孚尔根染色
九孚尔根Feulgen核反应染色法
（三）染色
加入适量的Schiff试剂，避光染色30分 钟，然后用漂洗液漂洗2～3次，水洗后压片。 （四）压片、镜检
取一根尖置于载玻片，切下0.3cm生长 区部位，加一滴亮绿液对染一分钟，吸去亮 绿液，加一滴清水或醋酸水溶液压片，镜检， 观察有丝分裂各个时期的染色体。
以小组为单位，探究温度高低与酸水解 时间长短对孚尔根核反应的影响。
（二）水解
取准备好的洋葱根尖，装到青霉素瓶中，水洗三 次，换1M HCl洗一次，倾去，换入预热60℃的1M HCl，覆盖样品即可，放入恒温水浴锅中在60℃下 水解10分钟，然后吸去热1M HCl，换入冷1M HCl洗 一次，再水洗三次。
水解是本实验成败的关键。重要的是温度和时间。 如果温度过高或时间过长，造成水解过度，核糖与 醛基之间的键被破坏，醛基流失到水解液中，不能 呈现颜色反应。
水解时DNA中嘌呤碱基与去氧核糖之间的糖苷键打 断，使嘌呤脱下，并使去氧核糖C-1位置释放醛基 与席夫试剂反应显紫红色。细胞中只有DNA才具有 这种专一反应，因此可鉴定DNA的存在。
பைடு நூலகம்
三 、实验方法和步骤
（一）材料准备 取一洋葱鳞茎，置于盛满水的小烧杯
上使其长出新根。待根尖长2cm 时，于上 午8时剪下根尖进行预处理、固定、保存 （请参考实验一）。
实验九 孚尔根（Feulgen）核反应染色法
一、实验目的 1、学习孚尔根核反应染色法，鉴
定染色体、DNA的存在。 2、探究水解时间及温度对孚尔根
核反应的影响。
二、实验原理
碱性品红原呈品红色，当与亚硫酸作用时还原，使 醌型结构变为苯型结构，由品红色变为无色透明的 亚硫酸品红碱(即Schiff试剂)，当它与醛基作用时， 其分子式又恢复为醌型结构，呈现紫红色。
大学课程遗传学实验实验四 孚尔根(Feulgen)核染色课件
1N HCl 60℃
酸解使DNA醛基暴露
醛基与Schiff试剂发生显色反应
孚尔根核染色法是Feulgen和Rossonbek于1924 年提出的鉴定细胞中DNA的组织化学方法。其 优点是制片清洁、染色体清晰、组织软化好， 易于压片。但对小型染色体（如玉米、水稻） 效果较差。在切片、涂片上研究核和染色体时， 能减少细胞质着色对观察的影响。在细胞学研 究中普遍采用
材料：大蒜根尖、洋葱根尖
1mol/L 盐酸(常温和60℃) Schiff试剂 45%醋酸或亮绿
实验步骤
预处理的目的及方法
目的：改变细胞质粘度，破坏和抑制纺锤体 的形成，使染色体适度缩短和分散。
方法： 0.04-0.2%秋水仙素溶液2-4小时。 对二氯苯饱和溶液3-5小时。 0.002M (或0.03%)8-羟基喹啉1.5-2小时以
黑暗条件下染色。 要保证细胞呈单层，使染色体在一个平面上，
根尖的切片尽量要薄，压片必须用力适度，压 片的实验台面要平坦。
实验作业
绘制你所观察到的图象，并说明是有丝 分裂的哪一个时期，并注明放大倍数。
前期、中期、后期、末期
思考题
为什么要严格掌握DNA的水解条件？ 为什么实验材料从60℃盐酸中倒出后，
实验原理
有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，在植物根尖或茎尖的 分生组织中可清晰观察。在有丝分裂时，细胞核与细胞质有很 大的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是有规 律地进行。各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的， 并随科属种的不同而具有一定的特征。大蒜体细胞中有8对共 16条染色体，在有丝分裂过程中，每个染色体能复制一份， 然后分配到两个子细胞中，所以两个子细胞与母细胞所含的染 色体在数目、形态和性质上都是相同的。在细胞遗传学研究中， 人们常常需要了解某一物种的染色体数目，而最有效的方法就 是观察细胞有丝分裂的中期，这样能得到较为准确的结果。
孚尔根染色法
孚尔根染色法DNA是主要的遗传物质，集中于染色体上。
1924年孚尔根首先用席夫试剂(Schiff)作试验，鉴定了染色体上DNA的存在，故称为孚尔根染色法。
孚尔根染色法的反应原理主要与席夫试剂的化学性质有关，此试剂的基本成分是碱性品红，偏亚硫酸氢钠(NaHSO3)和盐酸.碱性品红的主要成分是三氨基三苯甲烷氯化物。
实验原理：细胞中的DNA受1NHC1，60℃水解作用以后，核酸中的嘌呤碱很快完全被除掉，使脱氧核糖中潜在的醛基获得自由状态。
水解后，组织要经水洗再移至希夫（Schiff）试剂中，希夫试剂即同露出来的醛基发生反应，呈现紫红色。
这个反应是Feulgen在1942年提出来的，是DNA的一个特异性检查法。
水解的时间很重要，因为核酸的水解有两个过程，第一，漂呤碱很快被除掉，脱氧核糖中潜在的醛基显露出来，第二，组蛋白和核酸愈来愈多地被除掉。
在短时间的水解作用以后，第一个过程占优势，这时候用希夫试剂染色，染色体的染色作用最强。
随着水解作用的继续进行，第二个过程逐渐变成优势，因此水解液中的希夫反应增强，而染色体中的希夫应减弱。
最后，第二个过程超过第一过程时，染色体也随之停止反应。
希夫试剂是碱性品红———亚硫酸溶液，呈无色。
与DNA醛基反应后，使碱性品红恢复原来的红色。
二、实验目的：观察蚕豆根尖细胞或其它根尖细胞内染色体中的DNA，以及染色体在有丝分裂中的行为，掌握Feulgen染色方法。
三、实验材料：上次实验制成了石蜡切片。
四、实验准备：1．用具立式染色缸一套，镊子，盖玻片，小漏斗，铁架，毛边纸，玻璃棒，显微镜，恒温水浴锅，温度计，烧杯，棕色瓶，黑纸。
2．玻璃器皿的清洗主要是染色缸的清洗，一般用肥皂粉洗，用水冲净即可，如不能洗净时，要用洗液浸泡后，再冲洗，自来水洗后，再用少量蒸馏水过洗一次。
盛放100%酒精、二甲苯的染色缸必须干燥，缸盖内缘必须涂以几士林，以防止蒸发和收水分，影响浓度。
染色缸上要贴上标签。
植物染色体的孚尔根染色法
四、实验步骤
1. 希夫试剂的配制
• 将0.5g碱性品红徐徐加入煮沸的 碱性品红徐徐加入煮沸的100ml蒸馏水中 用玻璃棒搅拌 蒸馏水中, 碱性品红徐徐加入煮沸的 蒸馏水中 用玻璃棒搅拌, 使之充分溶解, 待溶液冷却至58°C左右 过滤于棕色瓶中。 使之充分溶解 待溶液冷却至 ° 左右, 过滤于棕色瓶中。 左右 • 当滤液冷却至 °C时, 再加入 当滤液冷却至26° 时 再加入10ml的1M盐酸和 盐酸和0.5g亚硫酸氢钠 的 盐酸和 亚硫酸氢钠 或偏重亚硫酸钠(钾 摇动, 溶解后密封于棕色瓶中, 或偏重亚硫酸钠 钾), 摇动 溶解后密封于棕色瓶中 置于黑暗 低温处。次日检查溶液颜色, 须呈无色透明或淡茶色才可使用。 低温处。次日检查溶液颜色 须呈无色透明或淡茶色才可使用。 • 若稍呈红色可加入 若稍呈红色可加入0.5g活性炭连续摇动 在4°C下静置过夜 然 活性炭连续摇动, 下静置过夜, 活性炭连续摇动 ° 下静置过夜 后过滤脱色。 后过滤脱色。
2. 染色过程
① 取固定好的根尖, 用水洗2-3分钟, 放入室温条件下的1N HCl处理根尖 材料2-3分钟。 ② 将根尖换入60℃预热的HCl, 置于恒温水浴中, 在60±0.5℃的条件下水 解8-10分钟。 ③ 吸出热HCl, 换入室温1N HCl再处理1-2分钟, 然后水洗2-3次。 ④ 吸净水分, 加入Schiff试剂, 盖上盖子, 在黑暗条件下染色30分钟, 也可 过夜。 ⑤ 用水漂洗, 去掉细胞中残存的一些有色的品红分子。 ⑥ 取根尖置载玻片上, 用镊子夹碎后, 加一滴45%醋酸, 然后盖上盖片。 ⑦ 压片、观察。
玉米染色体核型图(2n=20), Feulgen 染色
玉米染色体核型图(2n=20+2B)
玉米染色体核型图(2n=20+4B) /mnl/79/18rosado.htm
植物染色体的孚尔根染色法
染色过程
取固定好的根尖, 用水洗2-3分钟, 放入室温条件下的1N HCl处理根尖材料2-3分钟。
添加标题
将根尖换入60℃预热的HCl, 置于恒温水浴中, 在600.5℃的条件下水解8-10分钟。
添加标题
吸出热HCl, 换入室温1N HCl再处理1-2分钟, 然后水洗2-3次。
添加标题
吸净水分, 加入Schiff试剂, 盖上盖子, 在黑暗条件下染色30分钟, 也可过夜。
希夫试剂的配制
当滤液冷却至26C时, 再加入10ml的1M盐酸和0.5g亚硫酸氢钠或偏重亚硫酸钠(钾), 摇动, 溶解后密封于棕色瓶中, 置于黑暗低温处。次日检查溶液颜色, 须呈无色透明或淡茶色才可使用。
若稍呈红色可加入0.5g活性炭连续摇动, 在4C下静置过夜, 然后过滤脱色。
将0.5g碱性品红徐徐加入煮沸的100ml蒸馏水中, 用玻璃棒搅拌, 使之充分溶解, 待溶液冷却至58C左右, 过滤于棕色瓶中。
1
二、实验目的
在熟悉火焰干燥法制片的基础上, 掌握弗尔根染色法, 并观察有丝分裂的各个时期
三、材料、方法、器具、药品
小麦根尖 希夫试剂， 45%醋酸， Carnoy’s固定液 碱性品红、偏重亚硫酸钠、活性炭、1M盐酸 镊子 载玻片 盖玻片 显微镜 青霉素瓶子 恒温水浴锅
四、实验步骤
PART 1
实验四 植物染色体的孚尔根染色法
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一、实验原理
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01
孚尔根（Feulgen）染色法是鉴别细胞核中DNA的组织化学方法, 其原和盐酸作用而生成的, 为无色透明的溶液, 它遇醛类物质即呈紫红色, 故可用于鉴定醛基的存在。
实验二孚尔根染色法
实验二孚尔根染色法一、实验原理染色体是遗传物质的载体，它的主要化学成分是脱氧核糖核酸(DNA)，DNA系核苷酸的多聚体，核苷酸又由碱基脱氧核糖和磷酸所组成，当细胞经60℃、1mol·1-1HCl处理后，不仅使分生组织的细胞彼此分离，而且可以破坏核内DNA链上的嘌呤碱与脱氧核糖之间的糖苷键，嘌呤脱下，脱氧核糖上的醛基暴露，形成含醛基的无嘌呤结构物，醛基与希夫试剂反应显紫红色。
细胞中只有DNA才具有这种专一的孚尔根反应，因此所以根据紫红色出现的部位就可鉴定脱氧核糖核酸(DNA)的存在，并广泛应用于核及染色体的研究中。
二、实验目的学习和掌握孚尔根反应染色法，鉴定植物细胞核内染色体上DNA的存在。
三、实验材料、用具及药品1．材料：洋葱或大蒜的根尖2．用具显微镜、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、冰箱、温箱、天平、载玻片、盖玻片、吸水纸、吸管、烧杯、量筒、3．药品希夫氏试剂(无色碱性品红液)、漂洗液、1mol·1-1 HCl、45％醋酸等。
四、实验步骤1. 取材与固定：待大蒜根尖长1cm 时，于上午8时剪下根尖，经过预处理后投入卡诺固定液中固定2-24h。
固定后，保存在70%的酒精中，放入冰箱中冷藏供用。
2.水解试管1：取大蒜根尖数条，投入试管，先用清水洗3次，换1N HCl洗一次，倾去，换入预热60℃的1N HCl 浸没根尖，放入恒温水浴锅中在60±0.5℃下水解10分钟（视材料而定，水解时间可以从10分钟延长至30分钟）。
然后吸去热1N HCl，换入冷1N HCl洗一次，再用清水将根尖洗三次。
试管2（对照）取大蒜根尖数条，投入试管，先用清水洗3次，入预热60℃的蒸馏水浸没根尖，放入恒温水浴锅中在60±0.5℃下水解10分钟。
以下各步骤两试管相同。
（水解是本实验成败的关键之一。
重要的是温度，应保持在60±0.5℃之间。
如果温度过高或时间过长，造成水解过度，醣与醛基之间的键被破坏，醛基流失到水解液中，反之，不能出现潜在的醛基，都不能呈现颜色反应。
DNA的细胞化学——Feulgen反应
DNA的细胞化学——Feulgen反应核酸是细胞中的重要组分，主要包括DNA和RNA。
DNA是遗传信息的载体，主要存在于细胞核中；RNA传递DNA的遗传信息，指导细胞合成各种蛋白质。
核酸的细胞化学研究已有近一个世纪的历史，1924年Feulgen和Rossenbeck于1924年创立显示DNA的特异性反应，1940年Brachet发明了甲基绿一派洛宁染色方法用以区别细胞中的DNA和RNA。
这些经典方法目前仍被广泛应用，并得到不断改进和发展。
研究细胞中核酸的含量及其动态变化，对于理解生长、发育、分化及凋亡等生物学基本问题具有重要的价值。
孚尔根反应(Feulgen reaction)是特异性显示DNA的最经典方法，得到了非常广泛的应用。
其原理是DNA经过稀盐酸水解后的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开，脱氧核糖的C 端形成游离的醛基。
游离的醛基再同Schiff试剂的无色品红反应形成紫红色化合物，使细胞内含有DNA的部位呈现紫红色阳性反应。
甲基绿和派洛宁是2种碱性染色料，二者分别属于三芳基甲烷和氧杂蒽衍生物，与酸性的核酸具有亲和力，可以形成盐键而呈现出特殊的颜色反应。
在pH4.6时甲基绿与派洛宁跟核酸发生竞争性结合。
甲基绿分子具有2个正电荷，与聚合程度高的DNA具有较强的亲和力，与DNA双螺旋外侧的磷酸根基团结合从而阻止派洛宁从碱基之间插入，甲基绿与DNA的结合产物呈绿色；派洛宁只有1个正电荷，与低聚分子RNA具有较强的亲和力，中和RNA的磷酸基团，阻止甲基绿染色，派洛宁与RNA的结合物呈红色。
根据颜色的部位可以判断DNA和RNA的定位并且判断两种核酸的相对含量。
这一反应对pH敏感，脱水过程、染料的纯度和染料的结合力都影响到染色效果。
【实验目的】学习DNA的Feulgen染色方法，并了解Feulgen反应原理及其DNA在细胞中的分布。
掌握甲基绿-派洛宁法（methyl green-pyronin method）并了解DNA和RNA在细胞中的分布。
实验02 孚尔根核反应染色法
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有丝分裂各时期
中期 ——极面
后期
末期
苏州大学 生命科学学院
子细胞
19
有丝分裂各时期
苏州大学 生命科学学院
20
六、注意事项
1. 水解时间和温度是实验的关键因素；
2. Schiff试剂中SO2的含量影响孚尔根反应的 颜色表现；
3. 压片技术是视野观察清晰与否的关键；
4. 材料的不同（DNA含量的不同），是影响 显色反应强度的根本因素；
13
五、实验步骤
材料
培养的植物根尖长到2cm左右时，切下；或取幼小 花药或叶表皮或愈伤组织，或动物组织，或果蝇唾 腺等材料。
固定
将取出的材料放入新配制的Carrnoy固定液（无水 乙醇:冰醋酸=3:1）处理2~24hr→95%乙醇洗2次， 每次10min→80%乙醇洗1次，10min→70%乙醇， 冰箱保存。
染色30min~4h； 漂洗液漂洗2~3次，每次2~5min，待用。
五、实验步骤
以下各人独立完成： 将根尖置载玻片上，切取适当部位； 加45%醋酸洋红1滴； 压片； 镜检； 作图（实验报告）。
有丝分裂各时期
苏州大学 生命科学学院
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有丝分裂各时期
间期
前期
中期 ——侧面
苏州大学 生命科学学院
实验二 孚尔根核反应染色法
苏州大学 生命科学学院
1
一、实验目的
1. 学习和了解孚尔根（Feulgen）反应的原理； 2. 掌握对植物组织及细胞中鉴别DNA分布的 孚尔根反应染色方法； 3. 掌握压片方法； 4. 了解制作玻片标本的方法； 5. 观察细胞中DNA的分布。
苏州大学 生命科学学院
Schiff试剂中的无色亚硫酸品红分子与活性醛 基反应而呈现为紫红色化合物。该产物能特异 地吸收峰值为550~570nm的光波。并在一定的 浓度范围内，在550~570nm光波的吸收值与 DNA含量成正比，即符合化学计量学关系。
《孚尔根核染色》课件
染色过程
孚尔根核染色包括几个关键步骤：细 胞固定、细胞通透性处理、DNA氧化 、染色和观察。
染色过程需要在弱酸条件下进行，以 促进DNA的氧化和后续的染色反应。
在染色过程中，需要使用特定的染料 ，如Giemsa染料或巴尔巴土染料，这 些染料能够与DNA-蛋白质加合物结 合，产生明显的染色效果。
染色效果
政策支持
政府可以出台相关政策， 支持孚尔根核染色技术的 研发和应用，促进其发展 壮大。
感谢您的观看
THANKS
该技术可用于DNA多态性分析 ，有助于研究基因变异与疾病 的关系。
技术局限性
1 样本量要求
孚尔根核染色技术需要一定量的样本才能进行检测，对 于微量样本可能存在限制。
2 交叉污染风险
孚尔根核染色技术需要一定量的样本才能进行检测，对 于微量样本可能存在限制。
3 假阳性结果
孚尔根核染色技术需要一定量的样本才能进行检测，对 于微量样本可能存在限制。
减少人工操作误差。
降低成本
通过优化试剂和设备， 降低检测成本，使更多 实验室和医疗机构能够
应用该技术。
05
孚尔根核染色技术的未来发展
技术发展趋势
自动化与智能化
随着机器人技术和人工智能的发展，孚尔根 核染色技术将逐渐实现自动化和智能化，提 高染色效率和准确性。
环保与可持续发展
随着环保意识的提高，未来的孚尔根核染色 技术将更加注重环保和可持续发展，减少对 环境的污染和资源消耗。
《孚尔根核染色》PPT课件
目录
• 引言 • 孚尔根核染色技术原理 • 孚尔根核染色技术的应用 • 孚尔根核染色技术的优缺点 • 孚尔根核染色技术的未来发展
01
引言
核染色技术简介
实验四 孚尔根(FEULGEN)反应
9．封片：中性树胶封片
10．贴标签，镜检
组织切片
鱼血涂片 95％乙醇固定 Feulgen反应 日期 姓名
五：实验结果
细胞核呈紫红色，细胞质呈浅绿色，对 照片只呈浅绿色。
六、作业
简述Feulgen反应的原理及关键步骤。
实验四 孚尔根 （Feulgen）反应
光镜标本制作
切片法： 取材 固定 切片 贴片
非切片法： 1. 涂片法 2. 磨片法 3. 分离法等
脱水 染色
透明 包埋 封片 观察
一、实验目的
了解DNA的显示原理并掌握其操作过程。
二、实验用品
1. 器材：显微镜、盖玻片、染色缸、眼科剪、解 剖刀、镊子、水浴锅
linkBiblioteka 4．染色： Schiff氏试剂30’-40’
5．分色 ：亚硫酸水I、Ⅱ、Ⅲ 各 2’
流水洗 5’
蒸馏水洗 1’
6．复染 ：1% 亮绿 30～60”左右
蒸馏水洗 (两次) 2’
7．脱水：以70%酒精，80％酒精，95%酒 精，l00%酒精各2’
8．透明：1／2 100%酒精+1／2二甲苯，二 甲苯Ⅰ、Ⅱ，各5’
四、实验方法
1．血涂片放入90％乙醇中固定1’30l’ink’ 2．放入70%酒精1’, 放入蒸溜水1’ 3．稀酸水解：1N HCl (室温) 1’
1N HCl 60℃水浴 8’ 1N HCl (室温) 1’ 蒸馏水 1’ 对照片以5%三氯醋酸90℃水浴l5’抽提核酸 后，再经稀酸水解。
link
2. 试剂： 95％乙醇（固定液）、Schiff氏试剂、 1N盐酸、亚硫酸水、1%亮绿甲苯、酒精、中 性树胶
3. 材料：鸡血或鱼血涂片
三、实验原理
孚尔根(FEULGEN) 染色
Schiff 试剂的配置
称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中（用三角烧瓶）， 时时振荡，继续煮 5分钟（勿使之沸腾），使之充分溶解。然 后冷却至50℃时用滤纸过滤，滤液中加入10ml 1N HCl，冷却至 25℃时，加入0.5g Na2S2O5（偏重亚硫酸钠或钾），充分振荡 后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24小时（有时需2～3天）， 使其颜色退至淡黄色，然后加入0.5g活性炭，用力振荡1分钟， 最后用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封严瓶塞，外包黑纸。滤液应 为无色也无沉淀，贮于4℃冰箱中备用。如有白色沉淀，就不 能再使用，如颜色变红，可加入少许偏重亚硫酸钠或钾，使之 再转变为无色时，仍可再用
反应原理
样品经稀盐酸水解后，DNA分子中的嘌呤 碱基被解离，从而在核糖的一端出现了醛 基。Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应， 形成含有醌基的化合物分子, 因醌基为发色 团，故可呈现出紫红色。也就是说, DNA经 稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用， 可与无色品红结合形成紫红色化合物，从 而显示出DNA的分布。
操作方法及步骤
以Feulgen染色法观察洋葱根尖有丝分裂为例
•1．将洋葱根尖或鳞茎内表皮放在1N HCl中， 加热到60℃水解8～10 min。 • 2．蒸馏水水洗。 •3．Schiff试剂遮光染色30min。 •4．用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗3次，每次 1min。 • 5．水洗5min。 •6．将根尖放在载玻片上，镊子捣碎，盖上盖 玻片，压片（洋葱表皮可省去压片这一步）。 • 7．显微镜检查。 结果：细胞中凡有DNA的部 位应呈现紫红色的阳性反应。
孚尔根染色法的反应原理主要与Schiff试剂的化学性质有关，此试剂的基本 成分是碱性品红，偏亚硫酸氢钠(NaHSO3)和盐酸.碱性品红的主要成分是 三氨基三苯甲烷氯化物。
孚尔根核染色25页PPT
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
Thank you
孚尔根核染色
1、纪律是管理关系的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
5、教导儿童服从真理、服从集体，养 成儿童 自觉的 纪律性 ，这是 儿童道 德教育 最重要 的部分 。—— 陈鹤琴
期末实验 孚尔根染色法和植物染色体标本的制备
期末实验孚尔根染色法和植物染色体标本的制备207.12.1 6.结果与分析6.1结果（1）孚尔根染色结果图1.洋葱根尖分生区孚尔根DNA染色结果（10×10倍）图2.洋葱根尖分生区孚尔根DNA染色结果（10×40倍）①结果描述：在光学显微镜下，洋葱根尖细胞被均匀地压成了单层细胞，细胞分布较为均匀，变形细胞较少。
DNA成功被染上紫色，染色较深，视野背景为白色无红色颗粒较为清晰，视野中无气泡。
处于分裂时期的细胞约占10％，分裂期的细胞染色体染色较深，而分裂间期的染色较浅，中间有1-3个白斑为核仁。
②结果评价：较成功③结果分析：在物镜10倍观察下可以清晰反映出压片的结果与染色的情况。
在压片前要注意用亚硫酸水把染液冲洗干净，防止背景一片红，不利于观察，压片时先把根尖捣碎，防止细胞堆积；在压片时要固定好盖玻片防止盖玻片与载玻片之间发生摩擦，防止细胞变形，同时也要注意力度的把握和敲击的方向，垂直敲打，且从中间到边缘。
染色的时间要足够长，这是我实验时制作的第二张装片，染色时间为18min,第一张为10min，染色较浅，不利于观察。
视野中，由于分裂期的染色质高度螺旋为染色体，DNA浓度较高，所以分裂期的染色体染色较深，而分裂间期的细胞，DNA分裂较为均匀，所以染色较为均匀且相对浅，中间的白斑为核仁，因为核仁中主要为rRNA，所以不被染成紫色。
A B C DE F G HI J K LM N O P图2.洋葱根尖分生区孚尔根DNA染色有丝分裂过程（10×40倍）①结果描述：A间期:DNA均匀分部于细胞核中，核仁明显，为透明发亮圆形，可见1—3个。
B-E前期：细胞核膨大，染色质缩短变粗，晚前期（D、E）核仁、核膜消失。
F-G中期：染色体缩短变粗，形成姐妹染色单体，整齐排列与赤道板上。
H-L后期：着丝粒分裂，姐妹染色单体分离，分别移向细胞两极。
M-P末期：染色体解旋为染色质，核仁核膜重新出现，细胞中间形成细胞板。
孚尔根
课程名称：细胞生物学指导老师：成绩：__________________实验名称：孚尔根染色同组学生姓名：一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填）四、实验器材与仪器（必填）五、操作方法和实验步骤（必填）六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析（必填）八、讨论、心得一、实验目的1.以Feulgen染色法为例学习细胞化学方法检测细胞核DNA的原理和方法；2.观察DNA在细胞内的分布。
二、实验原理孚尔根反应分为水解和显色两个步骤。
在水解过程中，细胞中DNA经1N60℃盐酸水解后，DNA双螺旋结构中的嘌呤与脱氧核糖之间的连接打开，使脱氧核糖的第一碳原子上形成游离的醛基，这些醛基与Schiff氏试剂作用，形成紫红色的三苯甲烷衍生物。
Schiff试剂是由碱性品红和偏重亚硫酸钠相作用，形成无色的品红液，当无色品红与醛基结合形成紫红色的化合物。
紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色基团，所以具有颜色。
因此凡有DNA的地方，都能显示紫红色。
但是，细胞中除了DNA酸解会产生醛基之外，多糖等物质也会产生醛基，此外细胞中可能还有自由醛基，但多糖的醛基不会再该反应条件下裸露，而且自由醛基可被盐酸消除；此外，细胞中的RNA也不被染色。
目前认为，RNA的N-糖苷键较为稳定，在孚尔根反应的酸解条件下，其嘌呤碱基不会易被脱去。
故只有DNA不完全水解出来的醛基才能与Schiff试剂反应生成紫红色产物；由于线粒体，叶绿体的结构原因，内部的DNA也不被染色。
从而，孚尔根反应时对细胞中核DNA高度专一的一种检测手段。
材料不经过水解或预先用热的三氯醋酸或DNA酶处理，得到的反应是阴性的，从而证明了Feulgen反应的专一性。
三、实验材料与试剂器材：显微镜、盖玻片、染色缸、眼科剪、解剖刀、镊子、水浴锅试剂：Schiff试剂，亚硫酸水溶液，1mol/L HCl，5%三氯醋酸材料：洋葱鳞茎四、实验步骤1.撕取小块洋葱内表皮，放入10mL预热的60°C的1mol/L HCl中温育水解8-10分钟。
实验10 DNA孚尔根染色
实验10孚尔根（Feulgen）反应
一、实验目的
掌握孚尔根（Feulgen）反应的原理和方法，观察了解DNA在细胞内的分布。
二、实验用具
洋葱内表皮，显微镜、染色缸、剪刀、镊子、培养皿等；1M HCl、希夫试剂、亚硫酸水溶液等。
三、原理
孚尔根反应是Feulgen和Rosserbeck于1924年发现的,是鉴定细胞内DNA特殊有效的方法。
其原理一般认为：稀酸（1M HCl,60℃)水解DNA，打开DNA分子上嘌呤碱和脱氧核糖连接的键，从而使脱氧核糖中的醛基释放出来，然后再与希夫试剂（Schiff试剂，无色品红）反应，由于醛基的氧化作用，使之与无色品红结合成紫红色的化合物。
细胞内凡有DNA的地方都呈阳性反应。
四、操作过程
1、将洋葱鳞茎内表皮放在1mol/l的HCl中，加热到60℃水解8-10分钟。
2、蒸馏水水洗3次。
3、入希夫试剂染色30分钟。
4、亚硫酸水溶液洗3次，每次1分钟。
5、水洗5分钟。
6、将鳞茎内表皮放在载玻片上，盖好盖玻片，用吸水纸吸去玻片上多余的溶液，置显微镜下检查，细胞内凡有DNA的地方都呈阳性反应（玫瑰红色）。
五、实验结果
绘图示Feulgen反应的结果即细胞内DNA的分布。
高中生物实验 细胞内DNA 福尔根染色及测定实验报告
实验十二细胞内DNA 福尔根染色及测定一. 实验原理DNA经盐酸水解，使嘌呤碱基和脱氧核糖之间键打开，使核糖的一端形成自由醛基，SCHIFF 试剂与醛基反应形成紫色化合物，使细胞内的DNA显示出来，固绿着色浅染，用于衬托DNA的颜色.二. 实验方法1. 取小鼠附睾一只，放入5ml小烧杯中，加1-2滴生理盐水，然后剪碎捣碎,再加0.5ml生理盐水，制成悬浊液.2. 用双层200目的过滤布滤到青霉素小瓶中。
3. 制作小鼠精子涂片。
4. 取小鼠肝脏一小片，用双面刀片切新鲜切面,在载波片上制印片(如印章一样轻轻印一下,而不是涂片.否则没有完整的肝细胞,)。
5．吹风机吹干.6. 乙醇固定10min(放入染色缸中).7．自来水漂洗一下。
（非冲洗，以免冲走粘着的细胞）。
8. 60℃下盐酸水解15min(放入染色缸中)。
9. SCHIFF试剂浸染4-6小时(放入染色缸中)。
10. 自来水漂洗一下。
（非冲洗，以免冲走粘着的细胞）。
11．固绿快染4秒。
12. 自来水漂洗一下。
（非冲洗，以免冲走粘着的细胞） 13.吹风机吹干.14. 显微镜观察.15．显微数码拍照，比较精子和肝细胞内的DNA含量。
三. 结果观察小鼠精子的活动现象。
画精子和肝细胞福尔根染色的图片。
比较精子和肝细胞内的DNA含量。
1M HClHCl (12mol/L) 4.2mL*6=25.2TDW 50mL*6=300生理盐水（NaCl 0.85%）NaCl 0.85gTDW 100mL1%琼脂，湿盒，乙醚，放棉花大烧杯带塑料盆扣顶脂肪体和睾丸之间小小的是附睾，下面小的是储精囊。
要这两样小鼠睾丸与附睾的提取与位置1.颈椎脱臼处死雄性小鼠2. 用外科剪和镊子剪开皮肤层和肌肉层暴露内脏3. 在腹部的最下端位置可见大量脂肪层，用镊子夹着脂肪层轻轻向小鼠头方向牵引4. 能看一睾丸被牵出，成年小鼠的睾丸大约有一粒黄豆那么大，形状也类似5. 在睾丸下方一点与睾丸相连的位置，能看到附睾，白色，能看到其内有许多曲精小管6. 找到睾丸后附睾后，用小剪刀和镊子轻轻分享脂肪就能得到了。
孚尔根核染色
实验目的 实验原理
实验材料与药品
实验方法
注意事项
实验作业 思考问题
孚尔根核染色法是Feulgen和Rossonbek 于1924年提出的鉴定细胞中DNA的组织 化学方法。其优点是制片清洁、染色体 清晰、组织软化好，易于压片。但对小
型染色体（如玉米、水稻）效果较差。
固定液
简单固定液：如乙醇、甲醛、冰醋酸、
升汞等。
混合固定液：如Carnoy’s固定液、AF
液（乙醇:甲醛=9:1)
Carnoy’s固定液
Carnoy’s固定液：
冰醋酸:氯仿:无水乙醇=1:3:6
改良Carnoy’s固定液：
冰醋酸:无水乙醇=1:3
预处理的目的及方法
目的：改变细胞质粘度，破坏和抑制纺锤体的 形成，使染色体适度缩短和分散。 方法： 0.04-0.2%秋水仙素溶液2-4小时。 对二氯苯饱和溶液3-5小时。 0.002M (或0.03%)8-羟基喹啉1.5-2小时以上， 室温。 低温：1-4℃处理24小时。
用镊子夹碎后，再加一滴45%的醋酸， 压片镜检。
固定与固定液
固定：将新鲜的活组织从生物体取下
后，立即投入固定剂中，借助化学药 品的作用，使细胞保持原有形态结构 的一种手段。
固定的目的
迅速防止细胞的死后变化，防止自溶、腐败，
尽量保持生长状态结构。 使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转 变为不溶性物质，以保持生前状态。 使组织内各种物质成分产生不同的折射率， 便于鉴定、观察。 使不同组织成分对染料有不同的亲和力，便 于染色。 防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态 结构。
根尖形态与结构
成熟区
HE XI UNIVERSITY
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孚尔根染色法中Schiff试剂配方的研究
一、实验目的
1、进一步深入了解孚尔根染色的基本原理
2、探究尝试用非传统的方法配置Schiff试剂并观察其染色效果
二、实验原理
DNA是遗传的物质基础，应用Feulgen反应法显示细胞DNA是常用的组化染色技术，其中Sehitt试剂是染色成败的关键因素。
Sehiit试剂(希夫试剂)，又称品红醛试剂，与醛类反应呈紫红色。
它有多种不同的配制方法，归结起来有经典热配法以及冷配法。
实验室经常采用的热配法，配制过程繁琐，常会因一个步骤的偏差而造成配制失败，实验中尝试改用冷配法，可收到与热配法同样的染色效果。
Schiff试剂的主要成分是碱性品红，属三氨基三苯甲烷类，它由副品红、品红、二号碱性品红组成四。
碱性品红在酸性环境下与亚硫酸盐作用，生成无色品红。
其配制方法有2种：热配法(将碱性品红加热煮沸)是通过热效应来加速分子运动，使染料溶解与脱色；冷配法(室温下采用振荡或搅拌的方法)是通过增加分子间的碰撞，促进染料溶解与脱色。
2种方法的反应机制相同。
三、实验器材
实验材料：蚕豆根尖
实验器具：显微镜、载玻片、盖玻片、电炉、滤纸、烧杯、纱布、量筒、锥形瓶、标签、刀片、容量瓶
实验药品：蒸馏水、卡诺氏液、0.1mol/L的盐酸、碱性品红、盐酸、偏重亚硫酸钠、活性炭。
四、实验方法
1.浸种催芽
选择无虫、饱满、大小均匀的蚕豆种子50粒放入蒸馏水的烧杯中， 25℃浸泡24h,其中换水1次。
种子吸胀后，在培养皿中铺一层脱脂棉，倒入足量的蒸馏水，将种子置于其中25 ℃培养2至3天，期间随时补充水分，大部分初生根长至1～2cm左右。
2.不同试剂配置
1. 热配法（常规法）
称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中（用三角瓶），时时振荡，继续煮5min（勿使之沸腾），充分溶解。
然后冷却致50℃时用滤纸过滤，滤液中加入10ml1mol/L HCl，冷却致25℃时，加入0.5g偏重硫酸钠，充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h（有时需要2至3天），使其颜色退至淡黄，然后加入0.5g 活性碳，用力振荡一分钟，最后用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封瓶塞，外包黑纸。
滤液应为无色也无沉淀，贮于4℃冰箱中备用。
如有白色沉淀，就不能再使用，如颜色变红，可加入少许偏生亚硫酸钠或钾，使之再转变为无色时，仍可再用。
2．冷配法
(1) Kodousek法将1g碱性品红溶于10rnl无水乙醇中，放入250ml烧瓶振荡10min 使之溶解，再加入186ml蒸馏水和5g偏重亚硫酸钠。
然后加入34fnl浓盐酸，振荡至完全溶解后溶液呈浅黄色，加500mg活性炭，振荡3min，用0．2mol／L盐酸把容
量调整到200ml，过滤使之无色。
(2) Lillie和Fullmer法 1g碱性品红和1．9g偏重亚硫酸钠溶于0．15mol／L盐酸100ml中。
在机械振荡器上振荡2h，溶液呈黄色或浅棕色透明液体。
加500mg活性炭，振荡1—2min，过滤后加蒸馏水调至100ml。
(3)陈啸梅法碱性品红0．5g加1moVL盐酸15rnl，振荡使之溶解，再加0．6％偏重亚硫酸钠85rnl。
盖紧瓶塞混匀后在室温下避光放置24h，溶液呈草黄色，加活性炭300n1g，振荡1min，过滤后呈无色液体。
(4)渡边恒彦法 1g碱性品红溶解于0．15mol／L盐酸100ml内，用磁力搅拌器搅拌12h。
再加入偏重亚硫酸钠1．9g，混合搅拌1—2h，这时液体稍呈透明状，加500mg 活性炭。
混合2min以后过滤，过滤后呈无色液体。
3.固定
配置固定液：无水乙醇:冰乙酸=3:1
将蚕豆根尖取下用蒸馏水冲洗三分钟放入固定液中固定12~15h
4.解离
配置1N HCL解离液 1.18g/mlHCL量取8.39ml加水定容到100ml，放到60℃水浴锅上预热
将固定好的根尖用水冲洗三分钟并吸干各加入到预热好的相应的解离液管中，解离10~13min染色
5.染色
吸去水分，加入Schiff试剂避光染色30min，然后用漂洗液漂洗2-3次，经水洗后准备压片。
6.压片
取一根尖置于载玻片上，切下生长区部位，加一滴清水或45%醋酸水溶液压片镜检。
7.镜检、观察
观察各种不同的方法染色的染色效果有何差异
五、结果与分析
热配法：
冷配法：Kodousek法
冷配法：Lillie和Fullmer法
冷配法：陈啸梅法
冷配法：渡边恒彦法
比较冷配法和热配法：认为冷配法比热配法优越。
冷配法无需加热，程序简便易行，节约时间；不会因为温度和时间掌控不准确而影响配制效果。
冷配法配制的Schiff试剂较热配法使用周期长，试剂稳定性好。
这可能是热配法中碱性品红加热煮沸，染料受热分解，丢失了部分有效成分之故。
热配法的温度控制要求较严，药液保存的稳定性较差，暴露后再使用效果不佳。
Sehiff试剂应密封贮存在阴暗处，倘若受热或见光，或露置于空气中过久。
试剂中的二氧化硫易失，造成试剂显色。
(1)冷配法与热配法相比有以下优点：①配制在常温下进行，元需煮沸，避免了加
热后再冷却杂质析出问题；②排除人为因素的影响(降温、测温的操作)，减少测量误差。
增强了反应的稳定性，使用周期增长；③免去过滤、净化与吸附等繁琐步骤；④以浓盐酸取代1mol／L盐酸，加速了对染色剂色素的破坏速度，缩短了配制时间，提高了工作效率。
(2)失败原因主要为：Schiff试剂中含有磺酸基、氨基，磺酸基易被氧化剂氧化，
氨基在碱性条件下不稳定。
因此，配制Sehitt试剂应在冷溶液及酸性条件下进行。
试剂显色是由于亚硫酸盐被消耗，转化为二氧化硫气体逸出，醌式结构重新恢复，无色品红又被氧化生成碱性品红。
六、实验感想
本小组通过运用不同方法对希夫试剂的配置进行研究，通过染色的比较观察，最终归纳出各种方法的优缺点，在这次实验过程中，尽管初期遇到一些问题，但是我们还是通过对方法的改进成功的完成了我们的实验，在实验过程中对于试剂的配置及研究过程中小组成员各司其职，配合良好，尽管实验过程付出了很多努力，也很辛苦，但是最终圆满完成预期目标，因此我们觉得很值的。
这次实验中我们学到了很多，增强了我们的动手能力和团队意识。
让我们对遗传学实验进一步深入了解了许多，十分感谢老师能给我们这样的机会去做实验。