DNA的提取与鉴定讲解
《DNA 的粗提取及鉴定》 讲义
《DNA 的粗提取及鉴定》讲义一、引言DNA 作为生命的遗传物质，承载着生物体的遗传信息。
对 DNA 的研究有助于我们深入了解生命的奥秘、疾病的发生机制以及进行法医学鉴定等。
DNA 的粗提取及鉴定是分子生物学中的基础实验技术，下面我们就来详细了解一下。
二、实验目的1、了解 DNA 粗提取的原理和方法。
2、学习 DNA 的鉴定方法。
三、实验原理1、 DNA 在不同浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同在014mol/L 的氯化钠溶液中，DNA 的溶解度最低。
利用这一特点，可以使 DNA 从细胞中析出。
2、 DNA 不溶于酒精溶液但细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，从而可以将 DNA 与蛋白质进一步分离。
3、 DNA 遇二苯胺会呈现蓝色这一特性可用于鉴定 DNA。
四、实验材料和用具1、材料新鲜的鸡血细胞液（也可以使用菜花、洋葱等材料）2、用具研钵、烧杯、玻璃棒、漏斗、纱布、试管、量筒、体积分数为 95%的酒精溶液、2mol/L 的氯化钠溶液、0015mol/L 的氯化钠溶液、二苯胺试剂等。
五、实验步骤1、制备鸡血细胞液将新鲜的鸡血加入抗凝剂，离心或静置沉淀，除去上清液，得到鸡血细胞液。
2、破碎细胞，释放 DNA取 20mL 鸡血细胞液倒入烧杯中，加蒸馏水到 100mL，搅拌均匀。
然后向鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使鸡血细胞破裂，释放出 DNA。
3、去除杂质（1）过滤用纱布过滤含 DNA 的溶液，取滤液。
（2）去除核蛋白向滤液中加入 2mol/L 的氯化钠溶液 40mL，搅拌 1min，使核蛋白充分溶解。
然后缓慢加入蒸馏水，同时轻轻搅拌，直至溶液中氯化钠浓度达到 014mol/L，此时 DNA 会析出，用多层纱布过滤，取纱布上的黏稠物。
4、 DNA 的进一步提纯将上述黏稠物放入 20mL 体积分数为 95%的酒精溶液中，搅拌，使DNA 沉淀。
然后用玻璃棒卷起沉淀，放入试管中。
5、 DNA 的鉴定（1）向两支试管中分别加入 2mol/L 的氯化钠溶液 5mL。
dna粗提取与鉴定实验知识点
dna粗提取与鉴定实验知识点一、实验原理。
1. DNA的溶解性。
- DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。
在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低，在此浓度下，DNA的钠盐形式会从溶液中析出；而在2mol/L的NaCl溶液中，DNA的溶解度较高。
- DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。
利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。
2. DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。
- 蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没有影响。
- 大多数蛋白质不能忍受60 - 80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。
- 洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA无影响。
3. DNA的鉴定原理。
- 在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
二、实验材料的选取。
1. 选用鸡血细胞作为实验材料的原因。
- 鸡血细胞中红细胞有细胞核，含有丰富的DNA，而植物细胞需要研磨等复杂操作才能释放出DNA。
- 鸟类的血红细胞有细胞核，而哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核，不能用于提取DNA。
三、实验步骤及注意事项。
1. 实验步骤。
- 制备鸡血细胞液：取鸡血细胞液（加柠檬酸钠抗凝），离心或静置后取下层血细胞。
- 提取细胞核物质：将血细胞放入蒸馏水中，细胞吸水涨破，释放出核物质（包括DNA和蛋白质等），然后用纱布过滤，取滤液。
- 溶解DNA：在滤液中加入2mol/L的NaCl溶液，使DNA溶解。
- 析出含DNA的黏稠物：向上述溶液中缓慢加入蒸馏水，使NaCl溶液浓度降低至0.14mol/L，此时DNA的溶解度最低，会析出，过滤后取黏稠物。
- 将DNA的黏稠物再溶解：将黏稠物放入2mol/L的NaCl溶液中，使DNA再次溶解。
- 过滤含DNA的NaCl溶液：用纱布过滤，除去不溶的杂质。
- 提取较纯净的DNA：向滤液中加入冷却的酒精溶液（体积分数为95%），DNA不溶于酒精，会析出白色丝状物，这就是较纯净的DNA，用玻璃棒搅拌后可以卷起。
实验05DNA的粗提取与鉴定(原卷版)
专题05DNA 的粗提取与鉴定一、实验原理1．提取DNA的原理利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
如：(1)DNA在酒精溶液中的溶解性：DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。
(2)DNA在NaCl溶液中的溶解性：DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于2 mol/L 的NaCl溶液。
2．鉴定DNA的原理在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
二、方法步骤1．称取约30 g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨。
2．去除滤液中的杂质方案一在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液方案二直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1 500 r/min的转速下离心5 min，再取上清液3．DNA方案一在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2～3 min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA；用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分方案二将溶液倒入塑料离心管中，在10 000 r/min的转速下离心5 min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干4.DNA取两支20 mL的试管，各加入2 mol/L的NaCl溶液5 mL。
将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中，再向两支试管中各加入4 mL的二苯胺试剂。
混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
三、操作提示1．以血液为实验材料时，每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠，防止血液凝固。
2．加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。
四、关键点拨1．利用动物细胞提取DNA时，破碎细胞的方法：动物细胞无细胞壁，可直接使其吸水涨破。
2．不能选用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料，原因是哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。
dna粗提取和鉴定的原理
dna粗提取和鉴定的原理
DNA粗提取和鉴定主要是通过以下原理进行的：
1. 粗提取：DNA粗提取是将DNA从生物样本（如血液、唾液、组织等）中分离出来的过程。
最常用的方法是细胞裂解，以释放DNA。
细胞裂解可以通过物理方法（如机械切割、超声波
处理）或化学方法（如蛋白酶消化、洗涤剂裂解）来实现。
裂解后，可进行离心等步骤以去除细胞残渣和其他杂质，得到含有DNA的提取液。
2. 鉴定：DNA鉴定是通过比较DNA序列的相似性或特征来确定个体的身份、亲缘关系等。
主要有以下鉴定方法：
- 聚合酶链式反应（PCR）：PCR是通过复制特定DNA片段的方法，使得起始数量较少的DNA可以被扩增到足够数量以
进行分析。
PCR需要通过引物选择性扩增特定的DNA序列，
然后通过酶切、电泳等技术进行分析。
- DNA测序：DNA测序是确定DNA序列的方法。
常用的测
序技术有Sanger测序和下一代测序（如Illumina、Ion Torrent 等）。
测序后得到DNA的碱基序列，可以与数据库中的已知
序列进行比对，从而确定DNA的来源、身份等信息。
- DNA指纹技术：DNA指纹技术是根据DNA上的多态性位
点进行鉴定。
常用的方法是通过PCR扩增多个DNA位点，然后通过电泳等技术进行分析。
与其他个体相比较，每个个体的DNA指纹是独特的，可以用于身份鉴定、亲缘关系判定等。
这些原理在DNA粗提取和鉴定过程中相互作用，可以帮助科学家从生物样本中提取和鉴定DNA，为研究、法医学和医学诊断等领域提供有力的技术支持。
dna的粗提取与鉴定
dna的粗提取与鉴定DNA的粗提取与鉴定一、粗提取粗提取的方法是通过物理和化学方法从一个或多个生物样品中提取DNA样品，通常是为了进行DNA分子生物学分析、基因组学以及其他科学研究。
1. 用拆解液拆解细胞使用拆解液拆解细胞是最常用的粗提取DNA技术。
主要使用的拆解液有Tris-EDTA（TE buffer）、Cetyltrimethyl ammonium bromide （CTAB）、Sarkosyl（SDS）和NaOH溶液等。
各种拆解液的比例和温度可以根据每个实验的要求进行调整。
2. 用磁珠或磁性分选器抽提也可以使用磁珠或磁性分选器来抽提DNA样品。
这种方法可以从多种生物样品中提取DNA，如血清、血浆、细胞粗提物以及血液细胞等。
磁珠抽提的原理是利用磁性珠子来吸附DNA样品，而磁性分选器则是利用磁场将DNA分离出来。
磁珠抽提的优点是简单快捷，缺点是提取的DNA质量不够高。
3. 改良的拆解方式一些改良的拆解方式可以用来考察某一特定细胞类型。
这些方法包括冷冻破碎、湿热破裂、极限温度破裂和化学破裂等。
这些技术可以有效地提高蛋白质和DNA的提取效率，但缺点是需要较高的技术要求，而且操作步骤较多，比较耗时。
二、DNA的鉴定DNA的鉴定是指用特定的方法和技术，明确某个DNA样品的鉴定。
常见的DNA鉴定技术有定性分析、定量分析和活性检测等。
1. 定性分析定性分析是指对DNA样品进行定性鉴定，识别出它们是哪种DNA，以确定其基本性质。
常用的定性分析方法有紫外光检测和酶切检测等。
紫外光检测是将DNA浓度调整至1μg/ml，然后放置在紫外光228纳米的紫外灯管（UV lamp）下，通过分析紫外光吸收光谱来鉴定DNA 样品。
酶切检测是将DNA样品与特定的酶进行反应，用来分析DNA的特征。
常用的酶有限制性内切酶（restriction enzymes），例如EcoRI、BamHI、PstI和HindIII等。
2. 定量分析定量分析是指对某一DNA样品的浓度和数量进行测量，以了解其容量。
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定（一）实验原理鸟类血液中红细胞有细胞核，细胞核内DNA与蛋白质结合成染色质。
利用DNA在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，而蛋白质此时的溶解度高的特点，可以使DNA与蛋白质分离，形成沉淀析出，通过过滤，得到粗提取的滤出物DNA。
再利用DNA不溶于酒精，但细胞中的其他物质可溶于酒精的特点，进一步提取出含杂质较少的DNA。
利用DNA遇二苯胺（沸水浴）成蓝色的特性，可以鉴定提取的DNA。
（二）实验材料（以鸡血为例）鸡血细胞液：先配备10%的柠檬酸钠溶液，按180mL新鲜鸡血混合100mL10%柠檬酸钠溶液的比例，立即将血液与柠檬酸钠充分混合，同时用玻璃棒搅拌以免凝血。
然后，用离心机以2000转/min的速度离心4min后，用吸管除去离心管上清液，就可获得所需的鸡血细胞悬液。
每组大约需要5—10mL鸡血细胞悬液。
如果无离心机，可将与柠檬酸钠充分混合的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀后，也可获得所需的鸡血细胞悬液。
（三）试剂与仪器1、2mol/L的NaCl溶液称取117g的NaCl，加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解，即可获得2mol/L 的NaCl，须按此配方配备大量的2mol/L 的NaCl。
2、二苯胺试剂A液——1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸，用棕色瓶保存。
B液——体积分数为0.2%的乙醛溶液。
实验前，将0.1mL的B液加入到10mL的A液中，现配现用。
3、0.015mol/L的NaCl溶液称取0.88g氯化钠加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解。
4、塑料杯和试管DNA易吸附在玻璃器皿上，用塑料杯和试管可减少提取过程中DNA的损失。
（四）实验方法与步骤1、提取细胞核物质取5—10mL鸡血细胞悬液入烧杯中，加蒸馏水20mL，同时，用玻璃棒沿一个方向快速充分搅拌，使血细胞过度吸水破裂，细胞核内物质释放出来，然后用纱布过滤取其滤液。
2、溶解核内的DNA在滤液中加入2mol/L的NaCl40mL，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，核中DNA游离并充分溶解，染色质中的DNA和蛋白质分离。
dna粗提取与鉴定
dna粗提取与鉴定DNA粗提取与鉴定DNA是生命的基础，它携带了生物体的遗传信息。
在现代分子生物学中，DNA的提取和鉴定是非常重要的技术。
本文将介绍DNA粗提取和鉴定的方法。
一、DNA粗提取1.1 细胞破碎法细胞破碎法是一种常见的DNA粗提取方法。
它通过机械或化学手段破坏细胞膜和核膜，释放出细胞内的DNA。
机械方法包括高压均质和超声波破碎等，化学方法包括SDS、NaOH等。
这些方法都可以有效地破坏细胞结构，但同时也会对DNA造成一定程度的损伤。
1.2 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA粗提取方法，它利用酚对蛋白质和核酸有不同的溶解度来分离DNA。
首先用盐水或缓冲液洗涤样品，然后加入酚/氯仿混合液，在离心后上层为水相（含RNA）、中间为界面层（含蛋白质）和下层为有机相（含DNA）。
通过抽取下层的有机相，可以得到粗提的DNA。
1.3 硅胶柱法硅胶柱法是一种高效的DNA粗提取方法，它基于DNA和硅胶之间的亲和力。
首先将样品加入硅胶柱中，然后用盐水或缓冲液洗涤硅胶柱，最后用低盐缓冲液洗脱DNA。
这种方法可以得到较纯的DNA，并且适用于大量样品处理。
二、DNA鉴定2.1 凝胶电泳凝胶电泳是一种常见的DNA鉴定方法，它利用电场将带电的DNA分子移动到凝胶上。
根据不同长度的DNA片段在凝胶中行进速度不同来分离不同大小的DNA片段。
通过比较样品中不同长度的DNA条带，可以确定样品中是否存在目标序列。
2.2 PCR扩增PCR扩增是一种高效、敏感、特异性强的鉴定方法。
它通过引物特异性识别目标序列，在体外进行大量扩增。
PCR扩增可以检测极少量的目标序列，并且能够对复杂混合物进行分析。
2.3 DNA测序DNA测序是一种直接读取DNA序列的方法。
它通过将PCR扩增的目标片段或提取的DNA样品，进行测序仪读取，得到目标序列的具体信息。
这种方法可以检测出极少量的变异或突变，并且可以对整个基因组进行分析。
三、总结DNA粗提取和鉴定是现代分子生物学中非常重要的技术。
DNA的提取及性质鉴定
能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；
3、将混合液用两层纱布过滤或离心，向滤液 中加入预冷的10ml乙醇溶液，静置，可产生絮 状的DNA。
DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质
4、将DNA溶于2mol/ＬＮaＣl中，轻轻搅拌使其 溶解。加入等体积二苯胺试剂，振荡均匀，将 试管放入沸水中水浴4～5min，观察颜色的变化。
（2）溶解ＤＮＡ：取鱼白匀浆液3ml于100ml烧杯中，取10ml的 2mol/ＬＮaＣl加入烧杯中，用玻璃棒单向搅拌成溶胶状。 （3）析出ＤＮＡ粘稠物：取50mL以上的蒸馏水沿杯壁慢慢注入 烧杯中，同时用玻棒单向搅拌，使冻状粘稠物缠在玻棒上。 （4）ＤＮＡ再溶解：倒掉上清液，把粘稠物放入，10ml 2mol/ ＬＮaＣl注入烧杯中，用玻棒充分搅拌，使粘稠物尽量溶解，
易溶解。因此，用0．14mol／LNaCl溶液可简单地
初步分开DNP和RNP。
• 2、 从DNP中把蛋白质去除 • 在分离核酸中最困难的是将核酸与紧密结合的蛋白质分开， 而且还要避免核酸的降解。常用的解离剂是阴离子去垢剂， 如脱氧胆酸钠，十二烷基硫酸钠(SDS)，4—氨基水杨酸钠和 萘—1，5—二磺酸钠等，它们具有溶解病毒、细菌的作用， 可使核酸从蛋白质上游离出来，还具有抑制核糖核酸酶的作 用。 • 另外除去核酸中的蛋白质的一个有效办法是用酚—氯仿混合 液，它们可使蛋白质变性并对核糖核酸酶有抑制作用，另外 氯仿比重大可使有机相和水相完全分开，减少残留在水相中 的酚。在用酚—氯仿抽提核酸提取液时，还需要剧烈振摇， 为防止起泡和促使水相与有机相的分离，在酚—氯仿抽提液 中再加上一定量的异戊醇。
关于DNA的鉴定
1、电泳鉴定
2、二苯胺鉴定 3、甲基绿鉴定：取少许丝状物，置玻片中
央，加1滴甲基绿溶液，丝状物变成绿色。
DNA的粗提取和鉴定分析
DNA的粗提取和鉴定分析DNA(脱氧核糖核酸)是构成生物体遗传信息的重要分子。
DNA的提取和鉴定分析是分子生物学和遗传学等领域中的一项基础技术和研究方法。
DNA的提取过程旨在从生物样品中纯化和提取出DNA分子，而DNA的鉴定分析则旨在确认提取的DNA是否符合特定的特征。
DNA的提取过程通常包括以下几个主要步骤：样品处理、细胞破碎、DNA纯化和DNA溶解。
首先，对于涉及到固体样品的提取，如动物组织样品或植物组织样品，必须先将样品粉碎，通常使用刀片或研钵研磨的方法。
然后，样品细胞被破碎，通常通过各种化学方法或机械方法。
常用的细胞破碎方法包括裂解酶、超声波、热冲击等。
细胞破碎后，通过使用盐水溶解细胞内其他组分，将纯化的DNA从其他细胞组分中分离出来。
这通常涉及到一系列的溶剂溶解步骤以及DNA的沉淀和洗涤。
DNA的纯化过程中，一些常用的技术包括酚/氯仿法、硅胶柱法和离心管法等。
其中，酚/氯仿法是最常用和最早的纯化方法之一、该方法通过将DNA溶解于酚-氯仿混合物中，形成有机相和水相的界面，然后通过离心分离DNA和其他组分。
硅胶柱法则利用硅胶效应，在高盐浓度条件下，DNA吸附在硅胶柱上，然后通过洗脱形成纯净的DNA样品。
离心管法是通过盐溶解和酶处理等步骤，使DNA从细胞中提取并纯化。
DNA提取完成后，可以进行进一步的鉴定分析。
常用的DNA鉴定方法包括聚合酶链式反应(PCR)、限制性酶切和电泳等。
PCR是一种常用的扩增DNA的方法，利用特定的引物和聚合酶在体外模拟自然界中的DNA扩增过程，从而产生大量的特定DNA序列。
限制性酶切是通过使用限制性内切酶切割DNA，然后通过电泳检测DNA片段的大小和形状来鉴定DNA。
电泳是一种将DNA样品通过电场在凝胶中进行分离的方法，通过测量DNA片段的迁移距离和大小来分析和鉴定DNA。
DNA的提取和鉴定分析在许多领域中都具有重要意义。
在法医学中，可以通过DNA分析来确定犯罪嫌疑人和受害者之间的关联；在遗传学中，可以通过DNA分析来确定遗传疾病的相关基因等。
DNA的提取及鉴定
六、实验操作
1）粗提 1．称取猪肝 8g于100ml的小烧杯中，用剪刀剪碎，加 入2倍重的0.1mol/LNaCl-0.05mol/L 柠檬酸钠缓冲液 （16ml），高速匀浆。
2．将匀浆液（ ~25ml）转移到 100ml 离心管中，在 4000r/min下离心10min，弃去上清液。沉淀中继续加 入25ml缓冲液，搅拌均匀后于 4000r/min离心20min， 取沉淀。
2）分离DNP、除蛋白 3．将上述沉淀转移至 250ml烧杯中，加入 40ml0.1mol/LNaCl-0.05mol/L 柠檬酸钠缓冲液、 21ml氯 仿/异戊醇、4ml5%SDS，用保鲜膜封口，振摇 30min。
4．缓慢加入 3.6gNaCl （事先在研钵中研成粉末）使体 系终浓度为1mol/L。将混合液转移至离心管中于 3500r/min离心20min，取上清水相（用滴管吸取并量 体积）。
DNA鉴定或定量（二苯胺法）： 颜色反应可先完成标准曲线的制作，
或配置一个标准管。
(二)二苯胺法测定DNA含量
二、原理 核酸含量的测定方法包括紫外吸收法、定磷法和
分别针对DNA和RNA的颜色反应方法
本实验采用针对DNA的二苯胺法测DNA的含量。在 酸性溶液中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该 物质在595nm有最大吸收，在40～400mg/mL范围内其 峰值与DNA含量成正比
DNA的提取及鉴定
一、动物肝脏中DNA的提取
一 . 实验目的
学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取 DNA的原理和技术
了解分离提取DNA的一般原理
DNA的主要来源
1.动物组织及器官：脾、肝胚芽等 3.微生物：细菌、酵母菌等
核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形 式存在，其中DNA主要存在于细胞核中，RNA 主要存在于核仁及细胞质中。
DNA粗提取与鉴定实验讲解
A
D
二、DNA粗提取实验流程
1.实验材料的选取 选用 含量相对较高的生物组织。 DNA 2.破碎细胞，获取含DNA的滤液 (1)动物细胞的破碎——以鸡血为例 蒸馏水 ，同时用玻璃棒 在鸡血细胞液中加入一定量的 搅拌，过滤后收集 即可。 滤液 (2)植物细胞的破碎——以洋葱为例 先将洋葱切碎，然后加入一定量 _______________ 洗涤剂和食盐 ；进行充 研磨 __，过滤后收集研磨液。 分 搅拌 和
思考：用猪的血液与鸡的血液提取DNA哪个效果更好？ 用鸡的血液；因为鸡血细胞核DNA含量丰富，材料易得，而猪 的红细胞无细胞核DNA含量少。
思考：
1.为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进
入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速
了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。 2.加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放； 食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。 3.在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？如果研磨 不充分，会对实验结果产生什么影响？ 破碎细胞壁，使DNA更多地溶解在NaCl溶液中,研磨不充分会使
③两次析出
第一次：用0.14 mol／L 的NaCI溶液含杂质多
第二次：用冷却的95％的酒精 第七步
第三步
④六次搅拌：第一、二、三、五、七步 其中除第八步外，其余均要朝一个方向搅拌，在第三、五步 搅动还要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，这样才能保证得 到完整的DNA
讨论：实验结果不明显，可能是什么原因？
思考：
1.过滤时应当选用滤纸还是尼龙布？ 选用尼龙布进行过滤 2.方案二与方案三的原理有什么不同？ 方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋 白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不 同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。 3.为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？
DNA的提取与鉴定ppt课件
琼脂糖浓度(％) 线型DNA分子的分离范围(kb)
0.3
5～60
0.6
1～20
0.7
0.8～10
0.9
0.5～7
1.2
0.9～6
1.5
0.2～3
12.0
0.1～. 2
.
琼脂糖凝胶电泳有许多优点：
操作简单，电泳速度快，分离核酸范围广； 电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好； 电泳后区带易染色，便于定量测定； 可用于核酸的纯化和分离（电洗脱法）； 可制成干膜可长期保存。
经离心后溶液分为三层：上层是核酸溶液、 中间不溶物为变性蛋白质，下层是苯酚氯 仿溶液。
核酸溶液 蛋白质 苯酚氯仿
.
3.沉淀DNA
有机溶剂沉淀DNA：2倍体积无水乙醇（或1倍体积的异戊醇） 再用75%乙醇清洗多次。
4.重新溶解DNA
将DNA溶于水或TE溶液。
.
DNA提取的一般流程
.
二、核酸的鉴定
.
电泳
根据电泳支持介质分为
琼脂糖凝胶电泳： 多用于鉴定较大核酸片段（0.1~60 kb）
聚丙烯酰胺凝胶电泳： 用于鉴定较小的核酸片段（50~1000 bp）
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖是从琼脂中提纯出来的一种多糖。凝胶具有刚性的滤孔，凝胶孔径的 大小决定于琼脂糖的浓度，低浓度的琼脂糖形成较大的孔径，而高浓度的琼 脂糖形成较小的孔径。
（3）培养细胞： 离心，弃细胞培养液； 用缓冲液多次漂洗；
.
3、微生物培养物样品
离心获取菌体细胞， 加缓冲液洗涤， 加缓冲液悬浮菌体细胞。
4、微生物混合样品
用缓冲液悬浮菌体，低速离心，沉淀杂质。 高速离心获取菌体细胞。 用缓冲液洗涤菌体细胞。 加缓冲液悬浮菌体细胞。
《DNA 的粗提取及鉴定》 讲义
《DNA 的粗提取及鉴定》讲义一、DNA 粗提取及鉴定的原理1、 DNA 在不同浓度氯化钠溶液中的溶解度不同在 014mol/L 的氯化钠溶液中，DNA 的溶解度最小；随着氯化钠溶液浓度的升高，DNA 的溶解度逐渐增大。
利用这一原理，可以将 DNA 与其他杂质分离。
2、 DNA 不溶于酒精溶液但细胞中的某些蛋白质则溶于酒精溶液。
利用这一特点，可以进一步提纯 DNA。
3、 DNA 遇二苯胺试剂会呈现蓝色这是鉴定 DNA 的常用方法。
二、实验材料的选择1、材料选取的原则应选取 DNA 含量相对较高的生物组织，以保证实验能够提取到足够量的 DNA。
同时，材料应新鲜，以避免 DNA 降解。
2、常见的实验材料鸡血细胞是进行本实验的常用材料之一。
鸡血细胞中 DNA 含量丰富，且取材方便。
三、实验步骤1、制备鸡血细胞液将新鲜的鸡血加入柠檬酸钠溶液中，防止血液凝固。
然后离心或静置，使血细胞沉淀，去除上清液，留下鸡血细胞液。
2、破碎细胞，释放 DNA向鸡血细胞液中加入蒸馏水，使细胞吸水涨破，释放出细胞内的物质，包括 DNA。
3、去除杂质（1）过滤：用纱布过滤，去除较大的杂质。
（2）溶解：向滤液中加入 2mol/L 的氯化钠溶液，使 DNA 充分溶解。
（3）析出：缓慢加入蒸馏水，使氯化钠溶液浓度降低至014mol/L，此时 DNA 溶解度最小，析出白色丝状物。
（4）过滤：用多层纱布过滤，收集 DNA 黏稠物。
4、 DNA 的进一步提纯将 DNA 黏稠物放入 2mol/L 的氯化钠溶液中溶解，然后加入等体积冷却的酒精溶液，轻轻搅拌，DNA 会析出，而蛋白质等杂质则溶解在酒精溶液中。
再次过滤，得到较纯净的 DNA。
5、 DNA 的鉴定取两支洁净的试管，分别编号为 1、2。
向 1 号试管中加入 2mL 氯化钠溶液（0015mol/L），作为对照。
向 2 号试管中加入 2mL DNA 提取液。
然后向两支试管中各加入 4mL 二苯胺试剂，混合均匀后，在沸水浴中加热 5 分钟。
DNA的提取与鉴定讲解ppt课件
4D不 溶、N解同AD，，和NA而利蛋的当m大D一液在m随逐时ND使用N白o中，氯Na原o溶N，N渐lAC杂这lA／溶浓化质/aa理l的D降L的溶解CC质L解度钠一时N等，ll溶时低溶液溶溶A或为性的沉特，可其解，；解浓溶液液析物淀D以点0D度他在度度解浓浓出质．NN，使最，0又继成度度度A的1A.或D14的低续逐选的最的低量分4N者m。溶增渐溶小浓增于择A在mo相利 在加度增解解；加0ol适不／.l1为用 盐度时大反当而度/4当LL同时最这 溶， 。2的浓，盐度浓的度Na就C能l溶使液D中N溶A解充度分
4.DNA的再溶解。 用高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液再溶解DNA粘稠物。
5.DNA的沉淀和浓缩。
对于除去了蛋白质的DNA的氯化钠溶液，必须再进 一步沉淀和浓缩，常用酒精沉淀法。即往含有Na＋的 DNA溶液，加入体积分数为95%的冷却酒精，混匀后可 以使DNA沉淀、浓缩，形成含杂质较少的DNA丝状物， 悬浮于溶液中。若丝状物较少，可将混合液再放入冰 箱中冷却几分钟即可。浓缩后的DNA丝状物可以用玻棒 （玻棒有吸附DNA的作用）缓缓旋转的方法卷起。
3.DNA的鉴定： 加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水 浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。
三、实验小结
1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌”
2.加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”
四、实验原理拓展介绍。
1.DNA的释放。 DNA主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会释 放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可以 大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速搅拌 的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。但释 放出来的大量DNA与RNA、蛋白质结合在一起，即释放 的不是纯净的DNA，常称为DNA核蛋白。 2.DNA与蛋白质分离。 在高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液中，核蛋白易溶解， 析出DNA并溶解在高浓度的氯化钠溶液中 3.DNA的析出与获取。 因为DNA在低浓度（ 0.14mol/L ）的氯化钠溶液中溶解 度小，而蛋白质的在其中的溶解度大。所以在向含DNA 的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化钠溶 液，从而使DNA溶解度下降，蛋白质溶解度增高。
dna的粗提取与鉴定知识点
dna的粗提取与鉴定知识点一、DNA的粗提取1.1 DNA的来源DNA是存在于生物体内的遗传物质，包括植物、动物、微生物等。
因此，进行DNA粗提取需要选择合适的样品，如血液、组织、细胞等。
1.2 DNA的粗提取方法常见的DNA粗提取方法有以下几种：（1）CTAB法：采用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）与其他试剂配合，可以将细胞壁和细胞膜破坏，从而释放出DNA。
（2）酚/氯仿法：通过酚和氯仿相分离原理，将DNA分离出来。
（3）硅胶柱法：利用硅胶柱吸附原理，将杂质去除后得到纯净的DNA。
二、DNA的鉴定2.1 DNA鉴定的意义DNA鉴定是指通过对个体或物品中的DNA进行检测和比对，确定其身份或来源等信息。
在犯罪侦查、亲子关系确认、遗传疾病诊断等方面有着广泛应用。
2.2 DNA鉴定方法常见的DNA鉴定方法有以下几种：（1）PCR扩增：通过PCR技术扩增目标DNA片段，以便进行后续的分析和比对。
（2）电泳分离：将PCR扩增产物进行电泳分离，根据DNA片段大小的不同，形成不同的条带。
（3）序列比对：对比不同个体或物品中的DNA序列，确定其相似性和差异性。
三、DNA粗提取与鉴定注意事项3.1 样品处理样品处理是影响DNA粗提取和鉴定结果的重要因素。
在采集、保存、运输等方面需要注意避免污染、降解等情况发生。
3.2 实验操作实验操作需要严格控制温度、时间、试剂浓度等因素，以免影响DNA 粗提取和鉴定结果。
同时需要遵守实验室安全规范，保障个人安全和实验室环境卫生。
3.3 数据解读在进行DNA鉴定时，需要结合样品来源、亲缘关系等信息进行综合判断。
同时需要考虑概率统计学原理，在数据解读时避免过度解读或误判。
DNA粗提取和鉴定实验
DNA的粗提取与鉴定实验一、实验原理①DNA主要存在于细胞核②DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的.当NaCl的物质的量浓度为 mol／L时,DNA的溶解度最低.利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出.③DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液.利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA.⑷DNA遇二苯胺沸水浴会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂.二、实验材料和用具鸡血细胞液5~10ml；体积分数为95%的冷酒精溶液实验前置于冰箱内冷却24h；蒸馏水；质量浓度为0．１g/ml的柠檬酸纳溶液；质量的浓度分别为2mol/L和0．015mol/L的氯化纳溶液新教材不要求0、015的浓度了,都是用的2mol/L；二苯胺试剂；铁架台；镊子；水浴锅；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒100ml,一个；烧杯；1000ml,一个,50ml、100 ml 、500ml 各二个；试管20ml,二个；漏斗；试管夹；纱布.三、课前准备鸡血细胞液取质量浓度为0．1g/ml的柠檬酸纳溶液抗凝剂100ml,置于500ml烧杯中.注入新鲜的鸡血约180ml,同时用玻璃棒搅拌,使血液与柠檬酸纳溶液充分混合,以免凝血.将烧杯中的血液置于冰箱内,精置一天,使血细胞自行沉淀.也可以将血液倒入离心管内,用1000r/min转每分的离心机离心2min,血细胞沉淀于离心管底部.实验时.用吸管除去离心管上部的澄清液,就可以得到鸡血细胞液.四、方法步骤①提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL,注入到50 mL烧杯中.向烧杯中加入蒸馏水20 mL,同时用玻璃棒充分搅拌5 min,使血细胞加速破裂.然后,用放有1-2层纱布的漏斗将血细胞液过滤至1000mL.取其滤液.②溶解细胞核内的DNA将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L的溶液40mL加入到滤液中,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,使其混合均匀,这时DNA在溶液中呈溶解状态 .③析出含DNA的粘稠物沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水,同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌,这时烧杯中有丝状物出现,注意观察丝状物呈什么颜色.继续加入蒸馏水,溶液中出现的粘稠物会越来越多.当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于 mol／L经验值：需加约570mL蒸馏水,且分多次加入.将溶液中的DNA与其他杂质分离,这一步骤是实验成败的关键.实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水,并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌,以利于DNA分子的附着和缠绕.④滤取含DNA的粘稠物用放有多层纱布的漏斗,过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中,含 DNA的粘稠物被留在纱布上,滤液丢弃.⑤将DNA的粘稠物再溶解取 1个 50 mL烧杯,向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L的溶液 20mL.用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中,用玻璃棒不停地搅拌,约3分钟,使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中.⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液取1个100 mL烧杯,用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液.取其滤液,DNA溶于滤液中.⑦提取含杂质较少的DNA在上述滤过的溶液中,加入等体积的、冷却的、体积分数为 95％的酒精溶液使用冷却的酒精,对DNA的凝集效果较佳,并用玻璃棒搅拌,溶液中会出现含杂质较少的白色丝状物.用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面的水分.这种丝状物的主要成分就是DNA.⑧ DNA的鉴定取两支20 mL的试管,各加入氯化钠的物质的量浓度为0．015 mol／L的溶液5 mL,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解.然后,向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂.混合均匀后,将试管置于沸水中加热 5 min,待试管冷却后,观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化.五、讨论①两次使用蒸馏水第一次：细胞吸水胀破第一步第二次：使 DNA黏稠物析出第三步②三次过滤第一次： DNA存在于滤液里第一步第二次： DNA被留在纱布上第四步第三次： DNA存在于滤液里第六步过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关,第二次要用其滤出的黏稠物有关,所以要使用多层纱布,第一次和第三次均要用其滤液,使用的纱布为1－2层③两次析出第一次：用 mol／L 的NaCI溶液含杂质多第三步第二次：用冷却的95％的酒精第七步④六次搅拌：第一、二、三、五、七、八步其中除第八步外,其余均要朝一个方向搅拌,在第三、五步搅动还要轻缓,玻璃棒不要直插烧杯底部,这样才能保证得到完整的DNA为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质答：用高盐浓度的溶液溶解DNA,能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质.因此,通过反复溶解与析出DNA,就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质在NaCl溶液浓度低于 mol/L时,DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在 mol/L 时,DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时,DNA的溶解度又逐渐增大.。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
⑶.析出含DNA的粘稠物： 在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅 拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水 （此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。
⑷.滤取含DNA的粘稠物： 用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。 在20mL烧杯中轻缓搅拌 3min，使尽可能多的 DNA溶解在NaCl溶液。 ⑹.过滤含有DNA的NaCl溶液： 用放有两层纱布的漏斗过滤步骤⑸所得的溶液，滤液中 含有DNA。 ⑸. DNA粘稠物的再溶解： 20mL2mol/L的NaCl溶液 步骤⑷含DNA的粘稠物
⑺.提取含有杂质较少的DNA： 步骤⑹所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精50mL， 用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳 白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上 面的水分。
3.DNA的鉴定： 加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水 浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。
为了纯化提取的 DNA需要 将滤液作进一步处理
讨论：此步骤获得的滤液中可 能含有哪些细胞成分？
答：可能含有核蛋 白 、 多 糖 和 RNDNA ， 能够去除杂质
（四） DNA的析出与鉴定
1 、以血液为实验材料时，每 100ml 血 液中需要加入 3g 柠檬酸钠，防止血液 凝固。 2、加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和， 否则容易产生大量的泡沫，不利于后 续步骤的操作。加入酒精和玻璃棒搅 拌时，动作要轻缓，以免加剧 DNA 分 子的断裂，导致 DNA 分子不能形成絮 状沉淀。 3、二苯胺试剂要现配现用，否则会影 响鉴定的效果。
三、实验小结 1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌”
2. 加入“两次蒸馏水， 三次 NaCl 溶液 ，一次酒精”
四、实验原理拓展介绍。 1.DNA的释放。 DNA主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会释 放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可以 大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速搅拌 的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。但释 放出来的大量DNA与RNA、蛋白质结合在一起，即释放 的不是纯净的DNA，常称为DNA核蛋白。 2.DNA与蛋白质分离。 在高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液中，核蛋白易溶解， 析出DNA并溶解在高浓度的氯化钠溶液中 3.DNA的析出与获取。 因为DNA在低浓度（ 0.14mol/L ）的氯化钠溶液中溶解 度小，而蛋白质的在其中的溶解度大。所以在向含DNA 的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化钠溶 液，从而使DNA溶解度下降，蛋白质溶解度增高。
讨论 1 ：构成生物体的遗 传物质是什么？
讨论 2 ：如何证明 他们是遗传物质？
讨论 3 ：怎样才能将细胞内的这 些物质分离出来？
提取DNA的方法 1、提取生物大分子的基本思路
选用一定的物理或化学方法分离具有
2、生物大分子
主 要 指 蛋白 质 、 酶和核酸
不同物理或化学性质的生物大分子
3、提取DNA的基本思路
4.DNA的再溶解。 用高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液再溶解DNA粘稠物。 5.DNA的沉淀和浓缩。 对于除去了蛋白质的DNA的氯化钠溶液，必须再进 一步沉淀和浓缩，常用酒精沉淀法。即往含有Na＋的 DNA溶液，加入体积分数为95%的冷却酒精，混匀后可 以使DNA沉淀、浓缩，形成含杂质较少的DNA丝状物， 悬浮于溶液中。若丝状物较少，可将混合液再放入冰 箱中冷却几分钟即可。浓缩后的DNA丝状物可以用玻棒 （玻棒有吸附DNA的作用）缓缓旋转的方法卷起。 6.DNA的鉴定。 100℃ DNA＋二苯胺 蓝色物 鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。
7、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
①蛋白酶能水解蛋白质， 但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受 60 － 80°C 的 高 温 ， 而 DNA 在80°C以上才会变性 ③洗涤剂可以溶解细胞的 细胞膜，去除脂质和蛋白 质,但对DNA没有影响
（一）实验材料的选取
（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液
讨论：为什么加 入蒸馏水能使鸡 血细胞破裂？
2、植物细胞 ①植物细胞需要先 用一定的洗涤剂和 食盐溶解细胞膜
②实例：提取洋葱 DNA 时 ， 在 切 碎 的 洋 葱中加入一定的洗涤 剂和食盐，进行充分 的搅拌和研磨，过滤 后收集研磨液
讨论：如果研磨不充分，会 对实验结果产生怎样的影响？
（三）去除滤液中的杂质
三、实验步骤
1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得）
0.1g/mL柠檬酸钠100mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌， 离心、分离或静置沉淀。 活鸡鲜血180mL 2.提取DNA。 ⑴.提取血细胞核物质： ①取血细胞5-10mL＋20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向 快速搅拌。 ②纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。 ⑵.溶解核内的DNA： 滤液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向轻缓 搅拌。
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的
差异，提取DNA，去除其他成分
在 NaCl 溶 液 浓 度 低 于 0.14 4、DNA的溶解性 当氯化钠的物质的量浓度为
2 mol/L 时 ， DNA 的 溶 解 度 随 mol ／ L 时， DNA 的溶解度最大， DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的 NaCl溶液中溶解度不 NaCl溶液浓度的增加而逐渐 浓度为 0．14 mol／L时，DNA 降 低 ； 在 0.14 mol/L 时 ， 的溶解度最低。利用这一原理， 同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使 DNA充分溶解， DNA 溶解度最小；当 NaCl 溶 可以使 DNA 在盐溶液中溶解或 液浓度继续增加时， DNA 的 析出 而使杂质沉淀，或者相反 溶解度又逐渐增大。
①根据DNA在NaCl溶液中的溶 ②如何通过控制 NaCl溶液的浓 解度曲线图，思考在什么浓 度使 DNA 在盐溶液中溶解或析 度下 ， DNA 的溶解度最小？ 出？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是 如何变化的？
6、DNA在酒精溶液中的溶解性
DNA 不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以 溶于酒精。利用这一原理，可以将 DNA 与蛋白质进一 步分离