细胞染色方法总结 (1)
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法Mallory三色染色法可用于胶原和网状纤维的染色，其中蓝色代表胶原和网状纤维，淡蓝色代表软骨、粘液和淀粉样变物质，红色代表神经胶原纤维、肌纤维和酸性颗粒，橘红色代表髓鞘和红细胞。
图表A1.1展示了Mallory三色染色法的效果，其中A组排列规则。
1.2 Masson三色染色法Masson三色染色法可用于胶原纤维和肌纤维的染色，其中绿色代表胶原纤维，红色代表肌纤维，橘红色代表红细胞。
图表B1.2和C1.2展示了Masson三色染色法在胃癌组织和血管平滑肌中的应用。
1.3 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法三联染色法可用于显示胶原、网状和弹性纤维，其中红色代表胶原纤维，黑色代表网状纤维，绿色代表弹性纤维，淡黄色代表肌肉和红细胞。
图表D展示了Weigert间苯二酚法的效果。
胶原纤维染色法2.1 天狼星红苦味酸染色法天狼星红苦味酸染色法可用于胶原纤维的染色，其中红色代表胶原纤维，绿色代表细胞核，黄色代表其他物质。
天狼星红苦味酸染色法在偏光显微镜下观察，Ⅰ型呈强双折光性，呈黄色或红色纤维，Ⅱ型呈弱双折光，呈多种色彩疏网状分布，Ⅲ型呈弱双折光，呈绿色的细纤维，Ⅳ型呈弱双折光的基膜，呈淡黄色。
图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
2.2 Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法可用于胶原纤维的染色，其中鲜红色代表胶原纤维，黄色代表肌纤维、细胞质和红细胞，蓝褐色代表胞核。
图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
三、网状纤维染色3.1 XXX-Sweets银氨染色法XXX-Sweets银氨染色法可用于网状纤维的染色，其中黑色代表网状纤维，红色代表胞核（核固红复染），黄棕色代表胶原纤维，淡红色代表细胞质（红液复染）。
细胞免疫荧光染色的自我总结
免疫荧光实验所需试剂1、PBS和PBST（0.05% Tween 20 in PBS：2000mlPBS+1ml吐温）2、4％多聚甲醛/PBS(4g多聚甲醛+50-80mlPBS+加热至60℃并搅拌+滴加少量1mol/L 的NaOH溶液使其变清亮，定容至100ml)3、0.1％ triton X-100/PBS配制（999mlPBS+1ml Triton X-100/曲拉通X-100（碧云天ST795），因为Triton X-100很粘稠，需减掉枪头尖慢吸）4、2％二抗同源血清封闭：组织切片上有剩余的位点可以与一抗非特异性结合，造成后续结果的假阳性；封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合；也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能与一抗来源一致(中杉金桥封闭用正常羊血清工作液 ZLI9022)5、二抗（中杉金桥 594标记山羊抗兔IgG ZF0616）（中杉金桥 488标记山羊抗小鼠IgG ZF0512）细胞爬片的免疫荧光染色步骤：1）实验前一天，将细胞接入铺有22×22mm（或24×24mm）盖玻片[悬浮细胞需要用多聚赖氨酸包被过的玻璃片]的六孔板或十二孔板中。
2）第二天，待细胞汇合度达到70％左右开始进行染色步骤。
3）用新鲜配制4％多聚甲醛[4℃]固定细胞10分钟。
4）PBS洗三遍，每次5分钟。
5）用0.1％ triton X-100[PBS配制]对细胞透化处理10分钟。
6）加PBS，使液面覆盖玻片。
如果细胞贴壁好，PBS洗时可轻摇孔板洗三遍，每次5分钟[不必一直摇]。
如果细胞贴壁不好就不必了，可以考虑多加点PBS，或者每次浸泡时间稍延长1-2分钟。
7）2％二抗同源血清[购买的纯的羊或牛血清用PBS稀释至2%，当前用的是羊血清]封闭30分钟-60分钟，PBS简单冲洗两遍或者不洗。
8）染色前根据公司说明书建议的浓度配好1抗（1抗稀释液购自中杉金桥）[建议先测试抗体浓度，可依据公司推荐的浓度增加和减低浓度进行测试；如公司推荐1：200，可将抗体配成1：50、1：100、1：200、1：400、1：600，以不同浓度进行孵育，如果抗体有效，应当在有效染色的抗体浓度范围内都可染色，只是颜色深浅不同]，加入1抗，4℃冰箱孵育，一般要大于18小时[有的抗体可能需要多达50小时]。
细胞染色方法
一、形态学观察方法1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。
2、丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。
凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。
如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。
此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。
4、透射电镜观察：可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。
二、DNA凝胶电泳（一）、检测原理细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均发生断裂，细胞内小分子量DNA片断增加，高分子DNA减少，胞质内出现DNA片断。
但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180－200bpDNA 片断，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并可与坏死细胞区别。
（二）结果判断正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状（LADDER)条带；坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带。
三、酶联免疫吸附法（ELISA)核小体测定凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。
核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成，可由ELISA 法检测。
（一）检测步骤1、将凋亡细胞裂解后高速离心，其上清液中含有核小体；2、在微定量板上吸附组蛋白体‟3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合…4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合‟4、加酶的底物，测光吸收制。
（二）用途该法敏感性高，可检测5*100/ml个凋亡细胞。
可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。
该法不需要特殊仪器，适合基层工作，但是不能精确测定凋亡细胞发生的绝多对量。
细胞(组织)化学和免疫化学染色技术
细胞（组织）化学和免疫化学染色技术细胞化学（cytochemistry）或组织化学（histochemistry），是细胞学（cytology）或组织学与生物化学（biochemistry）相结合的一门科学。
细胞化学染色（cytochemical staining）是在血细胞的原位上研究其化学成分的性质，包括蛋白、脂类、糖类、无机盐和酶等，在保持细胞形态的基础上进行化学的定位、定性及半定量的观察，是血液病形态学诊断中的一个重要手段。
细胞免疫化学（immunocytochemistry）又称免疫细胞化学或免疫组织化学（immunohistochemistry）染色，是鉴定某些细胞或组织的病态细胞（如微小巨核细胞）和白血病的重要的辅助性检验技术。
一、涂片细胞化学和免疫化学染色技术（一）细胞化学染色1.铁染色正常骨髓中存在一定量的贮存铁，以含铁血黄素的形式贮存，多分布在巨噬细胞内，称为贮存铁。
骨髓中幼红和晚幼红细胞含有铁颗粒，为细胞内铁，含内铁的细胞称为“铁粒幼细胞”，少数成熟红细胞也含有小的铁颗粒，称为“铁粒红细胞”。
以上铁质均可用普鲁士蓝反应加以显示。
（1）原理：骨髓内含铁血黄素的铁离子和幼红细胞内的铁颗粒，在盐酸环境下与亚铁氰化钾作用，生成蓝色的亚铁氰化铁沉淀（普鲁士蓝反应），定位于含铁粒的部位。
（2）试剂：铁染色液（临用时配制）：200g/L亚铁氰化钾溶液5份加浓盐酸1份混合；复染液：1g/L沙黄溶液。
（3）操作：取新鲜含骨髓小粒的骨髓涂片，于铁染色架上，滴满铁染色液；室温下染色30分钟，流水冲洗，复染液复染30秒；流水冲洗，晾干后镜检。
（4）结果判定1）细胞外铁：细胞外铁呈蓝色的颗粒状、小珠状或团块状，细胞外铁主要存在巨噬细胞胞质内，有时也见于巨噬细胞外。
“-”为涂片骨髓小粒全无蓝色反应；“+”为骨髓小粒呈浅蓝色反应或偶见少许蓝染的铁小珠；“++”为骨髓小粒有许多蓝染的铁粒、小珠和蓝色的片状或弥散性阳性物；“+++”为骨髓小粒有许多蓝染的铁粒、小珠和蓝色的密集小块或成片状；“++++”为骨髓小粒铁粒极多，密集成片。
细胞染色知识点总结
细胞染色知识点总结一、细胞染色的基本原理1. 细胞染色的概念细胞染色是指利用染色剂将生物细胞的各种器官、细胞核和细胞质等成分着色，以便于观察和研究的一种实验技术。
2. 细胞染色的基本原理细胞染色的基本原理是利用染色剂对细胞中的某些结构或化合物有选择地着色，从而突出目标结构，使之能够被观察。
3. 细胞染色的目的细胞染色的目的是为了使细胞各部分或特定结构在显微镜下能够清晰的观察到，并且可以研究细胞的结构、功能和动态变化。
二、常用的细胞染色方法1. 基本染色技术基本染色技术主要包括HE染色、Giems染色和PAP染色等，这些染色方法可以将细胞核、细胞质以及其他不同的细胞结构在显微镜下清晰的观察到，是细胞学研究中最常用的染色方法。
2. 免疫组化染色免疫组化染色是利用抗体-抗原特异性反应原理，通过特定的抗体将被检测的分子或结构着色的方法。
这种方法可以用于检测细胞中特定的蛋白质、细胞器等，广泛应用于细胞生物学和病理学研究中。
3. 分子生物学标记法分子生物学标记法主要是利用特定的标记分子对细胞中的遗传物质进行标记，如荧光标记、辐射标记等，通过显微镜观察能够清晰的观察到目标分子的位置和表达情况，是现代生物学研究中的重要技术。
4. 着色体分析着色体分析主要是通过对染色体进行着色，观察染色体的结构、数量和变化等，包括有丝分裂图像分析、FISH法、G带分析法等，是细胞遗传学研究的重要手段。
5. 细胞动力学标记法细胞动力学标记法主要是通过对细胞内特定结构或分子进行标记，如微管标记、细胞骨架标记等，可以研究细胞的运动、分裂和形态变化等过程。
6. 变性染色法变性染色法主要是通过对细胞内蛋白质的特性进行变性后着色，如石蜡切片染色、单克隆抗体法等，能够实现对细胞内蛋白质的定位和研究。
三、细胞染色的应用领域1. 细胞生物学研究细胞染色是细胞生物学研究中最为常用的技术之一，通过染色可以观察细胞的结构、功能和动态变化，研究细胞内各种器官的形态和功能。
细胞各种染色方法
细胞各种染色方法细胞培养后，需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行连续地观察。
由于细胞小而复杂，若不借助适当的手段，则难以观察其形态、结构，更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。
目前，已有多种研究细胞的技术，从光镜到电子显微镜，从一般细胞化学法到免疫化学法，本章将重点介绍一些常用的观察和检测方法。
第一节培养细胞的常规检查和观察方法细胞在体外培养过程中需要每天进行常规检查和显微镜观察，及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄是否更换等。
细胞常规检查观察的内容为：一、肉眼观察一般常规检查用肉眼即可观察，主要看培养液的颜色和透明度的变化。
正常情况下，培养液pH介于7.2～7.4之间，呈桃红色清亮透明。
加入细胞在培养瓶中置一般温箱培养时，随着细胞生长时间的延长，细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降，引起颜色变浅变黄。
在超越缓冲范围后培养液酸化变黄，如不及时调节pH，会影响细胞的生长，甚至造成细胞退变死亡。
所以，一旦发现培养液变黄，应及时换液传代。
一般更换培养液的时间，依营养物的消耗而定，正常情况生长稳定的细胞2～3天换液一次，生长缓慢的细胞3～4天换液一次。
培养液中加Hepes或用5%CO2温箱培养可使pH维持稳定，利于细胞生长。
用含磷酸盐缓冲系统培养时，可因瓶及塞子漏气，CO2溢出，也可能由于培养瓶塞洗刷不洁、残留碱性物，使培养液变碱发红，只致使细胞难以生长，甚至死亡。
细胞换液传代后，若发现培养液很快变黄，要注意是否有细菌污染或培养器皿没有洗干净。
贴壁细胞培养时若出现混浊，多为污染。
悬浮培养的细胞，应将瓶竖起静置1小时，若培养基混浊示为污染，也可在显微镜下仔细观察有无污染现象出现。
二、显微镜观察生长良好的细胞，在显微镜下可观察到细胞透明度大，折光性强，轮廓不清。
相差显微镜观察时可见细胞部分细微结构。
若细胞生长状态不良，可见细胞轮廓增强，细胞折光性变弱，细胞胞质中出现空泡、脂滴和其他颗粒状物质，细胞之间空隙增大，细胞形态不规则，甚至失去原有细胞的特点，产生圆缩脱落，有时细胞表面及周围出现丝絮状物。
细胞固定、染色原理与方法
(5)防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结构。
2.时期
(1)有丝分裂：有丝分裂主要发生在根尖、茎生长点及幼叶等部位的分生组织，根尖取材容易，操作和鉴定方便。
(2)减数分裂：选取适当大小的花蕾是观察花粉母细胞减数分裂的关键性的第一步。此时的植株形态及花蕾大小依植物的类别及品种有所不同。
(4)AF液：90ml乙醇 10ml甲醛 用于固定大块组织。
(5)卡诺氏固定液： 冰醋酸:氯仿:无水乙醇=1:3:6
改良卡诺氏固定液: 冰醋酸:无水乙醇=1:3
二、染色与染色原理
根据染料的来源不同可分为天然染料(苏木精、洋红等)和人工合成染料（煤焦油染料，如碱性品红等）。
1.苯与苯的取代物
醋酸洋红： 45%醋酸100ml与1-2g卡红混合，煮沸，充分溶解，凉后过滤。1-2个月后加媒染剂铁即可使用。主要染细胞核，若时间太长，细胞质也被染红。
(3)碱性品红 染细胞核的特异染料。
2.染细胞质 伊红Y、刚果红、苦味酸、酸性品红（品红 磺基）
四、洋葱根尖有丝分裂的观察
流程：固定好的根尖→水洗2-3次→1N HCl7-8min→水洗2-3次→取材(1/2分生区)→切碎→染色6-7min→加盖玻片→轻敲→压片→观察。
②饱和对二氯苯溶液室温下处理3-5h，对阻止纺锤体活动和缩短染色体效果也较好，但对染色体小而多的植物来说个利于染色体的计数。
③0.002-0.00mol/L8-羟基喹啉18℃条件下处理5-6h，可以引起细胞粘度的改变，导致纺锤体活动受阻，使中期染色体在赤道面上保持相应的排列位置。缢痕区也较为清晰。一般认为对中等或长染色体的植物较合适。
病理学技术特殊染色总结
病理学技术特殊染色总结一、结缔组织染色法Mallory三色染色法蓝色：胶原和网状纤维淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒橘红色：髓鞘、红细胞Masson三色染色法绿色：胶原纤维红色：肌纤维蓝褐色：胞核三联染色法红色：胶原纤维黑色：网状纤维绿色：弹性纤维淡黄色：肌肉、红细胞二、胶原纤维染色法Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法鲜红色：胶原纤维黄色：肌纤维、细胞质、红细胞蓝褐色：胞核天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法红色：胶原纤维绿色：细胞核黄色：其他三、网状纤维染色Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）黑色：网状纤维红色：胞核（核固红复染）黄棕色：胶原纤维淡红色：细胞质（伊红复染）四、弹性纤维染色Gomori醛复红染色法*甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳紫红色：弹性纤维橘黄色：背景五、弹性、胶原纤维的双重组合染色法蓝绿色：弹性纤维红色：胶原纤维淡黄色：背景六、肌肉组织染色△横纹肌组织染色Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或玫红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨微紫色：粗弹性纤维（有时）紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌△早期心肌病变组织染色Nagar-Olsen染色法（HBFP）红色：缺氧心肌、红细胞黄色或黄棕色：正常心肌蓝色：细胞核Poley显示缺氧心肌染色法红色：缺氧心肌紫色：胞核绿色：其他组织1七、糖类染色过碘酸-Schiff（PAS）染色法红色：糖原及其他PAS反应阳性物质蓝色：细胞核八、黏液物质（黏多糖）染色Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（AB-PAS）染色法红色：中性黏液物质蓝色：酸性黏液物质紫红色：混合性黏液物质阿尔辛蓝（爱先蓝，PH 2.5）法蓝色：含硫酸黏液物质不着色或淡然：强硫酸化黏液物质红色：胞核阿尔辛蓝（爱先蓝，PH 1.0）法蓝色：含硫酸黏液物质不着色：非硫酸化酸性黏液物质红色：胞核（如复染）九、黑色素染色Masson-Fontana黑色素银浸染色法黑色：黑色素及嗜银细胞颗粒红色：胶原纤维浅黄色：背景Lillie硫酸亚铁染色法暗绿色：黑色素浅绿或不着色：背景黄色：肌纤维和背景十、含铁血黄素染色亚铁氰化钾法（Perls blue普鲁士蓝显示三价铁）蓝色：含铁血黄素浅红色：其他组织十一、胆色素染色三氯醋酸染色法绿色：胆色素红色和黄色：其他（复染）十二、脂褐素染色三氯化铁-铁氰化钾法（非特异性）暗蓝色：脂褐素醛品红法（现配现用）深紫色：脂褐素浅黄色：背景十三、脱色素染色通常用来鉴定是否有黑色素存在，3张连续石蜡切片，1张HE，1黑色素染色，1张氧化漂白脱色素十四、纤维蛋白染色Lendrum等MSB染色法*本法的MSB指马休黄猩红蓝法红色：纤维蛋白紫色：陈旧性纤维蛋白蓝色：细胞核黄色：红细胞Gram甲紫染色法蓝黑色：纤维蛋白红色：背景十五、淀粉样物质染色刚果红染色法红色：淀粉样物质蓝色：细胞核Jurgens甲紫染色法红色或紫红色：淀粉样物质蓝色：细胞核十六、真菌染色2Grocott六胺银染色法*真菌均被着色黑褐色：菌丝和孢子红色：细胞核淡绿色：背景高碘酸复红染色法紫红色：真菌浅黄色：红细胞十七、细菌染色一般细菌革兰氏染色（Gram碱性复红结晶紫染色法）蓝色：革兰阳性菌红色：革兰阴性菌红色：细胞核抗酸杆菌Ziehl-Neelsen抗酸杆菌染色法红色：抗酸杆菌灰蓝色：背景胃幽门螺杆菌Warthin-Starry胃幽门螺杆菌染色法棕黑色或黑色：胃幽门螺杆菌淡黄色：背景十八、螺旋体染色硝酸银染色法黑色或棕黑色：梅毒螺旋体、钩端螺旋体淡黄至淡棕色：背景Ryu碳酸钠碱性复红法红色：螺旋体十九、病毒包涵体染色荧光桃红-酒石黄法亮红色：病毒包涵体蓝褐色：细胞核黄色：背景二十、乙型肝炎表面抗原染色Shikata地衣红染色法（现配现用）棕色：HBsAg阳性醛复红改良染色法紫色：HBsAg阳性红色：结缔组织黄色：红细胞及基质维多利亚蓝染色法蓝绿色：乙型肝炎表面抗原物质红色：细胞核二十一、神经组织染色△神经细胞尼氏体染色方法缓冲亚甲蓝法蓝色：尼氏小体及核仁△神经纤维的染色方法Holmes神经纤维染色黑色：神经纤维灰紫色：背景Bielschowsky神经纤维染色黑色：神经纤维紫色：背景Von Braunmubl神经纤维、扣结、老年斑染色黑色：神经纤维、扣结、老年斑浅灰色：背景Eager退变神经纤维染色黑色：退变神经纤维浅棕色：背景△神经髓鞘的染色方法Weigert-Pal髓鞘染色蓝黑色：髓鞘淡灰色：背景Weil髓鞘染色（石蜡切片理想）蓝黑色：髓鞘淡灰色：背景Kultshitzky髓鞘染色蓝黑色：髓鞘淡黄色：背景3Luxol fast blue髓鞘染色蓝色：髓鞘紫色：核仁、尼氏体变色酸2R—亮绿髓鞘染色深红色：神经髓鞘绿色：轴索、间质不着色：脱髓鞘纤维Marchi退变髓鞘染色方法黑色：退变髓鞘浅棕色：背景△神经胶质细胞染色方法Cajal星形细胞染色紫黑色：原浆性及纤维性星形胶质细胞Weil及Davenport小胶质细胞及少突胶质细胞黑色：神经胶质细胞、少突胶质细胞黄棕色：背景二十二、神经内分泌细胞染色△亲银反应Lillie-Masson二胺银反应法黑色：亲银颗粒细胞红色：细胞核淡灰黄色：背景Gomori-Burtner六胺银法黑色：亲银细胞浅红色：背景△嗜银反应De Grandi改良硝酸银反应法棕黑色：嗜银细胞颗粒红色：细胞核碱性重氮反应法橘红色至红色：嗜银细胞颗粒蓝色：细胞核黄色：胞质二十三、嗜铬细胞染色Giemsa改良染色法红色至紫红色：嗜铬细胞蓝色：皮质细胞粉红色：红细胞Wiesel染色法黄绿色：嗜铬细胞质红色：细胞核蓝色：其他二十四、肥大细胞染色甲苯胺蓝改良染色法紫红色：肥大细胞颗粒蓝色：细胞核醛复红法深紫色：肥大细胞颗粒橘黄色：红细胞黄色：其他组织二十五、DNA染色酸水解—无色品红法紫红色：DNA绿色：细胞质、其他成分甲基绿—派洛宁法紫红色：细胞质和核仁内RNA 绿色或绿蓝色：核内DNA二十六、脂肪染色苏丹法橘红色：中性脂肪蓝色：细胞核油红O染色法深橙红色：中性脂肪蓝色：细胞核4。
考马斯亮蓝染色法原理
考马斯亮蓝染色法原理考马斯亮蓝染色法是一种常用的细胞染色方法，可用于区分细胞的核和细胞质。
其原理基于碱性条件下亮蓝色染料甲基蓝与细胞内DNA分子间的静电作用力和亲和力。
首先，考马斯亮蓝染色方法通常在细胞固定后进行。
细胞固定是指保持细胞形态和结构，停止细胞的生理活动，以便进一步的观察和研究。
最常用的细胞固定方法是用乙醇或甲醇进行固定，也可以使用醋酸乙酯等化学药品。
接下来，细胞需要进行脱水，以便更好地与染料反应。
一般会使用乙醇的序列浓度（例如30%-50%-70%-90%-100%）进行脱水处理。
每个浓度的乙醇浸泡时间可以根据实验需求进行调整。
然后，细胞需要进行染色。
染色方法主要是将甲基蓝染料加入细胞内。
甲基蓝是一种亮蓝色碱性染料，它能与核酸分子（DNA和RNA）发生静电作用力和亲和力。
甲基蓝的溶液可以通过醋酸盐缓冲液或甲醇进行准备。
甲基蓝会与DNA分子形成复合物，使得染色体显现出深蓝色或紫色。
这是因为DNA分子含有大量的碱基（如腺嘌呤和胸腺嘧啶），它们具有较高的负电荷，能够与染料形成静电吸附。
此外，甲基蓝也能与细胞内其他基质发生非特异性结合，如细胞膜、胞质蛋白等。
最后，细胞需要进行洗涤，以去除掉未结合的染料，保留已染色的细胞。
一般使用缓冲液（如醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液）进行洗涤，可以重复洗涤多次，直到洗涤液中不再出现明显的染料溶解出现。
考马斯亮蓝染色法的结果是在显微镜下观察到的染色细胞。
核内的DNA分子呈现出深蓝色或紫色，而胞质和其他细胞器则呈现出浅蓝色或无色。
这种染色方法可以用于观察细胞的核染色体形态、核质比例、核分裂等细胞学研究。
总结起来，考马斯亮蓝染色法主要是通过甲基蓝与细胞内DNA分子的静电作用力和亲和力，将细胞的核与细胞质进行染色区分。
这种染色方法简单易行，可用于多种细胞类型的观察和研究。
用于流式细胞分析的细胞内抗原染色方法总结
用于流式细胞分析的细胞内抗原染色改进的基本免疫荧光染色和流式细胞分析操作步骤可用于在单细胞水平上同时流式细胞分析表面分子和细胞内抗原。
通常，细胞用甲醛固定以稳定细胞膜，然后用破膜剂或酒精透化，使得抗细胞内抗原的抗体可以在细胞内进行染色。
染色细胞内的蛋白质时，重要的是要考虑它们的位置，因为这可能决定了最优的操作步骤和缓冲系统。
例如，核蛋白和许多分泌蛋白与Foxp3 /转录因子染色液组合配合良好，而分泌蛋白如细胞因子和趋化因子搭配细胞内固定和破膜缓冲液组合很好。
最后，有几种磷酸化的信号蛋白可能在前面提到的两种缓冲系统中不起作用，但可与固定/甲醇方案一起使用。
应根据经验确定不同缓冲系统和方案中的抗体性能。
细胞表面蛋白质染色操作步骤：1，取100-200w细胞（流式收20w），1200rpm离心8min，留100μL，将细胞重悬。
2，加入1mL 5% BSA（PBS配），1200rpm离心5min，留100μL，将细胞重悬。
重复两次。
这步是封闭，封闭非特异性的表面蛋白分子，防止与抗体非特异性结合。
3，每种抗体加0.3-0.5μL，4℃避光30min。
4，加1mL PBS 终止，1200rpm离心5min，留100μL，将细胞重悬。
5，如果不能马上过流式，加100μL4%多聚甲醛（PBS配），4℃固定。
细胞内抗原染色方法：一、两步法：细胞内（细胞质）蛋白质。
二、一步法：细胞内（核）蛋白质。
三、固定/甲醇的两步法。
一、两步法：细胞内（细胞质）蛋白质在该操作步骤中，固定步骤之后是破膜，在细胞膜上穿孔，这需要在所有后续步骤中持续存在破膜液。
这使得抗体可以进入细胞的细胞质。
因此，所有细胞内染色必须在存在破膜液的条件下进行。
该操作步骤推荐用于体外或体内活化后个体细胞中的胞浆蛋白、细胞因子或其他分泌蛋白的。
免疫荧光组织(细胞)化学染色方法
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法基本原理将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。
其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。
缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。
此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。
试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4荧光标记的抗体溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制搪瓷桶三只（内有0.01mol/L，pH7.4的PBS 1500ml）有盖搪瓷盒一只（内铺一层浸湿的纱布垫）荧光显微镜玻片架滤纸H37℃温箱等。
试验步骤1、滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持肯定湿度。
2、滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全掩盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温肯定时间（参考：30min）。
3、取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按挨次过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不时振荡。
4、取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片掩盖。
5、马上用荧光显微镜观看。
观看标本的特异性荧光强度，一般可用"+'表示：（-）无荧光；（）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清晰可见；（++）荧光光明；（+++ --++++）荧光闪亮。
待检标本特异性荧光染色强度达"++'以上，而各种对比显示为（）或（-），即可判定为阳性。
留意事项1、对荧光标记的抗体的稀释，要保证抗体的蛋白有肯定的浓度，一般稀释度不应超过1：20，抗体浓度过低，会导致产生的荧光过弱，影响结果的观看。
2、染色的温度和时间需要依据各种不同的标本及抗原而变化，染色时间可以从10 min到数小时，一般30 min已足够。
细胞免疫荧光的染色方法
不通透的染色方法:封闭液:3%BSA 用PBS 配制不加吐温-20,一抗,二抗用封闭液配制.1.4% PFA（多聚甲醛）室温固定15min。
2.1xPBS 洗三次，每次5min。
3.3%BSA（不加吐温-20）封闭1hr。
4.一抗4度过夜5.1xPBS 洗三次，每次5min。
6.二抗37度2hr。
7.1xPBS 洗三次，每次5min。
8.DAPI 染色5min。
9.1xPBS 洗三次，每次5min。
蔺红方法染色：蔺红用的方法封闭液里不加土温20 。
我们模拟这个方法封闭液里加了土温20。
1.4% PFA（多聚甲醛）固定15min。
2.1xPBS 洗三次，每次5min。
3.0.2% tritonX-100 通透15min。
4.1xPBS 洗三次，每次5min。
5.3%BSA封闭0.5hr。
6.一抗4度过夜。
7.1xPBS 洗三次，每次5min。
8.二抗37度1hr。
9.1xPBS 洗三次，每次5min。
10.DAPI 染色5min。
11.1xPBS 洗三次，每次5min。
12.封片。
通透的染色方法:封闭液: :3%BSA 用PBS 配制，加千分之一吐温-20一抗，二抗用封闭液配制。
1、细胞铺板，处理2、弃上清，甲醇-20℃固定10min3、预冷的1X PBS 冲洗两遍4、0.2% NP40(PBS配)室温通透8min5、1X PBS 洗5min X 3次6、1%BSA(PBS+1千分之一的土温20配) 室温封闭40min7、一抗4℃（1%BSA配制）孵育过夜8、1X PBS 洗5min X 3次9、二抗（1%BSA配制）室温避光孵育1h10、1X PBS 洗5min X 3次，拍照。
细胞铁染色实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的通过细胞铁染色实验，观察骨髓细胞中铁蛋白及含铁血黄素（细胞外铁）和幼稚红细胞的铁粒（细胞内铁）的分布情况，了解铁在骨髓细胞中的储存和利用状态，为临床诊断和治疗提供依据。
二、实验原理骨髓内的铁蛋白及含铁血黄素（细胞外铁）和幼稚红细胞的铁粒（细胞内铁）在盐酸环境下与亚铁氰化钾作用生成亚铁氰化铁，即普鲁士蓝反应，使细胞内的铁颗粒呈蓝色，从而在显微镜下观察到。
三、实验材料1. 试剂：4%盐酸溶液、40g/L亚铁氰化钾溶液、碱性复红贮存液、复染应用液、37%甲醛；2. 仪器：显微镜、细胞涂片、载玻片、滴管、酒精灯、酒精灯架、酒精灯罩、加热器、培养皿、实验台等。
四、实验方法1. 将血片和骨髓片在空气中干燥，将涂片置甲醛蒸气中固定2-3分钟；2. 将等量40g/L亚铁氰化钾和4%盐酸溶液混合，新鲜配制，加热至约56℃；3. 将待检已固定的血涂片放入上述溶液中，加热染色2-3分钟；4. 用流水冲洗涂片，去除多余的染料；5. 用复染应用液复染涂片，染色1-2分钟；6. 清洗涂片，晾干；7. 在显微镜下观察细胞内铁颗粒的分布情况。
五、实验结果1. 细胞外铁：骨髓小粒中的巨噬细胞呈蓝色，表明细胞外铁含量较高；2. 细胞内铁：幼稚红细胞内可见蓝色颗粒，表明细胞内铁含量较高；3. 部分幼稚红细胞呈环形铁粒幼细胞，表明铁在细胞内储存过多。
六、实验讨论1. 细胞铁染色实验是一种常用的细胞化学染色方法，通过观察骨髓细胞中铁的分布情况，可以了解铁在骨髓细胞中的储存和利用状态，对诊断和治疗贫血等疾病具有重要意义；2. 在本次实验中，观察到细胞外铁含量较高，可能与实验对象处于贫血状态有关；3. 部分幼稚红细胞呈环形铁粒幼细胞，表明铁在细胞内储存过多，可能与铁利用障碍有关；4. 本实验结果可为临床诊断和治疗提供依据，但需结合其他检查结果综合分析。
七、实验结论本次细胞铁染色实验成功观察到骨髓细胞中铁蛋白及含铁血黄素（细胞外铁）和幼稚红细胞的铁粒（细胞内铁）的分布情况，为临床诊断和治疗贫血等疾病提供了一定的依据。
实验十二常用血细胞化学染色
实验十二常用血细胞化学染色Cytochemistry stain for blood cells一、过氧化物酶染色染色原理粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有髓过氧化物酶(myeloperoxidase, POX或MPO),能将底物H202分解，产生新生态氧，新生态氧可氧化四甲基联苯胶成联苯胺蓝。
联苯胺蓝自我脱氢氧化形成棕色的四甲基苯酿二胺，后者与亚硝基铁氧化纳结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色颗粒，沉淀于细胞质内酶所在的部位。
试剂器材1．1%TMB(3,5,31,5f一四甲基联苯胶)乙醇溶液:0.1g TMB溶于100mL88%乙醇溶液中，置棕色瓶内，冰箱保存。
2．亚硝基铁氧化锅饱和溶液在少量蒸馏水中加入亚硝基铁氰晶体，至不再溶解为止，置棕色瓶内，冰箱保存。
3．1%过氧化氢溶液取30%H2021mL加入蒸馆水29mL。
4．稀过氧化氢溶液1%H2021滴，加10 mL蒸馏水稀释(新鲜配制)。
5．瑞氏(Wright)染色液。
6．新鲜涂片(骨髓或血片)、染色架、洗耳球、光学显微镜等。
操作步骤1．取0.1%TMB乙醇溶液1mL，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10μL，溶液呈淡棕黄色，染色液应临用前配制。
2．在新鲜干燥的血片或骨髓涂片上，加0.1%TMB一亚硝基铁氰化钠饱和溶液0.5mL，放置lmin，再加稀H202溶液0.7mL，吹匀，染色6min。
3．自来水冲洗，待干，用瑞氏染液复染15~20 min。
4．自来水冲洗，待干，用油镜镜检。
注意事顶1．血涂片或骨髓涂片应新鲜制作，涂片应厚薄适宜。
2．TMB配制在85%~88%的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90%~95%乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗入而导致染色效果差。
3．H202需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。
涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表示H202过浓。
若H202加于血片上不产生气泡，则示无效。
4．染色液pH应为5.5。
软骨细胞免疫荧光染色
软骨细胞免疫荧光染色1.引言1.1 概述概述软骨细胞免疫荧光染色是一种常用的实验方法，通过使用特定的抗体进行染色，可以帮助研究人员对软骨细胞进行定位、数量统计以及功能表征。
这一技术的引入对于软骨组织的研究和疾病诊断具有重要的意义。
在过去的几十年里，随着分子生物学、免疫学和细胞生物学的快速发展，研究人员对于软骨组织的认识有了极大的拓展。
然而，传统的研究方法仅能提供有限的信息，往往无法满足科研和临床的需求。
因此，软骨细胞免疫荧光染色应运而生。
软骨细胞免疫荧光染色的原理和方法主要基于免疫学的理论，利用特异性抗体和荧光标记物来标记和检测软骨细胞表面或细胞内的特定抗原或蛋白质。
这种标记方式使研究人员可以直观地观察软骨细胞的分布、形态、数量及其活性。
在应用上，软骨细胞免疫荧光染色被广泛应用于软骨生物学研究、生物医学研究和临床诊断中。
例如，在软骨发育以及软骨退变的研究中，通过荧光标记可以清晰地观察到软骨细胞的表达和变化情况。
同时，该技术还可用于研究软骨细胞与其他细胞、细胞因子的相互作用以及信号通路的调控机制。
软骨细胞免疫荧光染色的实施需要一系列的步骤和仪器，包括标本的制备、抗原修复、抗体染色以及显微观察等。
此外，还需要合适的控制组和检测方法来保证实验结果的准确性和可靠性。
综上所述，软骨细胞免疫荧光染色作为一种重要的实验方法在软骨组织的研究中具有广泛应用前景和深远意义。
它不仅可以提供定量和定位的信息，同时也为软骨生物学的发展和相关疾病的研究提供了重要的技术支持。
随着研究方法和技术的不断进步，相信软骨细胞免疫荧光染色在未来将继续发挥重要作用。
文章结构部分的内容可以包括以下几点:1.2 文章结构本篇长文主要分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分将对软骨细胞免疫荧光染色进行概述，并介绍文章的目的和意义。
正文部分将着重探讨软骨细胞免疫荧光染色的原理和方法。
我们将详细介绍免疫荧光染色的基本原理，以及在软骨细胞研究领域中常用的染色方法和技术，包括荧光标记的抗体选择、样本处理和荧光显微镜观察等。
实验室做细胞常用的细胞固定及染色方法(详细)
实验室做细胞常用的细胞固定与染色方法一、爬片前盖玻片处理方法对于悬浮培养的细胞，在进行各种染色前常需先制备成涂片。
为了保证细胞在长时间的染色过程中不从载玻片脱落，必须使其牢固贴附于载玻片上。
在载玻片上涂布一层有助于细胞黏附的物质是经常采用的方法之一。
能促进细胞黏附的物质主要有多聚赖氨酸、铬矾明胶等，这里介绍多聚赖氨酸的涂布方法。
1、将载玻片用玻璃专用洗涤剂(如Decon)浸泡5min，间或振荡。
2、用自来水冲洗5min。
3、以1％盐酸—70％乙醇溶液浸泡5min。
4、烤箱干燥(至此即可用于普通染色)。
5、多聚L-赖氨酸(1:10溶于去离子水)浸泡5min，振荡。
6、入60℃烤箱1 h，或室温过夜干燥(用于细胞化学、免疫细胞化学及原位杂交细胞化学)。
二、细胞固定常用方法固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，避免组织和细胞发生降解、自溶、腐败和变形等，使细胞和组织内的各种酶失去活性，防止细胞和组织的各种分子变性、解离，使细胞的化学物质和酶能准确定位，并在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏。
同时，固定还可使细胞的各部分易于着色，适于观察、长期保存和分析。
1.固定组织、细胞的基本原则：尽可能选用新鲜培养物；根据检测工具、对象、目的和要求选择固定剂和固定方法。
2.培养物的准备和固定前处理：各种细胞培养物，如双盖片悬滴培养物、悬液培养物、单层培养物和盖片单层培养物都可作固定材料。
对双盖片悬滴培养物和悬液培养物来说，常通过离心收集细胞，PBS漂洗2～3次后，备固定制片；对盖片单层培养物来说，将盖片从培养器皿中取出后，PBS液漂洗2～3次，以洗去血清和附着于细胞表面的残渣，备固定用。
3.常用固定液：常用的固定液分两类，一类是以单一化学物质配成的固定液，称简单固定液。
主要有甲醇、乙醇、甲醛、醋酸、丙酮、戊二醛、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯化汞、氯化镉、四氧化锇(锇酸)。
另一类是用两种或两种以上化学物质配合成的固定液，称混合固定液。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst 有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！
染色步骤
PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测.碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。
但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。
但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够！
annexin-v染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态.Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。
Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧光。
JC-1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。
线粒体本身存在一定的极性(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。
电位差由Ca2+、Na+和H+流调控。
当线粒体状态良好时对JC-l摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。
在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-l的浓度较高，多以多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。
JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membrane potential)，而与线粒体的形态、体积和密度都无关，因而能更好地反映线粒体的功能状态。
由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1染色被用于检测凋亡的早期发生。
其实验方法如下。
JC-l染色非常简单。
首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1～5mg/ml)，储存于-20℃，用时以培养液稀释至10ug/ml终浓度。
对贴壁细胞可以直接弃去培养液，漂洗细胞后直接加入染色液，10-30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。
线粒体状态好时细胞以绿色为主，当红光信号增强时，红绿相叠，以橙色为主。
该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红/绿信号强度，计算其强度比。
钙黄绿素-AM(Calcein-AM):Calcein -AM本身并不是荧光分子，但通过活细胞内的酯酶作用，Calcein -AM能脱去AM基，产生的Calcein能发出强绿色荧光（激发：490 nm，发射：515 nm）。
因此Calcein -AM仅对活细胞染色
细胞活力鉴定——台盼蓝染色法
原理：
细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。
而活细胞能阻止染料进入细胞内。
故可以鉴别死细胞与活细胞。
用品：
1. 4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。
使用时。
用PBS稀释至%。
2. 吸管、血细胞计数板、显微镜
步骤：
1、制备单细胞悬液。
并作适当稀释（106细胞/ml）
2、染色：细胞悬液与%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
3、计数：在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞
结果统计：
镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。
根据下式求细胞活力：
活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100
注意事项：台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。
否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。
台盼蓝染色原理
通常认为细胞膜丧失完整性，细胞即可被认为已经死亡。
台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。
健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞，膜的完整性丧失，通透性增加，细胞可被台盼蓝染成蓝色。
依据此原理，细胞经台盼蓝染色后，可通过显微镜，直接镜下计数或拍照后计数，实现对细胞存活率比较精确的定量分析。
试述台盼蓝染发鉴别死活细胞的原理，试分析染色时间过长本来是活细胞也被染色的原因
死细胞的细胞膜无屏障作用，台盼蓝马上进入细胞而显蓝色。
活细胞细胞膜有选择透性，对台盼蓝的透性小，进入细胞慢。
若染色时间过长，台盼蓝可能通过胞吞或胞饮作用进入细胞。