生化实验设计1
生化大实验——精选推荐
实验一密度梯度离心法提取叶绿体探索新鲜菠菜叶片叶绿体的分离纯化及其叶绿体蛋白质提取方法，为深入研究甘蔗叶绿体蛋白质组学奠定基础。
以叶片为材料，通过差速离心法制备粗叶绿体制品，分别利用蔗糖密度梯度离心和Percoll梯度离心进一步分离纯化完整叶绿体；提取叶绿体蛋白质，并进行电泳分析。
两种密度梯度离心法均可获得纯度和完整率较高的叶绿体，但蔗糖密度梯度离心法具有分离时间较短、成本较低，分离的叶绿体完整率、纯度和含量高等特点，并且提取的叶绿体蛋白质电泳条带清晰,蛋白质数量多且较全。
与Pecoll梯度离心法相比，蔗糖密度梯度离心法更适宜于在亚细胞水平上进行甘蔗蛋白质组学研究。
1 实验目的掌握手工制作密度梯度技术，了解蔗糖密度梯度离心的原理及优缺点。
2 实验原理密度梯度离心就是通过扩散法用相同的缓冲液把梯度介质配成不同浓度的梯度液，采用上铺法（或下铺法）将密度最大的梯度液置于离心管的底部，而把密度最小的梯度液铺在梯度的最上层，然后经之一段时间（最好放在与离心管温度相同的温度下，一般为24小时），让密度梯度溶质扩散，最后形成一种较为平坦的梯级梯度。
然后在密度梯度介质液柱的顶部铺上一层样品溶液，在离心期间，样品中的各种亚细胞组分会按照它们各自的沉降速度，被分成一系列的样品区带离心。
这种离心方法的基本依据是利用样品颗粒或大分子的不同沉降速率从而达到分离的目的。
密度梯度的作用在于一方面支撑样品溶液，另一方面用来稳定区带以防离心期间梯度柱中产生的对流对它的破坏。
颗粒在梯度中移动的快慢。
取决于它们的大小、形状、密度和离心力以及梯度介质的密度和黏度。
在含有不同颗粒的混合样品中，各种颗粒的移动是相互独立的，因此在各种颗粒的S值相差很小的情况下也能达到分离目的。
用两种或若干种浓度的蔗糖制成的梯度，在离心条件下，叶绿体和比它沉降系数小的细胞组分聚集到梯度交界处，而沉降系数较大的细胞组分沉到离心管底部。
通过这种方法可粗略的分离叶绿体。
生化实验
实验一：分光光度法一：定义：分光光度法是根据物质对不同波长的光波具有选择性吸收的特性---即可以产生吸收光谱，而建立起来的一种定量，定性分析的方法。
分类：根据波长范围可分为紫外，可见和红外分光光度法。
特点：1，与其它光谱分析方法相比，起仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快，2，灵敏度高3，选择性好4，精密度和准确度较高5，用途广泛。
二：分光光度法基本原理：物质对光的选择性吸收1：光的基本性质：波动性，微粒性2：物质对光的选择性吸收：一种物质呈现何种颜色，是与入射光的组成和物质本身的结构有关。
溶液呈现不同的颜色是由溶液中的质点（离子或分子）对不同波长的光具有选择性吸收而引起的。
能复合成白光的两种颜色的光也称为互补色光。
3：吸收曲线（光谱）物质的分子内部存在状态：电子能级，振动能级，转动能级组成：紫外--可见吸收光谱，红外吸收光谱，远红外吸收光谱4、透光率和吸光度当一束单色光通过均匀的溶液时，入射光强度为I0，吸收光强度为Ia，透射光强度为It，反射光强度为Ir，则I0 = Ia + It + Ir 透光率(transmittance)T：透射光的强度It与入射光强度I0之比。
透光率愈大，溶液对光的吸收愈少；透光率愈小，溶液对光的吸收愈多。
吸光度A:透光率的负对数。
A愈大，溶液对光的吸收愈多。
5、Lambert-Beer定律Lambert定律：当一适当波长的单色光通过一固定浓度的溶液时，其吸光度与光通过的液层厚度成正比。
式中b为液层厚度，k1为比例系数，它与被测物质性质、入射光波长、溶剂、溶液浓度及温度有关，Lambert定律对所有的均匀介质都是适用的。
三：分光光度计的基本组成(1)光源光源的作用：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够的光强度，稳定。
可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500 nm)紫外区：氢灯，氘灯(180～375 nm)(2) 单色器单色器的作用：从光源的连续光谱中，分出某一波长范围的光，作为吸光光度分析的光源。
生 化 实 验
(3) 0.10mo1/L醋酸溶液100mL
(4) 0.01mo1/L醋酸溶液50mL
（5）0.5%酪蛋白溶液（以0.01M NaOH作溶剂）100ml
（6）0.01%溴甲酚绿指示剂
（7）0.02mo1/L氢氧化钠溶液100ml
（8）0.02mo1/L盐酸溶液100ml
1.00N醋酸溶液（ml）2.4————
0.1N醋酸溶液（ml）—4.01.0——
0.01N醋酸溶液（ml）———2.50.62
酪蛋白醋酸钠溶液（ml）1.01.01.01.01.0
溶液的最终pH3.24.14.75.35.9
沉淀出现的情况
（2）静置约20分钟，观察每支试管内溶液的混浊度，以“—、＋、＋＋、＋＋＋、＋＋＋＋”符号表示沉淀的多少。根据观察结果，指出哪一个是酪蛋白的等电点。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2。
NH2和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所
形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成
有色物质。此反应的适宜pH为5—7，同一浓度的蛋白质或氨基酸
在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
(13) 2％氯化钡溶液150mL
四、实验操作
1、蛋白质的盐析
中性无机盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。
4、有机溶剂沉淀蛋白质
取1支试管，加入2mL蛋白质溶液，再加入2mL 95％乙醇，混匀，观察沉淀的生成。
2022简单生物实验设计方案
2、增殖培育(又称丰富培育)
增殖培育就是在所采集的土壤等含菌样品中加入某些物质，并创建一些有利于待分别微生物生长的其他条件，使能分解利用这类物质的微生物大量繁殖，从而便于我们从其中分别到这类微生物。因此，增殖培育事实上是选择性培育基的一种实际应用。
3、纯种分别
在生产实践中，一般都应用纯种微生物进行生产。通过上述的增殖培育只能说我们要分别的微生物从数量上的劣势转变为优势，从而提高了筛选的效率，但是要得到纯种微生物就必需进行纯种分别。
改进：染色时不用吸水纸吸水，而是将玻片倾斜10度左右，这个角度肯定不能太大，太大水就会流出盖玻片下的小空间，然后从较高一侧的盖玻片与载玻片的缝隙往里滴碘液，让碘液自己流进盖玻片下，假如有液体流到盖玻片外，用吸水纸擦拭，但肯定要强调不能从盖玻片边缘吸水，盖玻片四周肯定要有充盈的液体，这样才不会出现大气泡。
⑵盖盖玻片
盖用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的水滴，然后缓缓地放下，盖在要视察的材料上
⑶染色
染：将玻片倾斜10度左右，从高的一侧滴入碘液，让其自己流入玻片。问题：染色时书中要求是把1-2滴碘液滴在盖玻片的一侧，然后用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染液浸润标本的全部。然而，部分同学可能将盖玻片下全部水全部吸干，做出的装片会有许多的大气泡，且气泡将细胞掩盖了，或者有人将气泡误认为细胞。
三、试验方法及步骤：
(一)试验材料：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、吸水纸、解剖针、毛笔、滴管、擦镜纸;清水、碘酒溶液;西红柿、空心莲子草、洋葱;创可贴(切片时可能会有人受伤)
生化实验 设计试验--PAGE
tetramethyl ethylene diamine, 简称TEMED)的
作用下,聚合交联而成的三维网状结构的凝胶。
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实验原理
设计试验
聚丙烯酰胺凝胶电泳按其有无浓缩效应分为连
生 续及不连续系统，在连续系统中凝胶总浓度、缓 物 冲液PH均相同，带电颗粒在电场作用下主要靠电 化 荷及分子筛效应得以分离；在不连续系统中缓冲 学 液离子成分、PH、凝胶总浓度及电位梯度均不连 实 续，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应和分 验 子筛效应，还具有浓缩效应，可使稀的样品在电
生
生物化学实验
物 化
设计试验
学 实
主讲：刘连芬
验
聊城生命科学学院
E-Mail：liulianfen@
生命科学学院பைடு நூலகம்
设计试验
相关知识背景
聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel
生 electropHoresis, PAGE）是以聚丙烯酰胺为支 物 持介质的电泳。聚丙烯酰胺是由单体丙烯酰胺
物 1.准确称取新鲜材料3g，加入9ml 提取缓冲液
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设计试验
生 物 化 学 实 验
Exit 生命科学学院
设计试验
试剂
1、1mol/L盐酸48.0 mL Tris 36.6g TEMED 0.24 mL
生
物
2、Acr 28.0g
Bis 0.753g
化 3、过硫酸铵 0.14- 0.3g
学
4、1mol/L盐酸48 mL Tris 5.98g TEMED 0.48 mL
化 （acrylamide. Acr）和交联剂N, N’-甲叉双丙烯
生化创新设计实验
1.2.2市售饮品及榨汁的维生素C测定
维生素C易被光及空气氧化，微量金属离子(铜、铁等)可加速其氧化，实验操作要迅速。维生素C在酸性溶液中比在碱性溶液中稳定，实验在酸性条件下进行【4】，同时避免阳光直射。
市售维生素饮料中有许多种类，且都打着高维生素C含量的标签，本实验希望以相对科学，准确的方式测定市售饮料中维生素C的含量，并通过与新鲜柠檬榨汁中维生素C含量的比较指出哪些饮料的相对维生素C含量更与纯果汁接近。
1 材料与方法
1．1实验材料
百事维动力，农夫山泉水溶C100，名仁柠檬苏打，新鲜柠檬，1%草酸溶液，2%淀粉溶液，0.05mol/L碘液，250ml锥形瓶若干，烧杯若干，低温离心机，玻璃棒，酸式滴定管，广泛ph试纸，100ml容量瓶。
同时我们发现农夫山泉水溶c100的宣传广告宣称一瓶饮料中有五个半柠檬的维生素C含量，可是实验中我们发现，一瓶饮料为445ml，而每100ml饮料中有22.4mg维生素C较其广告有较大出入。
4结论
通过实验我们发现，市售饮料中的维生素C含量可能要比标签中的读数要大一些，且农夫山泉水溶C100存在虚假宣传情况，通过本次实验我们有理由相信，商家在制售维生素饮料的过程中多多少少会有一些虚假成分，同时我们可以得出结论：新鲜水果较维生素饮料而言更适合补充人体日常所需维生素
Abstract:By comparing the content of vitamin C in common commercial drinks and comparing with the content of vitamin C in lemon juice, the loss of vitamin C in drinks was discussed. And whether there are suspected adulterants.
生化实验教案设计
生化实验是现代生物学研究中非常重要的实验项目，其是生物学的基础性实验之一，能够提供很多的重要信息，对于研究生物学的相关领域有着非常重要的意义。
生化实验在教学中也占据着非常重要的位置，生化实验教案的设计也就显得尤为重要。
生化实验全套教案设计需要从实验的基础性方面入手，设计出符合授课对象基础知识水平和学习态度的实验教学方案。
在教案设计中，需充分考虑学生的各种知识脉络，例如物理、化学、生物等基础知识，还需要针对各种不同层次的同学，调整教学内容和难度。
生化实验全套教案设计要充分考虑实验条件和实验的安全性。
实验条件是评估整个实验教学成功与否的关键点。
需要在教案设计时充分考虑实验条件，包括实验材料、设备和技术，确保能够顺利完成整个教学过程。
同时，更加重要的是，教师需要为实验设计一个完善的安全操作方案，考虑不同实验条件下的好坏情况，预防事故的发生。
做好实验操作和安全防范，可以保证各个环节的顺利进行。
在教案设计中充分考虑实验的科学性，科学性是生物学研究中必不可少的一个方面，在生化实验中更是不可或缺的重点。
生化实验全套教案的设计需要充分考虑科学性，需要突出实验的科学特点，比如实验的目的、原理、操作步骤、程度等方面，从而使同学们获得更为深入的理解和认识。
在设计实验时，需要围绕实验目的和原理提出问题和难点，让同学们能够从实验中获得更加丰富和深入的知识。
在教案设计中充分考虑实验的教育意义。
生化实验不仅仅是一种教学方式，而且作为教育手段，也有着非常重要的作用。
在设计教学方案时，需要充分思考实验的教育价值，想办法让同学们在实验中得到更多的知识和启示，提高学生的实验能力和学习效率。
除了重要的实验操作和内容以外，还应该加强同学们的实验室合作能力,加强同学们的学术经验能力，帮助同学们更好地理解实验内容，提高实验收获，从而达到教育目的。
为了保障生化实验教学效果，设计生化实验全套教案，一定要细致，系统，周密，确保教学质量的同时也需要充分体现教育意义和科学性。
生化实验的设计实验报告
一、实验目的1. 掌握从生物组织中提取DNA的基本原理和方法。
2. 学习使用酚-氯仿法进行DNA的粗提取和纯化。
3. 熟悉DNA的鉴定方法。
二、实验原理DNA是生物体内的重要遗传物质，具有独特的碱基序列。
在提取过程中，利用DNA与蛋白质、RNA等物质的溶解性差异，通过适当的化学试剂和操作步骤，将DNA从细胞中分离出来。
三、实验材料与仪器1. 材料：鸡血、无菌生理盐水、无水乙醇、氯化钠、酚-氯仿、NaCl溶液、DNA标准样品等。
2. 仪器：离心机、玻璃棒、量筒、烧杯、滴管、吸管、移液器、酒精灯、显微镜等。
四、实验步骤1. 鸡血采集：取鸡血2ml，加入10ml无菌生理盐水，充分混匀。
2. 细胞裂解：取2ml鸡血混合液，加入等体积的酚-氯仿，充分混匀后静置5分钟。
3. DNA沉淀：取上述混合液，加入2.5倍体积的无水乙醇，充分混匀后静置10分钟。
4. DNA纯化：将上述混合液转移到离心管中，离心5分钟（8000r/min），弃去上清液。
5. DNA溶解：将沉淀用50μl NaCl溶液溶解，混匀。
6. DNA鉴定：取少量溶解后的DNA溶液，加入2μl DNA标准样品，观察颜色变化。
五、实验结果1. 在实验过程中，观察到鸡血混合液与酚-氯仿混合后分层，上层为红色，下层为无色。
2. 在DNA沉淀过程中，观察到白色沉淀形成。
3. 在DNA溶解过程中，观察到溶液颜色由白色变为无色。
4. 在DNA鉴定过程中，观察到溶液颜色与DNA标准样品颜色相似。
六、实验结论1. 成功从鸡血中提取了DNA。
2. 酚-氯仿法是提取DNA的有效方法。
3. DNA在生物组织中的提取具有实际应用价值。
七、实验讨论1. 实验过程中，酚-氯仿的加入有助于细胞裂解和DNA的提取。
2. 无水乙醇的加入有助于DNA的沉淀。
3. NaCl溶液的加入有助于DNA的溶解。
4. 实验过程中，注意操作规范，避免污染。
5. DNA提取过程中，温度、pH值等条件对实验结果有影响。
初中化学生物实验教案设计
初中化学生物实验教案设计实验目的：通过观察酵母在不同糖类溶液中的发酵作用，了解酵母的生物作用以及发酵所释放的气体的性质。
实验原理：酵母是一种微生物，能够利用糖类产生能量，并产生二氧化碳和酒精作为副产物。
在发酵过程中，酵母通过酶的作用将糖分解为能量和产物。
实验材料：酵母粉、蔗糖溶液、葡萄糖溶液、淀粉溶液、试管、试管架、气球、注射器、玻璃棒。
实验步骤：1.将三个试管标记为A、B、C，并分别加入等量的蔗糖溶液、葡萄糖溶液和淀粉溶液。
2.向每个试管中加入适量的酵母粉，并用玻璃棒轻轻搅拌均匀。
3.将每个试管口用气球盖住，并用橡皮筋固定。
4.用注射器向每个试管中注入等量的水。
5.将三个试管放置在试管架上，观察气球的膨胀情况。
6.记录每个试管中气球膨胀的时间和程度。
实验要点：1.在实验过程中要注意酵母粉的用量，过多或过少都会影响实验结果。
2.观察气球的膨胀情况时，要注意记录每个试管的膨胀时间和膨胀程度，以便做出比较。
3.在实验结束后，要注意将试管及废弃物妥善处理，注意实验室的清洁卫生。
实验结果分析：1.蔗糖溶液中酵母发酵所产生的气体最多，气球膨胀最快。
2.葡萄糖溶液中酵母发酵的效果次之，气球膨胀速度较慢。
3.淀粉溶液中酵母发酵所产生的气体最少，气球膨胀较缓慢。
实验小结：通过本次实验，我们可以看到不同糖类溶液中酵母的发酵作用。
蔗糖溶液中酵母产生的气体最多，说明蔗糖是酵母的优质能源；淀粉溶液中酵母的发酵效果较差，说明淀粉不是酵母理想的能源来源。
这个实验不仅帮助我们了解酵母的生物作用，还可以引导我们合理选择不同糖类溶液作为发酵的原料。
生物化学实验教案
生物化学实验教案生物化学实验教案实验一蛋白质的定量测定考马斯亮蓝染色法测蛋白质含量教学目的：学习考马斯亮蓝染色法测蛋白质含量的原理和方法。
进一步掌握分光光度法，包括确定最大吸收波长，制作标准曲线，准确测定未知样品浓度，正确使用测定仪器等。
教学重点：考马斯亮蓝染色法测蛋白质含量的原理；制作标准曲线，准确测定样品浓度。
教学难点：确定最大吸收波长；正确利用标准曲线求得样品浓度。
教学安排：时间分配：预习效果检查15分钟；实验讲解15分钟；教师演示10分钟；学生进行实验120分钟；实验讨论20分钟。
共4学时。
课堂安排：第一部分预习效果检查一、检查预习报告。
二、提问三、讨论预习思考题第二部分实验讲解一、目的要求二、实验原理三、实验材料四、实验方法及注意事项五、布置实验要解决的问题：样品的蛋白质浓度应该在什么范围才能使用本法第三部分实验演示介绍722分光光度计的操作注意事项，演示其操作方法。
邀请一个同学操作，教师对其操作作出点评。
第四部分实验指导实验过程教师在实验室巡视，学生可随时提问，教师予以解答，同时及时纠正学生的错误操作。
第五部分实验讨论一、实验总结1、学生总结2、教师总结二、讨论实验操作之前布置的问题教学参考文献：1、2、《生物化学实验》，李玉兰主编，中国医药科技出版社20xx年出版。
授课教师年月日教研室主任年月日实验二SephadexG-50分离核黄素和丙种球蛋白教学目的：学习和掌握分子筛凝胶层析法的原理和基本操作。
学会使用SephadexG-50分离核黄素和丙球蛋白。
教学重点：分子筛凝胶层析法的基本原理和操作技术；洗脱曲线的绘制。
教学难点：分子筛凝胶层析法的基本原理和操作技术；洗脱曲线的绘制。
教学安排：时间分配：预习效果检查15分钟；实验讲解25分钟；教师演示20分钟；学生进行实验200分钟；实验讨论20分钟。
共6学时。
课堂安排：第一部分预习效果检查一、检查预习报告。
二、提问三、讨论预习思考题第二部分实验讲解一、目的要求二、实验原理三、实验材料四、实验方法及注意事项五、带着问题做实验①蓝色葡聚糖除了可以测外水体积，在本实验中还有什么作用？②可以用哪些方法测定洗脱液中的蛋白质含量以绘制洗脱曲线？本实验选用的方法有何优缺点？如果不想造成样品的损耗，则应选用哪种方法？第三部分实验演示演示装柱、上样、洗脱、卸柱以及分部收集器的使用。
生化设计性实验
1．淀粉遇碘后，形成紫蓝色的复合物。 2．淀粉酶可以使淀粉逐步水解成麦芽糖和葡萄糖（淀粉水解过 程中，不同阶段的中间产物遇碘后，会呈现红褐色或红棕色。） 3 ．酶的活性受环境pH的影响极为显著。因pH影响酶蛋白和底 物的解离状态，从而明显改变酶与底物的结合和催化作用。每一种 酶发挥作用的最佳条件要求最适pH，此时酶的活性最大。当其他条 件相同时，离最适pH越近，其活性越大，所催化的反应速率也最快。
影响酶活性的因素
生化一组4小组： 叶蓁、闵泽楚、赵泽楠、袁野
一、实验目的
观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的 变化。观察不同底物、温度、pH、激活剂与 抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。
二、原理
1、影响酶活性的因素包括：底物类型、酶浓度、底 物浓度、产物浓度、抑制剂、激活剂、pH值、温 度等 2、淀粉在淀粉酶的作用下被降解成单糖，这种降解 过程是逐步进行的，降解的中间产物遇碘曾现不同 的颜色： 3、淀粉 → 红色糊精→ 无色糊精 → 麦芽糖 → 葡萄 糖 （紫蓝色）（红色） （无色） 所以根据水解液和碘反应的颜色，可以判断水解是否 已完全。
3
将a液加入到A试管，b液加入到 B试管，c液加入到C试管中， 摇匀
保温5min 600C 1000C 00C
4
5
滴入碘液，摇匀
2滴
2滴
2滴
6
观察现象并记录
实验三：pH对酶活性的影响
一、实验目的：
1．初步学会探索pH对酶活性的影响的方法。 2．探索淀粉酶在不同pH下催化淀粉水解的情况。
二、实验原理：
三、试剂和器材 1. 试 5~8磷酸盐缓冲液（配 制见实验课本207页） 2. 器材 试管、控温水浴锅、吸量管、滴管
四、实验步骤： 按照下表进行实验
生化实验教案
生化实验全套教案第一章：引言1.1 课程背景1.1.1 生化实验是生物科学领域的重要实践活动，通过实验可以让学生更好地理解生物学的理论知识。
1.1.2 生化实验能够培养学生的实验操作能力、观察能力和分析能力，提高学生的实践技能。
1.1.3 通过本课程的学习，学生将掌握基本的生化实验原理和方法，为今后的生物学研究或工作打下坚实的基础。
第二章：知识点讲解2.1 生化实验的基本原理2.1.1 生化实验是基于生物化学反应的原理进行的，学生需要了解各种生化反应的基本原理。
2.1.2 学生需要了解生化实验中常用的仪器设备及其使用方法。
2.1.3 学生需要掌握生化实验数据处理的基本方法，如标准曲线法、酶活性计算等。
第三章：教学内容3.1 实验一：蛋白质的提取与鉴定3.1.1 实验原理：通过盐析法提取蛋白质，使用SDSPAGE电泳鉴定蛋白质。
3.1.2 实验材料：鸡蛋白、盐、SDS、PAGE胶等。
3.1.3 实验步骤：包括蛋白提取、蛋白分离、蛋白鉴定等步骤。
第四章：教学目标4.1 知识目标4.1.1 学生能够理解生化实验的基本原理和方法。
4.1.2 学生能够掌握实验操作技能，如蛋白提取、电泳等。
4.1.3 学生能够分析实验数据，得出合理的结论。
第五章：教学难点与重点5.1.1 学生需要掌握生化实验的基本原理和方法。
5.1.2 学生需要熟练操作实验仪器，掌握实验步骤。
5.1.3 学生需要学会分析实验数据，得出合理的结论。
后续章节待补充。
第六章：教具与学具准备6.1 教具准备6.1.1 生化实验室所需的仪器设备，如显微镜、离心机、PCR仪器等。
6.1.2 实验所需的化学试剂和生物材料，如蛋白酶、底物等。
6.1.3 实验讲义和相关参考书籍，供学生参考学习。
6.2 学具准备6.2.1 学生实验室所需的个人防护装备，如实验服、手套、护目镜等。
6.2.2 实验报告表格，用于记录实验数据和结果。
6.2.3 笔记本电脑或平板电脑，用于展示实验相关资料或软件操作。
生化实验 设计试验--PAGE
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设计试验
实验原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳按其有无浓缩效应分为连 续及不连续系统，在连续系统中凝胶总浓度、缓 冲液PH均相同，带电颗粒在电场作用下主要靠电 荷及分子筛效应得以分离；在不连续系统中缓冲 液离子成分、PH、凝胶总浓度及电位梯度均不连 续，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应和分 子筛效应，还具有浓缩效应，可使稀的样品在电 泳中浓缩成层，因而具有良好的清晰度和分辨率。 按器材来分主要有垂直的圆盘电泳和板状电泳。 下面就三种物理效应的原理分别加以说明：
Exit Exit
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二、聚丙烯酰胺凝胶电泳----垂直板 1.装胶槽： （1）配1%的琼脂糖：用电子天平准确称取5g琼脂糖，加水 500ml,然后在电炉上加热至微沸，并不断搅拌，溶液由浑浊 变为透明即可。 （2）取两块电泳玻板（其中一块有凹槽），用铬酸洗净， 再用自来水冲洗2-3次，最后用蒸馏水冲洗干净，放于相应的 支架上直立干燥。（洗净的玻板内面要避免手指触摸，以防 沾污） （3）将带有凹槽的玻璃放在凝胶模高一点的孔中，另一平 板放于凝胶模有底槽的一边. （4）将已插好玻板的凝胶模夹到贮槽中（使略低的玻板一 侧靠近负极），然后双手以对角线的方式旋紧螺丝帽. （5）倾斜电泳槽，用滴管吸取少量的1% 琼脂糖溶液，封好 凝胶模板底边和侧边 Exit
3、过硫酸铵 5、Acr 10.0g 6、蔗糖 40.0g
4、1mol/L盐酸48 mL Tris 5.98g TEMED 0.48 mL
7、电极缓冲液Tris 6.0克；甘氨酸 28.8克；加水到1L 用时稀释10倍
Exit
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实验步骤
生 物 化 学 实 验
一、样品的提取 二、PAGE电泳 三.结果分析
生化大实验实验步骤
⽣化⼤实验实验步骤实验⼀、碱裂解法提取质粒DNA及检测⼀、实验⽬的与原理简介质粒DNA的提取是基因⼯程操作中常⽤的基本技术。
质粒作为载体应具备下列四个特点：①有⾜够的容纳⽬的基因的幅度，并且对于携带的⽬的基因能够借助载体的复制和调控系统得到忠实的复制与增殖。
②在⾮必要的DNA克隆区有多种限制性核酸内切酶的单⼀识别位点，易于基因⽚段与载体的连接、重组与筛选。
③与宿主细胞有天与⼀个或多个遗传表型（如抗药性、营养缺陷型或显⾊表型反应等）。
④拷贝数多，易于宿主细胞的DNA分开，便于分离提纯。
分离质粒DNA的⽅法包括三个基本步骤：培养细胞使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。
碱裂解法质粒DNA是基于染⾊体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异⽽达到分离⽬的的。
在强碱性pH时，染⾊体线性DNA 的氢键断裂，双螺旋结构解开⽽变性。
质粒DNA的⼤部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，调节pH值⾄中性时，变性的质粒DNA⼜恢复到原来的构型，⽽染⾊体DNA不能复性纠缠形成⽹状结构，经过离⼼，染⾊体DNA与不稳定的⼤分⼦RNA、蛋⽩质-SDS复合物等⼀直沉淀下来⽽被除去。
提取基因⼯程中运载基因的载体，掌握最常⽤的提取质粒DNA的⽅法。
⼆．实验试剂1，SolⅠ100ml： 1M Tris-HCL（pH8.0）2.5ml，0.5M EDTA 2ml, DDW 91ml, 20%葡萄糖4.5ml( 葡萄糖单独灭，灭完后加进Sol I)，⾼压灭菌，4°保存。
2，SolⅡ100ml：（新鲜配制，常温使⽤）10% SDS 50ml， 2M NaOH 50ml。
使⽤前将两种溶液混合。
3，SolⅢ 500ml：KAc 147g， HAc57.5ml，加300mlDDW搅拌，定容⾄500ml。
⾼压灭菌，4°保存。
4，TE 100ml：1M Tris-HCl（pH8.0）1ml， 0.5 M EDTA 0.2 ml, 加DDW ⾄100ml。
生化设计实验
蛋白质与核酸的定性与定量一. 实验目的1. 学习和掌握纯化蛋白质的原理和方法、蛋白质等电点的测量原理和方法。
2. 掌握使用双缩脲法对蛋白质的定性测定。
3. 学会利用定糖法对核酸的定性与定量测定二. 实验原理1. 区分蛋白质和核酸：蛋白质在碱性溶液中可与Cu2+紫红色反应。
这是蛋白质分子中肽键的反应，肽键越多反应颜色越深。
核酸由单核苷酸所组成，无此反应。
另外，核酸组成成分嘌呤及嘧啶碱基具有强烈的紫外吸收，所以核酸也具有强烈的紫外吸收，最大吸收值在260mn ，利用这一性质亦可鉴别核酸样品和蛋白质样品。
2. 蛋白质的纯化方法：（1）粗分离：中性盐对蛋白质胶体的稳定性有显著的影响。
一定浓度的中性盐可破坏蛋白质胶体的稳定因素而使蛋白质盐析沉淀。
盐析沉淀的蛋白质一般保持着天然构象而不变性。
（2）蛋白质类别及分子量的确定：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术测定样液中含有几种蛋白质，每种蛋白质的分子量大小。
由于SDS 是阴离子，使多肽表面覆盖的负电荷远远超过蛋白质分子原有的电荷量，消除了原来的电荷差异。
改变了蛋白质单体分子的构象，不同蛋白质的SDS 复合物的短轴长度都相同，长轴长度随其分子量的大小成正比变化（3）蛋白质的精制：根据上一步骤得到的蛋白质的分子量，采用葡聚糖凝胶层析的方法。
聚糖凝胶层析，是使待分离物质通过葡聚糖凝胶层析柱，各个组分由于分子量不相同，在凝胶柱上受到的阻滞作用不同，而在层析柱中以不同的速度移动。
分子量大于允许进入凝胶网孔范围的物质完全被凝胶排阻，不能进入凝胶颗粒内部，阻滞作用小，随着溶剂在凝胶颗粒之间流动，因此流程短，而先流出层析柱；分子量小的物质可完全进入凝胶颗粒的网孔内，阻滞作用大，流程延长，而最后从层析柱中流出。
若被分离物的分子量介于完全排阻和完全进入网孔物质的分子量之间，则在两者之间从柱中流出，由此就可以达到分离目的。
3. 蛋白质的含量测定以及等电点、比旋度等性质（1）蛋白质的含量测定：采用Folin- 酚试剂法。
药大生化设计实验报告
药大生化设计实验报告引言生化设计实验是药学专业学生培养中重要的一门实验课程。
通过这门课程的学习，学生能够熟悉常用的生物化学实验操作，了解不同药物对生物体的影响，培养实验设计和数据分析的能力，为今后的科研工作打下基础。
本次实验旨在设计一个新型药物，并通过生化实验来评估其对细胞的影响。
实验设计本次实验设计了一个基于细胞增殖抑制作用的药物。
首先，从现有的药物中筛选出具有抑制细胞增殖效果的化合物A，作为我们设计的基础药物。
然后，我们希望通过对化合物A的结构进行修饰，产生一系列新型化合物，以寻找更具活性的药物。
最后，通过细胞培养和药物处理实验，评估设计出的化合物对细胞增殖的影响。
实验步骤1. 从现有药物中筛选出化合物A，并确认其对细胞增殖的抑制效果。
2. 根据化合物A的结构，设计一系列新型化合物，进行合成。
3. 对设计出的化合物进行质量分析，包括质谱和核磁共振等技术。
4. 利用细胞培养技术，培养癌细胞株，例如HeLa细胞。
5. 将细胞分成多组，每组分别添加不同浓度的化合物，进行处理。
6. 观察细胞形态变化，记录细胞数量和生长情况。
7. 进行数据统计和分析。
实验结果化合物A的抑制效果在本次实验中，我们从已有的药物中筛选出了化合物A，并通过细胞培养实验评估了其对细胞增殖的抑制效果。
实验结果显示，化合物A在一定浓度范围内能够显著抑制细胞的增殖，并呈浓度依赖性。
新型化合物的设计与合成根据化合物A的结构，我们设计了一系列新型化合物，通过有机合成方法成功合成了这些化合物。
质谱和核磁共振技术的分析证实了化合物的结构正确性。
新型化合物对细胞增殖的影响通过细胞培养和药物处理实验，我们评估了新型化合物对细胞增殖的影响。
实验结果表明，新的化合物能够更有效地抑制细胞的增殖，且在低浓度下就表现出明显的抑制效果。
结论与展望通过本次实验，我们成功设计出了一系列新型的化合物，并通过细胞培养实验评估了其对细胞增殖的抑制效果。
实验结果显示，这些新型化合物具有更强的生物活性，为进一步的药物研发提供了重要的线索。
生化实验报告
生化实验报告引言本实验旨在研究生物体内的化学反应和生化过程。
通过对不同生物体进行实验观察和数据分析，我们将探索生物体内的基本生化反应以及其对生物体功能和健康的影响。
本报告将详细描述实验设计、实验过程、结果分析和结论，并提出进一步研究的建议。
实验设计本实验选择了两种不同的生物体：植物和动物。
我们分别对这两种生物体进行了以下实验设计：实验一：植物生化反应观察1. 准备不同种类的植物标本，包括叶片、茎和根部。
2. 将标本分别置于试管中，加入适量的生理盐水。
3. 在不同的环境条件下观察标本的生化反应，如光照、温度和湿度等。
4. 记录观察到的生化反应现象，如色素变化、气体释放等。
实验二：动物生化反应观察1. 准备不同种类的动物标本，包括血液、肌肉和器官组织。
2. 将标本分别置于试管中，加入适量的生理盐水。
3. 在不同的环境条件下观察标本的生化反应，如温度、pH值和添加特定物质等。
4. 记录观察到的生化反应现象，如酶活性变化、蛋白质分解等。
实验过程以下是实验的具体步骤和操作：实验一：植物生化反应观察1. 准备好所需的植物标本，并确保其新鲜度和完整性。
2. 将标本分别放置于不同的试管中，并加入适量的生理盐水。
3. 将试管放置于不同的环境条件下，如光照箱、恒温箱和湿度控制器中。
4. 观察标本在不同环境条件下的生化反应现象，并记录下来。
实验二：动物生化反应观察1. 准备好所需的动物标本，并确保其新鲜度和完整性。
2. 将标本分别放置于不同的试管中，并加入适量的生理盐水。
3. 将试管放置于不同的环境条件下，如恒温水浴、酸碱平衡溶液中。
4. 观察标本在不同环境条件下的生化反应现象，并记录下来。
结果分析根据实验观察和数据记录，我们得出了以下结果：实验一：植物生化反应观察1. 不同植物标本在不同环境条件下表现出不同的生化反应。
2. 光照条件对植物叶片的色素合成和光合作用有显著影响。
3. 温度和湿度条件对植物的新陈代谢和生长速率有一定影响。
生化实验设计
参考文献
【1】郑铁生，辛淮生等 地产龙虾壳甲壳素的提取和壳聚糖 】郑铁生，辛淮生等.地产龙虾壳甲壳素的提取和壳聚糖 的制备.时珍国医国药 时珍国医国药， ）：1208-1209 的制备 时珍国医国药，2005，16（12）： ， （ ）： 【2】贾荣仙，聂容春 龙虾壳甲壳素的提取和壳聚糖的制备 】贾荣仙，聂容春.龙虾壳甲壳素的提取和壳聚糖的制备 及性能研究.安徽化工 安徽化工， ）：41-42 及性能研究 安徽化工，2010，36（1）： ， （ ）： 【3】刘必富，丁瑜等 孝感市场小龙虾及提取甲壳素的重金 】刘必富，丁瑜等.孝感市场小龙虾及提取甲壳素的重金 属含量分析.湖北农业科学 湖北农业科学， ）：1458-1460 属含量分析 湖北农业科学，2010，49（6）： ， （ ）： 【4】邵健，景晓辉，杨宇民 分光光度法测定壳聚糖抗菌纤 】邵健，景晓辉，杨宇民.分光光度法测定壳聚糖抗菌纤 维中的壳聚糖含量.针织工业 针织工业2007，1（12）： ）：55-57 维中的壳聚糖含量 针织工业 ， （ ）： 分光光度法测定壳聚糖含量.药 【5】陈伶俐，宗莉，庞瑞 分光光度法测定壳聚糖含量 药 】陈伶俐，宗莉，庞瑞.分光光度法测定壳聚糖含量 物分析杂志， 物分析杂志，2005，25(5) ：526-529 ， 【6】刘小华，张美霞等 考马斯亮兰法测定壳聚糖中蛋白的 】刘小华，张美霞等.考马斯亮兰法测定壳聚糖中蛋白的 含量.中国交通医学杂志 中国交通医学杂志， ）：159-160 含量 中国交通医学杂志，2006，20（2）： ， （ ）：
对虾虾壳中壳聚糖的 含量测定
小组成员： 小组成员
研究方案
研究对象： 研究对象：对虾虾壳 研究问题：从食后的对虾壳中提取天然亮壳素， 研究问题：从食后的对虾壳中提取天然亮壳素，
生化实验设计1
实验设计：酶偶联反应测定血清中的肌酐一、广泛查阅文献、确定候选方法：经过查阅相关文献，根据方法选择的要求对各种方法进行比较，充分了解各方法的科学依据和真实的使用价值，再根据临床应用价值、实验室条件等综合分析后，目前主要的肌酐测定方法有化学测定法(碱性苦味酸法)、酶法、高效液相层析法、拉曼散射法、同位素稀释质谱法、毛细管电泳法及电极法等。
二、候选方法设计：1、实验原理：肌酐经肌酐水合酶催化生成肌酸，肌酸与肌酸激酶、丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶的级联催化作用下生成乳酸，并将NADH变成NAD+，测量在340nm处监测NADH吸光度变化速率，其降低程度与肌酐含量呈正比例，反应式如下P教材1982、反应最适条件探讨：设计一系列实验分别探讨该候选方法的最适试剂浓度、缓冲体系的种类、离子强度、pH值、反应温度和时间、检测波长等。
3、候选方法的初步试验：——对候选方法做初步评价试验，包括：①标准曲线和重复性；②质控血清和新鲜标本的重复试验；③分析浓度不同的标本，并与公认的参考方法的结果对比。
三、方法学评价：（一）重复性试验：检测候选方法的随机误差。
批内重复性试验：目的是测定实验方法的偶然误差，但产生偶然误差的原因也可能由于仪器、温度、试剂、标准品缺乏稳定性，吸量、计时、混匀等操作缺乏重现性造成，应排除这些因素才能把试验所产生的误差归于方法学的误差。
重复性试验依据时间间隔可分为批内、天内、天间三种重复性试验。
方法学评价重复性试验应由实验者作批内(或天内)及天间重复性试验原理：批内重复性试验是指在相同条件下(用同样的方法，同一种试剂和标准品，同一台仪器，在同一实验室由同一人操作，并保持实验期间准确度不变)对同一标本在尽可能短的时间内进行m轮，每轮n次重复测定，以获得批内精密度数据的试验方法。
其结果能反映各次测定结果相互接近的程度，用于客观评价酶偶联反应测定血清中的肌酐随机误差的大小。
操作步骤：将血清标本用酶偶联反应测定血清中的肌酐作5轮，每轮4次血糖测定，即可获得20个测定数据。
生化实验室设计标准
生化实验室设计标准
首先，生化实验室的设计标准需要考虑实验室的布局和空间规划。
实验室的布局应该合理，包括实验台、通风系统、安全出口等的设置，以及实验室内部的分区和通道设计。
同时，实验室的空间规划也需要考虑到实验设备的摆放和使用空间，确保实验操作的便捷性和安全性。
其次，生化实验室的设计标准还需要考虑到实验室的安全设施和环境控制。
这包括通风系统的设计，以确保实验室内的空气质量和排放有害气体；安全柜和防护设施的设置，以确保实验操作过程中的安全性；以及实验室的环境控制，比如温度、湿度等参数的控制。
此外，生化实验室的设计标准还需要考虑到实验设备和仪器的配置。
这包括实验台、实验室设备、实验仪器等的选型和配置，以及其与实验室布局的协调性和安全性。
最后，生化实验室的设计标准还需要考虑到实验室的管理和操作规范。
这包括实验室的规章制度、实验操作流程、实验废物处理等方面的规定，以确保实验室的安全运行和实验操作的规范性。
综上所述，生化实验室的设计标准涉及到实验室的布局和空间规划、安全设施和环境控制、实验设备和仪器的配置、以及实验室的管理和操作规范等多个方面，需要综合考虑并遵循相关的行业标准和法规规定。
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实验设计：酶偶联反应测定血清中的肌酐
张燕111004048 周方111004052 周跃慧111004053
一、广泛查阅文献、确定候选方法：经过查阅相关文献，根据方法选择的要求对各种方法进行比较，充分了解各方法的科学依据和真实的使用价值，再根据临床应用价值、实验室条件等综合分析后，目前主要的肌酐测定方法有化学测定法(碱性苦味酸法)、酶法、高效液相层析法、拉曼散射法、同位素稀释质谱法、毛细管电泳法及电极法等。
二、候选方法设计：
1、实验原理：肌酐经肌酐水合酶催化生成肌酸，肌酸与肌酸激酶、丙酮酸激酶、乳
酸脱氢酶的级联催化作用下生成乳酸，并将NADH变成NAD+，测量在340nm处
监测NADH吸光度变化速率，其降低程度与肌酐含量呈正比例，反应式如下
P教材198
2、反应最适条件探讨：设计一系列实验分别探讨该候选方法的最适试剂浓
度、缓冲体系的种类、离子强度、pH值、反应温度和时间、检测波长等。
3、候选方法的初步试验：——对候选方法做初步评价试验，包括：
①标准曲线和重复性；
②质控血清和新鲜标本的重复试验；
③分析浓度不同的标本，并与公认的参考方法的结果对比。
三、方法学评价：
（一）重复性试验：检测候选方法的随机误差。
批内重复性试验：目的是测定实验方法的偶然误差，但产生偶然误差的原因也可能由于仪器、温度、试剂、标准品缺乏稳定性，吸量、计时、混匀等操作缺乏重现性造成，应排除这些因素才能把试验所产生的误差归于方法学的误差。
重复性试验依据时间间隔可分为批内、天内、天间三种重复性试验。
方法学评价重复性试验应由实验者作批内(或天内)及天间重复性试验
原理：批内重复性试验是指在相同条件下(用同样的方法，同一种试剂和标准品，同一台仪器，在同一实验室由同一人操作，并保持实验期间准确度不变)对同一标本在尽可能短的时间内进行m轮，每轮n次重复测定，以获得批内精密度数据的试验方法。
其结果能反映各次测定结果相互接近的程度，用于客观评价酶偶联反应测定血清中的肌酐随机误差的大小。
操作步骤：将血清标本用酶偶联反应测定血清中的肌酐作5轮，每轮4次血糖测定，即可获得20个测定数据。
计算：
1．按照批内精密度的计算公式计算5轮每轮4次测定值的平均数()、标准差(S)和变异系数(CV%)。
首先计算出每轮测定值的均数、标准差(Si)及方差S12 S22 S32、S42。
再将5轮的总和代入公式即可算出批内标准差Sw。
最后计算出变异系数(CV%)。
（二）回收试验：通过计算回收率，检测候选方法的比例系统误差
试剂：
1．血清标本收集无肝炎病毒、无溶血、无脂浊的人混合血清，用酶偶联反应测定血清中的肌酐，再用生理盐水稀释到一定浓度备用
2．肌酐校准液
3．生理盐水。
4．其它试剂同酶偶联反应测定血清中的肌酐
操作步骤：1．样品制备
基础样品：血清0.9ml + 0.1ml生理盐水。
回收样品Ⅰ：血清0.9ml＋0.01ml 80mmol/L肌酐标准液＋ 0.09ml生理盐水。
回收样品Ⅱ：血清0.9ml＋0.06ml 80mmol/L肌酐标准液＋ 0.04ml生理盐水。
回收样品Ⅲ：血清0.9ml＋0.09ml 80mmol/L肌酐标准液＋ 0.01生理盐水。
2．血糖浓度测定按酶偶联反应测定血清中的肌酐，每份样品作双份检测，结果取平均值。
计算:
1．加入浓度计算:加入浓度(mmol/L)=标准液浓度×
2．回收量计算:回收量＝回收样品测得值－基础样品测得值
3．回收率计算:回收率(%)=×100
请将各计算结果填入表2-4内。
表2-4 回收试验的数据处理
样品测得浓度加入浓度回收浓度回收率(%)
(umol/L) (umol/L) (umol/L)
基础样品
回收样品Ⅰ
回收样品Ⅱ
回收样品Ⅲ
平均回收率。
(三)干扰试验：通过计算干扰值，检测候选方法的恒定系统误差。
试剂：
1．血清标本收集无肝炎病毒、无溶血、无脂浊的人混合血清，用酶偶联反应测定血清中的肌酐，再用生理盐水稀释到一定浓度备用
2．肌酐校准液
3．生理盐水。
4．其它试剂同酶偶联反应测定血清中的肌酐
操作步骤：
1．样品制备
基础样品：血清0.9ml＋蒸馏水0.1ml。
干扰样品Ⅰ：血清0.9ml＋9.0mmol/L肌酐标准液0.05ml+蒸馏水0.05ml。
干扰样品Ⅱ：血清0.9ml＋9.0mmol/L肌酐标准液0.1ml。
血液样品：蒸馏水0.9ml＋9.0mmol/L肌酐标准液0.1ml。
2．肌酐值的测定按酶偶联反应测定血清中的肌酐
计算：
1．干扰物加入值计算干扰物加入值＝干扰物溶液浓度×
2．干扰值计算干扰值(mmol/L)＝干扰样品测定值－基础样品测定值3．干扰率计算干扰率(%)＝干扰值/基础值×100
计算结果请填入表2-5内。
表2-5 干扰试验的数据处理
样品葡萄糖测得值加入值干扰值干扰率(%)
(umol/L) (umol/L) (umol/L)
基础样品－－－
回收样品Ⅰ
回收样品Ⅱ
样品
（四）方法比较试验：检测候选方法的系统比例误差。
1、用允许分析误差（EA）和医学决定水平(XC)判断候选方法能否接受。
评价试验中得到的结果，经统计学处理就能得出各种误差值，将其与确定的允许误差值EA进行比较。
各项指标都小于EA，则表示该方法可以接受；任何一项指标大于EA，则表示不能接受。
单值判断指标，可信区间判断指标
误差类别判断指标备注
随机误（RE） 1.96STM＜EA STM：重复试验方法的
标准差
比例误（PE ）(|R-100|)(xc/100)＜EA R：平均回收率
恒定误（CE）|偏差|＜EA由干扰试验测出
系统误（SE）|(a+bXC)-XC|＜EA对比试验回归方程
总误差（TE） 1.96STM+|(a+bXC)-XC|＜EA包括随机及系统误差三、参考值与参考范围
从按若干标准规定的参考人群中选定一定数量的参考个体，通过检测所得结果，经统计学处理求得均值（X）和标准差（S），均值（X）即为参考值，而上述结果的95%的分布区间（X±2S）即为参考范围。
四、临床诊断性能
诊断试验评价四格表
金标准
诊断试验有病无病合计
阳性真阳性(a)假阳性(b)a+b
阴性假阴性(c)真阴性(d)c+d
a+c b+d N
五、质控体系的建立
酶偶联反应测定血清中的肌酐
实验目的酶偶联反应测定血清中的肌酐
实验原理：肌酐经肌酐水合酶催化生成肌酸，肌酸与肌酸激酶、丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶的级联催化作用下生成乳酸，并将NADH变成NAD+，测量在340nm 处监测NADH吸光度变化速率，其降低程度与肌酐含量呈正比例，反应式如下：
P教材198
实验试剂：血清、R：肌酐水合酶；R2 ：肌酸激酶、丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶
操作步骤：连续监测法(340nm处吸光度，其降低程度与肌酐含量呈正比例)
加入物 B C U
样品（ul）X
标准品（ul）X
蒸馏水（ul）X
R1（ul） a a a
混匀，在37℃恒温5min，
R2 b b b
混匀，在37℃恒温5min,在340nm处吸光度，其降低程度与肌酐含量呈正比例
计算：样品肌酐测定（umol/L）=△Au
△Ac /min ×Cc
正常参考值：血浆肌酐44-133μmol/L。
注意事项：
1、此法特异性高，标本不需去蛋白，特别适用于自动分析。
但工具酶过多、价格昂贵。
2、酶法具有线性范围宽、抗干扰能力强、重复性好等特点
3、血尿素浓度除受肾功能影响外，还受到蛋白质分解代谢引起的变化，如高蛋白饮食、胃肠道出血、口服类固醇激素等都可使血尿素浓度增高。
4、样品为不溶血的血清、血浆（肝素或EDTA抗凝）。
样品应在低温条件下运输保存，样品中Crea在2~8℃保存可稳定3天，-20℃保存可稳定数月。
5、采用必要的预防措施适用试剂，试剂使用后应立即盖紧瓶盖，避免污染。
准确的结果取决于准确校正的仪器、温度及时间的控制。