
④、显微镜计数(记录结果） ⑤、清洗血细胞计数板
横槽隔成两半。
计数室的刻度一般有两种规格 大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格
一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25 个小方格
无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方
格400个，每一个大方格边长为1毫米，则每一个大方格的 面积为1mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为