原浆型和纤维型星形胶质细胞调控神经干细胞定向分化的比较研究_曾琳

文章编号:1009-4237(2007)02-0160-03

论　著

原浆型和纤维型星形胶质细胞调控神经干细胞

定向分化的比较研究

曾　琳,李　民,刘　媛,龙在云,李书林,伍亚民

(第三军医大学大坪医院野战外科研究所三室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆　400042)摘要:　目的　探讨原浆型星形胶质细胞(pro t op l as m ic astrocy t e ,PAS )和纤维型星形胶质细胞(fi brous astrocy t e ,FA S )对神经干细胞(neura l ste m ce ll ,N SC )定向分化的调控作用。方法　将4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-D ia m i dino -2-phenyindo l e ,dilac t a t e ,DAP I )标记的NSC 分别与PAS 、FAS 共培养,10天后免疫组化法对分化神经元进行鉴定,显微镜下随机选取20个视野,每次计数100个细胞,计算NSC 分化为神经元的比

例。结果　N SC 与PA S 共培养后分化成的神经元比例较高,与胶质细胞的比例约为61%:39%;FA S 与N SC 共培养后分化神经元数量相对较少,以胶质细胞居多,其比例约为41%∶59%。结论　PA S 与FA S 相比更能促进NSC 向神经元分化。

关键词:星形胶质细胞;神经干细胞;分化

中图分类号:R 338 文献标识码:A

Stud ies on regulatory effects of t he protoplas m ic and fi b rous astrocytes to the

d irectional differentiation of neura l st

e m cell

Z ENG lin ,LI M in ,L I U Y uan ,et al .

(S tate K ey L aboratory of T rau m a ,Bu rns and Co m bined In j ury ,D epa rt m entN o.3,Institute of Su rgery R esearch ,

Daping H ospit a l ,ThirdM ilitary M ed ica l Un i ve rsit y ,Chongqi ng 400042,Chi na )Ab stract :　O b jective To study t he regula t o ry eff ec t o f pro toplas m ic astrocy te (PAS )and fibrous astrocy t e (FAS )on differentiation of neural ste m ce ll (N SC ).M ethod s I mmunohist o che m isty w it h DA P I wa s taken to cal -cu l a t e the proporti on of neurons w it h i n 100cells by 20fie l ds of v isi on chosen random ly fo r 10days .The da t a w ere analyzed in statistics by co -cu lt u re of N SC w it h PAS and FAS respec tiv l y .Resu lts The percentage of neurons in PA S group (61%)w asm uch m ore t han t hat of FA S g roup (41%).Con clusion The result sugge sted t ha tPA S w as m ore eff ec tive t o induce NSC diff e renti a ting into neuron in vitro .

K ey word s :astrocy t e ;neu ra l st em cell ;d iffe rentia tion

基金项目:国家自然科学基金(30300364) 重庆市院士基金(7671)

收稿日期:2006-08-06;修回日期:2006-11-03通讯作者:伍亚民(第三军医大学大坪医院野战外科 研究所三室,重庆　400042)

星形胶质细胞(astrocyte ,AS )能分泌多种细胞因子[1-3]

,调控神经干细胞(neura l ste m ce ll ,NSC )分

化,而原浆型(protoplas m ic astrocy t e ,PAS )和纤维型星形胶质细胞(fibrous astrocy t e ,FAS )又存在一定的

功能差异[4]

,对NSC 分化可能产生不同的作用。为此,本实验探讨以上两种AS 对NSC 向神经元分化的不同作用,从而为细胞联合移植治疗脊髓损伤奠定基础。

材料与方法1　实验动物

孕13～14天的大鼠和新生2天的大鼠。2　试剂与材料

胎牛血清(FBS ,H yclone ),2mm o l /L L -谷氨酰胺

(Sig m a ),0.6%葡萄糖,DME M /F 12培养基(H y -clone ),多聚赖氨酸,0.25%胰蛋白酶(S i g m a ),10mm o l /L L -l e uc i n e -m e t h y l -este r (S ig m a ),0.15mm o l /

L E DT A ,H anks 液(自备),兔抗大鼠GF AP (Sig -m a ),小鼠抗大鼠NF -200(S i g m a ),羊抗兔TRI TC 、羊抗小鼠TR I TC 、0.4%Triton -X -100、甲醇、30%H 2O 2、0.01M PBS (北京中山公司)。3　实验方法

3.1　PAS 和FAS 的纯化培养参见Raff 等[4]

的培养方法。

3.2　PAS 和FAS 的鉴定　将上述细胞固定后,用0.5%H 2O 2/纯甲醇灭活内源性过氧化物酶,0.4%Trit o n -X -100处理,滴加正常山羊血清封闭,加入

GFAP 抗体37℃孵育2小时,用羊抗兔TRI TC Ig G 荧光抗体显色后DPX 封片,激光共聚焦显微镜观察,激发波长为543nm ,呈红色。

3.3　NSC 的培养和鉴定　参见本单位刘媛等建立的方法

[5]

。