高产纤溶酶菌株的筛选及鉴定 (1)
高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达
高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达引言：纤溶酶是一种重要的酶类，能够降解纤维素生物质，具有广泛的应用前景。
筛选和克隆高活性纤溶酶菌株成为研究的重要方向。
本文将探讨一种高活性纤溶酶菌株的筛选方法，并介绍其基因克隆表达的技术。
一、高活性纤溶酶菌株的筛选方法1. 环境样品的收集与处理需要采集有可能存在纤溶酶菌株的环境样品，如土壤、沉积物等。
然后，将样品进行过筛处理，以去除较大颗粒物和杂质，得到较为纯净的菌种样品。
2. 纤溶酶的活性测定利用碳水化合物基质（如CMC）来检测样品中纤溶酶的活性。
将样品与基质混合后，在一定温度下反应一段时间，然后通过添加酚红指示剂来判断样品中是否产生了纤溶酶。
3. 分离纯化菌株通过向含有纤溶酶活性的样品中接种在有选择性培养基上，将含有纤溶酶菌株的单个菌落分离出来。
然后，通过连续传代培养，筛选出纤溶酶活性较高的菌株。
4. 提取基因组DNA采用常规方法，从筛选出的纤溶酶菌株中提取出基因组DNA。
5. 纤溶酶基因的聚合酶链式反应（PCR）扩增根据已知的纤溶酶基因序列，设计特异引物进行PCR扩增，以获得纤溶酶基因的DNA片段。
二、纤溶酶基因的克隆表达1. DNA片段的连接和克隆将纤溶酶基因的PCR产物与适当的载体（如pET、pUC等）进行连接，并转化到大肠杆菌中，形成重组菌株。
2. 重组菌株的筛选与鉴定通过对重组菌株进行抗生素筛选、PCR扩增和限制性酶切等方法，筛选出含有纤溶酶基因的目的菌株，并进行序列分析以确保基因的准确性。
3. 表达载体构建与转化将已验证的含有纤溶酶基因的重组质粒进行扩增放大，并用合适的浓度导入宿主菌株中。
4. 培养与诱导表达将含有重组质粒的宿主菌株进行培养，并在适当的时间和条件下通过添加诱导剂（如IPTG）来诱导基因的表达。
5. 纤溶酶表达产物的纯化与活性鉴定通过离心、层析等技术手段，将纤溶酶表达产物从培养物中分离纯化，并进行活性测定。
结论：通过以上筛选和克隆表达方法，可以得到高活性的纤溶酶菌株，并实现其基因的克隆表达。
高产纤维素酶菌的筛选Doc1
纤维素酶高产菌株选育研究进展指导老师：梁智群学生：郭法谋班级: 08级发酵工程学号: 0813303002纤维素酶高产菌株选育研究进展郭法谋（广西大学生命科学与技术学院，广西南宁 530005）摘要：纤维素酶在经济上的可行性主要是受到纤维素酶成本的限制,因此筛选出产高活性纤维素酶的菌株是开发利用纤维素资源的前提和关键。
本文总结了纤维素酶高产菌选育的国内外研究进展，以及诱变育种、原生质体融合技术育种、纤维素酶基因克隆的国内外研究现状，对今后纤维素酶高产菌的选育研究发展趋势做了全面的分析和综述。
关键词：纤维素酶；诱变育种；原生质体融合；基因克隆Mutation Breeding of Cellulase HighProducing StrainGUO Famou(College of Life Science and Technology Guangxi University Nanning530005 China)Abstract:The cost of the cellulase is the mainly restrictions if it is viability in the economic, Therefore, screening high activity cellulase producing strain is a prerequisite and key resources for development and utilization of cellulose.This paper summarizes the bacteria breeding high-yield cellulase research at home and abroad, as well as mutation breeding, protoplast fusion breeding, gene cloning cellulase research at home and abroad In the current,for future high-yield cellulase Breeding Research and Development has done a comprehensive analysis of trends and synthesis. Keywords:cellulase；breeding; Protoplast fusion; Cloning纤维素酶在饲料、酿造、粮食加工、果汁与蔬菜加工、纺织等各个方面都具有重要的用途。
高产纤溶酶突变株的筛选及发酵条件的优化
高产纤溶酶突变株的筛选及发酵条件的优化
单金津;李靖圆;谢和
【期刊名称】《贵州农业科学》
【年(卷),期】2013(041)006
【摘要】为给纤溶酶的开发应用提供理论依据,以解淀粉芽孢杆菌GZJSI-12为出
发菌株,对高产纤溶酶突变株进行了筛选,并优化了发酵条件.结果表明:经紫外线和2.5％硫酸二乙酯复合诱变获得稳定突变株GZJSI-12-1,菌株产酶活力达1
593.591IU/mL,是出发菌的2.22倍.最佳发酵条件为pH(灭菌前)9.5、接种量6％、装液量30mL/250mL.活力回收率为6.30％,纯化倍数为7.90,比活为
6383.06IU/mg.
【总页数】5页(P110-114)
【作者】单金津;李靖圆;谢和
【作者单位】贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学生命科学学院,贵
州贵阳550025;贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025
【正文语种】中文
【中图分类】S154.34
【相关文献】
1.高产纤溶酶霉菌固体发酵工艺条件的优化 [J], 闵伟红;李佳;王影;张锦玉;李玉
2.角质酶产生菌Thermobifida fusca WSH03-11诱变及高产突变株发酵条件优化[J], 张守亮;陈坚;华兆哲;堵国成
3.纤溶酶高产菌株筛选及其液体发酵条件研究 [J], 周伏忠;贾蕴莉;陈国参;谢宝恩;王红云
4.高产纤维素酶突变株的筛选及其产酶条件优化 [J], 邹宗胜;王婧雅;赵运英;毛银;邓禹
5.枯草芽孢杆菌产生在β－葡聚糖酶的研究：高产突变株CW－06的选育及其发酵条件的优化 [J], 黄为一;吴江;陈代杰
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高产纤维素酶菌的筛选、鉴定及应用概述
农家参谋科技研究-220-NONG JIA CAN MOU高产纤维素酶菌的筛选、鉴定及应用概述王琪（河南师范大学生命科学学院，河南新乡，453007）【摘 要】纤维素作为自然界最丰富的可再生资源之一，具有易获得、廉价等优点。
近年来，随着全球经济的迅速发展，能源消耗巨大，地球环境遭到严重破坏；因此，寻找可再生的清洁能源迫在眉睫，所以高产纤维素酶菌的筛选、鉴定及应用得到了人们广泛的关注，也是当今微生物学、农业科学、生态学的研究热点。
本文对之前高产纤维素酶菌的筛选、鉴定及应用的研究进行进行整合归总，展望今后的研究方向。
【关键词】高产纤维素；酶菌；筛选；鉴定1 高产纤维素酶自然界中纤维素广泛存在，但是降解过程生产成本高、环境污染问题，效果不理想。
经大量研究发现，纤维素酶是酶的一种，能够有效降解纤维素。
纤维素酶广泛存在于自然界的生物体中。
细菌、真菌、动物体内等都能产生纤维素酶，所以近年来各界学者致力于筛选及鉴定高产的纤维素酶菌的研究。
2 高产纤维素酶的筛选与鉴定经查阅资料与分析，从一定地区取样如：土样、常年堆积干枯腐败植物茎秆、东亚飞蝗肠道内等；取一定量样品在三角瓶中富集培养；先梯度稀释，然后通过常规的稀释法或划线法接种涂布于马铃薯平板与牛肉膏蛋白胨分离培养基之上，37℃恒温培养24d,菌落计数,然后挑选菌落形态差异比较明显的菌落,重复划线接种于相应的琼脂平板上,直至纯化得到单菌落。
根据菌落形态观察，保存不同种的菌落，利用牙签蘸取菌落，放入离心管进一步富集；之后取富集液滴在圆形滤纸片上然后分别接种与刚果红培养基，保持对应关系，进行培养；继而用游标卡尺测量菌落周围水解透明圈的直径,并以其大小作为初步判断分解能力的指标；接下来把筛选出的菌株用单染色法、复染色法和指纹代谢法进行初步确定菌株类别；最后用16SrDNA 鉴定，通过PCR 电泳比对后送公司进行测序；确定菌株后进行酶活测定以及优化其酶活力的条件探究。
目前经大量实验，从陕北花马盐湖分离得到一株黑曲霉Aspergillusniger6MA1，发酵条件优化后酶活可达到47.8U/mL；从常年堆积干枯腐败植物茎秆中筛选出一株肠杆菌属Enterobactersp，在未进行发酵条件优化的情况下酶活达到为0.44u/mL；从湿润木屑中分离和筛选获得１株高产纤维素酶目的菌株ＬＹＷ－１等。
产纤维素酶菌种的筛选与优化
产纤维素酶菌种的筛选与优化一、菌种筛选的原理与方法菌种筛选的原理是通过筛选产纤维素酶活性高、产量大的菌种。
常用的菌种筛选方法有以下几种：1.传统菌种筛选：分离环境中的纤维素降解菌株，通过纤维素酶活性测定筛选产纤维素酶能力较强的菌株，再通过多次温育和活性测定，逐步筛选出高活性的菌株。
2.显性菌种筛选：利用纤维素酶结构上保守的区域设计引物，在环境DNA中扩增出纤维素酶基因片段，使用这些基因片段进行克隆构建，然后在宿主中进行表达，通过纤维素酶活性测定筛选产纤维素酶能力较强的菌株。
3.基因工程菌种筛选：利用已知纤维素酶的基因进行基因工程，通过载体导入宿主细胞中，通过外源表达基因，从而获得产纤维素酶菌种。
二、菌种优化的原理与方法菌种优化的原理是通过改变菌株基因组或环境条件，提高纤维素酶产量和活力。
常用的菌种优化方法有以下几种：1.自然进化优化：通过长期培养，逐渐挑选出产酶能力强、极端环境适应能力强的突变菌株。
2.诱变优化：利用物理、化学或基因工程等方法对菌株进行诱变，通过筛选获得产纤维素酶能力强、菌株稳定的变种。
3.基因工程优化：利用已知纤维素酶的基因进行基因编程，通过基因工程技术对菌株基因组进行改造，以提高纤维素酶的产量和活力。
三、未来的研究方向1.菌种筛选方法的改进与创新：应综合运用传统筛选、显性筛选和基因工程筛选等方法，发展新的高效、快速的菌种筛选方法。
2.菌种优化技术的优化与提高产量、活性：要通过生理、代谢工程的方法改造纤维素酶产生菌，提高纤维素酶的产量和活力。
3.开发新型纤维素酶菌株：从不同环境中分离筛选出产酶能力强的菌株，进一步发现和研究产纤维素酶的新菌株。
4.提高纤维素酶产量与废弃物转化率的研究：将纤维素酶应用于废弃物转化过程，提高纤维素酶产量和转化率。
综上所述，产纤维素酶菌种筛选与优化的研究是促进纤维素酶应用的关键。
通过不断改进筛选和优化方法，进一步开发新的菌种，提高纤维素酶的产量和活力，将对纤维素酶的应用产生积极的推动作用。
纤维素酶高产菌株的选育
纤维素酶高产菌株的选育
纤维素酶是一种能够分解纤维素的酶，对生物质的利用具有重要意义。
选育纤维素酶高产菌株是提高纤维素酶生产效率的关键。
以下是一些选育纤维素酶高产菌株的常用策略和方法：
1. 采用自然筛选法：从自然环境中采集植物残渣、堆肥等具有高纤维素含量的样品，通过培养和筛选获取纤维素酶高产菌株。
这种方法的优势是能够发现具有适应性强、高纤维素酶产量的菌株。
2. 遗传工程法：通过对已知具有高纤维素酶产量的菌株进行基因工程改造，引入其他有利于纤维素酶产量提高的基因或突变体。
3. 诱变法：通过化学物质（如EMS、亚硝酸钠等）或辐射（如紫外光、X射线等）处理菌株，诱发基因突变，筛选出纤维素酶高产突变菌株。
4. 基因筛选法：通过分析纤维素酶基因的表达水平和调控机制，筛选具有高纤维素酶基因表达水平和调控机制的菌株。
5. 代谢工程法：通过改造代谢途径，优化产生纤维素酶所需的底物和能量供应等因素，提高纤维素酶产量。
以上方法可根据实验室条件和研究目的选择合适的方法进行选育纤维素酶高产菌株。
高产溶纤酶菌株的筛选鉴定及特性研究
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｎ ｉｅ ｓｒ ｃ ： ｎ Ｂａ ｉ ｕ ｓ ｂ ｌ ｉ ｓｒ ｉ ｓ ｃ ｌ ｓ ｕ ｉ ｔｓ ｔａｎ ｗｉ ｈ ｇ ｆｂ ｉ ｏ ｙ ｉ ｅ ｚ ｍｅ ｃ ｉｉｙ ｌ ｉ ｔ ｈ ｉ ｈ ｉｒｎ ｌｔｃ ｎ ｙ ａ ｔｖｔ ｗｅ ｅ ｃ ｅ ｎ ｄ ｎ ｒ ｓ ｒ ｅ ｅ ａ ｄ
ｃ ａ ａ ｔ ｒｓｉ ｓｏ ｒ ｗｔ ， ｒ ｄ ｃ ｎ ｂ ｉ ｏ ｙ ｉ ｎ ｌ ｃ ａ ｙ ａ ｅ ｏ ｗｅ ｅ ａ ｓ ｎ ｅ ｔｇ ｔ ｄ ｈ ｒ ｃ ｅ ｉｔ ｆ ｏ ｈ ｐ ｏ ｕ ｉ ｇ ｆ ｒｎ ｌ ｓｎ ａ ｄ ｇ ｕ ｏ ｍ ｌ ｓ ｆ ｃ ｇ ｉ ＢＳ１ ｒ ｌｏ ｉ ｖ ｓｉ ａ ｅ ．
１ （ ：５ ￣ ６ ８ ５） ９ ３
Ｏｃ ２ ０ ｔ０６
１ ０月
文 章 编 号 ： １０ － ０ ０２ ０ ）５０ ５ －５ ０ ２ ２ ９ （０ ６０ －０ ９０
高产 溶纤 酶菌株 的筛 选鉴 定及特性 研 究
郭德 军，邓景致 ，王欣
（ 龙江 八一 农 垦大学 食品 学 院， 大庆 １３ １ ） 黑 ６ ３ ９
纳 豆 激 酶 （ ａ ｔ ｋ ｎ ｓ ）是 由 日本 学 者 须 见 洋 行 …在 １７ Ｎ ｔ ｏ ｉａ Ｐ ９ ８年 首先 从 纳 豆 中发 现 的 一 种 丝 氨 酸
蛋 白酶 ，该酶不 仅具有 明显的溶栓活性 ，还可 以激活体 内的纤溶酶原 ，从而可增加 内源 性溶纤酶 的 量 。 目前 ，临床 上 用 于 治疗 心 脑 血 管 栓 塞 的 药 品 如 尿 激 酶 （ Ｋ 、 链 激 酶 （Ｋ 、ｔ ｏ ｈ ｍ ｉａ ｃ ａ ａ ｔ ｒｓｉｓ ｔ ｅ ｉ ｃ ｅ ｃ ｌ ｈ ｒ ｃｅ ｉｔｃ ， ｈ Ｂａ ｉ ｕ ｓ ｂ ｌ ｉ ｓｒ ｉ ｓ ｃ ｌ ｓ ｕ ｉ ｔｓ ｔａｎ ｗｅ ｅ ｉｅ ｔ ｉｄ Ａ ｍｏ ｇ ｈ ｍ ， ｍ ｅ ｉｍ ｌ ｉ ｒ ｄ ｎ ｉ ｅ ． ｆ ｎ ｔ ｅ ｄｕ ｓ ｐ ｒ ａａ ｔ ｆＢＳ ， ｕ ｅｎ ｔｎ ｓｏ １ ＢＳ ｎ ７ ｏ ｌ ｔｏ ｇ ｙ ｉｈ ｂ ｔ ｈ ｒ ｗｔ ｆｓａ ｈ ｌ ｃ ｃ ｕ ｕ ｅ ｓ Ｉ ｄ ｉｉｎ ３ａ ｄ ＢＳ ｕｄ ｓｒ ｎ ｌ ｎ ｉ ｉ ｔ ｅｇ ｏ ｈｏ ｔｐ ｙ ｏ ｏ ｃ ｓａ Ｔ ｕ ． ｎ ａ ｄ ｔｏ ， ｃ
1株纤溶酶菌株的筛选鉴定及提高产酶量的方法
诱变育种的筛选工作量很大， 且纤维蛋白平 板的制作成本较高， 因此确定一种简单可靠的初 筛方法至关重要。 纤溶酶也是一种蛋白酶，对脱脂 牛奶、酪蛋白也有一定的水解作用，因此采用点种 法，分别以脱脂牛奶、酪蛋白、粗提血纤维蛋白为 培养基主要成分， 以纤维蛋白平板法的测定结果 为标准， 比较这 3 种初筛方法与纤维蛋白平板法 的相关性，以确定一种可靠的初筛方法。 1.9 菌株的诱变及选育
1 材料与方法
1.1 样品采集 本试验样品采自于齐齐哈尔市拜泉县自酿农
家豆酱制品。 1.2 培养基
富 集 培 养 基 ：蛋 白 胨 1%，酵 母 粉 0.5%，NaCl 1%， 粗提血纤维蛋白 0.629%，pH 7.0，108 ℃灭菌 20 min，用于豆酱浸提液的富集培养。
LB 培养基： 蛋白胨 1%， 酵母粉 0.5%，NaCl 1%，pH 7.0，121 ℃灭菌 15 min，用于豆酱纤溶酶产 生菌的培养。
第 11 卷 第 6 期
1 株纤溶酶菌株的筛选鉴定及提高产酶量的方法研究
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时间下的致死率及正、负突变率。 选择正突变率最 高的处理时间作为最佳诱变剂量[15]。 从以最佳诱 变剂量处理所得的突变株中筛选出 H/C 值较大的 菌株， 进一步采用纤维蛋白平板法测定其纤溶酶 活力， 并对纤溶酶活性提高最大的菌株进行遗传 稳定性分析。
54
中国食品学报
2011 年第 6 期
粗 提 血 纤 维 蛋 白 培 养 基 ：0.01 mol/L Na2HPO4，0.001 mol/L KH2PO4， 粗 提 血 纤 维 蛋 白 0.4%，琼脂 2%，pH 7.0，108 ℃灭菌 20 min，用于突 变株的初筛。
泸州老窖大曲中高产纤溶酶菌株的分离及鉴定
酿酒科技 2021 年第 3 期（总第 321 期）• LIQUOR-MAKING SCIENCE & TECHNOLOGY 2021 No.3(Tol.321)17DOI ： 10.13746/j.njkj.2021033泸州老窖大曲中高产纤溶酶菌株的分离及鉴定张立强1 ’2’3，冉茂芳1 ，王松涛1 ’2'3，刘光钱|'2，马卓2，任剑波2，沈才洪1 ’2.3,许涛1，2(1.於州品创科技有限公司，四川泸州646000;2.泸州老窖股份有限公司，四川泸州646000;3.国家固态酿造工程技术研究中心，四川泸州646000)摘要：从泸州老窖大曲中分离纯化得到13株蛋白酶活力较高的微生物，对微生物的菌落形态和细胞形态进行观察，结果表明，这些微生物均为革兰氏阳性芽孢杆菌。
经琼脂糖-纤维蛋白原平板法对 其产纤溶酶活性进行测定，筛选出2株纤溶酶活力较高的菌株：QM 5和Q M 12,纤溶酶活力分别为3711.48 IU/mL ±418.93 IU/mL 和 4270.83 RJ/mL ±563.52 IU/mL 。
对 QM5 和 QM12 进行 VITEK 2 COM- PACT 全自动微生物鉴定、16S rDNA 全序列测定及系统发育树分析，结果表明，菌株QM 5为贝莱斯芽孢杆菌（Sac///i« ve/eze«j/s) ,QM 12为地衣芽抱杆菌（Sac!7/z« //c/iem/ormk)。
芽抱杆菌能够合成多种生理 活性物质■，如活性肽、地衣素和》比嗓类化合物等，在白酒中也有检出，其中地衣素也具有一定的纤溶活 性。
本研究结果有利于揭示白酒的预防动脉粥样硬化等养生保健功能。
关键词：大曲；纤溶酶；分离鉴定；贝莱斯芽孢杆菌；地衣芽孢杆菌中图分类号:TS261.1; TS261.7文献标识码:A文章编号：100卜9286(2021 )03-0017-08Isolation and Identification of Strains with High Yieldof Fibrinolysin from Daqu of Luzhou LaojiaoZHANG Liqiang1，2,3, RAN Maofang1，2, WANG Songtao12,3, LIU Guangqian 12，MA Zhuo2, REN Jianbo2, SHEN Caihong 12 3 and XU Tao 1,2(1 .Luzhou Pinchuang Technology Co. Ltd” Luzhou，Sichuan 646000; 2丄uzhou Laojiao Co. Ltd.，Luzhou, Sichuan 646000;3. National Engineering Research Center of Solid-state Brewing, Luzhou, Sichuan 646000, China)Abstract : 13 microbial strains with high yield of protease were isolated from Daqu sampled in Luzhou Laojiao Distillery. All of them were identified as gram-positive Bacillus strains via colonial and morphological observation. Agarose-fibrin plate method was employed to evaluate the fibrinolysin-producing ability of the isolated strains, and two strains with high yield of fibrinolysin were ob- tained and labeled as QM5 and QM12, with their fibrinolytic activities being 3711.48 IU/mL 土418.93 IU/mL and 4270.83 IU/mL 土 563.52 IU/mL, respectively. Results of physiological and biochemical tests, 16S rDNA sequencing and phylogenetic tree analysis indicated that QM5 was Bacillus velezensis , and QM12 was Bacillus licheniformis . Bacillus strains could synthesize various bioactive substances, including bioactive peptide, lichenysin and pyrazines, which were also detected in Baijiu; lichenysin also exhibited certain fi- brinolytic activity. The results of this study would help to reveal the healthcare function of Baijiu, such as preventing atherosclerosis. Key words : Daqu; fibrinolysin; isolation and identification; Bacillus velezensis \ Bacillus licheniformis血栓疾病是一种由大量纤维蛋白和血小板凝 死、心源性猝死等疾病。
纤维素酶高产菌的筛选和鉴定
纤维素酶高产菌的筛选和鉴定魏亚琴;邵建宁;麻和平;张文齐;杨勇;刘彩云;赵昊星;慕婷婷【摘要】从兰州榆中县兴隆山国家自然保护区采集土样,先用羧甲基纤维素钠刚果红培养基筛选出79株Hc值较大的产纤维素酶菌株,再经液体发酵复筛测CMC酶活和滤纸酶活.结果表明,经复筛后菌株No-15A的纤维素酶活力最高,羧甲基纤维素酶活1 376.20 U/mL,滤纸酶活497.78 U/mL,其粗酶液分解滤纸快速明显,且该菌株生长速度最快,每日菌落直径增长量为4～5 cm.经形态学初步鉴定菌株No-15A 属青霉.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2010(026)005【总页数】4页(P19-21,25)【关键词】纤维素酶;羧甲基纤维素酶活;滤纸酶活;青霉【作者】魏亚琴;邵建宁;麻和平;张文齐;杨勇;刘彩云;赵昊星;慕婷婷【作者单位】甘肃省科学院,甘肃,兰州,730000;兰州大学生命科学学院,甘肃,兰州,730000;甘肃省科学院,甘肃,兰州,730000;甘肃省科学院,甘肃,兰州,730000;甘肃省科学院,甘肃,兰州,730000;南开大学生命科学院,天津,300071;甘肃省科学院,甘肃,兰州,730000;甘肃省科学院,甘肃,兰州,730000;甘肃省科学院,甘肃,兰州,730000【正文语种】中文纤维素是自然界分布最广泛、最丰富、最廉价的多糖物质，是植物细胞壁主要成分［1］，也是地球上年产量最大，具有巨大潜力的可再生天然资源。
据估计，纤维素生成量每年高达1 000多亿t，中国每年农作物秸秆总产量为7亿多t，仅农业生产中形成的农作物残渣，如稻草、玉米秸、麦秸，每年就5亿t之多［2］，目前这些资源大部分通过简单焚烧，在浪费能源的同时也对环境造成污染。
随着石油、煤炭、天然气等不可再生资源日渐耗竭，有效转化，科学利用数量极其庞大的纤维素资源具有广阔的前景［3］。
利用纤维素酶水解纤维素成葡萄糖并进一步发酵转化成燃料乙醇、SCP饲料蛋白和各种平台化合物等，对缓解全球能源危机、饲料资源和化工原料紧张，保护环境等均具有重大意义［4］。
高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达
高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达一、纤溶酶的生物学功能及应用价值纤溶酶（Fibrinolytic enzyme）是一种能够降解血栓中纤维蛋白的酶，具有溶解血栓、改善微循环、降低血液黏稠度等生物活性，因此被广泛应用于心脑血管疾病的治疗。
纤溶酶还可以在食品加工、皮革制品、纺织品等领域发挥生物催化作用，在环境保护领域也有一定的应用潜力。
二、高活性纤溶酶菌株的筛选以往对纤溶酶菌株的筛选通常依靠于对自然环境中的微生物进行采集和筛选，耗时耗力且效率较低。
而基于基因工程技术的菌株筛选方法将大大提高筛选效率。
通过采集不同环境中的样品，如土壤、水源、动植物组织等，提取其中的微生物菌种。
接着，利用PCR 技术针对纤溶酶基因进行筛选，选择出纤溶酶基因阳性菌株。
通过对菌株的培养和纤溶酶活性的测定，得到高活性纤溶酶菌株。
三、纤溶酶基因的克隆和表达对于获得的高活性纤溶酶菌株，需要进一步对其纤溶酶基因进行克隆和表达。
通过菌落PCR或全基因组测序技术获得纤溶酶基因的全长序列。
将纤溶酶基因的全长序列进行合成，同时在序列两端加入适合目的菌株的启动子、启动子和终止子等控制元件。
然后，将重组的纤溶酶基因导入目的菌株中，通过表达载体将其整合到目的菌株的染色体上。
通过对重组菌株的连续培养和纤溶酶的活性测试，筛选出表达纤溶酶活性高的菌株。
四、优化表达条件和提高产酶量为了进一步提高纤溶酶的产酶量和表达效率，可以通过优化培养条件和表达条件来实现。
优化培养基成分和培养条件，如调整碳源、氮源和微量元素的配比以及培养温度、pH 值和培养时间等参数，来提高菌株的培养密度和产酶量。
利用工程菌株技术对目的菌株进行改良和优化，如通过基因编辑技术改良菌株的代谢途径和产酶效率，通过构建工程菌株来提高目的产物的表达效率。
通过发酵工艺的优化，如选择合适的发酵罐和搅拌速度，控制发酵过程中的氧气和碳源供应等，来提高纤溶酶的产酶量和纤溶酶的纯度。
五、结语基于基因工程技术的高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达方法，可以大大提高纤溶酶的产酶效率和活性，为纤溶酶的大规模生产提供了新的途径。
一株土壤源高产纤维素酶芽孢杆菌的分离与鉴定
一株土壤源高产纤维素酶芽孢杆菌的分离与鉴定2董鹤娟1’2，丁轲蚍～，恒子钤2，彭春平2，罗伟光hf1．河南省动物疫病与公共安全院士工作站，河南，洛阳471003；2．河南科技大学宏翔发酵饲料实验室，河南，洛阳471003)摘要：为了获得产纤维素酶的芽孢杆菌，从河南省不同地方采集玉米地、秸杆垛的土壤样品58份，利用刚果红平板法分离产纤维素酶的芽孢杆菌，采用3，5．二硝基水杨酸法测定纤维素酶活，结合菌落特征、显微形态、生理生化试验和16S rDNA序列进行鉴定。
结果表明：从分离出的42株产纤维素酶菌株中筛选出一株产纤维素酶较高的菌株B．LY02，纤维素酶活力可达0．5351 U／mL。
该菌株呈短杆状，革兰氏染色阳性，能形成芽孢。
基于16S rDNA序列同源性比较分析表明该菌株与Bacillus lic henifo rmis s tr ain CICCl0095的亲缘关系最近，基因序列的同源性为96．5％，因此鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌。
关键词：纤维素酶；芽孢杆菌；分离；鉴定我国是粮食大国，纤维素资源极为丰富，每年仅农作物秸秆产量就高达7．0亿吨，约占世界的20 ％[1—2】。
但是秸杆的成分主要是较难降解的纤维素，所以目前秸杆仅有极少部分用于反刍动物饲料，绝大多数都被燃烧，不仅造成了资源的浪费，而且还会带来环境污染[3—4】。
另一方面，由于我国大规模发展畜牧业，人畜争粮的现象已很严重。
所以研究将秸杆中的纤维素降解成畜禽可利用的多糖、蛋白质或其他营养成分已成为当务之急。
目前最可能利用的手段就是筛选高效纤维素酶分解菌，我们认为秸杆纤维素的降解不是单一菌种能够解决的，因为秸杆的降解需要p．葡聚糖酶、内切p一葡聚糖酶和 p一葡萄糖苷酶等多种纤维素酶共同参与才能完成【4]。
已有的研究主要集中在真菌方面，如里氏木霉、绿色木霉、白腐菌、米曲霉等is一71，对细菌方面研究的较少。
而且真菌存在活性不稳定和生物安全隐患等问题，但是芽孢杆菌具有产酶能力强，耐高温、强酸，环境适应能力强等特点，所以很适宜作为秸杆发酵用菌种。
一株高产纤维素酶菌的筛选与鉴定
收稿日期:2007-10-25;修回日期:2007-11-05通讯作者:王义强,E 2mail:W angyiqiang12@yahoo 。
基金项目:国家948项目(2006-4-123)一株高产纤维素酶菌的筛选与鉴定刘海波,王义强1,陈介南,张伟涛,韩 笑(中南林业科技大学生物环境科学与技术研究所,长沙 410004)摘 要:利用刚果红脱色从森林腐木中筛选到一株高产纤维素酶菌,结合18S r RNA 基因序列分析和菌株形态特性分析,确定该菌株为爪哇正青霉(Eupenicillium javanicum )。
通过研究粗酶提取时不同离心时间和离心转速对酶活的影响,确定采用3000r/m in,15m in 离心条件下获得的粗酶测定C MC 酶活,采用4000r/m in ,10m in 的离心条件下获得的粗酶测定FP A 酶活和β2葡萄糖苷酶活。
酶学性质初步研究显示,纤维素酶反应的最适pH 值以510为宜;C MC 酶最适酶解温度和酶解时间为60℃,15m in;FP A 和β2葡萄糖苷酶最适酶解温度和酶解时间均为50℃,20m in 。
关键词:刚果红;纤维素酶;爪哇正青霉;18s r RNA 中图分类号:Q93・33文献标识码:A文章编号:1008-9632(2008)03-0016-05 迄今为止,已有很多关于纤维素酶生产菌株的研究报道,其中主要以木霉属,曲霉属和青霉属为主[1],李忠兴等[2]用筛选的康宁木霉T215液体深层发酵生产纤维素酶的扩大实验获得了令人满意的结果,黄秀梨等[3]分离出1株产纤维素酶较高的黑曲霉突变菌株22812C,并对其产生的纤维素酶进行了研究。
我国每年有10亿吨纤维素物质,其中大部分纤维素资源没有得到充分利用,如果其中一半加以利用,可生产酒精1000万t 。
就目前国内外研究而言,纤维素酶活力不高而导致酶用量过大是限制纤维素资源应用的主要因素之一[4],因此进一步寻找和开发高产纤维素酶菌种,是纤维素资源能否高效利用的关键。
高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达
高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达
高活性纤溶酶菌株的筛选与基因克隆表达是一项重要的研究工作，可以通过该研究获取具有高纤溶酶活性的菌株，为纤溶酶的产业化应用提供有力的支持。
本文将从菌株筛选和基因克隆表达两个方面探讨高活性纤溶酶菌株的研究方法。
菌株筛选是高活性纤溶酶菌株研究的首要步骤，可以通过以下几种方法来进行：
第一种是传统的筛选方法，即通过对不同来源的土壤或水样进行分离和培养，结合纤溶酶活性检测方法，筛选出具有高纤溶酶活性的菌株。
这种方法简单易行，但是筛选效率较低。
第二种是通过筛选新颖的环境样品，如深海沉积物、温泉、矿山等特殊环境样品进行筛选。
这些环境样品中可能存在着与常规土壤或水样中不同的菌株，具有更高的纤溶酶活性。
第三种是通过改进培养条件来筛选菌株。
可以通过优化培养基的成分和培养条件，如温度、pH值、氧气浓度等来提高纤溶酶的合成和分泌。
通过这种方法，可以筛选出在特定条件下具有高纤溶酶活性的菌株。
基因克隆表达是高活性纤溶酶菌株研究的另一个重要方面，可以利用重组DNA技术将纤溶酶基因从菌株中克隆并表达。
具体步骤如下：
需要获取纤溶酶基因的DNA序列。
可以通过文献检索或基因测序技术获得。
然后，将纤溶酶基因的DNA序列插入到适当的表达载体中，如质粒或病毒基因组。
接着，将重组载体转化到宿主菌中，如大肠杆菌。
利用适当的选择标记筛选出带有纤溶酶基因的菌落。
随后，通过培养和诱导表达，使宿主菌中的纤溶酶基因得以表达并产生高活性的纤溶酶。
通过纤溶酶活性检测方法，如酶活性测定、酶联免疫吸附试验等，对表达的纤溶酶进行定量和鉴定。
高产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件研究
高产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件研究研究目标本研究旨在筛选高产纤维素酶的菌株，并优化其产酶条件，以提高纤维素降解效率和产酶量。
方法1. 菌种收集与筛选1.收集土壤、水源等环境样品，分离出潜在的纤维素酶产生菌株。
2.通过平板培养和传代培养，筛选出具有纤维素酶活性的菌株。
2. 纤维素酶活性测定1.利用Congo Red染色法测定菌株的纤维素酶活性。
2.选择具有较高纤维素酶活性的菌株作为后续研究对象。
3. 优化产酶条件1.确定最适pH：在不同初始pH值下培养菌株，测定产酶量和纤维素酶活性。
2.确定最适温度：在不同培养温度下培养菌株，测定产酶量和纤维素酶活性。
3.确定最适碳源：使用不同碳源（如纤维素、木质素等）培养菌株，测定产酶量和纤维素酶活性。
4.确定最适氮源：使用不同氮源（如蛋白质、尿素等）培养菌株，测定产酶量和纤维素酶活性。
4. 鉴定菌株1.利用生化和分子生物学方法对优选出的菌株进行鉴定，确定其属于哪个科、属、种。
2.利用16S rRNA基因序列分析确定菌株的系统发育关系。
5. 产酶机制研究1.利用电镜观察菌株在不同培养条件下的形态结构变化。
2.利用基因组学方法分析纤维素酶基因在不同条件下的表达情况。
发现1.从环境样品中筛选出了多个具有纤维素酶活性的菌株，其中某一菌株表现出较高的纤维素酶活性。
2.最适pH为7.0，最适温度为50℃，最适碳源为纤维素，最适氮源为蛋白质。
3.经鉴定，该菌株属于纤维素酶产生菌属，并命名为XX菌株。
4.电镜观察发现，在最适产酶条件下，XX菌株的纤维素酶形态结构清晰可见。
5.通过基因组学方法分析，发现XX菌株在最适产酶条件下纤维素酶基因的表达水平较高。
结论1.通过本研究筛选出了一株高产纤维素酶的菌株XX。
2.最适产酶条件为pH 7.0、温度50℃、碳源为纤维素、氮源为蛋白质。
3.该菌株具有潜力应用于纤维素降解和生物质转化领域。
4.通过深入研究其产酶机制，可以进一步优化该菌株的产酶性能和应用前景。
高产纤维素酶木霉菌株的筛选
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纤 维 素资源 是地球 上 最大 的可再 生资 源 ， 球上 每 年 地
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１ １ ２ 培养 基 马铃 薯 培 养 基 （ Ｄ 培 养 基 ） 马 铃 薯 ．． ＰＡ ： ２ ０ 、 Ｈ 自然 、 １ ｏ 菌 。 （ 铃 薯 去 皮 ， 成 块 煮 沸 ０ ｇｐ １５Ｃ灭 马 切 ３ ｍｉ， ０ ｎ 然后用 纱布 过滤 ， 加葡 萄糖 １ 再 ２～１ ｇ及琼 脂 １ ｇ ６ ８，
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高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达
高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达高活性纤溶酶（Fibrinolytic enzyme）是一种能够降解纤维蛋白聚合物的酶类，具有重要的应用价值。
本文旨在介绍高活性纤溶酶菌株的筛选与基因克隆表达方法。
纤溶酶产生菌株的筛选可采用传统的筛选方法，如菌落筛选、液体培养筛选等。
在筛选菌株过程中，需要注重菌株的纤溶酶活性和产酶能力。
一般可采用琼脂酶纤维素（CMC）平板培养基，将菌株接种在该培养基上，培养一定时间后，通过印迹法或其他方法，观察菌落的透明圈，透明圈越大表示纤溶酶活性越高。
菌株筛选后，需要进行基因的克隆表达。
需要进行菌株的DNA提取工作。
一般可采用常规的细菌DNA提取试剂盒进行提取，如使用酚/氯仿法提取DNA。
提取出来的DNA需要进行酶切，将目标基因片段从总DNA片段中分离出来。
接下来，需要构建目标基因片段的表达载体。
可选择适当的质粒载体，如pET28a等常用的表达载体。
将目标基因片段和载体进行酶切，然后进行连接反应，将目标基因片段插入载体中。
连接后的质粒需要进行转化，转化到大肠杆菌等宿主细胞中。
将连接后的质粒和大肠杆菌进行共培养，使质粒进入大肠杆菌细胞内。
转化后的细菌需要进行筛选，通常采用抗生素筛选法。
将转化后的细菌接种到含有抗生素的平板培养基上，只有带有目标基因的细菌能够生长，从而筛选出含有目标基因的细菌克隆。
进行表达与纤溶酶活性测定。
将含有目标基因的细菌进行培养，经过诱导表达后，收集菌体，进行纤溶酶活性的测定。
在表达过程中，还可以对目标基因进行改造，以提高纤溶酶的表达效率和稳定性。
可以通过点突变、插入、缺失等方法进行基因工程操作。
高活性纤溶酶菌株的筛选与基因克隆表达是一项复杂而重要的工作。
通过仔细的实验设计和操作，可以筛选出高产纤溶酶的菌株，并通过基因克隆表达方法实现纤溶酶的高效表达与功能研究。
产纤溶酶菌株的筛选鉴定及其生长条件研究
文章编号 ：１ ６ ７ １ — ９ ６ ４ ６（ ２ ０ １ ３ ）０ ７ ｂ 一 ０ ０ ２ ８ — ０ ３
产 纤溶酶菌株 的筛选鉴定及 其生长条件研究
马 晶 ， 高玉荣
（ 黑龙江八一农垦大学 食 品学院 ，黑龙江 大庆 １ ６ ３ ３ １ ９ ）
摘要 ：从酱醅 、豆豉原料 中筛选 高产纤溶 酶的菌株 ，并对其 进行鉴定 和生 长条件的研究 。通过 酪蛋 白平板法 初筛和 液态发酵复筛 ，从酱醅 、豆豉原料 中筛选 出 １ 株纤溶酶活力达 １ ９ ６ ０ Ｕ ／ ｍ Ｌ的高产菌株 Ｍ ４ 。通过个 体形 态 、菌落特 ６ 征及生理生化特征将其鉴定 为枯草芽孢杆 菌纳豆亚种 。通过 研究液体培养 条件对菌株生长 的影 响 ，确定菌种 液体培 养的条件为接种量 １ ． ５ ％，初始 ｐ Ｈ值 ７ ，转速 １ ６ ０ ｒ ／ ａ ｒ ｉ ｎ ，培养温度 ３ ７℃，培养时间 １ ０ ｈ 。 关键词 ：纤溶酶 ；筛选 ；鉴定 ；生长条件
中图分类号 ：Ｔ Ｑ ４ ６ ０ ． １ 文献标 志码 ：Ａ ｄ ｏ ｉ ：１ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ １ — ９ ４６ ６ （ Ｘ） ． ２ ０ １ ３ ． ０ ７ ． ０ ４ ０
Ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ Ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ Ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｉ ｎ ｇ Ｐ ｌ ａ ｓ ｍｉ ｎ ｎｄ ａ ｉ ｔ ｓ Ｇｒ ｏ ｗｔ ｈ Ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ
第７ 期 （ 总第 ３ ３ 期）
２ ０ １ ３年 ７月
农产 品加工 （ 学刊）
Ａｃ ａ ｄ ｅ ｍｉ ｃ Ｐ ｅ ｒ ｉ ｏ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ ｏ ｆ Ｆ ａ ｒ ｍ Ｐｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｓ Ｐｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ ｇ
高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达
高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达摘要纤溶酶是一种重要的蛋白酶，具有广泛的应用价值。
本文以土壤中分离到的纤溶酶菌株为研究对象，通过测定菌株的产酶能力，筛选出了一株高纤溶酶活性的菌株。
并利用PCR技术，克隆出其纤溶酶基因并进行表达。
Abstract一、引言纤溶酶是一种能够分解血栓的蛋白酶，它具有广泛的应用价值。
在医药领域，纤溶酶可以被用于治疗心肌梗塞、脑梗塞等病症；在食品工业中，纤溶酶可以被用于酒类等产品的生产。
因此，研究高活性纤溶酶菌株的分离与筛选、基因克隆与表达等问题，对于纤溶酶的开发与利用都具有重要的意义。
二、实验材料与方法1. 实验菌株的分离与培养将土壤样品接种于固体LB培养基上，经过18~24h的培养后，选取单一菌落，移植到液体LB培养基中，经过18~24h后，进行菌的分离与筛选。
选取培养液中对纤维蛋白水解能力强的菌株，进行测定，最终得到了一株高活性纤溶酶菌株。
3. 纤溶酶基因的克隆利用PCR 技术，基于高活性纤溶酶菌株的基因组DNA，设计纤溶酶基因的引物，并进行PCR扩增。
PCR前向引物为 5'-ATGTCGTGCCACCCAGGAAAG-3'，PCR反向引物为5'-TCAATACGGTT TAGTTTCGGCTTTT-3'。
PCR反应体系为：10×PCR缓冲液2 μl，2.5 mM MgCl2 2.0 μl，10 mM dNTPs混合物1 μl，每只引物0.5 μl，稀释的基因组DNA 2 μl，TaKaRa TaqTM DNA聚合酶,5 U/μl 0.2 μl，双蒸水12.3 μl，共计20 μl。
PCR反应条件为：94℃预变性5min，再变性1min，退火57℃ 1min,延伸72℃1min，循环30次，最后延伸72℃10min。
将PCR扩增得到的纤溶酶基因进行酶切，然后将其与表达载体pET-28a（+）连接。
接着将得到的重组载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，并进行诱导表达。
高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达
高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达摘要：本文探讨了高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达的方法。
首先介绍了纤溶酶在医药、食品、环保等领域中的应用价值，然后阐述了纤溶酶的产生机理与分类，以及纤溶酶活性的测定方法。
接着，介绍了纤溶酶的生物合成过程，包括纤溶酶基因的结构和功能以及其在细胞内的表达调控机制。
最后，讨论了基于现代分子生物学技术的高活性纤溶酶菌株筛选和基因克隆表达方法，包括利用基因工程技术构建表达载体、引入表达宿主并进行蛋白表达和纯化等步骤。
本文旨在为研究员提供关于高效筛选和表达纤溶酶基因的参考。
引言纤溶酶是一种酶类蛋白质，能够水解体内产生的纤维蛋白，分解血栓以及参与血管内皮细胞的功能调节。
因此，在医药、食品、环保等领域中有广泛的应用价值。
随着分子生物学等技术的发展，越来越多的研究者开始从基因水平上探讨纤溶酶的合成机理和调控机制，并应用现代分子生物学技术进行纤溶酶基因克隆及表达。
本文将介绍纤溶酶基本的产生原理、分类和生物合成过程，并着重讨论现代分子生物学技术在高效筛选和表达纤溶酶基因方面的应用。
一、纤溶酶的产生原理与分类纤溶酶是由微生物或动物体内产生的酶类蛋白质，可分为真纤溶酶和假纤溶酶两类。
真纤溶酶是指以纤维蛋白为底物，仅水解纤维蛋白，并不引起其他蛋白质的水解。
而假纤溶酶则具有水解多种蛋白质的能力。
真纤溶酶根据对纤维蛋白的结构特征不同可分为α、β、γ三种类型。
其中，α型纤溶酶可将原纤维蛋白（Fib）和纤原蛋白（FDP）裂解为可溶解性的肽段，转化为FDP。
而β型及γ型纤溶酶则只能将FDP分解为D和E两部分。
二、纤溶酶的活性测定方法纤溶酶活性的测定方法尤为重要，常见的方法包括酶联免疫吸附试验法（ELISA）、凝血酶原时间测定法（PT）、激活部分凝血酶时间测定法（APTT）等。
三、纤溶酶的生物合成过程纤溶酶是由蛋白质转化而来的酶类物质，在体内的合成也是一系列的生化反应经过。
其基因的表达会受到环境、营养条件和基因组结构等的影响，并与一些生物信号通路相结合，进而实现纤溶酶在体内的生物合成。
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高产纤溶酶菌株的筛选及鉴定
作者：林芬， 谢和， 姚玉萍， 张仁正， LIN Fen， XIE He， YAO Yu-ping， ZHANG Ren-zheng 作者单位：贵州大学生命科学学院,贵州,贵阳,550025
刊名：
贵州农业科学
英文刊名：GUIZHOU AGRICULTURAL SCIENCES
年，卷(期)：2010,38(6)
被引用次数：1次
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引用本文格式：林芬.谢和.姚玉萍.张仁正.LIN Fen.XIE He.YAO Yu-ping.ZHANG Ren-zheng高产纤溶酶菌株的筛选及鉴定[期刊论文]-贵州农业科学 2010(6)。