肠球菌、溶血性链球菌和粪链球菌检验培养基
肠球菌、溶血性链球菌和粪链球菌检验培养基
葡萄糖肉浸液肉汤Dextrose Meat Infusion Broth 用途：用于溶血性链球菌的增菌培养配方：（g/L）牛肉粉氯化钠蛋白胨磷酸氢二钾葡萄糖pH值7.5 ± 0.1 3.0 5.0 10.0 2.0 10.0 25℃原理：蛋白胨、牛肉粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钾为缓冲剂；葡萄糖提供碳源。
用法：称取本品 30.0g,煮沸溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：在36±1℃培养24小时。
质控菌株ATCC生长情况溶血性链球菌（10-8）+++单增李斯特氏菌27853 （10-8）+++大肠杆菌25922 +/-沙门氏菌14028 +/-匹克氏肉汤基础APick’s Broth BaseA用途：用于溶血性链球菌的增菌培养配方：（g/L）胰蛋白胨牛心浸粉叠氮钠结晶紫pH值7.3-7.5 10.0 20.0 0.065 0.002 25℃原理：胰蛋白胨、牛心浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子；脱纤维兔血（或羊血）为溶血性链球菌提供大量生长因子；结晶紫和叠氮钠为选择性抑菌剂。
用法：称取本品 30.0g,加热溶于1000ml 蒸馏水中,分装, 121℃高压灭菌 15 分钟, 冷至 50℃左右时,加入脱纤维羊血,混匀。
质量控制：在36±1℃培养18-24小时。
质控菌株ATCC生长情况溶血现象溶血性链球菌+++ +（大）单增李斯特氏菌27853 ++ +（小）大肠杆菌25922 - -沙门氏菌14028 - -肉浸液肉汤培养基Meat Infusion Broth用途：用于溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养（GB标准）配方：（g/L）牛肉粉氯化钠蛋白胨磷酸氢二钾pH值7.5 ± 0.1 3.0 5.0 12.0 2.0 25℃原理：蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；磷酸氢二钾为缓冲剂；氯化钠可维持均衡的渗透压。
肠球菌属标准操作规程
肠球菌属标准操作规程1.概述肠球菌属于1984年从链球菌属划出，单独成为一个菌属，包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、坚韧肠球菌、铅黄肠球菌、蒙氏肠球菌、海氏肠球菌、鹑鸡肠球菌和病臭肠球菌等18个种和1个变异株。
临床上常见的菌株为粪肠球菌。
2.标本类型血液、尿液、痰、穿刺液、脓液等标本。
3.鉴定3.1 形态与染色革兰阳性球菌，单个、成双或短链状排列。
3.2 培养特性在血琼脂平板上形成较小、灰白色，有a 溶血或β溶血环的菌落。
在麦康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。
3.3 生化反应触酶试验阴性，分解甘露醇、山梨醇、胆汁七叶苷试验阳性、在含6.5%氯化钠的肉汤中生长，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。
3.4 鉴别要点3.4.1 本菌特征革兰阳性球菌，触酶试验阴性，在65g/L 氯化钠中生长，胆汁、七叶苷试验阳性，45℃中生长。
3.4.2与屎肠球菌的鉴别：粪肠球菌不分解阿拉伯糖，而屎肠球菌能分解阿拉伯糖3.4.3 与链球菌属和乳球菌属的鉴别：见表5-353.4.4 粪肠球菌与其他各主要菌种间的鉴别：见表5-36操作步骤3.5.1 触酶试验阳性参见触酶试验标准操作规程3.5.2 鉴定从血平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4.药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件.5.质量控制参见《质量控制程序》6.检验结果解释与分析在β-内酰胺酶阴性球菌肠球菌中，氨苄西林药敏试验结果可预测阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等敏感性。
青霉素药敏试验可预测氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等药敏结果。
粪肠球菌中氨苄西林药敏结果可以预测亚胺培南的药敏结果。
对于血培养和脑脊液中分离到的肠球菌，需做β-内酰胺酶检测，β-内酰胺酶阳性，则对青霉素、羧基青霉素和脲基青霉素均耐药。
肠球菌、溶血性链球菌和粪链球菌检验培养基
葡萄糖肉浸液肉汤Dextrose Meat Infusion Broth 用途：用于溶血性链球菌的增菌培养匹克氏肉汤基础APick’s Broth BaseA用途：用于溶血性链球菌的增菌培养肉浸液肉汤培养基Meat Infusion Broth用途：用于溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养（GB标准）叠氮钠葡萄糖肉汤Azide Dextrose Broth 用途：用于链球菌的增菌培养乙基紫叠氮钠肉汤用途：用于链球菌的增菌培养KF链球菌琼脂KF Streptococcus Agar 用途：用于链球菌的选择性分离及计数（GB、SN标准）肠球菌琼脂(胆盐－七叶苷－叠氮钠琼脂)Enterococcus Agar(Bile Esculin Azide Agar) 用途：用于食品和水中肠球菌的计数CATC琼脂CATC Agar 用途：用于食品和饮料肠球菌的分离培养胆盐七叶苷琼脂Bile Esculin Agar用途：用于肠球菌和肠道致病菌的分离培养哥伦比亚血琼脂基础Columbia Blood Agar Base 用途：营养非常丰富，用于各种细菌的基础培养基LIM培养基LIM Medium 用途：用于链球菌的分离培养（Japan方法）BETA-SSA琼脂BETA-SSA Agar用途：用于链球菌的选择性分离培养粪肠球菌琼脂Enterococcus faecalis Agar 用途：用于粪肠球菌的选择性分离缓冲蛋白胨水Buffered Peptone Water 用途：用于阪崎杆菌前增菌培养（GB2008标准）胆汁液态培养基Bile broth用途：用于粪链球菌的胆汁耐受试验。
M-肠道菌琼脂M-Enterococcus Agar用途：用于水中或其它物质中肠球菌分离培养和计数（滤膜法或划线法）THB培养基THB Medium 用途：用于链球菌增菌培养PS琼脂PS Agar 用途：用于消化球菌的培养肠球菌肉汤Enterococcus Broth 用途：用于肠球菌增菌培养脑心浸液肉汤（BHI）Brain Heart Infusion Broth 用途：用于细菌的增菌培养脑心浸萃液肉汤Brain Heart Infusion Broth 用途：用于营养苛求细菌的增菌培养脑心浸液琼脂（BHIA）Brain Heart infusion Agar 用途：用于营养苛求细菌的增菌培养Pfizer肠球菌选择性琼脂（PSE琼脂）Pfizer Enterococcus Selective Agar 用途：用于粪链球菌的选择性分离和计数（SN标准）MEI培养基MEI Medium 用途：用于一步滤膜法显色检测或计数水中的肠球菌。
肠球菌属标准操作规程
肠球菌属标准操作规程1.概述肠球菌属于1984年从链球菌属划出，单独成为一个菌属，包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、坚韧肠球菌、铅黄肠球菌、蒙氏肠球菌、海氏肠球菌、鹑鸡肠球菌和病臭肠球菌等18个种和1个变异株。
临床上常见的菌株为粪肠球菌。
2.标本类型血液、尿液、痰、穿刺液、脓液等标本。
3.鉴定3.1形态与染色革兰阳性球菌，单个、成双或短链状排列。
3.2培养特性在血琼脂平板上形成较小、灰白色，有a 溶血或0溶血环的菌落。
在麦康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。
3.3生化反应触酶试验阴性，分解甘露醇、山梨醇、胆汁七叶苷试验阳性、在含 6.5%氯化钠的肉汤中生长，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。
3.4鉴别要点3.4.1本菌特征革兰阳性球菌，触酶试验阴性，在65g/L氯化钠中生长，胆汁、七叶苷试验阳性，45℃中生长。
3.4.2与屎肠球菌的鉴别：粪肠球菌不分解阿拉伯糖，而屎肠球菌能分解阿拉伯糖3.4.3与链球菌属和乳球菌属的鉴别：见表5-353.4.4粪肠球菌与其他各主要菌种间的鉴别：见表5-36操作步骤3.5.1触酶试验阳性参见触酶试验标准操作规程3.5.2鉴定从血平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4.药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20 最新版本文件.5.质量控制参见《质量控制程序》6.检验结果解释与分析在台内酰胺酶阴性球菌肠球菌中，氨苄西林药敏试验结果可预测阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等敏感性。
青霉素药敏试验可预测氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等药敏结果。
粪肠球菌中氨苄西林药敏结果可以预测亚胺培南的药敏结果。
对于血培养和脑脊液中分离到的肠球菌，需做B-内酰胺酶检测，B-内酰胺酶阳性，则对青霉素、羧基青霉素和脲基青霉素均耐药。
为耐万古霉素肠球菌做氯霉素、红霉素、四环素和利福平药敏试验，根据结果进行治疗。
中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验.
中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验1 主题内容与适用范围本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。
本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球的检验。
2 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 设备和材料3．1 温箱：36±1℃。
3．2 水浴：36±1℃。
3．3 显微镜。
3．4 离心机。
3．5 试管架。
3．6 灭菌平皿。
3．7 灭菌小试管。
3．8 载玻片。
3．9 灭菌吸管：1 mL、10 mL。
3．10 灭菌镊子。
3．11 均质器。
3．12 酒精灯。
3．13 接种环。
4 培养基和试剂4．1 葡萄糖肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。
4．2 肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定。
4．3 匹克氏肉汤：按GB 4789.28 中4.62 规定。
4．4 血琼脂平板：按GB 4789.28 中4.6 规定。
4．5 人血浆。
4．6 0.25%氯化钙。
4．7 灭菌生理盐水。
4．8 杆菌肽药敏纸片（含 0.04 单位）。
5 检验程序6 操作步骤6．1 样品处理称取 25 g 固体检样；称取25 mL 液体检样，加入 225 mL 灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。
6．2 一般培养将上述混悬液吸取 5 mL，接种于 50 mL 葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经 36±1℃培养 24 h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。
6．3 形态与染色本菌呈球形或卵圆形，直径 0.5～1 μm，链状排列，链长短不一，短者4～8个细胞组成，长者 20～30 个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。
中文名称肠球菌显色培养基
中文名称: 肠球菌显色培养基英文名称：Enterococcus faecium chromogenic medium产品规格：1000ml用途：用于肠球菌的显色培养，肠球菌显红色至紫红色作用:肠球菌显色培养基是公司改良的培养基，用于快速检测食品、水质和环境中的肠球菌。
菌落显红色至紫色，其它菌显无色、黄色或被抑制。
肠球菌显色培养基是用于快速检测食品、水质和环境中的肠球菌。
菌落显红色至紫色，其它菌显无色、黄色或被抑制。
成份(g/L)此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
用法称取本品56.4g，水浴加热溶解于1000ml 蒸馏水中，冷却至45-50℃时，倾入无菌平皿，备用。
无需高压灭菌;操作步骤使用前，把制备好的培养基放置室温10-20 分钟。
1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液；2、取样品液1ml加入冷却至45-50℃肠球菌显色培养基中混匀或涂布于平板上；或取样品液划线接种于肠球菌显色培养基上；3、36℃培养24～48h，选用有30～200 个菌落的平板，计数平板上出现的红色至紫色菌落。
质量控制1、外观此干燥培养基的粉末均匀，具有良好的流动性，呈淡黄色至乳白色。
制备好的平板呈透明淡黄色培养基。
2、微生物试验在36℃培养24-48h：典型特征典型菌落为红色至紫色。
贮存制备好的平板应立即使用，应避免光线直接照射。
干燥培养基应放置于阴暗干燥处，保存温度2-8℃，注意避光保存。
失效干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
注意此培养基仅供实验室使用。
肠球菌显色培养基的微生物灵敏度试验:按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养24-48小时。
注：回收率计算时，用TSA琼脂做对照培养基。
肠球菌、溶血性链球菌和粪链球菌检验培养基
葡萄糖肉浸液肉汤Dextrose Meat Infusion Broth 用途：用于溶血性链球菌的增菌培养Pick ' s Broth BaseA用途：用于溶血性链球菌的增菌培养pH 值7.3-7.5 25 C原理：胰蛋白胨、牛心浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子；脱纤维兔血〔或羊血〕为溶血性链球菌提供大量生长因子；结晶紫和叠氮钠为选择性抑菌剂。
用法：称取本品，加热溶于1000ml蒸馏水中，分装,121 C高压灭菌15分钟，冷至50C左右时，参加脱纤维羊血，混匀。
质量控制：在36 ±1 C培养18-24小时。
Meat Infusion Broth用途：用于溶血性链球菌、蜡样芽抱杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养〔GB标准〕配方：〔g/L〕原理: 蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；磷酸氢二钾为缓冲剂；氯化钠可维持均衡的渗透压。
用法：称取本品，溶解于1000ml蒸馏水中,121C高压灭菌15分钟，备用质量控制：在36 ±1 C培养18-24小时。
Azide Dextrose Broth 用途：用于链球菌的增菌培养用途：用于链球菌的增菌培养KF Streptococcus Agar 用途：用于链球菌的选择性别离及计数〔GB、SN标准〕肠球菌琼脂胆盐-七叶苷-叠氮钠琼脂Enterococcus Agar(Bile Esculin Azide Agar) 用途：用于食品和水中肠球菌的计数CATC Agar用途：用于食品和饮料肠球菌的别离培养Bile Esculin Agar 用途：用于肠球菌和肠道致病菌的别离培养配方：〔g/L〕Columbia Blood Agar Base 用途：营养非常丰富，用于各种细菌的根底培养基用法：称取本品39克，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装，121 C高压灭菌15分钟，冷至45-50'C左右时, 参加相当于20mg庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素，混匀，倾入无菌平皿。
粪肠球菌粪链球菌使用说明
放置会导致菌种衰退；
2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；
3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才
能正常生长；
4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时 来电询问； 5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌 氧状态；培养过程中亦要保持厌氧状态； 6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要 5-‐10%CO2 促 进生长； 7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。 8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。 保 藏 条 件 ： -‐20℃保存（复溶液于 2-‐8℃保存） 保 藏 时 间 ： 2-‐10 年，应根据菌种状况及时转接
保存方式： 30%甘油，-‐80℃
操作说明：
1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面
蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次
数的增加，细菌的活力会逐渐下降。
粪肠球菌粪链球菌
编号
名称
北京华越洋生物 NRR00300
粪肠球菌粪链球菌
基 本 信 息 ：
名称：粪肠球菌粪链球菌
规格：300ul 甘油菌
中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌 株 复 壮 ：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培
养。细菌在 30-‐35℃培养箱中培养 24-‐48h，真菌在 23-‐28℃培养箱中培养
24-‐72h（必要时，可适当延长培养时间）。
储存温度：-‐80℃
不同培养基对肠球菌的检测效果比较
农产 品加工 ・ 学刊 Ａ ａ ｅ ｃＰ ｒ ｄｃｌ ｆ ａｍ ｒｄ ｃ ｒｃｓｉｇ ｃｄｍｉ ｅｉ ｉ ｒ Ｐｏ ｕｔ Ｐｏｅｓ ｏ ａ ｏＦ ｓ ｎ
Ｎｏ １ ．
Ｊ ｎ ａ．
文 章 编 号 ：１７ — ６ Байду номын сангаас （０ ２ ０ — １９ ０ ６ １９ ４ ２ １） １ ００ — ２
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Ｊ ｕ－ ｉ ， Ｓ Ｉ ｉ － ｕ ， Ｓ ｅ－ ａｇ Ｇ ｉ －ｉｇ Ｓ Ｎ ａ ｗ ｉ Ｕ Ｈ ｉｐ ｇ ｎ Ｈ ａ ｈ ａ Ｕ Ｆｎ ｈｎ ， ＥＱｎ ｙ ， Ｏ Ｇ Ｂ ｉ ｅ Ｊｎ ｇ ｎ －
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和准 确 性 。 关键词 ：肠球菌 ；培养基 ；最近似值测定法
中图分类号 ：Ｑ ３３ ２ ９． ３
文献标 志码 ：Ａ
ｄ ｉ ０３ ６￣ｓｎ１７ — ６ ６ Ｘ） ０ ２０ ． １ ｏ：１ ． ９ ｉ ．６ １ ９ ４ （ ． １ ．１ ３ ９ ｓ ２ ０
Ｃｏ ｍｐａｉｏ ｆＤｉ ｅｅ ｔＣｕ ｔ ｒ ｄａ ｆｒＤｅｅ ｔｏ ｆＥｎｅ ｏ ｏ ｃ ｒｓ ｎ ｏ ｆ ｒｎ ｌｕ ｅ Ｍｅ ｉ ｏ ｔｃｉｎ ｏ ｔｒｃ ｃ ｉ ｆ
粪链球菌及检验
粪链球菌及检验一、生物学性状依据最新分类原则，粪链球菌又叫粪肠球菌。
应用C多糖抗原，依据兰氏（Lancefield）血清学分类，可将链球菌分成很多群。
粪链球菌属于D群。
D群链球菌分肠球菌和非肠球菌两类。
前者包括粪链球菌（S.faecalis）、屎链球菌（S.faecium）和坚忍链球菌（S.durans）,后者有牛链球菌（S.bovis）和马肠链球菌(S.equinus)。
粪链球菌菌形圆或椭圆，可顺链的方向延长,直径0.5-1.0微米,大多数成双或短链状排列,通常不运动。
在丰富培育基上菌落大而光滑，直径1-2mm，全缘，罕见色素。
其养分要求低，在一般养分琼脂上也可生长。
能在10℃或45℃ pH 9.6或含6.5%NaCl肉汤培育基中生长，并能耐65℃ 30分钟。
它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。
在简洁的培育基上生长不需叶酸。
近年来，DNA-DNA杂交结果显示，肠球菌与链球菌属同源程度低，故有学者建议另立肠球菌属，与人类有关者为粪肠球菌（E.faecalis）和屎肠球菌（E.faecium）。
二、致病性粪链球菌引起的感染有尿路感染、化脓性腹部感染、败血症、心内膜炎和腹泻发烧等。
其中败血症最常继发于生殖泌尿性感染，皮肤、胆道、肠道等感染也可作为原发病灶。
从自然乳清培育物中分别的菌株，能产生一种细菌素，叫肠球菌素（Enterocin），对单增李斯特氏菌有杀灭作用。
三、流行病学粪链球菌为条件致病菌，它来源于人和温血动物的粪便，间或消失于感染的尿道及急性心内膜炎。
它能够通过食品对人类造成感染，因而常见于很多食品，如火腿肠、炸肉丸、布丁及经过巴氏消毒的牛奶等，粪链球菌进入食物链的主要缘由是不卫生的加工条件所致的，一般与直接的粪便感染无关。
粪链球菌引起的感染大多是由于它的侵袭所造成，感染剂量较高，一般大于107个细菌。
人、禽感染率最高，亦见于猪、牛、马、山羊、绵羊及兔。
四、检验与掌握1、检验：样品制备取25g或25mL样品，放入225mL灭菌生理盐水中，充分混匀，制成1：10样品稀释液。
链球菌、肠球菌
3、生化反应： （1）触酶试验：肠球菌属为阴性反应。 （2）胆汁-七叶苷试验： 原理：培养基的胆汁对某些细菌有抑 制作用，只有既能在胆汁中生长，又能水 解七叶苷的细菌才能表现出对七叶苷的水 解活性。肠球菌能在胆汁中生长，并水解 七叶苷，使培养基变黑。
方法：将被检菌1~3个菌落接种于胆汁-七叶 苷琼脂培养基，35℃孵育18~24h。 结果：细菌生长，且培养基变黑色或棕褐色 为阳性，不变色为阴性。肠球菌为阳性。
CAMP试验
原理：B群溶血性链球菌能产生CAMP因子， 该物质可促进金黄色葡萄球菌β溶血素的活性，故 在血琼脂平板上两菌交界处溶血能力增强，形成 箭头状透明溶血区。 方法：在羊血琼脂平板上，用金黄色葡萄球菌 划种一条横线，在将被检菌距金葡菌接种线3mm 处直角接种一短线，35℃培养18-24h观察结果。同 时设阳性对照和阴性对照。
求高，兼性厌氧。初 次分离需提供5%-10% 的CO2。 18-24h后血平板上形 成灰白色、圆形、针 尖样的菌落。菌落周 围有草绿色溶血环。
S. pneumoniae
肺炎链球菌
S. pneumoniae
培养特性：培养48h
后，菌落有自溶现象， 菌落的中心会出现凹 陷，像“肚脐”称脐 状凹陷。
肺炎链球菌
链球菌的溶血性
β溶血性链球菌
2、形态观察 涂片、革兰氏染色镜检，记录镜下 细菌染色性、大小、形态、排列及荚 膜。
肺炎链球菌
S. pneumoniae
形态与染色：G+球菌,矛头
状 ,成双排列，宽端相对 ，尖端向外,有荚膜
肺炎链球菌革兰染色有荚膜
肺炎链球菌荚膜染色特点
肺炎链球菌
培养特性：营养要
主要生化反应
S. pneumoniae
链球菌及肠球菌鉴定说明
链球菌及肠球菌鉴定试剂使用说明书 3.4【原理】：本试剂盒用于体外标本中细菌（链球菌及肠球菌）的鉴别培养。
【试剂盒组成】：① 10或20个鉴定板(培养基) ② 10或20张结果记录单。
③操作说明书1份【本试剂盒所需显色试剂及配制方法】： VPⅠ：5% α-萘酚无水乙醇溶液。
VPⅡ：40% KOH水溶液。
【贮存及效期】：2-8℃贮存，效期见外标签。
【操作】：1.菌落的选择●根据革兰氏染色，触酶等确定菌株属链球菌科。
记录溶血类型（这组成第22个测试结果）。
●挑取单个菌落在哥伦比亚羊血琼脂平板上均匀涂抹整个表面。
(如疑为肺炎链球菌应涂2个平板最合适)●根据菌株生长条件在厌氧或好氧条件下于35-37℃培养18-24小时。
注：一般菌在培善24小时后可产生足够大的菌落。
有些菌落太小应培养48小时后才选择菌落。
对营养苛求菌(在48小时后只产生小菌落)，应将培养菌落种于1ml增菌培养基中，置35-37℃培养5小时。
用整个培养物注入哥伦比亚羊血琼脂平板上。
2.接种●取出试验板条，平衡于室温。
在鉴定试条伸出的边沿处标上菌株编号。
●取无菌蒸馏水3ml，将培养18-24小时的目的菌洗脱下来,制成菌悬液，使其浊度相当于4号McFarland标准浊度。
●将调制好的菌悬液按每孔100ul，加入试验板条中。
除VP孔外，每孔滴加液体石蜡2滴覆盖。
（为防止VP孔蒸干，可在未加试剂的三个孔中各加蒸馏水100-200ul）●盖上盖子，放35～37℃孵育18～24小时，取出按判读标准判读自然发生的结果和加入反应试剂后出现的结果（滴加VP试剂于相应孔中观察），并记录在记录单上。
●将反应结果输入计算机BIO-KONT STREP软件得到鉴定结果。
使用后的所有的玻璃管、玻璃片、吸头、试条及试验纸条等均须高压灭菌处理。
【质量控制】：为保证试验条的质量试验板条启封后应保持干燥，尽量无菌操作。
BIO-KONT STREP试剂盒的质量检查推荐用以下菌株进行。
溶血性链球菌的检验
食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵 袭性酶有关，主要有以下几种： 1、溶血素 2、致热外毒素 3、透明质酸酶 4、链激酶 5、链道酶 6、杀白细胞素 抵抗力： 60℃30min即被杀死，对常用消毒剂敏感。 乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、 磺胺均敏感。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微1、革兰氏染色，阳性，G+链状排列，符合者可做生 化鉴定。 2、生化鉴定 （1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验） 吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水， 混匀，再加入链球菌18-24h36±1℃肉浸液肉汤培养 物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，置于 36±1℃水浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块 重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不 溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已 知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。
溶血性链球菌检验
二、流行病学与致病性
溶血性链球菌在自然界中分布较广，存 在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物 的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、 空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染， 被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对 人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化 脓性感染部位常成为食品污染的污染源。
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食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
第一天 样品处理和增菌培养
第一天前半天 规格名称 预先准备并灭菌的器材 数量
1、500mL广口瓶 2、13×100mm试管 3、10mL移液管 4、5mL移液管 5、1mL移液管 6、直径为90mm平皿 7、250mL量筒
微生物检验实验室链球菌属标准操作规程
微生物检验实验室链球菌属标准操作规程1. 概述链球菌是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。
该菌属种类繁多，目前临床上仍延用Lancefield血清学方法进行分群（A、B、C、D、F、G群），或根据溶血现象（β溶血、α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血）进行分类。
2.标本类型血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。
3.鉴定3.1 形态与染色：革兰阳性球菌，固体培养基上单个或成双排列，较少呈链状排列；肉汤培养基中呈长链排列；从脓液、尿液和痰液等标本直接涂片镜检，呈单个、成双或短链排列。
3.2 培养特性：在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应：a溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环；B溶血周围有明显较大的完全透明环；。
溶血（不溶血）无异常变化。
周围有灰绿色的狭窄溶血环；肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿色溶血环。
3.3 生化反应：触酶试验阴性，对各种碳水化合物的分解因菌种而异，链球菌不被胆汁溶解。
肺炎链球菌分解菊糖，胆汁溶菌试验阳性，Optochin试验敏（抑菌环>14mm）。
3.4 鉴别要点3.4.1 本菌特征：革兰阳性球菌，单个、成双或链状排列，菌落较小、可出现：a溶血、B溶血或不溶血，触酶试验阴性。
3.4.2根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群：A群链球菌（化脓性链球菌）：β溶血，杆菌肽敏感。
B群链球菌（无乳链球菌）：β溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验阳性。
C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：CAMP试验、马尿酸钠、65g/L氯化钠耐盐试验均为阴性，杆菌肽耐药（抑菌试验阴性）。
D群非肠球菌（马肠链球菌、牛链球菌、变形链球菌等）：胆汁七叶苷试验阳性，65g/L氯化钠耐盐试验为阴性。
D群肠球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌和坚忍肠球菌等）：胆汁七叶苷、65g/L氯化钠耐盐试验阳性，45℃生长。
现归属于肠球菌属。
C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。
肠球菌属的鉴定要点
肠球菌属的鉴定要点
肠球菌属的鉴定要点
肠球菌属（Enterococcus）是革兰阳性球菌的一类，是一些重要且广泛存在于人和动物肠道中的细菌。
此类细菌是病原菌和医院感染的主要来源之一，因此对于肠球菌属的鉴定显得尤为重要。
本文将从形态特征、生理生化特性以及分子生物学方法等方面介绍肠球菌属的鉴定要点。
形态特征
从形态特征方面，肠球菌属的细菌在革兰染色结果中通常呈现革兰阳性，球形或椭圆形，直径一般为0.5-1.5 μm，有一定的链状或成对排列现象。
在培养基上进行培养时，其菌落呈灰白色或白色，表面多呈平坦或凹陷状，粘度较高，可形成微嗅气味。
生理生化特性
除了形态特征外，还可通过生理生化实验鉴定肠球菌属。
在营养需求方面，肠球菌属偏爱碱性环境，常常能够生长在高盐分和多种碳源的基础培养基中，低温、低氧和高CO2浓度的环境中也可适应生长。
在酶学反应方面，肠球菌属是鲜奶酪加工过程中极为常见的乳酸菌，表现出强烈的产酸、产气和哑巴菌特性。
分子生物学方法
除了生理生化实验外，分子生物学方法也成为肠球菌鉴定的一种新的手段，比如PCR扩增和16S rRNA基因测序等方法。
这些方法的出现对于鉴定肠球菌属的种类和种群密度起到了很大的帮助，同时也大幅度增加了鉴定的准确性。
在进行PCR扩增时，常常会采用16S rRNA 基因作为检测的目标基因，从而通过对其序列的分析来进行细胞种类的识别。
总之，对于肠球菌属的鉴定来说，在形态特征、生理生化特性以及分子生物学方法方面都有着相应的鉴定要点。
我们需要结合多种方法进行鉴定，从而保证准确性和精度。
同时也需要注意防止肠球菌的传播和感染，保障我们的健康和生命安全。
肠球菌的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习肠球菌的分离与培养方法。
2. 掌握肠球菌的形态、培养特性及生化反应。
3. 提高微生物实验技能。
二、实验原理肠球菌是一种革兰氏阳性球菌，广泛分布于自然界、动物体内和人类肠道中。
肠球菌对多种抗生素有抵抗力，是医院感染的重要病原菌之一。
本实验通过分离培养肠球菌，观察其形态、培养特性及生化反应，以鉴定其种类。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 肠道内容物- 生理盐水- 0.1%氯化钠溶液- 1%氢氧化钠溶液- 5%硫酸铜溶液- 10%氯化钠溶液- 2.5%碘酊- 生理盐水- 水浴锅- 培养皿- 移液器- 显微镜- 细菌培养箱- 酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒2. 实验仪器：- 电子天平- 高压蒸汽灭菌器- 离心机- 培养箱- 移液器- 显微镜四、实验方法1. 样品处理：- 取适量肠道内容物，加入生理盐水，充分混匀。
- 将混合液进行10倍稀释，取适量稀释液加入0.1%氯化钠溶液中，制成悬液。
2. 分离培养：- 将悬液涂布于含有0.1%氯化钠溶液的平板上，37℃培养24小时。
- 观察菌落特征，挑取典型菌落进行进一步鉴定。
3. 形态观察：- 将菌落制成涂片，进行革兰氏染色，显微镜下观察菌体形态。
4. 培养特性：- 将挑取的菌落接种于生理盐水、0.1%氯化钠溶液、5%硫酸铜溶液、10%氯化钠溶液、2.5%碘酊等培养基上，37℃培养24小时，观察菌落生长情况。
5. 生化反应：- 对挑取的菌落进行触酶试验、氧化酶试验、葡萄糖发酵试验、乳糖发酵试验等生化反应，以鉴定其种类。
6. 肠球菌鉴定：- 使用ELISA试剂盒对分离得到的菌进行肠球菌检测。
五、实验结果1. 样品处理：肠道内容物悬液呈均匀乳白色。
2. 分离培养：平板上出现圆形、光滑、边缘整齐、白色、直径约为1mm的菌落。
3. 形态观察：菌体呈球形，革兰氏染色呈阳性。
4. 培养特性：在生理盐水、0.1%氯化钠溶液、5%硫酸铜溶液、10%氯化钠溶液、2.5%碘酊等培养基上均能生长。
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葡萄糖肉浸液肉汤
Dextrose Meat Infusion Broth 用途：用于溶血性链球菌的增菌培养
匹克氏肉汤基础A
Pick’s Broth BaseA
用途：用于溶血性链球菌的增菌培养
肉浸液肉汤培养基
Meat Infusion Broth
用途：用于溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养（GB标准）
叠氮钠葡萄糖肉汤
Azide Dextrose Broth 用途：用于链球菌的增菌培养
乙基紫叠氮钠肉汤用途：用于链球菌的增菌培养
KF链球菌琼脂
KF Streptococcus Agar 用途：用于链球菌的选择性分离及计数（GB、SN标准）
肠球菌琼脂(胆盐－七叶苷－叠氮钠琼脂)
Enterococcus Agar(Bile Esculin Azide Agar) 用途：用于食品和水中肠球菌的计数
CATC琼脂
CATC Agar
用途：用于食品和饮料肠球菌的分离培养
胆盐七叶苷琼脂
Bile Esculin Agar 用途：用于肠球菌和肠道致病菌的分离培养
哥伦比亚血琼脂基础
Columbia Blood Agar Base 用途：营养非常丰富，用于各种细菌的基础培养基
LIM培养基
LIM Medium 用途：用于链球菌的分离培养（Japan方法）
BETA-SSA琼脂
BETA-SSA Agar
用途：用于链球菌的选择性分离培养
粪肠球菌琼脂
Enterococcus faecalis Agar 用途：用于粪肠球菌的选择性分离
配方：（g/L）
月示胨
麦芽糖
酵母浸粉
甘油磷酸钠
氯化钠
乳糖
溴甲酚紫
叠氮钠
TTC
琼脂
pH值7.2 ± 0.2 10.0 20.0 10.0 10.0 5.0 1.0 0.015 0.4 0.1 13.0
缓冲蛋白胨水
Buffered Peptone Water 用途：用于阪崎杆菌前增菌培养（GB2008标准）
胆汁液态培养基
Bile broth
用途：用于粪链球菌的胆汁耐受试验。
M-肠道菌琼脂
M-Enterococcus Agar
用途：用于水中或其它物质中肠球菌分离培养和计数（滤膜法或划线法）
THB培养基
THB Medium
用途：用于链球菌增菌培养
PS琼脂
PS Agar 用途：用于消化球菌的培养
配方：（g/L）
蛋白胨
牛肉浸粉
酵母浸粉
葡萄糖
半胱氨酸盐酸盐氯化钙
硫酸镁
磷酸氢二钾
磷酸二氢钾
碳酸氢钠
氯化钠
吐温80
琼脂10.0 3.0 3.0 2.0 0.5 0.008 0.008 0.04 0.04 0.4
0.08
1.0 13.0
原理：
肠球菌肉汤
Enterococcus Broth 用途：用于肠球菌增菌培养
脑心浸液肉汤（BHI）
Brain Heart Infusion Broth 用途：用于细菌的增菌培养
脑心浸萃液肉汤
Brain Heart Infusion Broth 用途：用于营养苛求细菌的增菌培养
脑心浸液琼脂（BHIA）
Brain Heart infusion Agar 用途：用于营养苛求细菌的增菌培养
Pfizer肠球菌选择性琼脂（PSE琼脂）
Pfizer Enterococcus Selective Agar 用途：用于粪链球菌的选择性分离和计数（SN标准）
MEI培养基
MEI Medium 用途：用于一步滤膜法显色检测或计数水中的肠球菌。