肿瘤细胞培养和杂交瘤技术医学
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在人类的脑部、肺部和胰腺等部位的肿瘤中 EGFR的含量极高，Artrazeneca公司的研究人员 于1998年率先提出通过开发阻断EGFR的药物，
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肿瘤和正常的组织同样在体内也具有三 种不同的细胞群：
①增殖细胞群（A）：是肿瘤中处于增殖周期的细 胞，与肿瘤生长直接有关，亦是化学疗法最易攻击 的部分。
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10
②暂不增殖细胞群（B），它是延长了G1 细胞或G0细胞，目前不参加细胞周期， 与肿瘤的扩大暂时无关，由于它保留着 增殖的能力，在一定条件下成为肿瘤复 发根源。
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17
当前较有前景的靶向治疗
①现在发展的基因工程腺病毒（ONYX015）因删除了E1B 55KD蛋白而可以选 择性的溶解P53突变或缺失的肿瘤细胞， 此类肿瘤细胞占50℅，也就是腺病毒 ONYX-015可达到50℅的靶向治疗药物的 效果，目前已在头颈部肿瘤中进行Ⅱ期 临床试验。
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13
放线菌素D作用于G1期抑制DNA聚合酶 合成，作用于S后期与G2期抑制rRNA并 影响cAMP水平。放线菌素D不影响非分 裂期细胞，因而放线菌素D是一种细胞周 期特异性药物。
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14
阿糖胞嘧啶，选择性地抑制核苷二磷酸 还原酶，阻断核苷酸变为脱氧核苷酸， 从而抑制DNA合成，是DAN合成抑制剂， 属于S期特异性药物。
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15
秋水仙素能与微管蛋白强烈结合，引起 微管解体，纺锤体破坏，结果染色体的 移动被阻断，细胞分裂停留在中期，它 是属于M期的特异性药物。
通过体外细胞培养观察抗癌药物对细胞 周期作用点将常用的抗癌药物的细胞周 期分类。
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16
数十年来医生们除用手术外只能用放疗 和化学疗法来治疗癌症，这些疗法毫无 分别地同时杀死健康细胞和癌细胞，直 到人类基因组图谱的解密，我们才迎来 了适用少数病人的靶向性治疗新时代， 医生们首先分析病人肿瘤中的DNA（基 因），再开出靶向性复合药物的药方， 专门攻击肿瘤细胞发生缺陷的基因，达 到治疗癌症的目的。
安徽医科大学微生物学教研室 龚蕴贞
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1
大纲
一、肿瘤细胞体外培养的重要性 二、癌细胞系的建立 三、转化细胞系建立 四、癌细胞系和转化细胞系注意事项 五、癌细胞系和转化细胞系的鉴定 六、癌细胞和转化细胞系建立和鉴定的 小结及讨论
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2
一、肿瘤细胞体外培养的重要性
恶性肿瘤细胞培养建立细胞系，包括癌 细胞系和转化细胞系。转化细胞系可以 是恶性转化细胞和一般转化细胞两种。
当前较有前景的靶向治疗
肿瘤对化疗和放疗抗性的一种机制是由 于P53突变或P53的缺失，人类癌50 % P53 突变
Non small cell lung
60 %
Colon
50 %
Breast
Hale Waihona Puke Baidu
40 %
Head and neck
60 %
Ovarian
60 %
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②制备单克隆抗体，主要是靶向表皮生长因子 EGF受体EGFR和HER-2。80年代研究人员发现，
②不增殖细胞，这类细胞在分裂完成后，暂处 于 分G裂1期期，，如正肝常细情胞况，下只不有合受成损DN或A切，除不时进肝入细细胞胞 再分裂增殖。哺乳动物的初级卵细胞也属于此 类。 ③不增殖细胞，这类细胞由R点走向分化细胞， 并执行专门功能的细胞（称终末细胞）如神经 细胞、哺乳动物成熟的红细胞、皮肤上皮的角 质细胞、多性核粒细胞。
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3
恶性转化细胞系和癌细胞系一样具有永 久性生长能力和恶性表型，对此二种来 源的细胞系鉴定也是相似的，为研究恶 性肿瘤提供了有用模型。而一般转化细 胞系只具有无限生长能力，不具有恶性 细胞的表型，此种细胞系可相似于正常 细胞的模型而被应用。
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4
癌细胞来源于体内正常上皮细胞。癌细胞在
重量时足以致病人于死亡。经治疗后如细胞数 从1012减少至1010，重约10g时可称显效或部 分缓解；若肿瘤细胞数减少到108或106，重约 100mg至10mg时，可认为临床治愈或完全缓
解，但仍有可能复发。要根治肿瘤细胞，必须
彻底消灭所有癌细胞。外科手术切除大量肿瘤 细胞，但转移癌细胞仍有复发的危险。
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③不再增殖群（C），它不再参与细胞周
期，而日趋衰老，死亡，对肿瘤增长无 意义。肿瘤的增长情况取决于3种细胞群 的比例，肿瘤增殖率（growth factor GF） 可由下列关系来决定： GF=A／A+B+C。 A群细胞越多， B、C群细胞越少，肿瘤 恶性程度越高。
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常应用体外肿瘤细胞培养，模拟体内环境或确定 单因素多因素研究肿瘤细胞发生发展结局。观察 抗癌药物对细胞周期作用点的影响也常应用肿瘤 细胞体外培养。若能确定肿瘤细胞各周期时间， 选择各期针对性药物进行治疗，则可以提高疗效。
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6
癌细胞的迅速增殖扩散受机体内环境中多种因
素的影响如各种生长因子、抑素、激素、多胺、 基因调节包括细胞周期基因和癌基因、cAMP 和cGMP浓度（前者对细胞增殖负调节，而后 者为相反）。
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7
正常细胞周期的G1期有一个特殊的调节点—R 点，在生长条件不适宜情况下，细胞不能通过 调节点而不增殖，细胞通过G1期进入M期前受 一种不稳定蛋白质调节通过R点启动DNA的合 成，例如抑癌基因P53最重要的生物学功能就
体内或体外一样具有无控制生长和分化不全
的特点，因此比正常细胞容易培养建细胞系。 如20世纪50年代，国外建立了宫颈癌的Hela 细胞系。
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5
癌细胞的增殖是按指数方式生长的，自一个癌 细胞增殖到能触及的程度要经过30代（109， 1cm3, 1g）。这样1cm3大小的肿块再经过10 代（ 1012 ，10 cm3，1Kg）。这样的大小和
是通过调控细胞周期监测点来维持基因组的稳 定性，当细胞DNA受损时，P53诱导细胞周期 终止或凋亡，而P53突变或缺失使P53功能失活 则导致基因组紊乱，产生细胞转化。
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8
体内细胞处于不同状态，大概分成三种命运: ① 中 骨继不髓同干续时细增期胞殖（，细胃S胞、肠，G上不2皮断、M中离）的开完基G成1底期细细通胞胞过分等细裂，胞，周如期
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肿瘤和正常的组织同样在体内也具有三 种不同的细胞群：
①增殖细胞群（A）：是肿瘤中处于增殖周期的细 胞，与肿瘤生长直接有关，亦是化学疗法最易攻击 的部分。
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②暂不增殖细胞群（B），它是延长了G1 细胞或G0细胞，目前不参加细胞周期， 与肿瘤的扩大暂时无关，由于它保留着 增殖的能力，在一定条件下成为肿瘤复 发根源。
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当前较有前景的靶向治疗
①现在发展的基因工程腺病毒（ONYX015）因删除了E1B 55KD蛋白而可以选 择性的溶解P53突变或缺失的肿瘤细胞， 此类肿瘤细胞占50℅，也就是腺病毒 ONYX-015可达到50℅的靶向治疗药物的 效果，目前已在头颈部肿瘤中进行Ⅱ期 临床试验。
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放线菌素D作用于G1期抑制DNA聚合酶 合成，作用于S后期与G2期抑制rRNA并 影响cAMP水平。放线菌素D不影响非分 裂期细胞，因而放线菌素D是一种细胞周 期特异性药物。
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阿糖胞嘧啶，选择性地抑制核苷二磷酸 还原酶，阻断核苷酸变为脱氧核苷酸， 从而抑制DNA合成，是DAN合成抑制剂， 属于S期特异性药物。
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秋水仙素能与微管蛋白强烈结合，引起 微管解体，纺锤体破坏，结果染色体的 移动被阻断，细胞分裂停留在中期，它 是属于M期的特异性药物。
通过体外细胞培养观察抗癌药物对细胞 周期作用点将常用的抗癌药物的细胞周 期分类。
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数十年来医生们除用手术外只能用放疗 和化学疗法来治疗癌症，这些疗法毫无 分别地同时杀死健康细胞和癌细胞，直 到人类基因组图谱的解密，我们才迎来 了适用少数病人的靶向性治疗新时代， 医生们首先分析病人肿瘤中的DNA（基 因），再开出靶向性复合药物的药方， 专门攻击肿瘤细胞发生缺陷的基因，达 到治疗癌症的目的。
安徽医科大学微生物学教研室 龚蕴贞
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大纲
一、肿瘤细胞体外培养的重要性 二、癌细胞系的建立 三、转化细胞系建立 四、癌细胞系和转化细胞系注意事项 五、癌细胞系和转化细胞系的鉴定 六、癌细胞和转化细胞系建立和鉴定的 小结及讨论
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一、肿瘤细胞体外培养的重要性
恶性肿瘤细胞培养建立细胞系，包括癌 细胞系和转化细胞系。转化细胞系可以 是恶性转化细胞和一般转化细胞两种。
当前较有前景的靶向治疗
肿瘤对化疗和放疗抗性的一种机制是由 于P53突变或P53的缺失，人类癌50 % P53 突变
Non small cell lung
60 %
Colon
50 %
Breast
Hale Waihona Puke Baidu
40 %
Head and neck
60 %
Ovarian
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②制备单克隆抗体，主要是靶向表皮生长因子 EGF受体EGFR和HER-2。80年代研究人员发现，
②不增殖细胞，这类细胞在分裂完成后，暂处 于 分G裂1期期，，如正肝常细情胞况，下只不有合受成损DN或A切，除不时进肝入细细胞胞 再分裂增殖。哺乳动物的初级卵细胞也属于此 类。 ③不增殖细胞，这类细胞由R点走向分化细胞， 并执行专门功能的细胞（称终末细胞）如神经 细胞、哺乳动物成熟的红细胞、皮肤上皮的角 质细胞、多性核粒细胞。
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恶性转化细胞系和癌细胞系一样具有永 久性生长能力和恶性表型，对此二种来 源的细胞系鉴定也是相似的，为研究恶 性肿瘤提供了有用模型。而一般转化细 胞系只具有无限生长能力，不具有恶性 细胞的表型，此种细胞系可相似于正常 细胞的模型而被应用。
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癌细胞来源于体内正常上皮细胞。癌细胞在
重量时足以致病人于死亡。经治疗后如细胞数 从1012减少至1010，重约10g时可称显效或部 分缓解；若肿瘤细胞数减少到108或106，重约 100mg至10mg时，可认为临床治愈或完全缓
解，但仍有可能复发。要根治肿瘤细胞，必须
彻底消灭所有癌细胞。外科手术切除大量肿瘤 细胞，但转移癌细胞仍有复发的危险。
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③不再增殖群（C），它不再参与细胞周
期，而日趋衰老，死亡，对肿瘤增长无 意义。肿瘤的增长情况取决于3种细胞群 的比例，肿瘤增殖率（growth factor GF） 可由下列关系来决定： GF=A／A+B+C。 A群细胞越多， B、C群细胞越少，肿瘤 恶性程度越高。
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常应用体外肿瘤细胞培养，模拟体内环境或确定 单因素多因素研究肿瘤细胞发生发展结局。观察 抗癌药物对细胞周期作用点的影响也常应用肿瘤 细胞体外培养。若能确定肿瘤细胞各周期时间， 选择各期针对性药物进行治疗，则可以提高疗效。
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癌细胞的迅速增殖扩散受机体内环境中多种因
素的影响如各种生长因子、抑素、激素、多胺、 基因调节包括细胞周期基因和癌基因、cAMP 和cGMP浓度（前者对细胞增殖负调节，而后 者为相反）。
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正常细胞周期的G1期有一个特殊的调节点—R 点，在生长条件不适宜情况下，细胞不能通过 调节点而不增殖，细胞通过G1期进入M期前受 一种不稳定蛋白质调节通过R点启动DNA的合 成，例如抑癌基因P53最重要的生物学功能就
体内或体外一样具有无控制生长和分化不全
的特点，因此比正常细胞容易培养建细胞系。 如20世纪50年代，国外建立了宫颈癌的Hela 细胞系。
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癌细胞的增殖是按指数方式生长的，自一个癌 细胞增殖到能触及的程度要经过30代（109， 1cm3, 1g）。这样1cm3大小的肿块再经过10 代（ 1012 ，10 cm3，1Kg）。这样的大小和
是通过调控细胞周期监测点来维持基因组的稳 定性，当细胞DNA受损时，P53诱导细胞周期 终止或凋亡，而P53突变或缺失使P53功能失活 则导致基因组紊乱，产生细胞转化。
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体内细胞处于不同状态，大概分成三种命运: ① 中 骨继不髓同干续时细增期胞殖（，细胃S胞、肠，G上不2皮断、M中离）的开完基G成1底期细细通胞胞过分等细裂，胞，周如期