细菌常用生理生化鉴定
细菌鉴定中常用的生理生化反应
葡萄球菌可产生凝固酶，使血浆中的 纤维蛋白原转变为纤维蛋白，导致血 浆凝固。
其他细菌的分类和鉴定
氧化发酵试验
细菌对碳水化合物的代谢方式不同，可分为氧化型和发酵型。通过 观察细菌在氧化发酵培养基中的生长情况和颜色变化来判断结果。
硝酸盐还原试验
细菌可将硝酸盐还原为亚硝酸盐或氮气，通过观察培养基中硝酸盐 的颜色变化来判断结果。
细菌鉴定在医学、工业等领域的应用
细菌鉴定对于医学诊断、流行病学调查、食品卫生、环境监测等领域具有重要意 义，因此，掌握细菌鉴定的方法和技巧至关重要。
细菌鉴定的重要性
准确识别病原菌
通过细菌鉴定，可以准确识别 引起人类和动植物疾病的病原 菌，为疾病的预防和治疗提供
科学依据。
保障食品安全
细菌鉴定在食品工业中用于检 测食品中的有害菌和腐败菌， 确保食品的安全和质量。
细菌鉴定中生理生化反应的改进方向
自动化技术应用
通过自动化仪器和计算机技术，实现 生理生化反应的自动化操作和数据分 析，提高鉴定效率和准确性。
多项指标联合应用
将多个生理生化反应指标联合应用， 形成综合评价体系，提高细菌鉴定的 准确性和可靠性。
新型反应的开发
针对现有生理生化反应的不足，开发 新的反应类型和试剂盒，以满足更多 种类细菌的鉴定需求。
明胶液化试验
某些细菌可分泌明胶酶，将明胶分解为可溶性的多肽和氨基酸，通过 观察明胶的液化情况来判断结果。
05
细菌鉴定中生理生化反 应的优缺点及改进方向
生理生化反应的优缺点
准确性高
通过特定的生理生化反应，可以准确 地鉴定细菌种类。
操作简便
大多数生理生化反应的操作步骤相对 简单，易于掌握。
生理生化反应的优缺点
实验三 细菌鉴定中的几种生化试验
玫瑰吲哚 （阳性反应）
2、V-P试验 [原理]
葡萄糖
丙酮酸
缩合
乙酰乳酸
脱羧
乙酰甲基甲醇
碱性条件
二乙酰
与培养基中精氨酸 的胍基结合
红色化合物（阳性反应）
3、MR试验
[原理]
葡萄糖 丙酮酸
大量混合酸
pH值降至4.5以下
非酸性末端产物(醇、醛等）
pH值＞6.2 甲基红指示剂 培养基橘黄色(阴性反应)
荡，再放入 37℃温箱中保温 15-30min。若培养物呈
红色者，为VP 试验反应阳性 3、 “+”表示阳性反应， “-”表示阴性反应。
MR试验
1、将另一半葡萄糖蛋白胨水培养液内加入甲 基红试剂 2 滴，培养基变为红色者为阳性，变黄 色者为阴性。 2、 “+”表示阳性反应， “-”表示阴性反应。
细菌生化实验误差原因？
柠檬酸盐 利用试验 吲哚试验 硫化氢试验
IMViC 试验
硝酸还原酶试验， 淀粉水解试验
内容
一、糖发酵试验 二、IMViC试验
1、吲哚试验
2、V-P试验 3、MR试验 三、淀粉水解试验
说明
1、本次细菌的生化试验仅选择5项代表性试验
2、本次实验均按传统的生化试验方法进行检测
现代快速生化检测
现代快速生化检测
实验三
细菌鉴定中常用的几种生化试验
细菌的生化试验
用生化的方法来检测细菌对各种基质 的代谢作用及代谢产物，借以鉴别细菌 种类，这种生化试验称为细菌的生化反 应试验；是鉴别细菌的重要依据 。
碳水化合物 代谢试验
糖发酵试验 甲基红试验（MR） V-P试验
常 见 的 生 化 反 应
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。
生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。
本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。
二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。
三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。
四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。
结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。
若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。
2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。
3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。
4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。
结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告细菌鉴定是微生物学中的一个重要分支，它是通过对细菌的形态、生理生化反应、生长特性等方面进行分析，来确定细菌种类的过程。
在细菌鉴定中，生理生化反应实验是一种常用的方法，它可以通过观察细菌在不同条件下的生长情况，来确定细菌的种类。
本文将介绍几种常用的生理生化反应实验。
1. 氧气需求实验氧气需求实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧气需求量。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧气浓度的培养基中，然后观察细菌的生长情况。
如果细菌只能在氧气充足的条件下生长，那么它就是一种需氧菌；如果细菌只能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种厌氧菌；如果细菌既能在氧气充足的条件下生长，也能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种兼性厌氧菌。
2. 糖类发酵实验糖类发酵实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌对不同糖类的发酵能力。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同糖类的培养基中，然后观察培养基的酸碱度变化。
如果培养基的酸碱度发生了变化，那么说明细菌对这种糖类进行了发酵。
通过这个实验，我们可以确定细菌对哪些糖类具有发酵能力，从而进一步确定细菌的种类。
3. 氧化还原实验氧化还原实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧化还原能力。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧化还原剂的培养基中，然后观察培养基的颜色变化。
如果培养基的颜色发生了变化，那么说明细菌对这种氧化还原剂具有反应能力。
通过这个实验，我们可以确定细菌的氧化还原能力，从而进一步确定细菌的种类。
4. 酶活性实验酶活性实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的酶活性。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同底物的培养基中，然后观察底物的变化情况。
如果底物发生了变化，那么说明细菌对这种底物具有酶活性。
通过这个实验，我们可以确定细菌的酶活性，从而进一步确定细菌的种类。
细菌的生理生化鉴定方法
方法2.3.5 细菌的生理生化鉴定１、形态学观察采用插片法、埋片法, 对该拮抗细菌的菌落形态特征作镜检观察。
用革兰氏染色进行油镜观察。
①革兰氏染色溶液和试剂：革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈式碘液，95%乙醇，番红复染液等。
试验步骤：(1) 涂片：取活跃生长期菌种按常规方法涂片（不易过厚）、干燥和固定。
(2) 初染：滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位1～２min，用水冲洗至流出水无色。
(3) 媒染：先用卢戈氏碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖１min，倾去碘液，水洗至流出水无色。
(4) 脱色：在上述涂片上流加95%乙醇溶液（一般20～30s），当脱色至流出液无色时立即用水洗去乙醇。
(5) 复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min，水洗，用吸水纸吸去残水晾干。
(6) 镜检：用油镜观察。
②芽孢染色(1) 制片：按常规方法涂片、干燥及固定。
(2) 加热染色：向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸汽并维持５min，加热时应注意补充染液，切勿让涂片干涸。
脱色：待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色。
(3) 复染：用0.5%番红水溶液复染2min。
(4) 水洗：用缓流自来水冲洗至无色。
(5) 镜检：晾干载玻片后油镜镜检。
③鞭毛染色（硝酸银染色法）(1) 载玻片准备：将载玻片置于含洗衣粉或洗涤剂的水中煮沸20min，然后用清水充分洗净，再置于95%乙醇中浸泡，使用时取出在火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。
(2) 菌液制备：用接种环挑取菌落边缘菌体，悬浮于1～2mL无菌水中制成菌悬液，不能剧烈震荡。
(3) 制片：取一滴菌悬液滴到载玻片一侧，倾斜玻片，使菌悬液流向另一边，用吸水纸吸取多余的菌悬液，自然干燥。
(4) 染色：滴加硝酸银染色A液覆盖3～5min，用蒸馏水充分洗去A液，再滴加B液染色约1 min，期间可用微火加热，当涂面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗。
微生物鉴定中常用的生理生化试验
微生物鉴定中常用的生理生化试验一、实验目的1.证明不同微生物对各种有极大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握微生物大分子物质水解实验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中重要作用。
4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5.了解IMViC的原理。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以它们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1.淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种四种细菌（枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2.糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
3.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
（1）吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
（2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
三、实验材料1.菌种大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球(Staphyloccocus aureus Rosenbach)，铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa），枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis Cohn），产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，普通变形杆菌（Proteus.vulgaris)。
细菌生理生化鉴定
细菌生理生化鉴定
细菌生理生化鉴定是通过对细菌在特定生理和生化条件下的反应进行观察和分析，以确定其种类和特性的过程。
这通常包括一系列实验，涉及对细菌代谢途径、酶活性、生长条件等方面的研究。
以下是细菌生理生化鉴定的一些常见方法和实验：
1.形态学观察：
形状：观察细菌的形状，可以是球形（球菌）、杆状（杆菌）、螺旋形等。
结构：使用显微镜检查是否有胞壁、胞膜、纤毛、鞭毛等结构。
2.生理特性：
生长条件：观察细菌在不同温度、pH值和氧气条件下的生长情况。
营养需求：测试细菌对不同营养物质（碳源、氮源、矿物质等）的利用能力。
3.生化反应：
大肠杆菌的IMViC测试：Indole（吲哚）测试、Methyl Red（甲基红）测试、V oges-Proskauer（V-P）测试、Citrate（柠檬酸）测试、
4．氧化还原反应：观察细菌对不同氧化还原指示剂（如甲基红、溴亚甲蓝）的反应，推断其对氧化还原条件的适应性。
5.酶活性测试：
氧化酶：使用氧敏感指示剂观察酶的活性。
淀粉酶：利用淀粉琼脂板，观察菌落周围是否发生淀粉分解带。
蛋白酶：使用明胶板检测细菌对蛋白质的分解能力。
6.抗生素敏感性测试：确定细菌对不同抗生素的敏感性，通过纸片扩散法或肉汤稀释法进行。
7.分子生物学方法：16S rRNA测序：通过测序菌株的16S rRNA基因，进行分子水平的种类鉴定。
8.培养基选择：利用特定培养基，如MacConkey琼脂培养大肠杆菌等，根据细菌在培养基上的生长情况进行初步鉴定。
细菌的生理生化鉴定方法
方法2.3.5 细菌的生理生化鉴定１、形态学观察采用插片法、埋片法, 对该拮抗细菌的菌落形态特征作镜检观察。
用革兰氏染色进行油镜观察。
①革兰氏染色溶液和试剂：革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈式碘液，95%乙醇，番红复染液等。
试验步骤：(1) 涂片：取活跃生长期菌种按常规方法涂片（不易过厚）、干燥和固定。
(2) 初染：滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位1～２min，用水冲洗至流出水无色。
(3) 媒染：先用卢戈氏碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖１min，倾去碘液，水洗至流出水无色。
(4) 脱色：在上述涂片上流加95%乙醇溶液（一般20～30s），当脱色至流出液无色时立即用水洗去乙醇。
(5) 复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min，水洗，用吸水纸吸去残水晾干。
(6) 镜检：用油镜观察。
②芽孢染色(1) 制片：按常规方法涂片、干燥及固定。
(2) 加热染色：向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸汽并维持５min，加热时应注意补充染液，切勿让涂片干涸。
脱色：待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色。
(3) 复染：用0.5%番红水溶液复染2min。
(4) 水洗：用缓流自来水冲洗至无色。
(5) 镜检：晾干载玻片后油镜镜检。
③鞭毛染色（硝酸银染色法）(1) 载玻片准备：将载玻片置于含洗衣粉或洗涤剂的水中煮沸20min，然后用清水充分洗净，再置于95%乙醇中浸泡，使用时取出在火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。
(2) 菌液制备：用接种环挑取菌落边缘菌体，悬浮于1～2mL无菌水中制成菌悬液，不能剧烈震荡。
(3) 制片：取一滴菌悬液滴到载玻片一侧，倾斜玻片，使菌悬液流向另一边，用吸水纸吸取多余的菌悬液，自然干燥。
(4) 染色：滴加硝酸银染色A液覆盖3～5min，用蒸馏水充分洗去A液，再滴加B液染色约1 min，期间可用微火加热，当涂面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗。
第四五讲细菌典型生理生化鉴定技术
五、 呼吸酶类试验
氧化酶试验 过氧化氢酶试验 硝酸盐还原试验 氰化钾试验
（一） 氧化酶试验
1.原理: 氧化酶使细胞色素C氧化后，氧化
型细胞色素C再使盐酸二甲基对苯二胺 氧化，使生成玫瑰红色到暗紫色的醌类 化合物,再和α-萘酚结合,生成吲哚酚蓝, 呈蓝色反应，为阳性。
阳性反应试验管颜色变化过 程：
紫色→黄色→紫色
（五） 苯丙氨酸脱氨酶试验
1、原理： 某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，
使苯丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸， 苯丙酮酸与氯化铁作用生成绿色化合 物，以此鉴别细菌。
2、试验方法
• 从待检菌琼脂斜面上挑取大量培养物， 接种于苯丙氨酸培养基上，在36±1 ℃ 培养18~24h后，加入氯化铁溶液4~5滴， 转动试管，使试剂与菌苔表面充分接 触，立即观察结果。
3、结果观察与记录
（1）出现紫色或紫红色者,为阳性，记录 为+；
（2）与对照管颜色相同者,为阴性，记录 为-
（六） 甘油品红试验
1、原理： 某些细菌可分解甘油成为丙酮酸，并进一步
脱羧生成乙醛，乙醛与无色品红生成醌式化合 物，呈深紫红色，以此鉴别细菌。
2、试验方法：
取待检菌的新鲜纯培养物，接种于 甘油品红肉汤培养基中，于36±1 ℃培 养8天,并用未接种的培养基在相同条件 下培养作为阴性对照，观察结果。
2、试验方法
挑取新鲜的待试培养物少许，接种于磷 酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于36±1 ℃或 30 ℃（以30 ℃较好）培养3~5天，从第48h起， 每日取培养液1mL，加入甲基红指示剂1~2滴， 立即观察结果。
MR-VP试验原理及照片
V-P
3、结果观察与记录
（1）呈鲜红色或橘红色为阳性，呈淡红色 为弱阳性，记MR+；
微生物生理生化鉴定
了解细菌生理生化反应原理以及在细 菌鉴定中的重要作用
掌握通过生理生化反应鉴别不同细菌 的基本方法
基本原理
糖发酵试验：是鉴别肠道细菌的常用生化 反应。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳 源和能源，但是它们在分解糖的能力上有 很大的差异，例如大肠杆菌能分解乳糖和 葡萄糖产酸并产气；普通变形杆菌分解葡 萄糖产酸产气，不能分解乳糖。
甲基红试验
大肠杆菌：+ 产气杆菌： –
阳性 阴性
伏-普试验原理
产气杆菌： V.P.试验阳性 大肠杆菌： V.P.试验阴性
V.P试验
大肠杆菌：– 产气杆菌：+
阳性 阴性
IMViC 试验
柠檬酸盐试验：用来检测细菌利用柠檬酸的 能力。有些细菌能分解柠檬酸形成CO2，由 于培养基中钠离子的存在而形成碳酸钠，使 pH升高，当用溴麝香草酚蓝作为指示剂时， 培养基颜色发生变化。溴麝香草酚蓝变色范 围为，pH6.0-7.6呈绿色，pH＞7.6时呈蓝色。
糖发酵试验
大肠杆菌：产酸产气
大肠杆菌分解糖类产生多种有机酸，使培养液呈 酸性；产生的甲酸在酸性条件下可进一步裂解生 成H2和CO2
发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂由紫色(pH6.8)变为 黄色(pH5.2)；气体的产生可由倒置的德汗氏小管 中有无气泡来证明。
乳糖发酵试验
大肠杆菌：+ 变形杆菌： –
IMViC 试验
结果观察
柠檬酸盐试验：观察培养基颜色变化，含有 溴麝香草酚蓝的斜面呈蓝色者为阳性反应， 呈绿色者为阴性反应。
H2S试验
IMViC是吲哚试验（indol test）、甲基红试验 （methyl red test）、伏-普试验（Voges-Prokauer test） 和柠檬酸盐试验（citrate test）四个试验的 缩写。这四个试验主要用来鉴别大肠杆菌与产气肠 杆菌，而且主要是用于水的细菌学检查，因为大肠 杆菌虽非致病菌，但在饮水中若大肠杆菌超过一定 数量则表示受粪便污染，而产气肠杆菌则广泛存在 于自然界中，因此，检查水时要将二者区分开来。
细菌的鉴定方法
细菌的鉴定方法细菌是一类微小的单细胞生物，它们在自然界中广泛存在，并且在生物学研究和医学诊断中具有重要的意义。
为了准确鉴定细菌的种类，科学家们发展了多种方法。
本文将介绍几种常见的细菌鉴定方法。
一、形态学观察法形态学观察法是最早也是最基础的细菌鉴定方法之一。
通过使用显微镜观察细菌的形态特征，如形状、大小、颜色等，可以初步判断细菌的类别。
常见的形态学观察方法包括染色技术，如革兰氏染色和抗酸染色，以及电子显微镜观察技术。
这些方法可以帮助鉴定出细菌的基本形态特征，但并不能确定其种类。
二、生理生化试验法生理生化试验法是通过研究细菌在特定环境条件下的生理和生化特性来鉴定细菌。
这种方法通常包括对细菌的代谢能力、酶活性、氧气需求和产物等进行测试。
常用的生理生化试验包括碳源利用试验、氧气需求试验、酶活性试验等。
通过对细菌在这些试验中的反应结果进行分析，可以初步确定细菌的种类。
三、分子生物学方法分子生物学方法是近年来发展起来的一种高效、准确的细菌鉴定方法。
这种方法是通过分析细菌的基因组DNA序列和RNA序列来确定其种类。
常用的分子生物学方法包括PCR扩增技术、核酸杂交技术和基因测序技术等。
利用这些技术，科学家们可以比较细菌的基因序列与已知的细菌数据库中的序列进行比对，从而确定细菌的种类。
四、质谱法质谱法是一种基于质量-电荷比的分析技术，可以用于鉴定细菌。
这种方法通过将细菌样品离子化，然后将离子通过质谱仪进行分析，得到细菌样品的质谱图谱。
通过比对质谱图谱与数据库中已知细菌的质谱图谱，可以确定细菌的种类。
质谱法具有灵敏度高、分析速度快的优点，因此在微生物学研究和临床实验室中得到了广泛应用。
五、免疫学方法免疫学方法是利用细菌与免疫系统之间的相互作用来鉴定细菌。
常用的免疫学方法包括血清学试验和免疫染色技术。
在血清学试验中，科学家们通过观察细菌与特定抗体之间的反应来确定细菌的种类。
而免疫染色技术则是通过使用特定抗体标记细菌，然后观察染色结果来鉴定细菌。
微生物鉴定常用的生理生化试验实验报告
山东大学实验报告2017年12月4 日___________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物鉴定常用的生理生化试验姓名：丁志康一、目的要求1.证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。
4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5.了解IMViC反应的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二、基本原理1、生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。
胞外酶只要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。
这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实；淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘测定不在产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。
脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，使pH降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色变成深红色，说明胞外存在着脂肪酶。
2、糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。
绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。
有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳糖、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳的等）；有些细菌只产酸不产气。
例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。
发酵培养基含有蛋白胨，指示剂（溴甲酚紫），倒置的德汉氏小管和不同的糖类。
当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）变为黄色（pH5.2）。
气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。
3、IMViC反应是吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验和柠檬酸试验4个试验的首字母缩写。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告背景细菌鉴定是微生物学中的一项重要任务，通过对细菌的形态、生理特征和生化反应进行分析，可以确定细菌的种属和特性。
生理生化反应实验是其中的关键步骤，通过观察细菌对不同物质的代谢情况，可以获取有关其代谢能力、营养需求和产物生成等信息。
本报告旨在介绍常用的细菌生理生化反应实验方法，并分析实验结果以提供准确的鉴定和分类建议。
分析1. 嗜热/嗜冷性嗜热/嗜冷性是指细菌对温度的适应能力。
常用实验方法包括在不同温度条件下进行培养观察，并记录生长情况。
根据结果可将细菌分为嗜热菌（适宜高温）、嗜冷菌（适宜低温）或中温菌（适宜中等温度）。
2. 好氧/厌氧性好氧/厌氧性是指细菌对氧气需求的差异。
常用实验方法包括在含氧和不含氧的培养条件下观察细菌生长情况。
根据结果可将细菌分为好氧菌（需氧）、厌氧菌（不需氧）或兼性厌氧菌（能在有或无氧的条件下生长）。
3. 革兰氏染色革兰氏染色是观察细菌壁结构的常用方法。
该实验通过处理细菌样品，并使用革兰染色剂将其染色，然后观察其颜色变化。
根据结果可将细菌分为革兰阳性（蓝紫色）或革兰阴性（红粉色）。
4. 淀粉酶活性淀粉酶活性实验用于检测细菌对淀粉的降解能力。
该实验将待测细菌培养于含淀粉的琼脂平板上，经过一段时间后，用碘液滴定并观察是否出现透明圈。
透明圈表示淀粉被降解且产生了淀粉酶。
5. 水解酪蛋白活性水解酪蛋白活性实验用于检测细菌对酪蛋白的降解能力。
该实验将待测细菌培养于含酪蛋白的琼脂平板上，经过一段时间后，用盖有硫酸铜的试管放置在平板上，观察是否出现由蓝色转变为紫色的反应。
颜色变化表示细菌产生了水解酪蛋白酶。
6. 氧化/发酵代谢氧化/发酵代谢实验用于检测细菌在代谢过程中产生的产物。
该实验将待测细菌接种于含有碳源的培养基中，并根据pH指示剂颜色变化观察细菌是通过氧化代谢还是发酵代谢产生能量。
氧化代谢通常伴随着pH值升高，培养基呈碱性；而发酵代谢则通常伴随着pH值降低，培养基呈酸性。
细菌的常用生化试验
应用：主要用于厌氧菌的鉴别。类杆菌属中的中间类杆 菌产生脂酶，其他类杆菌则阴性；芽胞梭菌属中产芽胞 梭菌、肉毒梭菌和诺维梭菌也有此酶，而其他梭菌阴性。
5.卵磷脂酶试验
原理：有的细菌产生卵磷脂酶（α-毒素），在钙离子存 在时，此酶可迅速分解卵磷脂，生成浑浊沉淀状的甘油 酯和水溶性磷酸胆碱。
方法：将被检菌划线接种或点种于卵黄琼脂平板上，于 35℃培养3～6h。
普罗威登菌和摩根菌为阳性，而斯
氏和产碱普罗威登菌阴性
5.苯丙氨酸脱氨酶试验
原理 方法：将被检菌浓厚接种于苯丙氨酸琼脂培养基斜面上， 于35℃培养l8～24h，滴加10%三氯化铁试剂3～4滴，自 斜面上方流下。 结果：出现绿色为阳性。应立即观察结果，延长反应时 问会引起褪色。 应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变 形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属细 菌均为阳性，肠杆菌种中其他细菌均为阴 性。
原理
由于细菌各自具有不同的酶系统，对糖的分解能 力不同，有的能分解某些糖产生酸和气体，有的 虽能分解糖产生酸，但不产生气体，有的则不分 解糖。据此可对分解产物进行检测从而鉴别细菌。
具体试验有：①糖类发酵试验；②葡萄糖代谢类 型鉴别试验；③七叶苷水解试验；④淀粉水解试 验；⑤甲基红试验；⑥V-P试验；⑦β-半乳糖苷 酶试验（ONPG试验）。
1.明胶液化试验
原理 方法：将被检菌穿刺接种于明胶培养基，于22℃培养7d， 逐日观察结果。 结果：培养基呈液化状态为阳性。 应用：肠杆菌科细菌的鉴别，如沙 雷菌、普通变形杆菌、奇异变形杆 菌、阴沟杆菌等可液化明胶，而其 他细菌很少液化明胶。有些厌氧菌 如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也 能液化明胶。另外多数假单胞菌也 能液化明胶。
鉴定细菌的方法
鉴定细菌的方法一、形态学鉴定法形态学鉴定法是通过观察细菌在显微镜下的形态特征来进行鉴定。
细菌的形态特征包括细菌的形状、大小、胞壁结构、胞内结构等。
通过染色技术，如革兰氏染色、抗酸染色等，可以更清晰地观察到细菌的形态特征。
形态学鉴定法简单易行，但对操作者的经验要求较高。
二、生理生化特性鉴定法生理生化特性鉴定法是通过研究细菌在特定条件下的代谢特点来进行鉴定。
包括对细菌的营养需求、氧气需求、产酶能力、代谢产物等进行检测。
常用的生理生化鉴定方法有氧耗量法、氧化酶试验、碳水化合物利用试验等。
通过与已知细菌的生理生化特性进行比对，可以确定未知细菌的种类和特性。
三、分子生物学鉴定法分子生物学鉴定法是通过分析细菌的基因组DNA序列或特定基因的序列来进行鉴定。
常用的分子生物学鉴定方法包括PCR技术、脱氧核糖核酸(DNA)序列比对等。
通过比对未知细菌的基因序列与数据库中已知细菌的基因序列，可以准确确定细菌的种属和亲缘关系。
四、免疫学鉴定法免疫学鉴定法是通过检测细菌与特定抗体的反应来进行鉴定。
常用的免疫学鉴定方法有免疫沉淀试验、酶联免疫吸附试验等。
通过与已知抗体的反应性比对，可以确定细菌的种类和抗原特性。
五、质谱鉴定法质谱鉴定法是通过分析细菌样品中的代谢产物或特定蛋白质的质谱图谱来进行鉴定。
质谱鉴定法具有高分辨率和高灵敏度的优点，可以对细菌的代谢产物进行全面分析，提供更准确的鉴定结果。
六、综合鉴定法综合鉴定法是将多种鉴定方法相结合，通过综合分析不同方面的鉴定结果来进行细菌的鉴定。
这样可以提高鉴定的准确性和可靠性。
例如，先利用形态学鉴定法对细菌进行初步鉴定，然后再通过生理生化特性鉴定法、分子生物学鉴定法等进行进一步确认。
细菌的鉴定方法多种多样，每一种方法都有其优点和局限性。
在实际应用中，常常需要综合运用多种鉴定方法来进行细菌的鉴定，以提高准确性和可靠性。
同时，随着科学技术的不断发展，新的鉴定方法也在不断涌现，为细菌的鉴定和研究提供了更多的选择和可能性。
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细菌鉴定中常用的生理生化反应
录入时间:2009-8-13 15:12:12 来源：中国生命科技论坛
1、实验原理
（1）细菌生化试验
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。
用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。
（2）糖（醇）类发酵试验
不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。
其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。
酸的产生可利用指示剂来判定。
在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。
气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。
（3）甲基红（Methylred ）试验（该试验简称MR 试验）
很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。
因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）一pH6 . 2 （黄色）。
若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。
（4）大分子物质代谢实验．
靛基质（口引睬）试验
某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。
硫化氢试验
某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。
明胶液化实验
某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。
淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）
细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖（或麦芽糖），再被细菌吸收利用，细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。
（5）有机酸盐及氨盐利用试验
柠檬酸盐利用试验
柠檬酸盐培养基系一综合性培养基，其中柠檬酸钠为碳的唯一来源。
而磷酸二氢按是氮的唯一来源。
有的细菌如产气杆菌，能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。
此时培养基中的溟廖香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色。
不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌，在该培养基上不生长，培养基不变色。
2、实验仪器，材料和用具
（1）实验仪器
37OC 恒温培养箱、20OC 恒温培养箱（室温代替）。
（2）微生物材料
大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、产气杆菌这四种菌种的斜面各1 支。
（3）试剂
甲基红试剂、V . P 试剂、叫噪试剂、格里斯试剂（硝酸盐利用试验）、卢戈氏碘液（淀粉水解试验）（4）实验用具
试管：每份每个试验2 根试验，1 根对照，8 个试验共27 根。
无菌乎皿：每份2 个
杜氏小管：每份6 个。
接种环、酒精灯、试管架、记号笔。
（5）培养基
葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基：何份各6 支试管，何支5 一10mi 培养基，灭菌。
用于糖类发酵试验。
葡萄糖蛋白陈水培养基：每份3 支试管，何支5 一10mi 培养基，灭菌。
用于甲基红和V . P 试验。
胰蛋白水培养基：每份3 支何支5 一10mi 培养基，灭菌。
用于叫睬试验。
柠檬酸铁钱或醋酸铅的半固体培养基；每份3 支，每支5 一10ml 培养基，灭菌。
用于硫化氢试验。
营养明胶培养基：每份3 支，每支．5 一10ml 培养基、灭菌。
用于明胶液化试验。
淀粉培养基：每份2 个平皿，每平皿约20ml 培养基，灭菌后倒入平皿。
用于淀粉水解试验。
柠檬酸钠培养基：每份3 支，每支5 一IOml 培养基，灭菌，做斜面。
用于柠檬酸盐利用试验。
3、实验步骤
（1）糖（醇）类发酵试验
编号在各试管上分别标明发酵培养基名称，所接种的菌名和组号，下同。
接种取葡萄糖发酵培养基3 支，按编号1 支接种大肠杆菌，另1 支接种普通变形杆菌，第3 支不接种，作为对照C 同样取3 支乳糖发酵培养基，1 支接种大肠杆菌，1 支接科普通变形杆菌，第3 支不接种，作为对照。
将己接种好的培养基置37OC 温箱中培养24h 。
观察结果：被检细菌若能发酵培养基中的糖时，则使培养基的pH 降低，这时培养基中的指示剂呈酸性反应（为黄色），若发酵培养基中的糖产酸产气，则培养基不仅显酸色反应，并且在培养基中倒置的小玻璃管（杜氏小管）中有气体。
气体占整个倒置小玻管的10 ％以上。
若被检细菌不分解培养基中的糖，则培养基不发生变化。
（2）甲基红试验（MR 试验）
将大肠杆菌和产气杆菌分别接种到葡萄糖蛋白陈水培养基中，37OC 培养48h ，加甲基红指示剂数滴，观察结果，呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。
（3）伏一普二氏试验（V . P ．试验）
将被检菌接种到葡萄糖蛋白陈水培养基中，37OC 培养48h ，取出，加入40 % KOlls 一10 滴，然后再加入等量的5 ％。
一蔡酚溶液，用力振荡，再放入37OC 温箱中保温巧一30min ，以加快反应速度。
若培养物呈现红色，为伏一普反应阳性。
（4）靛基质（口引噪）试验将被检菌接种到胰蛋白陈水培养基中，37OC 培养24h 一48h 后，沿试管壁滴加数滴叫睬试剂于培养物液面，观察结果。
出现红色者为阳性，出现黄色者为阴性。
（5）硫化氢试验：
将大肠杆菌和变形杆菌以接种针穿刺接种到醋酸铅或柠檬酸铁氨培养基中，37OC 培养24h ，观察结果，若有黑色出现者为阳性。
（6）明胶液化试验
取大肠杆菌和枯草杆菌的纯培养物少许，以接种针分别穿刺接种到营养明胶培养基中，置20OC 培养5 一7 天。
观察明胶培养基液化情况。
若被检细菌20 OC 不易生长，可放3 7 OC 培养，但在此温度下明胶培养基呈液状，故观察结果时，应将明胶培养基轻轻放入4OC 冰箱30min ，此时明胶又凝固。
若放置于冰箱30min 仍不凝固者，说明明胶被试验细菌液化，是为阳性。
（7）淀粉水解试验
将配制好的淀粉培养基冷却到SOOC 左右，以无菌操作制成平板。
用接种环取少许枯草杆菌划线接种在平板的一边，再取少许大肠杆菌划线接种在平板的另一边。
置37OC 温箱培养24h 。
将平皿取出，打开皿盖，滴加少量卢戈氏碘液于平板上，轻轻摇动平皿，使碘液均匀铺满整个平板。
如菌苔周围有无色透明圈出现，说明淀粉己被水解。
透明圈的大小，说明该菌水解淀粉能力的大小。
（8）柠檬酸盐利用试验
取少量被检菌接种到柠檬酸盐培养基上，37OC 培养24h 后，观察结果。
培养基变深蓝色者为阳性。
培养基不变色，则继续培养7 天，培养基仍不变色者为阴性。