简单DNA提取实验

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实验一-DNA提取

实验一-DNA提取

实验一-DNA提取实验一DNA的小量制备小量法提取植物基因组DNA(CTAB法)1 实验目的:随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用,人们经常需要提取高分子量的植物DNA,用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等,这是研究基因结构和功能的重要步骤。

本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法,进一步了解DNA 的性质。

2 实验原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物(DNP)的形式存在于细胞核内。

提取DNA 时,一般先破碎细胞释放出DNP,再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质,最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。

DNP 与核糖核蛋白(RNP)在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大,利用这一特性可将二者分离。

以NaCl 溶液为例:RNP 在0.14mol/L NaCl中溶解度很大,而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1%。

当NaCl 浓度逐渐增大时,RNP的溶解度变化不大,而DNP 的溶解则随之不断增加。

当NaCl 浓度大于1mol/L 时,DNP的溶解度最大,为纯水中溶解度的2 倍,因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。

为了得到纯的DNA 制品,可用适量的RNase 处理提取液,以降解DNA 中搀杂的RNA。

关于植物总DNA 的提取主要有两种方法:1.CTAB 法:CTAB(十六烷基三甲基溴化铵,hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB):是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜,它能与核酸形成复合物,在高盐溶液中(0.7mol/LNaCl)是可溶的,当降低溶液盐的浓度到一定程度(0.3 mol/L NaCl)时从溶液中沉淀,通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开,然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中,再加入乙醇使核酸沉淀,CTAB 能溶解于乙醇中。

生物趣味实验——DNA的粗提取

生物趣味实验——DNA的粗提取

(二)从唾液中提取自己的DNA 1、取自己的唾液,置于烧杯中,加入几滴洗洁精; 2、倒入一些橙汁,同时往烧杯里撒入一些盐,摇晃 均匀; 3、向滤液中缓缓加入预冷的酒精,并观察现象。
实验步骤
(一)从水果中提取DNA 1、往烧杯中加入20ML清水和3ML洗洁精,少许食盐 (3g左右),将混合液搅拌均匀备用; 2、将香蕉剥皮,放置于封口塑料袋中,倒入配制的混合 液,用手轻轻挤压破坏细胞,使DNA释放出来; 3、倒出香蕉并过滤,取出滤液; 4、向滤液中缓缓加入预冷的酒精,并观察现象。
DNA的粗提取
实验原理
1、水果的细胞里含有DNA,香蕉更易碾碎、不必 削皮,使实验更加简化; 2、食盐里的钠离子和氯离子可以中和DNA上的电 荷,使DNA变形聚集,更易沉淀出来; 3、洗洁精里有表面活性剂,可以破坏细胞膜和核 膜,使DNA释放出来; 4、橙汁里含有蛋白酶,可把和DNA紧密结合的蛋 白质分解,使得到的DNA更纯; 5、DNA可以溶于水但不溶于酒精,在高浓度酒精 下相互吸附形成沉淀。

实验一、血液标本提取DNA(蛋白酶K-酚抽提法)

实验一、血液标本提取DNA(蛋白酶K-酚抽提法)

实验一、血液标本提取DNA(蛋白酶K-酚抽提法)一、实验原理离心分离到外周血的白细胞层;用细胞裂解液溶解细胞膜、核膜,使组蛋白与DNA分离,再用酚、三氯甲烷/异戊醇抽提去除蛋白质,最后经乙醇沉淀即可得到基因组DNA片段。

二、实验步骤:1、血液标本处理 1.0ml抗凝全血(ACD、EDTA抗凝均可)2000rpm离心10min(1.5mlEP管)。

轻轻去上清液(血浆),吸出淡黄色悬浮液(白细胞层)置于另一2.0mlEP管中。

(约50μl)2、细胞裂解加入10倍体积组织细胞裂解液,37℃1h,3、加入蛋白酶K消化加入蛋白酶K至终浓度100μg/ml(约4μl),充分混匀,37℃震荡12-24h或37℃1h后,56℃水浴3h。

保温过程中不时摇动,混匀反应液。

液体逐渐变粘稠,表明已有DNA释放出来,操作应轻柔。

4、酚抽提:将上述溶液冷却至室温,加等体积的Tris饱和酚(pH8.0)溶液,温和缓慢颠倒离心管10min,混匀两相成乳液。

12000rpm 5分钟,两相分层。

用宽口径移液管小心吸出上层粘稠的水相,移至一新的2.0mlEP管中。

(小心一点,不要吸入蛋白层。

如交界处有白色沉淀,需重新抽提有机相,用酚重新抽提两次,合并水相)5、三氯甲烷/异戊醇抽提上清液加等体积三氯甲烷:异戊醇(24:1),倒转混匀10分钟,12000rpm5分钟,取上层水相0.5ml入另一新的2.0mlEP管;6、DNA沉淀上清液中加0.2倍体积3.0mol/L 醋酸钠,再加2倍体积的4℃冰箱冷却后的无水乙醇,轻柔振摇,充分混匀;应可看到白色絮状物(DNA)。

12000rpm 5分钟,弃上清液;7、纯化:加1ml 70%乙醇洗涤,12000rpm 离心5分钟,去上清夜,重复1次;(此过程不得振荡摇动)8、溶解:弃上清液后,自然干燥(挥发痕量乙醇)后,用30μl pH8.0TE完全溶解,保存在-20℃备用。

三、注意事项1、加样准确,操作轻柔;微量加样器绝对不能超过最大量程;2、加酚试剂时,不要接触到皮肤上,有腐蚀性;如不小心弄到,立即用清水冲洗;3、取上清液时,不可吸到下层溶液;4、加TE液后轻摇10min溶解DNA或-4˚C保存待用。

dna提取实验报告

dna提取实验报告

dna提取实验报告DNA提取实验报告。

实验目的,通过本实验,掌握DNA提取的基本原理和操作技能,了解DNA 提取在生物学研究中的重要性。

实验材料与方法:1. 实验材料,酚-氯仿(25:24)、异丙醇、乙醇、盐酸、乙酸、蛋白酶K、磷酸盐缓冲液、蒸馏水等。

2. 实验仪器,离心机、振荡器、恒温水浴、显微镜等。

3. 实验步骤:a. 细胞破碎,取适量细胞悬液,加入盐酸和蛋白酶K,振荡破碎。

b. DNA沉淀,加入酚-氯仿混合液,离心分离上清液和沉淀层。

c. DNA沉淀洗涤,加入异丙醇,离心沉淀,去除上清液。

d. DNA溶解,加入磷酸盐缓冲液,用蒸馏水稀释,得到DNA提取液。

实验结果与分析:1. 实验现象,在DNA提取过程中,观察到细胞破碎后的混浊液经过酚-氯仿提取后,上清液呈现清澈的状态,沉淀层为白色颗粒状物质。

2. 实验分析,DNA提取液中含有DNA,经过酚-氯仿提取和异丙醇沉淀,成功获得了DNA提取物。

实验结论:通过本次实验,成功提取到了DNA,并初步了解了DNA提取的原理和操作步骤。

DNA提取是生物学研究中的重要基础工作,对于后续的分子生物学实验具有重要意义。

实验注意事项:1. 实验过程中应注意操作规范,避免污染和损失。

2. 实验中使用的试剂和仪器应符合实验要求,避免影响实验结果。

3. 实验后应及时清洗实验台和仪器,保持实验环境整洁。

总结:DNA提取实验是生物学实验中的基础操作,掌握好DNA提取的原理和技能对于后续实验具有重要意义。

通过本次实验,我对DNA提取有了更深入的了解,也提高了实验操作的技能。

希望通过不断实验和学习,能够更好地运用DNA提取技术,为生物学研究做出更大的贡献。

(以上内容为虚构内容,仅供参考)。

DNA提取实验方案

DNA提取实验方案

DNA提取实验方案
材料与试剂:
1.细胞样本(如血液、组织等)
2.细胞裂解缓冲液(含有蛋白酶K)
3.蛋白酶K
4.乙醇
5.蛋白质沉淀液
6.正丁醇
7.氯仿
8.等离子水
9.TE缓冲液
10.离心管
11.磁珠
12.磁珠悬浊液
13.热拌器
14.离心机
实验步骤:
1.细胞破裂:将细胞样本加入细胞裂解缓冲液中,加入适量蛋白酶K,放入热拌器中破裂细胞,使DNA溶解在缓冲液中。

2.蛋白质沉淀:加入等体积的蛋白质沉淀液,轻轻混匀,离心使蛋白
质沉淀。

3.DNA沉淀:将上清液转移至新的离心管中,加入适量的乙醇,轻轻
混匀,使DNA沉淀。

4.DNA纯化:将DNA沉淀用等离子水悬浊,加入等体积的正丁醇和氯仿,混匀后离心,取上清液,加入等量的等离子水和TE缓冲液。

5.纯化DNA:将上清液转移至带有磁珠的离心管中,加入磁珠悬浊液,混匀后在离心机中进行离心,使DNA和磁珠结合。

6.洗涤DNA:将离心管中的上清液丢弃,加入70%乙醇洗涤DNA,多
次洗涤后去除乙醇,干燥磁珠。

7.溶解DNA:最后用等离子水或TE缓冲液溶解DNA,即可用于后续的
实验。

通过上述步骤,可以从细胞样本中提取出纯净的DNA,用于后续的分
子生物学实验。

DNA提取是一项基础而重要的技术,在分子生物学和遗传
学研究中具有广泛的应用价值。

希望以上方案可以帮助您顺利进行DNA提
取实验。

dna的粗提取实验报告

dna的粗提取实验报告

dna的粗提取实验报告DNA的粗提取实验报告引言DNA(脱氧核糖核酸)是生物体中负责遗传信息传递的分子,它的提取是进行分子生物学实验的基础步骤之一。

本实验旨在通过简单的方法提取DNA,并观察提取效果。

材料与方法材料:- 植物组织(如洋葱、豆芽等)- 高渗盐溶液(含有盐分的溶液,如食盐溶液)- 咖啡过滤纸- 酒精(酒精浓度为70%)- 水方法:1. 将植物组织切碎,使细胞破裂,释放DNA。

2. 将切碎的植物组织放入一个容器中,加入高渗盐溶液,搅拌均匀。

3. 将搅拌后的溶液过滤,使细胞碎片和其他杂质被滤掉,得到澄清的液体。

4. 将澄清的液体倒入一个试管中,加入等量的酒精,并缓慢倾斜试管,使酒精与液体缓慢混合。

5. 观察酒精与液体的交界面,可以看到白色的DNA沉淀。

6. 使用酒精漂浮在DNA沉淀上方的方法,将DNA转移到另一个容器中。

7. 加入适量的水,溶解DNA。

结果与讨论通过上述方法,我们成功地从植物组织中提取到了DNA。

观察到的白色沉淀物就是DNA,其形状呈线状或颗粒状。

实验过程中,我们注意到以下几个现象:1. 细胞破裂:切碎植物组织的过程中,细胞膜被破坏,使DNA从细胞内释放出来。

这一步骤的重要性在于提供了DNA的来源。

2. 高渗盐溶液:高渗盐溶液的作用是破坏细胞膜和核膜,使DNA从细胞内释放出来。

高渗盐溶液中含有盐分,可以改变细胞内外的渗透压,进而破坏细胞膜和核膜。

3. 过滤:通过过滤,我们可以去除细胞碎片和其他杂质,得到澄清的液体。

这一步骤的目的是减少后续操作中DNA沉淀的杂质。

4. 酒精沉淀:加入酒精后,DNA会从溶液中沉淀出来。

酒精与溶液的混合过程中,DNA会聚集在交界面上形成白色沉淀物。

这是因为DNA在酒精中不溶,而且比较重,所以会沉淀下来。

5. DNA的溶解:将DNA从酒精中转移到水中后,加入适量的水,使DNA溶解。

DNA在水中溶解后,呈现出透明的溶液。

本实验采用的是粗提取方法,所得到的DNA并不纯净。

人类基因组dna的提取实验报告

人类基因组dna的提取实验报告

人类基因组dna的提取实验报告
人类基因组DNA的提取实验报告
DNA提取是分子生物学和遗传学研究中的基础性技术之一。

本次实验旨在从人类细胞中提取DNA,并通过多种方法进行检测和分析。

以下是实验的详细过程和结果。

实验材料与方法:
1.材料:人类细胞样本、细胞裂解液、蛋白酶K、异丙醇、氯仿、等渗盐溶液、乙醇、TE缓冲液、琼脂糖、DNA标准品。

2.方法:
(1)取100μl人类细胞样本,加入细胞裂解液中进行细胞破裂。

(2)加入蛋白酶K使细胞膜和蛋白质降解。

(3)加入异丙醇使DNA沉淀,离心去除上层液体。

(4)加入氯仿和等渗盐溶液,离心分离DNA纯化。

(5)加入乙醇沉淀DNA。

(6)加入TE缓冲液重溶DNA。

(7)用琼脂糖凝胶电泳法分离DNA并检测。

实验结果:
经过琼脂糖凝胶电泳分离,成功提取了人类细胞的DNA样本。

在电泳结果中,能够明显地看到DNA条带的形成,表明DNA的提取和纯化过程都比较成功。

为了进一步检测DNA的纯度和浓度,我们使用了多种方法,如吸光度测定、荧光染料检测等。

实验结果表明,提取出的DNA纯度较高,浓度也较为理想。

结论:
通过本次实验,我们成功地提取了人类细胞的DNA,并对其进行了检测和分析。

这为我们后续的研究提供了重要的基础。

同时,实验还说明了DNA提取技术的重要性和应用广泛性,不仅在分子生物学和遗传学领域有着广泛的应用,也在医学和生物工程等领域具有重要的价值。

dna提取实验步骤

dna提取实验步骤

dna提取实验步骤DNA提取是分子生物学中的一项重要实验技术,它可以从细胞中提取出DNA,并用于后续的分子生物学研究。

本文将介绍DNA提取的实验步骤。

一、实验前准备1.1 材料准备为了进行DNA提取实验,我们需要准备以下材料:- 细胞样本:可以是动物组织、细菌、植物组织等。

- 细胞裂解缓冲液:含有离子洗涤剂、蛋白酶K等。

- 高盐溶液:用于沉淀DNA。

- 各种浓度的酒精:用于沉淀DNA。

- 离心管、试管等实验器材。

1.2 实验环境准备- 实验室应保持清洁整洁,避免污染DNA样本。

- 使用无菌技术进行操作,避免外源DNA的污染。

二、细胞裂解2.1 细胞破碎将细胞样本放入离心管中,加入适量的细胞裂解缓冲液,用振荡器或超声波进行细胞破碎,使细胞膜破裂,释放出细胞内的DNA。

2.2 蛋白酶处理加入适量的蛋白酶K,使其降解细胞中的蛋白质,释放出DNA。

同时,离子洗涤剂可以使DNA保持在溶液中,避免沉淀。

三、DNA纯化3.1 加入高盐溶液为了沉淀DNA,需要加入高盐溶液。

高盐溶液中的离子浓度较高,可以与DNA中的离子结合,使DNA形成沉淀。

3.2 离心沉淀将样品离心,沉淀下的DNA会在离心管底部形成一个白色沉淀。

去除上层液体后,可以看到这个沉淀。

四、DNA沉淀4.1 加入酒精为了进一步沉淀DNA,可以加入适量的酒精。

酒精会使DNA分子凝聚在一起,形成可见的白色沉淀。

4.2 离心沉淀再次进行离心操作,将上层的液体去除后,可以看到沉淀。

注意,沉淀的DNA非常脆弱,操作时要轻柔避免破坏。

五、洗涤和溶解5.1 洗涤为了去除沉淀中的杂质,可以使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀。

将乙醇加入离心管中,轻轻摇晃,使DNA充分溶解。

5.2 溶解将洗涤后的DNA沉淀用适量的缓冲液溶解,使其完全溶解。

六、质量检测为了确保提取到的DNA质量良好,可以使用紫外可见光谱仪或凝胶电泳进行质量检测。

通过测量DNA的吸光度或检测DNA在凝胶上的迁移情况,可以评估提取到的DNA的纯度和完整性。

DNA-提取实验及配方

DNA-提取实验及配方

DNA提取实验步骤:(1)取1g左右幼叶,放入研磨小管然后放入钢珠,研磨前放入盛有液氮的保温桶冷冻一段时间,然后利用研磨机器研磨成粉末,-70℃冰柜保存;(2)65℃水浴锅中预热裂解缓冲液(加入Vitc和β-巯基乙醇);(3)从-70℃冰柜拿出带有粉末的离心管,将800ul体积的裂解液(水浴锅中预热)倒入管中并摇至均匀,然后放于65℃水浴槽中水浴35min,每隔10min摇一次;(4)向管中加入800ul氯仿-异戊醇(24:1)抽提液,并摇至均匀。

放入离心机内,4℃以12000r/s离心20min;(5)吸取上清置于另一个1.5ml离心管中,重复步骤4一次(再次抽提一次);(6)吸取上清置于新的离心管中,加入500ul的冰冻异丙醇,并缓慢摇至絮状DNA沉淀析出,于-20℃中放置15min;(7)钩出沉淀,置于1.5离心管中,用70%酒精洗至酒精无色,利用无水乙醇再次漂洗一遍,弃去无水乙醇,将装有DNA的离心管放于真空抽干机内风干45minDNA提取各溶液配方:(1)500ml 1M Tris母液(PH8.0)Tris碱60.55g 浓HCl 21ml 超纯水400ml因Tris溶液的PH值受温度影响较大,绪冷却至室温后用浓HCl调节PH至8.0,然后用超纯水定溶至500ml,灭菌后使用(2)500ml 0.5M EDTA母液(PH8.0)Na2EDTA 93.05g NaOH 10g 超纯水400ml边搅拌边加入NaOH颗粒,但PH接近8.0时,溶液由浑浊变清澈,最终调节至PH8.0,用超纯水定溶至500ml,灭菌后使用(3)500ml 1x TE (PH8.0)1M Tris-HCl 5ml 0.5M EDTA 1ml 超纯水480ml加超纯水定溶至500ml,灭菌后使用。

棉花DNA提取-裂解缓冲液配方:试剂终浓度每升用量1M Tris母液0.1M 100ml0.5M EDTA 0.025M 32mlNaCl 1.5M 87.6gCTAB 2% 20gPVP 40 2% 20gVITC(使用前加)0.3% 3gΒ-巯基乙醇(使用前加)3% 30mlPCR反应体系----10ulddH20 6.2ul Taq酶0.1ul模板DNA 1.2ul Buffer 1.0uldNTP 0.5ul 正向引物0.5ul反向引物0.5ul。

提取dna的方法及步骤

提取dna的方法及步骤

提取dna的方法及步骤提取DNA的方法及步骤DNA(脱氧核糖核酸)是构成生物遗传信息的基本单位,因此,准确提取DNA样本是进行遗传研究、基因工程和犯罪侦查等领域的重要步骤。

以下将介绍几种常见的DNA提取方法及其步骤。

方法一:酚氯仿法酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法,其步骤如下:1. 收集样本:可以是人体组织、血液、细胞培养物等。

确保样本新鲜,并避免受到污染。

2. 细胞破碎:将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中,通过离心将细胞沉淀。

3. 酚氯仿提取:将沉淀加入酚氯仿混合液中,轻轻混匀,并离心以分离DNA。

4. 沉淀DNA:将上清液转移到新的离心管中,加入冷乙醇沉淀DNA。

5. 洗涤:用70%乙醇洗涤沉淀的DNA,以去除杂质。

6. 干燥:将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。

方法二:盐析法盐析法是一种简单易行的DNA提取方法,其步骤如下:1. 细胞破碎:将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中,通过离心将细胞沉淀。

2. 盐析提取:加入高盐缓冲液使DNA与其他核酸和蛋白质分离。

3. 沉淀DNA:将上清液转移到新的离心管中,加入冷乙醇沉淀DNA。

4. 洗涤:用70%乙醇洗涤沉淀的DNA,以去除杂质。

5. 干燥:将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。

方法三:硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法,其步骤如下:1. 细胞破碎:将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中,通过离心将细胞沉淀。

2. 硅胶柱处理:将细胞沉淀加入硅胶柱中,经过洗涤和离心,将DNA吸附在硅胶柱上。

3. 洗涤:用洗涤缓冲液洗涤硅胶柱,以去除杂质。

4. DNA洗脱:加入低盐缓冲液,使DNA从硅胶柱上洗脱出来。

5. 洗涤:用70%乙醇洗涤洗脱后的DNA,以去除杂质。

6. 干燥:将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。

方法四:酶解法酶解法是一种特异性较高的DNA提取方法,其步骤如下:1. 细胞破碎:将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中,通过离心将细胞沉淀。

从血液中提取基因组DNA的实验方法

从血液中提取基因组DNA的实验方法

从血液中提取基因组DNA的方法原理:首先利用白细胞和红细胞的结构差异裂解掉红细胞,得到白细胞沉淀。

向沉淀中加入缓冲液和蛋白酶k破坏掉细胞结构,使DNA释放出来。

加入氯化钠溶液使DNA溶解,吸取上清液。

最后加入异丙醇促沉,用70%的乙醇清洗沉淀,得到DNA沉淀。

试剂配方:1. 红细胞裂解液ELS配方NH4Cl: 4.15克加双蒸水500毫升,取450毫升。

Tris:1.0297克加双蒸水50毫升,再加入上面的450毫升,共计500毫升。

此试剂可以高压灭菌。

2.溶液2配方Tris:6.057克EDTANa2: 7.4444克SDS:20克加蒸馏水溶解,可以先加800毫升,最后调到1升。

将溶液调pH到8此试剂最好不要高压灭菌,可以采用滤膜过滤。

3.溶液3配方把氯化钠加入蒸馏水中,37摄氏度饱和为止,直到氯化钠不再溶解。

4.商业的蛋白酶K5.糖原:浓度为20毫克每毫升试剂的保存:蛋白酶K放入-20度,其他试剂放在4度具体操作步骤:1. 在1.5毫升的离心管中加入冷的4摄氏度的红细胞裂解液1000微升,再加入500微升的抗凝血,轻混3秒,冰上静置20-30分钟(如果血液和抗凝剂是1:1混合,20分钟即可,如果抗凝剂比较少,血液比较粘稠,则30分钟),然后4摄氏度,3500转,离心15分钟。

(离心完后可以观察到底部有少量白色沉淀,大概有大米粒的一半大小。

如果观察到大量红色沉淀,说明红细胞没有彻底裂解,对后续实验有影响)然后弃上清液,在沉淀中加入1000微升的冷的红细胞裂解液,冰上静置5分钟。

4摄氏度,3500转离心5分钟,再弃上清。

如果感觉红色杂质较多,还可以再做一次。

加入冷的1000微升的裂解液,冰上静置1分,4摄氏度,3500转离心5分钟,弃上清。

2. 先把溶液2从冰箱中拿出融化一下并混匀,可以把溶液2泡在低于55摄氏度的热水中融化后混匀。

在沉淀中加入500微升的溶液2,,用枪反复吹吸一下直到把沉淀吹散,再加入2-5微升的蛋白酶K,轻混3秒,然后55摄氏度水浴2-5小时(水浴时间由蛋白酶K的活性和沉淀的多少决定)可以观察到试管中的沉淀完全溶解。

dna的粗提取方法

dna的粗提取方法

dna的粗提取方法DNA的粗提取方法DNA是生物体内最基本的遗传物质,对于研究生物学、医学等领域具有重要意义。

因此,DNA的提取方法也成为了科学研究中的一项重要技术。

下面将介绍一种简单易行的DNA粗提取方法。

材料准备1. 10% SDS溶液:称取10克SDS加入100毫升去离子水中,混合均匀后加热至70℃左右,搅拌至SDS完全溶解即可。

2. 0.5M EDTA溶液:称取186.1克EDTA加入500毫升去离子水中,调节pH至8.0。

3. 1M Tris-HCl缓冲液:称取121.14克Tris-HCl加入1000毫升去离子水中,调节pH至8.0。

4. NaCl溶液:称取58.44克NaCl加入1000毫升去离子水中,搅拌均匀后过滤灭菌。

5. 蛋白酶K:用去离子水将蛋白酶K稀释至10mg/ml浓度。

6. 高锰酸钾:用去离子水将高锰酸钾稀释至0.1%浓度。

7. 95%乙醇:用去离子水将95%乙醇稀释至70%浓度。

8. 细胞样品:可以是动物组织、细菌、真菌等样品。

步骤步骤一:制备细胞裂解液1. 取适量的细胞样品,用PBS缓冲液洗涤3次,去除细胞外的杂质。

2. 向含有10% SDS的裂解液中加入适量的蛋白酶K,搅拌均匀后在60℃水浴中孵育2小时。

3. 将孵育后的裂解液加入相同体积的高锰酸钾溶液中,搅拌均匀后再加入相同体积的4M NaCl溶液中,轻轻摇晃混合即可。

步骤二:沉淀DNA1. 将上述混合溶液离心10分钟,收集上清液至新离心管中。

2. 向上清液中滴加等体积的冷乙醇(70%),轻轻摇晃后放置于-20℃冷冻库中保存至少30分钟以上。

3. 将离心管取出,离心10分钟,倒掉上清液,将沉淀用无菌去离子水洗涤3次。

步骤三:纯化DNA1. 将沉淀加入含有0.5M EDTA的去离子水中,搅拌均匀后放置于60℃水浴中孵育30分钟。

2. 在孵育过程中,制备1M Tris-HCl缓冲液,并调节pH至8.0。

3. 孵育结束后,向上述溶液中加入相同体积的1M Tris-HCl缓冲液,轻轻摇晃混合均匀。

实验报告DNA提取实验步骤及结果分析

实验报告DNA提取实验步骤及结果分析

实验报告DNA提取实验步骤及结果分析实验报告:DNA提取实验步骤及结果分析一、引言DNA提取是分子生物学研究中的关键步骤之一,能够从样本中纯化出DNA,用于后续的分析和实验。

本实验旨在探究DNA提取的步骤和方法,并对提取结果进行分析和评估。

二、实验步骤1. 样本准备:选择合适的样本进行DNA提取,如植物组织、动物组织或微生物培养物。

样本应储存于-80℃的冰箱中,以防止DNA降解。

2. 细胞破碎:将样本取出,加入细胞破碎缓冲液,使用均质机或研钵等方法将细胞破碎,使细胞膜被破坏,释放DNA。

3. 蛋白酶处理:加入蛋白酶,将样本中的蛋白质降解,以去除蛋白质的干扰。

4. 酚/氯仿提取:加入等体积的酚/氯仿混合液,混匀后离心,使混合液分为上下两层,上层为DNA上清液。

5. DNA沉淀:将DNA上清液转移至新离心管中,加入等体积的冷异丙醇,轻轻颠倒混匀,待DNA逐渐沉淀出来。

6. 洗涤:使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物,以去除异丙醇和其他杂质。

7. 重溶:将洗涤后的DNA沉淀物用适量的TE缓冲液重溶,使其溶解。

8. 定量和纯化:使用紫外可见分光光度计测定DNA的浓度,并使用凝胶电泳验证DNA的纯度和完整性。

三、结果分析通过以上步骤,我们成功提取了DNA,并进行了初步的纯化。

下面是对实验结果进行分析和评估:1. DNA提取效果评估:- 可见分光光度计测定DNA浓度:根据光度计读数,我们可以计算出DNA的浓度。

通常,越高的读数代表着更高的DNA浓度。

- 凝胶电泳:通过凝胶电泳,我们可以观察到DNA在琼脂糖凝胶上的迁移情况。

理想情况下,DNA应该呈现出清晰的条带,并且没有明显的降解现象。

2. 实验结果评价:- DNA浓度:根据光度计读数,我们可以评估DNA提取的效果。

如果浓度较高,说明提取效果较好;如果浓度较低,说明可能存在提取效果不佳或DNA被降解的情况。

- DNA完整性:通过观察凝胶电泳结果,我们可以评估提取的DNA是否完整。

dna提取实验报告

dna提取实验报告

dna提取实验报告DNA提取实验报告。

实验目的,通过本实验,掌握DNA提取的基本原理和方法,了解DNA在生物学研究中的重要性。

实验材料和仪器,鸡蛋白、盐酸、乙醇、玻璃棒、试管、离心机、恒温水浴。

实验步骤:1. 取一只鸡蛋,打破蛋壳,将鸡蛋白倒入试管中。

2. 加入少量盐酸,轻轻摇匀,使鸡蛋白变得透明。

3. 将试管放入恒温水浴中,加热至60摄氏度,恒温10分钟。

4. 取出试管,用玻璃棒搅拌均匀,使蛋白凝固。

5. 加入同体积的乙醇,轻轻摇匀,观察到白色絮状物沉淀于试管底部。

6. 将试管放入离心机,离心5分钟,离心后可见白色DNA沉淀于试管底部。

实验结果与分析:通过以上实验步骤,成功从鸡蛋中提取出了DNA。

实验中,盐酸的作用是使蛋白质变得透明,加热则是使蛋白质凝固,乙醇的加入则有利于DNA的沉淀。

离心机的使用则能够使DNA更好地沉淀于试管底部。

通过本实验,我们不仅了解了DNA提取的基本原理和方法,也对DNA在生物学研究中的重要性有了更深刻的认识。

实验总结:DNA提取实验是生物学实验中的基础实验,通过本实验的操作,我们深入理解了DNA提取的原理和方法,也对DNA在生物学研究中的应用有了更直观的认识。

在今后的学习和科研中,我们将进一步深入研究DNA的结构和功能,探索更多关于DNA的奥秘。

实验注意事项:1. 实验中应注意个人安全,避免盐酸和乙醇的直接接触。

2. 恒温水浴的温度应控制在60摄氏度,避免过高温度损坏DNA。

3. 实验操作时应轻柔,避免对DNA的损伤。

通过本次实验,我们对DNA提取有了更深入的了解,也为今后的生物学研究打下了坚实的基础。

DNA作为生命的密码,其重要性不言而喻,希望通过我们的努力,能够揭开更多关于DNA的奥秘,为人类的生命科学研究做出更大的贡献。

实验一---DNA提取

实验一---DNA提取

天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核 中。要从细胞中提取DNA时,先把DNP抽提出来,再把蛋白质 和糖去除,同时除去RNA及无机离子等,从中分离DNA 。
提取植物 DNA 的方法主要采用 SDS 和 CTAB 法,对它们进行稍 加修改就可以应用于 DNA的微量提取。两种方法均采用去污剂 裂解细胞并保护DNA不受内源核酸内切酶降解。
实验材料和试剂
实验材料:新鲜植物组织。 实验所需试剂: DNA提取缓冲液 100 mmol/L Tris-HCl (pH8.0) 50mmol/L EDTA 500 mmol/L NaCl 1.5% SDS 24:1/氯仿:戊醇 2×CTAB buffer 100mM Tris pH8.0 1.4M NaCl 20 mM EDTA pH8.0 2% CTAB 0.2% 巯基乙醇 酚/氯仿(1:1) 氯仿:50 ml 无水乙醇

核酸的理化性质
RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶,DNA则为白色类 似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外,核酸 和核苷酸大都呈酸味。 DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物,一般都溶于水,不溶 于乙醇、氯仿等有机溶剂,它们的钠盐比游离酸易溶于水, RNA钠盐在水中溶解度可达 40g/L。DNA在水中为10g/L,呈 黏性胶体溶液。在酸性溶液中,DNA、RNA易水解,在中性 或弱碱性溶液中较稳定。
具体方法简单说来就是利用液氮对植物组织进行研磨,从而破 碎细胞。细胞提取液中含有的 SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜, 使蛋白质变性而沉淀下来。 EDTA抑制 DNA酶的活性。再用酚、 氯仿抽提的方法去除蛋白,得到的DNA溶液经乙醇沉淀。
细胞破碎
①机械方法: 超声波处理法、研磨法、匀浆法;

dna的提取 实验报告

dna的提取 实验报告

dna的提取实验报告DNA的提取实验报告引言:DNA(脱氧核糖核酸)是构成生命的基本遗传物质,它携带着生物个体的遗传信息。

DNA的提取是生物学实验中常见的一项重要技术,通过提取DNA,我们可以进一步研究生物的遗传特征、进化历程以及疾病的发生机制等。

本实验旨在探究DNA的提取方法,并通过实际操作来加深对DNA结构和功能的认识。

材料与方法:1. 实验材料:- 鸡蛋白溶液- 酒精- 盐水- 洗洁精- 酶解液- 水浴- 离心机- 显微镜2. 实验步骤:1. 将鸡蛋白溶液倒入试管中,加入适量的盐水,并加入洗洁精,轻轻摇晃混合。

2. 将酶解液加入试管中,再次轻轻摇晃混合,使酶解液与鸡蛋白溶液充分接触。

3. 将试管放入水浴中,保持温度在50℃左右,进行酶解反应。

4. 取出试管,加入等体积的酒精,轻轻旋转试管,观察DNA的析出。

5. 使用离心机将混合液离心,分离出DNA。

6. 将离心后的上清液倒掉,加入适量的盐水,再次离心,以去除残留的酒精。

7. 使用显微镜观察提取得到的DNA。

结果与讨论:经过实验操作,我们成功地提取到了DNA,并观察到了DNA的析出现象。

在实验过程中,酶解液的作用是破坏细胞膜和核膜,使DNA从细胞内释放出来。

酒精的加入则通过与DNA中的水结合,使DNA分子在溶液中析出形成细长的纤维状物质。

DNA提取的关键步骤在于酶解反应的温度和时间的控制。

过高的温度或过长的反应时间会导致DNA的降解,从而影响提取效果。

同时,酒精的加入和离心的速度也会影响DNA的析出和分离。

实验中我们选择了适宜的条件,保证了DNA的提取效果。

DNA的提取方法不仅在实验室中有广泛应用,也在现实生活中有重要意义。

例如,在犯罪侦查中,通过提取作案现场的DNA样本,可以帮助警方追踪犯罪嫌疑人;在医学诊断中,通过提取患者体液中的DNA,可以进行基因检测,帮助医生判断疾病的类型和治疗方案。

总结:通过本次实验,我们深入了解了DNA的提取方法,并通过实际操作加深了对DNA结构和功能的认识。

初中生物实验dna提取

初中生物实验dna提取

初中生物实验dna提取
标题: 初中生物实验:DNA提取
DNA是生物遗传信息的载体,存在于所有生物细胞的细胞核中。

在初中生物课程中,通过简单的实验步骤,学生们可以从日常食物中提取出DNA,亲眼看到DNA的存在,加深对分子生物学基础知识的理解。

以下是一个典型的DNA提取实验步骤:
材料准备:
- 新鲜或冷冻的水果/蔬菜(如香蕉、西红柿等)
- 食用盐
- 清洁剂(洗涤剂)
- 无水乙醇或异丙醇
- 研钵和研杵
- 滤纸或滤网
- 小试管或塑料杯
实验步骤:
1. 准备样品。

将水果或蔬菜切成小块,放入研钵中,用研杵将其充分研磨成糊状。

2. 提取DNA。

将研磨后的样品放入小试管或塑料杯中,加入适量的盐和清洁剂溶液。

轻轻混合均匀。

盐有助于将DNA从细胞核中释放出来,而清洁剂则破坏细胞膜和核膜,使DNA暴露于溶液中。

3. 沉淀DNA。

将试管或塑料杯中的混合物倾入另一个容器中,小心地将无水乙醇缓缓倾入混合物表面。

此时,DNA就会凝聚成白色絮状物或细丝,浮现在两种液体的界面处。

4. 观察DNA。

用牙签或滤纸小心地将凝聚的DNA捞起,可以清晰地看到其纤维状结构。

5. 进一步观察(可选)。

将提取的DNA放在载玻片上,在显微镜下观察其结构。

通过这个简单有趣的实验,学生们可以亲自操作并观察到DNA的存在形式,增强对分子生物学知识的理解和兴趣。

教师还可以结合实验,讲解DNA的结构、功能及其在生物科学中的重要作用。

DNA提取实验

DNA提取实验

DNA提取实验DNA提取是现代生物学研究的基础实验之一,它可以从生物体内分离和纯化DNA分子,为各种分子生物学技术和研究提供重要的基础。

本实验旨在介绍DNA提取的基本步骤和操作技巧。

材料和仪器:1. 新鲜的生物样本(如水果、蔬菜、口腔拭子等)2. DNA提取试剂盒3. 离心管4. 加热器5. 离心机6. 显微镜实验步骤:1. 样本处理:a) 将生物样本取出,如水果则切成小块,口腔拭子可直接使用。

b) 将样本放入离心管中。

c) 使用试剂盒提供的试剂,在样本中加入适量的细胞裂解缓冲液。

d) 轻轻摇动离心管,使样本与缓冲液均匀混合。

e) 将离心管放入加热器中,在60摄氏度恒温加热20-30分钟,以促进细胞的破裂和DNA的释放。

2. 细胞裂解:a) 将加热后的样本离心管取出,稍微晃动离心管使样本充分混合。

b) 加入适量的蛋白酶,用离心管盖密封离心管,并再次摇动离心管混合。

c) 将离心管放入加热器中,以高温(通常为60-65摄氏度)恒温孵育10分钟,以使蛋白酶发挥作用,降解细胞蛋白。

3. DNA沉淀:a) 将加热后的样本离心管取出,加入等体积的冷异丙醇,并摇动离心管使两者充分混合。

b) 将混合溶液离心10-20分钟,以最大速度离心沉淀DNA。

c) 抽掉上层溶液,离心沉淀的DNA。

d) 加入适量的70%乙醇洗涤一次,以去除残留的盐和其他杂质。

e) 将离心管倒置于纸巾上,待乙醇挥发后,加入适量的去离子水重新溶解DNA。

4. DNA纯化:a) 使用显微镜观察提取的DNA溶液中是否有明显的纹理和颜色,以确保DNA提取的成功。

b) 使用测量纯度和浓度的仪器对提取的DNA进行定量分析,并记录结果。

c) 将DNA溶液保存在低温冷冻条件下,以防止DNA的降解和损伤。

实验注意事项:1. 实验前需佩戴实验手套和口罩,防止污染和细菌感染。

2. 操作过程中需注意无菌操作,避免污染。

3. 实验前要确保所有仪器和材料已经正确消毒和清洗。

基因组dna的提取实验报告

基因组dna的提取实验报告

基因组dna的提取实验报告一、实验目的本实验旨在学习基因组DNA的提取方法,掌握DNA提取实验的基本步骤和技巧。

二、实验原理DNA提取是生物学中最基础的实验之一,其目的是从细胞或组织中分离出DNA。

DNA提取的原理是利用化学试剂破坏细胞膜和核膜,使细胞内部的DNA裸露出来,并通过特定方法纯化出来。

三、实验材料1. 细菌培养液2. TE缓冲液(10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0)3. 蛋白酶K溶液(20 mg/mL)4. 洗涤缓冲液(10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 8.0)5. 氢氧化钠(NaOH)溶液(0.2 M)6. 氯化钾(KCl)溶液(1 M)7. 高盐缓冲液(5 M NaCl, 1 M Tris-HCl, pH 8.0)8. 等体积异丙醇9. 离心管10. 微量离心管四、实验步骤1. 取细菌培养液0.5 mL,离心10分钟,将上清液倒掉。

2. 加入0.5 mL TE缓冲液和20 μL蛋白酶K溶液,室温下孵育10分钟。

3. 加入0.6 mL洗涤缓冲液,混匀后离心1分钟。

4. 倒掉上清液,加入0.2 mL氢氧化钠溶液,轻轻颠倒混匀,室温下孵育5分钟。

5. 加入0.3 mL氯化钾溶液,轻轻颠倒混匀后离心1分钟。

6. 将上清液转移到新的离心管中,加入等体积异丙醇,轻轻颠倒混匀后放置于-20℃冷冻箱中保存至少30分钟。

7. 离心10分钟后将上清液倒掉,并用70%乙醇洗涤沉淀一次。

8. 将沉淀用TE缓冲液重悬即可。

五、实验注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作。

2. 操作过程中要避免DNA的降解和污染。

3. 实验前应做好必要的准备工作,并按照步骤进行操作。

六、实验结果通过本实验,成功提取出了细菌的基因组DNA,并经过浓度检测和质量检测,证明提取的DNA质量较好,可以用于后续实验。

七、实验总结本次实验通过对基因组DNA的提取方法进行学习和实践,掌握了基本的操作技巧和注意事项。

提取dna的实验操作方法

提取dna的实验操作方法

提取dna的实验操作方法
提取DNA的实验操作方法主要包括以下步骤:
1. 样本收集:收集所要提取DNA的生物样本。

常见的样本来源包括血液、唾液、细胞培养物、植物组织等。

2. 细胞破碎:将收集到的样本进行细胞破碎,使DNA释放出来。

常用的方法有物理破碎(如超声波破碎、酶解)和化学破碎(如细胞裂解液、洗涤液)等。

3. DNA溶解:将破碎后的细胞样本转移至含有盐和缓冲液的试管中,使DNA 溶解。

4. 蛋白质沉淀:加入蛋白酶K等蛋白质沉淀剂,将样品中的蛋白质去除。

5. DNA沉淀:加入过冷酒精或异丙醇等沉淀剂,使DNA凝结成白色絮状物,然后通过离心将DNA沉淀下来。

6. 洗涤:将沉淀下来的DNA进行洗涤,以去除杂质和残留的沉淀剂。

常用的洗涤缓冲液包括70%乙醇等。

7. 干燥和溶解:将清洗后的DNA样本用空气或真空干燥,然后用缓冲液或去离子水使其溶解。

8. 测定DNA浓度和纯度:使用分光光度计或其他的测定方法,测定提取到的DNA的浓度和纯度。

以上是提取DNA的基本实验操作方法,实际操作中可能会根据具体的实验目的和样本类型进行适当的调整和改进。

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实验材料
透明杯子、筷子、盐、洗洁精、冰箱冷藏的白酒、冰块、隐形眼镜护理液、蒸馏水、牙签等
实验步骤
1.获取口腔上皮细胞。

含一口蒸馏水,开始漱口,试着用自己的舌头舔口腔内壁,大约2分钟;
2.用透明的杯子收回口腔中的液体;
3.在杯中加入半勺盐,缓慢搅拌10圈,记住动作要慢哦;
4.在杯中加入洗洁精5~6滴,均匀慢速地搅拌3分钟,切记越慢越好;
5.加入5滴隐形眼镜清洗液,继续缓慢搅拌10圈,加入冰块静置5分钟;
6.再次搅拌10圈,从冰箱拿出冷藏的白酒,缓慢倒入杯中,于是酒精便自然分层游离在唾液上方,唾液则沉淀在杯底;
7.由于DNA不溶于酒精,此时在上清下浑的酒精和唾液分层中间,能看到固态絮状的DNA。

用筷子轻轻搅拌,将DNA缠绕起来,缓缓拉出水面,就能目睹DNA的真容了。

这就是你的DNA哦!
8.将DNA放入小瓶中,也可加入一些精油或酒精。

这样,一条兼具观赏价值与特殊含义的精油项链就做好了。

实验原理:
DNA主要存在于真核生物的细胞核中,动物、植物都属于真核生物。

在高温的条件下,DNA会变性(被破坏),而在常温和低温条件下,则可以保存。

由于哺乳动物成熟的红细胞不含有细胞核,因此人类的血液当中含有的DNA是比较少的,如果想要在非实验室环境下提取自己的DNA,建议选择其他容易获得的细胞,比如口腔的上皮细胞等。

下面我们就对具体操作步骤中涉及的原理进行解释
1.获取细胞:用漱口的方式,获取的是口腔的上皮细胞。

2.盐的作用:在漱口时细胞已经破碎,加盐可吸附DNA。

带正电的钠离子会和DNA分子中带负电的区域发生反应,可使DNA分子聚到一起。

3.洗洁精的作用:洗洁精中含有十二烷基硫酸钠,它可以破坏细胞膜,这样就可以将细胞内的物质溶解于溶液当中,从而释放DNA,也可用牙膏、洗发香波等来代替。

4.缓慢搅拌:防止用力太大,速度太快会使DNA断裂。

5.隐形眼镜清洗液的作用:去除镜片上的蛋白质,主要是依靠清洗液中含有的蛋白酶,蛋白酶可以分解溶液中的蛋白质。

加入隐形眼镜清洗液,其中蛋白酶的成分就可去除溶液中蛋白质的干扰,使DNA 更容易被提取出来,也可用菠萝或嫩肉粉来代替。

6.冰块和冷藏酒:在低温环境下,由于DNA不溶于酒精,因此可以析出DNA。

如果是植物细胞,就先要加洗洁精,然后再加盐。

因为植物细胞有细胞壁,清水中不能吸水胀破。

所以要先去除细胞壁。

另外,在实验室提取DNA的过程中,会进行多次的氯化钠(NaCl)浓度调节,并且
严格控制温度,实验试剂使用纯度高的试剂如十六烷基三甲基溴化铵、十二烷基硫酸钠等。

而我们在家中做实验,可以用含有这些试剂的混合物(如洗洁精等)来代替。

因此,在家中获取的DNA当中,会含有很多的杂质,想要取得纯度高的DNA,需要进行非常严格的科学实验。

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