KB纸片法 ppt课件

药敏纸片制备
实验常规抗菌药物选择： 在标准中分成A、B、C 、U四组, A组所列的抗生素 为常规首选药敏试验药物,B组为临床使用主要抗生素, 尤其在医院感染时使用的抗生素，可在下列情况下使 用：①对A组同类抗生素耐药；②标本来源不同时， 如三代头孢菌素使用于脑脊液中的肠杆菌，磺胺甲恶 唑使用于尿道分离的细菌；③多种微生物感染；④多 部位感染；⑤感染流行的控制；⑤对A组抗生素 过敏、耐受或无反应。
接种平板
③15min内置35℃培养箱内培养。培养时，平板需在 培养箱内单独摆放，否则中间的平板达不到培养箱内 的温度而产生预扩散作用，平板培养18～24h后，读 取结果。
应注意：纸片一旦贴上就不能再拿起，因为纸片中的 药物已经扩散到琼脂中。纸片间距离不小于24mm， 纸片中心距平皿边缘不小于15mm。直径为90mm的 平板最好贴6张。
KB纸片法
K-B纸片扩散法
抗生素敏感性实验
小组成员
查阅资料：阿妹 PPT制作：光光
钰儿 现场演讲：子翔
目录
实验原理
实验优缺点
实验方法及结果
第一部分
实验原理
实验原理
纸片扩散法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了 测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着 扩散距离的增加抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片 的周围形成一种浓度梯度。在药物扩散的同时，纸片周围 抑菌浓度范围内的测试菌不能生长，而抑菌浓度范围外的 菌株则继续生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈。 不同抗菌药物抑菌圈的直径因受药物在琼脂中的扩散速率 的影响而可能不同，抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药 物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC） 呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小
结果判定
第四部分
实验优缺点
K—B纸片法优点
药敏试 验具有重复性较好 、操作简便 、试验成本相 对较低 、结果直观 、容易判读、便于基层开展的优 点。
K—B纸片法缺点
K—B纸 片扩散法虽然是一种传统 、经典的药敏试验 方法 ，但随着计算机的发展为细菌检验自动化奠定 了良好基础 ，全自动微生物分析仪的推广和应用K— B纸片扩散法出现药敏试验假耐药 、受人为因素影响 较大、试验耗时长的缺点也渐渐体现出来，同时快速 性 、准确性方面存在不足。
药敏纸片制备
A．培养皿烘干法 将浸有抗菌药液的纸片摊平在培养 皿中，于37℃温箱内保持2~3h即可干燥，或放在无 菌室内过夜干燥。
B．真空抽干法 将放有抗菌药物纸片的试管置于干燥 器了，用真空抽气机抽干。
药敏纸片制备
纸片的保存 将制好的各种药物纸片装入无菌小瓶中 置冰箱内保存备用。（纸片不应长期保存于常开的普 通冰箱中，也不要放在其他不能维持适宜温度的容器 中。）收到纸片后应立即保存在-20~4℃中，由于实 验室冰箱频繁地开关而不能维持适宜的温度，故常开 的冰箱中只能放置1周使用的纸片；纸片容器打开前 先置室温平衡（装纸片的容器自冰箱取出后，必须在 室温10min以上才能打开，如立即打开，空气中的水 分会冷凝在纸片上，易潮解），纸片贴毕应把未用完 的放回冰箱中。
第三部分
实验结果
班内实验结果
结果判读
用尺子准确测量抑菌环的直径(mm)，抑菌圈的边缘 以肉眼见不到细菌明显生长为限。结果报告应以最小 抑菌圈的的直径为准。
结果判读
结果判定
有的菌株可出现蔓延生长进入抑菌圈，磺胺类药的抑 菌圈内会出现轻微生长，这些均不作为抑菌圈边缘。 按抑菌圈直径判断细菌的敏感性。
第二部分
实验方法
实验方法
培养基制备 药敏纸片制备 细菌制备 接种
培养基制备
培养基的种类： 进行细菌药敏试验所用的培养基种类较多。M—H 培养 基琼脂浓度越大、抑菌圈直径越小。有研究证明3种不同 M—H 培养基进行纸片扩散法，实验结果相同。 浓度1．0 ～ 2．0 、pH 7．4左右 培养基的质量： 4 mm 厚平板，允许±1mm误差，如此控制平板厚度即 可满足试验要求。有研究证明，平板每增厚或减薄1mm， 抑菌圈相应减小或增大0．7mm。
细菌制备
从琼脂平板挑取新鲜分离的菌落数个或从保存的斜面 上移种至3～5mLMH肉汤培养液中37℃培养2～8h， 以待生长至轻微或中等浊度。也可直接从孵育18～ 24h的琼脂平板上挑去纯菌落制成肉汤。 为保证药敏试验的准确度和精度，必须对接种菌液的 浓度做相应的控制。因此，将菌液稀释并校正浊度至 0.5麦氏标准浓度，稀释时使用无菌肉汤或生理盐水， 此时菌液的浓度约为1.5×108个/L。
药敏纸片制备
触酶阳性的G＋球菌：青、苯唑、克林、庆大、环丙 沙星、万古、红霉素、头孢唑林 触酶阴性的G+球菌：青、氨苄、氯、红、利福平、 庆大、环丙沙星、万古 氧化酶阴性的杆菌：氨苄、丁卡、环丙沙星、庆大、 头孢噻肟、复达欣、泰能、哌拉西林 氧化酶阳性的杆菌：头他、庆大、哌拉、丁卡、氨曲 南、环丙、头孢噻肟、泰能
细菌制备
下表为麦氏比浊管制法：
接种平板
①制备好的接种菌液必须在15min内使用。用灭菌好 的棉试子蘸取菌wenku.baidu.com，在管壁上旋转挤压几次，去掉过 多的菌液。然后用试子涂布整个培养基表面，反复几 次，每次将平板旋转60°，最后沿平皿周边绕两圈， 保证涂布均匀。 ②粘贴药敏试纸 待平板上的水分被琼脂完全吸收后开始贴纸片。用镊 子取纸片一张，贴在琼脂平板表面，用镊子尖轻压， 使其贴平。
药敏纸片制备
C组药物用于对A组药物耐药的流行菌株或 对A组药物过敏的病人和某些不常见的细菌 （如肠外分离的沙门菌属或耐万古霉素肠 球菌）。 U组仅用于尿道中分离的细菌，不作为尿道 外分离菌的常规药敏试验。
药敏纸片制备
以大肠杆菌为例 ①纸片制备 ：选择优质滤纸，用打孔器制成直径 6mm圆形滤纸片。经120℃2h灭菌后备用 ②药物稀释 每张以吸入20μL药液为标准，如纸片薄，药物原液 需作调整。根据纸片内各种抗菌药物的不同浓度配制 药物原液。 药液浓度见下表。 ③课堂的实验中仅使用了青霉素 链霉素 氯霉素
药敏纸片制备
药敏纸片制备
④纸片浸润、干燥、保存 用无菌操作法将待测的抗菌药物溶液1ml（含药量按 表所列计算，例如，庆大霉素10μg /片×100片 =1000μg /ml），加入摊布于灭菌平皿中的100片 纸片中，置冰箱内浸泡1~2小时，必要时可不时翻动， 使滤纸片将药液均匀吸净，如立即实验可不烘干，若 保存备用可用下列一种方法烘干（干燥的抗菌素纸片 可保存6个月）。