实验4 pH值对唾液淀粉酶活性的

实验器材：
【器材】： 10mm×100mm试管、试管架、恒温水浴箱、记号笔、一次性杯子 【试剂】： 1．1%淀粉溶液：配制方法：取可溶性淀粉1克，加5毫升蒸馏水，调成糊状，再加蒸馏水约80 毫升，加热，使其溶解，最后用蒸馏水稀释至100毫升，冰箱保存。 2．稀释唾液：同实验3 3．缓冲溶液： 4．碘溶液 取碘化钾2g溶于少量蒸馏水中，再取碘1.27g，完全溶解后加蒸馏水至200ml，贮于 棕色瓶中。使用前用水稀释5倍。
实验步骤
取三支试管按下表操作：
加入物(ml)
1
2
3
1%淀粉溶液
PＨ5.7缓冲液 PH6.8缓冲液 PH8.0缓冲液
3
1 0 0
3
0 1 0
3
0 0 1
摇匀后37℃恒温水浴中保温5分钟
稀唾液 2 2 2
• 将上面各管摇匀后放入37℃恒温水浴中保
温。放置10分钟后取出，分别向各管加入
稀碘液1滴，观察3管中颜色的区别，说明
实验4 pH值对唾液淀粉酶活性的影响
实验目的：
• 1. 通过实验观察pH对酶促反应的影响。 • 2. 提高分析问题和动手能力。
实验原理
• 淀粉在淀粉酶催化下水解，其最终产物是麦芽糖和 葡萄糖。在水解反应过程中淀粉的分子量逐渐变小， 形成若干分子量不等的过渡性产物，称为糊精。向 反应系统中加入碘液可检查淀粉的水解程度，淀粉 遇碘呈蓝色，麦芽糖对碘不显色。糊精中分子量较 大者呈蓝紫色，随糊精的继续水解，对碘呈橙红色。 • 根据颜色反应，可以了解淀粉被水解的程度。在不 同酸碱度下，唾液淀粉酶活性不同，淀粉水解程度 也不一样。进而了解pH对酶促反应的影响。
pH对酶促反应的影响。
实验5 温度对酶促反应的影响
实验目的： 1. 通过实验观察温度对酶促反应的影响。 2. 提高分析问题和动手能力。 实验原理：同实验4。
根据颜色反应，可以了解淀粉被水解的程度。 在不同温度，唾液淀粉酶活性不同，淀粉水 解程度也不一样。进而了解温度对酶促反应 的影响。
实验器材： 【器材】： 10mm×100mm试管、试管架、恒温水浴箱、沸 水浴、记号笔、一次性杯子 【试剂】： 1．1%淀粉溶液：同实验4 2．稀释唾液：同实验3 3．碘溶液 取碘化钾4g溶于少量蒸馏水中，再取 碘2g，完全溶解后加蒸馏水至300ml，贮于棕色 瓶中。
实验内容与方法：
取三支试管按下表操作：
表
加入物ml 1% 淀粉溶液 PH6.8缓冲液
温度对酶促反应的影响
1
3 1 2 3
3 1
3 1
摇匀后分别于37、沸水、冰浴5分钟
稀唾液 1
1 1
摇匀后分别于37、沸水、冰浴10分钟
取出后，分别向各管加入稀碘液1滴，观察3管中颜色的区别，说明温度对酶促反应的影响。
实验内容与方法：
• 1、葡萄糖标准曲线的制定 • 取8支试管编号，按下表操作：
0 试剂处理 试管编号 葡萄糖标准液/ml — 1 0.2 2 0.4 3 0.6 4 0.8 Leabharlann Baidu 1.0 6 1.2 7 1.4
蒸馏水/ml
2.0 2
1.8 2
1.6 2
1.4 2
1.2 2
1.0 2
0.8 2
0.6 2
实验6 唾液淀粉酶的活性测定
实验目的： 1. 学习酶活力，酶活力单位，比活力的测定， 加深对概念的理解； 2. 学会用3,5-二硝基水杨酸测定还原糖的含量
实验原理：
• 在最适条件下，每分钟催化单位量的底物转化为产物所 需的酶量定义为一个活力单位。 • 酶的比活力：用每mg蛋白质酶活力单位数表示，表示 酶的纯度。每隔一段时间测定一次水解的横渡一浓度为 纵坐标，时间为横坐标作图，在图上找出开始部分线形 好的部分求出斜率。进而求出酶的活力与比活力。 • 3,5----二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色 的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的 颜色强度呈现比例关系，利用比色法可测知样品的含糖 量。该方法是半微量测糖法，操作简便，快速，杂质干 扰较小。
实验器材：
【器材】： 10mm×100mm试管、试管架、恒温水浴箱、沸水浴、记号笔、一 次性杯子 【试剂】： 1．3,5-二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）： 甲液：溶解 6.9g结晶酚于15.2ml10％氢氧化钠中，并稀释至69 ml， 在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠； 乙液：称取 255g酒石酸钾钠，加到300 ml10％氢氧化钠中，再加 入880 ml1％ 3,5-二硝基水杨酸溶液。 将甲液与乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，在室温 下放置 7－10天以后使用。 2．0.1％葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯的葡萄糖（预先在 105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100 ml，冰箱保 存备用。
3,5-二硝基水杨酸/ml
λ=550nm的吸光值（A）
水浴加热5min，迅速取出冷却，在向每管加入21ml的蒸馏水于550nm处测 吸光度；