免疫组织化学免疫组化技术综述

免疫组织化学（免疫组化）技术

利用抗原抗体的特异性联合反响来检测和定位组织或细胞中的某种化学物

质的一门技术，它是免疫学和传统的组织化学相联合而形成的，这类技术称免疫组织化学（immunohistochemistry IHC）或免疫细胞化学（immunocytochemistry）。其特色是将形态学改变与功能，代谢变化联合起来，直接在组织切片，细胞涂片或培育细胞爬片上定位一些蛋白质或多肽物质的存在，并可精准到亚细胞构造水平，联合电子计算机图像剖析系统或激光扫描共聚焦显微术等技术，可对被检物质进行定量剖析。

第一节免疫组化的发展史及应用

自1941 年Coons及其同事开创免疫组织化学技术以来，拌随免疫学和组织化学理论与技术的发展，免疫组织化学已发生了日异月新的变化。以下表

免疫组化的发展过程

年月研究者事件

1941 Coons 适用免疫萤光技术

1948 Fagraeus 进一步发展免疫萤光技术

1970 Sternberger 抗体酶标技术

1974 Taylor 证明组织中浆细胞免疫组化

1975 Kohler

单克隆抗体技术（被成为免疫学上的一场革命，Milstein

也令人类第一次获取了能依据人的意志在体外

产生抗体的杂交瘤细胞）。

1981 Hsu ABC 法

1990 到现在SP法、原位杂交免疫组化技术

因为免疫组化拥有特异性强、敏捷度高等明显特色，且能将形态与功能研究有机的联合在一同，所以，这门技术从一出生起就显示出了强盛的生命力和广阔

的应用远景，当今它已被宽泛地应用于生物学和医学研究的很多领域，推动了学科的发展，获得了令人瞩目的成就。

免疫组织化学染色技术的应用跟着大批商品化的单克隆和多可隆抗体出现，

配套试剂盒的使用及方法的不停完美，使免疫组化染色已经成为医学基础研究和

病理外检中应用最为宽泛的技术手段之一。免疫组化可用于各样蛋白质或肽类物

质表达水平的检测，细胞属性的判断，淋巴细胞的免疫表型剖析，细胞增殖和凋亡的研究，激素受体和耐药基因蛋白表达检测，以及细胞周期和信号转导的研究等。

在病理学研究中，免疫组化技术的作用和意义更重要。以肿瘤研究为例，在免疫组化技术出现从前，对肿瘤的诊疗和分类还限制于细胞水平，而引入免疫组化技术后，则使研究的深度提升到了生物化学水平、分子水平。最近几年来，拌随基因探针研究而盛行的核酸分子原位杂交技术也正在蓬勃发展，更使免疫组化如虎

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的发现不单有助于对肿瘤发活力制的商讨，并且使肿瘤的预防，初期诊疗，甚至治疗都向前迈进了一大步，为人类征服癌症代来了希望的曙光。

在外国，病理诊疗免疫组化开始于70年月，80 年月发展至顶峰，90 年月已列入病理技术室惯例工作。在国内，免疫组化到90 年月才开始在病理诊疗中逐

渐普及。

第二节免疫组化的基根源理

基根源理：尽人皆知，抗体与抗原之间的联合拥有高度的特异性。免疫组织化学正是利用这一特征，即先将组织或细胞中的某种化学物质提拿出来，以此作为抗原或半抗原，经过免疫后获取特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞

中的抗原物质。反之亦然。因为抗体与抗原联合后形成的免疫复合物是无色的，

所以，还一定借助于组织化学方法将抗原抗体反响部位显示出来，以期达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性、定位甚至定量的研究。

如前所述，免疫组化主要波及免疫学和组织化学的相关理论和技术，此中关键在于制备高效的抗体，后者又主要取决于抗原的质量。

组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多

糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。

在抗系统备上，经历了从抗血清，纯化IgG 到单克隆抗体，甚至发展到应用基因重组技术获取分子量较小的特异性片段。就单克隆抗体而言，它是在1975 年由Kohler 和Milstein 成立了杂交瘤技术后才开始问世的，现已被宽泛应用

于研究中，它拥有更好的特异性，大大地提升了免疫组化的技术水平。

显示技术的发展也相当迅猛，初期不过简单的将标志物联合在抗体上，此后则发展到将标志物联合在抗抗体上或与抗体拥有特异亲和性的分子上，用于标志的物质有好多种，如荧光染料、放射性同位素、酶、胶体金等。借助于荧光显微

镜、光学显微镜或电子显微镜，便可察看到这些标志物发出荧光、酶促反响产生的有色积淀或高电子密度颗粒，从而察看到抗原抗体复合物所再的部位。

因而可知，免疫组化技术以其特异性和敏捷度高等特色，又因其操作比较简便而得以宽泛应用。

第三节相关的免疫学理论

抗原（antigen）：

抗原应具备的条件：①异物性

②理化性质

③特异性

抗原的种类：①免疫原性与免疫反响性

完好抗原

不完好抗原

②抗原与机体的亲缘关系

异种抗原

同种异型抗原

自己抗原

③抗原的化学构造

蛋白质抗原

多糖抗原

核酸抗原

低分子量物质抗原

合成多肽抗原

④抗原的理化性状

颗粒性抗原

可溶性抗原

抗原的制备：

资料的准备和预办理

组织的粉碎

抗原的提取

抗原纯化

抗原纯度的检测

半抗原的免疫原制备法

抗体（antibody ）

——是机体受抗原刺激后，由B淋巴细胞，特别是浆细胞分泌产生的一种能与相应抗原发生反应的球蛋白，称免疫球蛋白

（immunolobulin,Ig ）, 共有五类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE,

主要散布在血清或外分泌物中。

抗体的分子构造

抗体的理化性质

抗体与抗原的特异性联合

抗体的种类

抗体的抗原性：同种型抗体

同种异型抗体

独到型抗体

抗体的制备方法：

多克隆抗体（血清抗体）——指机体接受抗原的主动免疫或被

动免疫后，从血清中分别提纯的

抗体。

单克隆抗体——是1975 年由Kohler 和Milstein 发明的一种

新技术。