食品中菌落总数的测定实验
实验三--食品中微生物菌落总数的测定
5、及时将已冷却到46℃的培养基倾入到平皿中，并转动
平皿使其混合均匀
6、37℃倒置培养2天
7、按照计数Biblioteka 则计数五、菌落计数方法 选取菌落数在30~300cfu之间，无蔓延生长的平板 计数 低于30的记录具体菌落数，大于300的可记录为多 不可计，每个稀释度采用2个平行的均数 有较大片状菌落生长者不宜采用， 若片状小于平板一半时且余部均 匀分布，则以半个平板菌落数2 倍报告 无明显界限链状菌落每条单链视 为一个菌落
1、计数结果的表述
若只有一个稀释度平板在30~300CFU，则计算两平行平 板的均数，再乘以稀释倍数报告之 若有连续两个稀释度符合计数要求则按下公式：
所有符合计数要求 的平板菌落数之和
菌落总数
例：10-2=232，244 10-3=33，35 N= (232+244+33+35) (2+2×0.1)×10-2 = 24727
灭菌生理盐水当中，充分振荡，混合均匀，制成
10-1稀释度样品
2、梯度稀释法依次稀释样品到10-4
菌落总数操作流程图
3、选择10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品均液，用无菌 移液管分别吸取1mL到无菌平皿中，每个稀释度做2个 平皿；同时，吸取1mL无菌生理盐水到1个平皿中作为
空白对照
4、熔化培养基
标准平皿活菌计数法（SPC法）是最常用的活菌计
数法
将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分
散的细胞通过混菌法或涂布法使其均匀分布在平皿
培养基上，培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落
都由原液中单个细胞发育而来。
反映食品被细菌污染的程度
由于倾注平板法的局限，会有一部分细菌在该实验
食品中菌落总数的测定
食品中菌落总数的测定一、实验目的（1）学习和掌握测定食品中菌落总数的基本方法（2）学会菌落总数的报告方式二、实验材料1、仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。
2、培养基和试剂：75%乙醇、0.85%生理盐水、琼脂培养基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.0±0.23、检样：利乐包装鲜牛奶250ml三、实验方法与步骤1、检验程序菌落总数检验程序：检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出→菌落数→报告2、检样稀释及培养（1）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25ml鲜牛奶，放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。
（2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。
（3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
（4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL，并转动平皿使与稀释检样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。
（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。
实验四食品中细菌菌落总数的测定
4、若所有稀释度平板菌落数均<30， 则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍 数计算。
5、若所有稀释度平板均无菌落生长， 则应按<1乘以最低稀释倍数计算。
6、若所有稀释度均不在30～300之间， 有的>300，有的又<30，则应以最接近 300或30的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
（四） 菌落计数报告方法
（二） 菌落记录方法 做平板菌落数记录时，可用肉眼观察
，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在 记下各皿的菌落总数后，求出同稀释 度的各平板平均菌落数。
到达规定培养时间，应立即计数。如果 不能立即计数，应将平板放置于0～4℃ ，但不要超过24h。
1、 平皿菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作
例如：
稀释度 1:100（第一稀释度） 1:1000（第二稀释度）
菌落数 232，244
33，35
232+244+33+35 (2+0.1×2) ×10-2
=544/0.022=24727
四舍五入表示为: 2.5 × 104
3、 若所有稀释度的平板菌落数均 >300，则取最高稀释度的平均菌落数乘 以稀释倍数计算。
酱油（GB/T2717-2003）： 细菌菌落总数： ≤30000 CFU/mL 大肠菌群： ≤30MPN/100mL 肠道致病菌： 不得检出
全脂奶粉、脱脂奶粉（GB5410-1999）：
特级 一级 二级
细菌菌落总数：≤20000 ≤30000 ≤50000
（CFU/ml）
大肠菌群
≤40
≤90
≤90
一、 目的
1、 学习并掌握食品中菌落总数测定方 法和原理。 2 、了解菌落总数测定在对被样品进行 卫生学评价中的意义 。
食品中菌落总数的测定
分即五分 平升自 二 用三自 一 混在摄别 皿，来 ） 灭分来 ） 匀桌氏倒 。注水 细 菌钟水 水 。面度入 入 菌 锥灭 样 形菌 上左约 空 总 的 用 先 瓶， 作右一 的 数 采 以 将 旋的毫 灭灭 的 接再自 取 摇营升 菌菌 测 取放来 水开 定 已 养 培 ， 的 水 样 养吸 使水 使琼溶 以水 化 脂 皿 水 量 待 龙 中管 流 样培并 分 头 ，取 与养已 析五用 共水 培基冷 。分火 钟焰 做样 养，却 后烧 两一 基并四 充立十 ，灼 个毫 (
检样 做成几个适当倍数的稀释液 选择2-3个适当稀释度的稀释液各以1ml分别加入灭菌平皿内 每皿内加入适量营养琼脂 菌落总数 报告
培待 培 ， 养 然 基 后 凝 取 固 出养后 进 ， 行 倒 菌 置 落 于 计 数 。 +2h
一另 毫取 升一 ，灭 作菌 空培 白养 对皿 照， 。倒 入 营 养 培 温 养 箱 基 中 约
(
操 作 步 骤
36+1℃ 4
, 8
消毒前的包装
实验前的准备
棉塞的制作
棉塞刚好卡于瓶口不 松动即为合格
校正PH值及溶液加热煮沸溶解
水样的制取
放水一分钟
酒精棉消毒
第一步 先放水一分钟 第二步 用镊子夹酒精棉消毒出水口 第三步 将酒精棉点燃，用镊子夹起酒精棉灼烧出水口 第四步 再放水一分钟 第五步 采样
食品中菌落总数的测定
实验仪器
电热恒温培养箱，托
盘天平，电炉，吸量
管，锥形瓶，酒精灯， 剪刀，棉花，麻布，
LOREM IPSUM DOLOR
实验试剂 乙醇 ， Hcl ，氢氧化
பைடு நூலகம்
钠溶液，营养琼脂培
养基（琼脂 5g，蛋白
食品化验菌落总数的实验步骤
食品化验菌落总数的实验步骤1、样品的稀释固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min,或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1 min～2 min,制成 1:10 的样品匀液.液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中,充分混匀,制成 1:10 的样品匀液.2、用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液1 mL,沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中（留意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）,振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合匀称,制成 1:100 的样品匀液.3、制备 10 倍系列稀释样品匀液.每递增稀释一次,换用 1 次1 mL 无菌吸管或吸头.4、依据对样品污染状况的估量,选择 2 3 个相宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）,在进行 10 倍递增稀释时,吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿.同时,分别吸取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对比.5、准时将 15 mL～20 mL 冷却至46 ℃的平板计数琼脂培育基（可放置于46 1 ℃℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿,并转动平皿使其混合匀称.6、培育 :待琼脂凝固后,将平板翻转,36 1 ℃℃培育48 h2 h.水产品 30 1 ℃℃培育 72 h3 h.假如样品中可能含有在琼脂培育基表面充满生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面掩盖一薄层琼脂培育基（约 4 mL）,凝固后翻转平板,条件进行培育.7、菌落计数可用肉眼观看,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量.菌落计数以落形成单位（colony-forming units,CFU）表示.8、选取菌落数在 30 CFU～300 CFU之间、无扩散菌落生长的平板计数菌落总数.低于 30 CFU的平板记录详细菌落数,大于 300 CFU的可记录为多不行计.每个稀释度的菌落数应采纳两个平板的平均数.9、其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采纳,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很匀称,即可计算半个平板后乘以代表一个平板菌落数.10、当平板上消失菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数.。
第三组食品中菌落总数的测定
注意事项
▲充气饮料应在无菌条件下进行排气;酸性样 品应用经过灭菌的20~30%的碳酸钠溶液调 整pH值至中性;高盐样品应用灭菌蒸馏水进 行稀释. ▲为了防止细菌增殖及产生片状菌落,在检液 加入平皿后,应在20分钟内向皿内倾入琼脂, 并立即使其与琼脂混合均匀.
结论与分析
结论:经实验,可得出学校食堂的牛奶含菌量没 有超出国家卫生标准,可放心食用. 分析:我们组在10-1这个稀释度的菌落数有悬 殊,我们分析原因可能有:①加样的不准; ② 为充分混匀; ③琼脂厚度相差悬殊; ④移液 管在注样前可能受到污染; ⑤可能含有抑菌 物质; ⑥培养皿未充分洗干净
菌落总数实验结名称 生产日期 生产车间 食堂 抽样日期 4-17 检验日期 4-17 细菌总数 检验依据 GB/T4789.2-2010 结果报告数 培养基 营养琼脂培养基 接种 A B 平均数 10-1 12 9 10.5 N=10.5X10 =105 10-2 2 4 3 10-3 4 2 3 0 0 0 空白 检验员:何佳志 谷娟娟 龚婷 日期:2013-4-22 牛奶 4-17
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析一、引言食品中菌落总数是指在特定条件下，通过培养基培养和统计法，对食品中细菌和真菌等微生物菌落数的测定。
食品中菌落总数是评价食品卫生质量的重要指标之一，可以反映食品是否受到污染、保存条件是否良好等情况。
对食品中菌落总数进行准确测定和不确定度分析，对于食品卫生和质量控制至关重要。
二、食品中菌落总数的测定方法食品中菌落总数的测定方法通常采用菲尔氏杯平板法和薄膜法。
菲尔氏杯平板法是将食品样品稀释后均匀铺在富含寒天的琼脂培养基上，培养并统计菌落数；薄膜法是将食品样品均匀涂抹在琼脂培养基上，培养并统计菌落数。
三、食品中菌落总数的不确定度分析1. 采样不确定度：食品中菌落总数的测定首先要进行食品样品的采样和样品的制备，采样过程中可能会存在采样不均匀、采样器具的精密度等因素，引入采样不确定度。
2. 复现性不确定度：食品中菌落总数的测定通常需要进行多次重复测定，由于操作者、环境等因素的影响，可能会出现不一致的结果，引入复现性不确定度。
3. 实验条件不确定度：食品中菌落总数的测定受到实验条件的影响，如温度、湿度等条件会对微生物生长产生影响，引入实验条件不确定度。
4. 测量设备不确定度：食品中菌落总数的测定需要借助于培养箱、平板计数器等设备，设备的准确度和精度会影响测定结果，引入设备不确定度。
四、食品中菌落总数的不确定度评定食品中菌落总数的不确定度评定需要考虑上述不确定度因素的影响，并采用合适的方法进行计算评定。
不确定度评定的目的是为了确定测定结果的可靠性和准确性，提高测定结果的可信度。
1. 不确定度计算方法食品中菌落总数的不确定度可以采用GUM不确定度评定方法，通过不确定度传递法和不确定度组分法计算总的不确定度。
在实际计算中，需要考虑到各种不确定度来源的具体数值和权重，综合计算得出总的不确定度值。
2. 不确定度控制方法为了减小不确定度的影响，可以采取以下控制方法：（1）采样不确定度的控制：采用合适的采样方法和器具，确保样品的均匀性和代表性；（2）复现性不确定度的控制：严格控制实验条件和培养操作流程，尽量减小操作者和环境的影响；（3）实验条件不确定度的控制：控制实验条件的稳定性和准确性，进行实验前后的环境监测和校准；（4）测量设备不确定度的控制：对测量设备进行定期维护和校准，确保设备的准确度和精度。
食品中菌落总数测定方案(菌落总数测试片)
食品中菌落总数测定方案菌落总数测试片1.操作步骤1.1 样品的稀释1.1.1 称取25g样品（剪碎）置盛有225ml无菌生理盐水的三角瓶中，充分振摇混匀，制成1:10的样品匀液。
1.1.2 用1ml微量移液器吸取1:10的样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml无菌生理盐水的无菌试管中（注意吸头尖端不要触及稀释液面），充分振摇混匀，制成1:100的样品匀液。
1.1.3 用1ml微量移液器吸取1:100的样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml无菌生理盐水的无菌试管中（注意吸头尖端不要触及稀释液面），充分振摇混匀，制成1:1000的样品匀液。
1.2 样品的接种揭开菌落总数测试片上层膜，用1ml微量移液器分别吸取1:10、1:100、1:1000的样品匀液1ml慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固（每个样品匀液做2个纸片）。
同时做一片空白阴性对照。
1.3 培养将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于36℃±1℃培养箱内培养15～24h，堆叠片数不超过12片。
1.4 菌落计数1.3.1 细菌在测试片上生长后会显示红色斑点，可用肉眼观察,必要时用放大镜,记录稀释倍数和相应的菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位(CFU)表示。
1.3.2 选取菌落数在30CFU—300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
低于30CFU的纸片记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个纸片的平均数。
1.3.3 其中一个纸片有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的纸片作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到纸片的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个纸片后乘以2,代表一个纸片菌落数。
1.3.4 当纸片上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
—1 —— 2 —1.5 结果与报告1.5.1 菌落总数的计算方法1.5.1.1 若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个纸片菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g 样品中菌落总数结果。
食品中菌落总数的测定实验
食品中菌落总数的测定实验一、实验目的：了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法，认识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。
二、原理平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是这种计数方法最大的优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测三、试剂和材料1.仪器恒温培养箱：（36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
）均质器或振荡器无菌吸管：1 ml（0.01 ml 刻度）、10 ml（0.1 ml 刻度）或微量移液器及吸头无菌锥形瓶：容量250 ml、500 ml、无菌培养皿：直径90 mm菌落计数器2.样品1）平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基：蛋白胨5.0 g 、酵母浸膏2.5 g 、葡萄糖1.0 g 、琼脂15.0 g、蒸馏水1000 ml、pH 7.0±0.2。
将所有成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。
分装试管或锥形瓶，121 ℃高压灭菌15 min。
注：用平板计数琼脂，称取23.5 g于1 000 ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121 ℃高压灭菌20min，冷却至45~47℃左右备用。
2）无菌生理盐水：氯化钠（NaCl）5.875g 蒸馏水(纯净水) 500ml 称取5.875ｇNaCl溶于500ml蒸馏水中，121 ℃高压灭菌20min。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析一、引言食品安全是人们关注的重点问题之一，而食品中的微生物污染更是引起广泛关注的话题。
菌落总数是一种常见的微生物指标，用于反映食品中细菌、酵母菌和霉菌的数量和品质，是评价食品卫生质量的重要指标之一。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析显得格外重要。
二、菌落总数的测定方法菌落总数的测定方法一般采用霉菌总数计数法或者菌落总数计数法。
下面以菌落总数计数法为例，介绍菌落总数的测定方法。
1. 样品制备首先需要准备好待测样品，这里以蔬菜为例。
将蔬菜样品洗净并切碎，然后取适量样品加入适量生理盐水中，进行样品的制备。
2. 稀释根据样品的预期菌落总数选择适宜的稀释倍数，将样品进行适当的稀释，以便于后续操作。
3. 菌落计数培养基将稀释后的样品平铺在含有琼脂的培养基上，然后放置在适宜的温度和湿度条件下进行培养，产生菌落。
4. 菌落总数的计数培养一定时间后，观察菌落的形态，进行计数并计算出样品的菌落总数。
三、菌落总数的不确定度分析不确定度是指在一定测量条件下，由于一系列测量误差和环境条件等因素引起的测量结果的不确定性。
菌落总数的测定同样受到不确定度的影响，因此需要进行不确定度分析。
1. 实验误差在菌落总数的测定中，包括样品制备、稀释、计数等环节都存在测量误差。
样品制备过程中的称量误差，培养基制备过程中的体积误差等都会引起测定结果的不确定性。
2. 环境条件菌落总数的测定过程中，温度、湿度、光照等环境条件的变化都会对测定结果产生影响，因此需要对这些因素进行控制和修正。
四、不确定度的计算菌落总数的不确定度可以通过以下步骤进行计算：1. 确定测定方法的不确定度根据实验数据和测定方法的特点，确定测定方法的不确定度。
这个过程需要考虑到实际测定过程中的各种误差和环境因素对测定结果的影响。
2. 计算出测定结果的标准偏差根据测定方法的不确定度和实验数据，可以计算出测定结果的标准偏差，从而确定实验数据的不确定度。
菌落总数测定实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除菌落总数测定实验报告篇一：食品中菌落总数的测定蛋糕中菌落总数的测定【说明】蛋糕具有松软香甜，携带方便、食用简单等特点，因此成为人们居家生活特别是旅途中不可或缺的一种美食，深受人们的喜爱。
测定蛋糕中的菌落总数可以用来判定其被微生物污染的程度及卫生质量，它反映蛋糕在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价，菌落总数的多少在一定程度上标志着蛋糕产品质量的优劣，因此，测定蛋糕中的菌落总数具有重要意义。
目前应用于测定食品中菌落总数的方法有:纸片法、电阻抗法等。
本实验采用国标法(gb\T4789.2-20XX)对独立包装小蛋糕中菌落总数进行测定。
并与gb7099-20XX糕点、面包卫生标准中规定的冷加工糕点中菌落总数≤10000（cfu/g）的数据对比初步判断样品是否符合卫生要求。
一、实验目的1、学习并掌握测定蛋糕中菌落总数的方法及原理。
2、通过对比实验验证冷藏对蛋糕的保鲜及抑菌作用。
3、了解菌落总数测定在食品卫生学评价中的意义。
二、实验原理菌落总数即为食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
每种细菌都有它一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及其他生理条件（如温度、培养时间、ph、需氧性质等）去满足其要求才能将各种细菌都培养出来。
但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法。
细菌菌落总数的测定，所得结果，只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。
菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
三、实验设备与材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃。
食品中菌落总数的测定
任务四 平板制备
选择适宜的稀释样液根据对标本情况的估计,选择 3个 适宜稀释度,吸取该稀释度1mL稀释液于空平皿内。
待培养基冷却至46℃左右，以无菌操作倒入无菌培养 皿中。每个平皿倒入约15-20mL培养基，并转动平皿使其 混合均匀。放至水平面上自然冷却凝固，切勿随意晃动而 使培养基表面不平整影响涂布操作。
从样品稀释到平板 制备要求在15min 内 完成。
任务五、培养计数
待琼脂凝固后,倒置平板,置36±1℃温箱内培养48+2h。 平板取出,计算平板内菌落数目,乘以稀释倍数,即得每
g(或mL)样品所含菌落总数。 菌落计数以平板内菌落形成单位（CFU）表示。
恒平 温板 培计 养数
食品中菌落总数的测定
检测依据
GB 4789.2-2010
任务一 仪器试剂准备
• 所用器具干净、烘干、灭菌，既不能存在活菌也不能存在 抑菌物质。
• 应注意无菌操作。
任务二 仪器试剂灭菌
玻璃器皿
----干热灭菌160-170℃ 1-2h
平皿可以用牛皮纸或 双层报纸包扎成捆， 或放入金属筒内再灭 菌。
在吸管粗头顶端约 0.5cm处，塞上一 小段棉花，后用45cm宽的报纸将其 包好。
内部框架 带盖外筒பைடு நூலகம்
电热恒温干燥箱
培养基、生理盐水-----湿热灭菌121 ℃ 15-30min
任务三 样品稀释制备
全过程遵循无菌操作程序
⑴检样处理 以无菌操作取经过充分摇 匀的检样25mL，放入含有225mL灭菌 生理盐水的灭菌广口瓶内做成1:10的均 匀稀释液。
⑵样品稀释 用1mL灭菌吸管,吸取1:10 稀释液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL灭 菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注 意吸管尖端不要触及管内稀释液),充分 振摇试管，使之混合均匀,制备成1:100 的稀释液。另取1mL灭菌吸管,按上项操 作顺序，作10倍递增稀释液,如此每递增 稀释一次,即换用1支1mL灭菌吸管。
食品中细菌菌落总数及大肠菌群的检测实验报告
实验九食品中细菌菌落总数及大肠菌群的检测[实验目的]1、了解国家规定的食品质量与细菌菌落总数和大肠菌群数量的重要关系。
2、掌握食品细中细菌菌落总数及大肠菌群的检测方法。
[实验原理]菌落总数根据稀释平板技术法检测每mL/g检样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上,经37℃、24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。
它所反映的是检样中的活菌数，细菌数越多，说明污染程度越大，这项指标可作为判定待测样品被污染的程度。
大肠菌群数是在100mL(g)食品中（或1000 mL水中）大肠菌群最近似值。
它是指肠杆菌科中的４个属，即埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
这一菌群致病力不强，具有共同特点：好氧和兼性厌氧、革兰氏染色阴性反应、无芽孢杆菌、37℃培养24-48h能发酵乳糖产酸产气。
大肠菌群在人畜肠道内含量最多，可随排泄物进入水源或污染食品。
国际公认以大肠菌群的存在作为粪便污染指标。
这项指标可判定待测样品有无被粪便污染及污染的程度。
[实验材料]1、检样牛乳（饮料、酱油）2、培养基普通营养琼脂平板、单料乳糖胆盐发酵培养基、乳糖发酵培养基、EMB平板3、仪器和其他物品恒温箱、水浴锅、无菌培养皿、无菌吸管、无菌盐水瓶（内装225 mL无菌生理盐水）、无菌试管（内装9 mL无菌生理盐水）、灭菌剪刀、镊子等[实验内容]1、细菌菌落总数的测定(1)制备样品及样品稀释取待测样品（牛乳、酱油）一瓶，用点燃的酒精棉球烧灼瓶口，若是塑料瓶则用75%的酒精棉球擦拭灭菌。
在无菌条件下取样25 mL放入内装225 mL生理盐水的瓶中，充分混匀，制成10-1的稀释液。
用1 mL无菌吸管吸取10-1稀释液1mL，沿管壁徐徐注入装有9mL无菌生理盐水的试管中（注意，吸管尖端不要触及管内稀释液），振荡试管，混合均匀，制成10-2的稀释液。
另取1mL无菌吸管，按上述操作方法做成10-3稀释液。
每次稀释，换用一支无菌吸管，共做10-1、10-2、10-3三个稀释度，分别含样品0.1mL，0.01mL，0.001mL。
菌落的总数实验报告
一、实验目的1. 掌握菌落总数的测定原理和方法。
2. 了解菌落总数在食品卫生学评价中的意义。
3. 通过实验，学会正确操作实验仪器和试剂，提高实验技能。
二、实验原理菌落总数是指在一定条件下，单位体积（或重量）样品中生长的细菌菌落数量。
本实验采用平板计数法，通过将样品进行稀释，涂布在琼脂平板上，在一定条件下培养，统计菌落数量，从而估算样品中的菌落总数。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 食品样品（如蛋糕、饮料等）- 稀释剂（如无菌生理盐水）- 营养琼脂平板- 铅笔- 灭菌棉签- 灭菌镊子- 培养箱- 移液器- 移液管- 计数器2. 实验仪器：- 电子天平- 高压蒸汽灭菌锅- 恒温水浴锅- 超净工作台四、实验步骤1. 样品准备：- 称取适量样品，用无菌生理盐水进行10倍稀释。
- 将稀释后的样品涂布在营养琼脂平板上。
2. 培养与观察：- 将涂布好的平板放入培养箱中，在适宜的温度下培养24小时。
- 观察平板上的菌落生长情况。
3. 菌落计数：- 选择菌落数量适中的平板，用铅笔在平板背面标记菌落位置。
- 用计数器对菌落进行计数。
- 根据稀释倍数，计算样品中的菌落总数。
五、实验结果与分析1. 实验结果：- 蛋糕样品的菌落总数为5.0×10^6 CFU/g。
- 饮料样品的菌落总数为1.2×10^5 CFU/mL。
2. 分析：- 蛋糕样品的菌落总数较高，可能是由于生产过程中受到污染或保存不当。
- 饮料样品的菌落总数相对较低，可能是由于生产过程中严格把关，保证了产品的卫生质量。
六、实验讨论1. 影响菌落总数测定的因素：- 样品处理方法：样品处理不当会导致菌落总数测定结果不准确。
- 稀释倍数：稀释倍数过大或过小都会影响菌落总数的测定。
- 培养条件：培养温度、湿度等条件会影响菌落的生长。
2. 提高菌落总数测定准确性的方法：- 严格遵循实验操作规程，确保样品处理、稀释、涂布等步骤的正确性。
- 选择合适的稀释倍数，保证菌落数量适中。
菌落总数测定实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除菌落总数测定实验报告篇一：食品中菌落总数的测定蛋糕中菌落总数的测定【说明】蛋糕具有松软香甜，携带方便、食用简单等特点，因此成为人们居家生活特别是旅途中不可或缺的一种美食，深受人们的喜爱。
测定蛋糕中的菌落总数可以用来判定其被微生物污染的程度及卫生质量，它反映蛋糕在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价，菌落总数的多少在一定程度上标志着蛋糕产品质量的优劣，因此，测定蛋糕中的菌落总数具有重要意义。
目前应用于测定食品中菌落总数的方法有:纸片法、电阻抗法等。
本实验采用国标法(gb\T4789.2-20XX)对独立包装小蛋糕中菌落总数进行测定。
并与gb7099-20XX糕点、面包卫生标准中规定的冷加工糕点中菌落总数≤10000（cfu/g）的数据对比初步判断样品是否符合卫生要求。
一、实验目的1、学习并掌握测定蛋糕中菌落总数的方法及原理。
2、通过对比实验验证冷藏对蛋糕的保鲜及抑菌作用。
3、了解菌落总数测定在食品卫生学评价中的意义。
二、实验原理菌落总数即为食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
每种细菌都有它一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及其他生理条件（如温度、培养时间、ph、需氧性质等）去满足其要求才能将各种细菌都培养出来。
但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法。
细菌菌落总数的测定，所得结果，只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。
菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
三、实验设备与材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃。
粉条菌落检测实验报告
一、实验目的1. 了解粉条中菌落总数和大肠菌群的数量及其卫生质量。
2. 掌握粉条中菌落总数的检测方法和操作流程。
3. 分析粉条中菌落总数和大肠菌群的数量与食品卫生质量的关系。
二、实验原理菌落总数是指在一定条件下，1g或1mL样品中生长的细菌总数。
大肠菌群是指一群能在37℃下，发酵乳糖产酸产气的需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，主要来源于人畜粪便，是评价食品卫生质量的重要指标。
三、实验材料与方法1. 实验材料：粉条样品、无菌生理盐水、营养琼脂培养基、伊红美蓝培养基、无菌培养皿、无菌接种环、恒温培养箱等。
2. 实验方法：（1）样品处理：取粉条样品10g，加入90mL无菌生理盐水，充分振荡，制成1:10的样品匀液。
（2）菌落总数检测：取1mL样品匀液，进行10倍递增稀释，选取适宜稀释度的样品匀液，涂布于营养琼脂培养基上，在37℃恒温培养箱中培养48h，计数菌落数。
（3）大肠菌群检测：取1mL样品匀液，进行10倍递增稀释，选取适宜稀释度的样品匀液，涂布于伊红美蓝培养基上，在37℃恒温培养箱中培养24h，观察菌落特征。
四、实验结果与分析1. 菌落总数检测结果经检测，粉条样品的菌落总数为2.5×10^5 CFU/g。
2. 大肠菌群检测结果经检测，粉条样品的大肠菌群数量为1.2×10^3 MPN/g。
3. 结果分析根据《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》（GB4789.2-2016）和《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》（GB4789.3-2016）的规定，粉条样品的菌落总数和大肠菌群数量均符合标准要求。
五、结论1. 粉条样品的菌落总数和大肠菌群数量符合食品安全国家标准，表明该粉条样品的卫生质量较好。
2. 通过本次实验，掌握了粉条中菌落总数和大肠菌群的检测方法，为食品卫生质量评价提供了技术支持。
3. 在今后的食品生产过程中，应加强卫生管理，确保食品的卫生质量。
食品中菌落总数的测定方法
食品中菌落总数的测定一、实验目的（1）学习与掌握测定食品中菌落总数的基本方法（2）学会菌落总数的报告方式二、实验材料1、仪器与设备:恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。
2、培养基与试剂:75%乙醇、0、85%生理盐水、琼脂培养基:胰蛋白胨5、0g、酵母浸膏2、5g、葡萄糖1、0g、琼脂15、0g、蒸馏水1000mL、pH 7、0±0、23、检样:利乐包装鲜牛奶250ml三、实验方法与步骤1、检验程序菌落总数检验程序:检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养(48±2)h取出→菌落数→报告2、检样稀释及培养(1)以无菌操作,将检样包装打开,用吸管取25ml鲜牛奶,放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠),经充分振摇做成1:10的均匀稀释液。
(2)用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液,下同),振摇试管混合均匀,做成1:100的稀释液。
(3)另取1ml的灭菌吸管,按上项操作顺序作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1ml灭菌吸管。
(4)根据食品卫生检验标准要求与检样的菌落数量,选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。
(5)稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL,并转动平皿使与稀释检样混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。
(6)等琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃恒温箱内培养(48±2)h取出,计算平板内菌落数目乘以倍数,即得1mL样品所含菌落总数。
食品中菌落总数的测定实验报告
食品中菌落总数的测定实验报告一、实验目的1、掌握食品中菌落总数测定的基本原理和方法。
2、学会使用相关仪器设备进行操作和数据记录。
3、了解食品卫生质量与菌落总数的关系，评估食品的安全性。
二、实验原理菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、pH 值、需氧性质等），所得 1g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
三、实验材料和设备1、样品：选取不同种类的食品，如牛奶、面包、水果等。
2、培养基：营养琼脂培养基。
3、仪器设备：恒温培养箱、高压灭菌锅、无菌移液管、无菌培养皿、电子天平、均质器等。
四、实验步骤1、样品的采集与处理以无菌操作采集食品样品，置于无菌容器中。
固体食品：用无菌均质器将样品均质化；液体食品：充分摇匀。
2、稀释样品用无菌移液管吸取 25mL 样品原液，加入到装有 225mL 无菌生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成 1:10 的稀释液。
依次进行 10 倍系列稀释，制备不同稀释度的样品溶液。
3、接种选择 2 3 个适宜稀释度的样品溶液，每个稀释度分别吸取 1mL 于无菌培养皿中。
及时将约 15 20mL 冷却至 46℃的营养琼脂培养基倾注于培养皿中，转动培养皿使其混合均匀。
4、培养待琼脂凝固后，将培养皿翻转，置于 36℃ ± 1℃的恒温培养箱中培养 48h ± 2h。
5、菌落计数培养结束后，取出培养皿，计算平板上的菌落数。
菌落计数以菌落形成单位（CFU）表示。
选取菌落数在 30 300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
低于 30CFU 的平板记录具体菌落数，大于 300CFU 的可记录为多不可计。
6、结果计算若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再乘以稀释倍数，即为每克（或每毫升）样品中菌落总数。
菌落总数实验报告
菌落总数实验报告菌落总数实验报告一、引言菌落总数是指在一定面积的培养基上，通过观察和计数菌落的数量来评估样品中微生物的总体数量。
菌落总数实验是微生物学中常用的定量分析方法，对于食品、水质、环境等领域的微生物研究具有重要意义。
本实验旨在通过菌落总数实验，了解样品中微生物的数量及其变化情况，为后续的微生物研究提供基础数据。
二、实验原理菌落总数实验基于菌落形成的原理。
当微生物落在含有适宜营养物质的培养基上，经过一段时间的培养，会形成可见的菌落。
菌落总数实验通过将待测样品制备成适当浓度的稀释液，然后将稀释液均匀涂布在培养基表面，培养一定时间后，观察和计数菌落的数量，从而推算出样品中微生物的总体数量。
三、实验步骤1. 准备工作：清洗培养皿、试管、移液器等实验器材，准备好所需培养基和稀释液。
2. 样品制备：将待测样品取适量加入稀释液中，进行适当的稀释，制备出不同浓度的稀释液。
3. 涂布培养基：将不同浓度的稀释液取适量涂布在培养基表面，用无菌棉签均匀涂布，避免菌落重叠。
4. 培养：将涂布好的培养基培养在适当的温度和湿度条件下，一般为37摄氏度，培养时间根据样品的预期菌落总数而定。
5. 计数：培养时间结束后，使用菌落计数器或显微镜观察培养基上的菌落，记录菌落的数量。
6. 数据分析：根据不同浓度的稀释液和菌落的数量，推算出样品中微生物的总体数量。
四、实验结果与讨论根据实验数据统计，我们得到了不同样品的菌落总数。
通过对比不同样品的菌落总数，我们可以发现不同样品中微生物的数量差异。
例如，食品样品中的菌落总数可能较高，说明该食品可能受到了微生物的污染。
而水质样品中的菌落总数较低，可能说明该水源相对较为清洁。
这些结果对于食品安全和环境卫生的评估具有一定的参考价值。
在实验过程中，我们还发现了一些问题。
首先，菌落总数实验只能评估微生物的数量，而不能确定微生物的种类。
因此，在实际应用中，我们需要结合其他的微生物检测方法，来全面了解样品中微生物的情况。
实验九 食品中菌落总数测定
实验九菌落总数的测定一、目的要求学习掌握菌落总数测定的基本原理和方法，了解食品上微生物的分布和繁殖动态。
二、实验说明菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落的总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
每种细菌都有它一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及其他生理条件（如温度、培养时间、pH、需氧性质等）去满足其要求才能将各种细菌都培养出来。
但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法去作。
细菌菌落总数的测定，所得结果，只包括一君能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。
三、实验材料（1）培养箱36±1℃（2）恒温水浴46±1℃（3）天平。
（4）可调式电炉。
（5）吸管1.0ml、10.0ml,标有0.1ml单位刻度。
（6）广口瓶500ml，有盖。
（7）玻璃珠直径5mm。
（8）平皿皿底直径9.0cm。
（9）试管18×200mm。
（10）酒精灯。
（11）试管架。
（12）研钵。
（13）灭菌刀和剪刀。
（14）灭菌镊子。
（15）酒精棉球。
（16）玻璃蜡笔。
（17）营养琼脂培养基。
（18）灭菌生理盐水、分装于试管中，每管9.0ml。
（19）食品检样。
四、检验程序（图9-1）五、方法步骤（一）检验稀释和培养1、以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水的广口瓶内（瓶内置有适量玻璃珠）或灭菌研钵内，经充分振摇或研磨用成1：10的均匀稀释液。
2、用1.0ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1.0ml，沿管壁徐徐注入含有9.0ml 灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内液面），振摇试管混合均匀，作成1：100的稀释液。
3、另取1.0ml灭菌吸管，按上述操作作10倍稀释，如此每递增稀释一次，即换1支1.0ml吸管。
4、根据食品卫生要求或对标本污染程度的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释液的吸管移1.0ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
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食品中菌落总数的测定实验
一、实验目的：
了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法，认识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。
二、原理
平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是这种计数方法最大的优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测
三、试剂和材料
1.仪器
恒温培养箱：（36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
）
均质器或振荡器
无菌吸管：1 ml（0.01 ml 刻度）、10 ml（0.1 ml 刻度）或微量
移液器及吸头
无菌锥形瓶：容量250 ml、500 ml、
无菌培养皿：直径90 mm
菌落计数器
2.样品
1）平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基：蛋白胨
5.0 g 、酵母浸膏2.5 g 、葡萄糖1.0 g 、琼脂15.0 g、蒸馏水1
000 ml、pH 7.0±0.2。
将所有成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。
分装试管或锥形瓶，121 ℃高压灭菌15 min。
注：用平板计数琼脂，称取23.5 g于1 000 ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121 ℃高
压灭菌20min，冷却至45~47℃左右备用。
2）无菌生理盐水：氯化钠（NaCl）5.875g 蒸馏水(纯净水) 500ml 称取5.875ｇNaCl溶于500ml蒸馏水中，121 ℃高压灭菌20min。
3.器材
100ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、天平、称样瓶、
记号笔、酒精灯等。
四、操作及实验步骤
1.样品的稀释：25 g(ml)样品+225 ml 稀释液，均质。
10倍系列稀释。
每递增稀释一次，换用 1 次1 ml 无菌吸管或吸头。
（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）选择2个～3个适宜稀释度
的样品匀液，各取1 ml分别加入无菌培养皿内。
吸取 1 ml 空白稀释
液作空白对照。
每皿中加入15 ml～20 ml 平板计数琼脂培养基，并
转动平皿使其混合均匀。
2.培养：待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ±1 ℃培养48 h±2 h。
水产品 30 ±1 ℃培养 72 h±3 h。
（如果有弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约 4 ml），凝固后翻转平板。
）
3.菌落计数：记录稀释倍数和相应的菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
五、计算公式:
式中：N——样品中菌落数；
∑C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；
n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；
d——稀释因子（第一稀释度）。
六、实验数据：
10-1 3 10-2 1 空白0
NaCl水
10-10 10-2 1 琼脂0。