两株生防链霉菌全基因组测序分析及几丁质酶家族基因鉴定

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生防链霉菌Men-myco-93-63 nsdB_(mgh)基因的克隆及序列分析

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途径的研究提供了重要依据。
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词：防链霉菌；ｎｄ生ｓＢ；基因克隆；ＡＰＲ；序列分析ＮＰ — Ｃ

产几丁质酶菌株Acinetobacter sp. CZW011的筛选鉴定与酶学性质研究

产几丁质酶菌株Acinetobacter sp. CZW011的筛选鉴定与酶学性质研究宋阳;陈梦;吴新财;丁志雯;李甜;刘耀东;房耀维;刘姝【期刊名称】《中国食品添加剂》【年(卷),期】2022(33)11【摘要】几丁质的自然资源十分丰富,因此新型产几丁质酶菌株的发现具有重要的研究价值。

本研究是从连云港连岛黄海海域海泥中筛选获得的一株产几丁质酶菌株,并对所筛选的菌株进行菌株鉴定,完成其酶学性质实验。

采用胶体几丁质平板产生透明圈法从海泥样品中筛选出产几丁质酶的细菌,获得产几丁质酶水平较高的菌株CZW011,并进一步通过摇瓶发酵,对菌株CZW011的酶学性质进行研究。

培养菌株CZW011,光学显微镜下观察其形态学特征,完成生理生化试验,并将PCR产物完成序列扩增及分析,可鉴定CZW011菌株为不动杆菌属。

通过研究菌株CZW011酶学性质发现,在温度35℃,pH=7.0的条件下水解几丁质能力最强。

在25~35℃孵育2h,残留酶活高于80%;在pH 6.0~7.0孵育2h,残留酶活高于90%,是一种中温中性几丁质酶。

常规金属离子Zn^(2+)、Ca^(2+)对酶活无明显促进或抑制的作用,Mg^(2+)有明显促进作用,Ag^(+)对酶活有明显的抑制作用。

本菌株的发现与研究丰富了产几丁质酶菌株数据库,为几丁质酶的实际应用提供了一个新的思路。

【总页数】8页(P1-8)【作者】宋阳;陈梦;吴新财;丁志雯;李甜;刘耀东;房耀维;刘姝【作者单位】江苏海洋大学食品科学与工程学院;连云港市质量技术综合检验检测中心;连云港市食品药品检验检测中心【正文语种】中文【中图分类】TS202.1;TS201.3【相关文献】1.产胞外乳糖酶耐冷菌株Comamonas sp.的筛选鉴定及酶学性质研究2.块菌菌根土壤产酸性几丁质酶放线菌Streptomyces omiyaensis SCPW03的筛选及其几丁质酶酶学性质研究3.产几丁质酶海洋细菌Dyadobacter sp.CZW019的筛选、鉴定及酶学性质研究4.产几丁质酶海洋细菌 Dyadobacter sp. CZW019的筛选、鉴定及酶学性质研究5.产几丁质酶细菌的筛选、鉴定及酶学性质研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

快速、准确鉴别产几丁质酶菌株的新方法

快速、准确鉴别产几丁质酶菌株的新方法胡晓;张敏;刘彭强;邓秋蕾;舒凯【期刊名称】《植物保护》【年(卷),期】2010(36)4【摘要】使用几丁质平板法筛选具有几丁质酶活性的细菌时,由于几丁质平板本身趋于透明,而降解环也为透明色,不易观察到明显的抑菌圈,故在筛选几丁质降解菌时,其观察结果受人为因素影响较大.本文首次使用刚果红染色的方法,对几丁质平板进行染色,降解环为浅红色,而未降解部分为深红色;结果表明,降解环的直径大小随着接种时间的延长而逐步增大,且降解环的大小可反映酶活大小.因此,此法可以直观、清晰、准确地对具有几丁质酶活性的菌株进行筛选,在相关菌株的筛选中具有较大的潜在应用价值.【总页数】4页(P163-166)【作者】胡晓;张敏;刘彭强;邓秋蕾;舒凯【作者单位】四川农业大学农学院植物病理系,雅安625014;四川农业大学农学院植物病理系,雅安625014;四川农业大学农学院植物病理系,雅安625014;四川农业大学农学院植物病理系,雅安625014;四川农业大学农学院植物病理系,雅安625014【正文语种】中文【中图分类】Q93-31【相关文献】1.产几丁质酶菌株 S68-CM5产酶条件优化研究 [J], 胡基华;曹旭;孟力强;陈静宇;姜威;刘宇帅;张淑梅;李晶2.一株产几丁质酶菌株的筛选鉴定与产酶条件优化 [J], 苗飞;孟阳;王悦;袁春营;崔青曼3.产几丁质酶菌株的分离鉴定及产酶条件探究 [J], 左一萌;石晓玲;潘晓梅;王欢;尹永得;董雪滢;王超4.产低温几丁质酶菌株的筛选、鉴定与产酶条件优化 [J], 陈立功;吴家葳;张庆芳;迟乃玉;王晓辉5.产几丁质酶菌株GXUN-20的筛选、鉴定及其产酶条件优化 [J], 张奇;王一兵;申乃坤;姜明国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

链霉菌生物防治研究进展

链霉菌生物防治研究进展毛良居;毛赫【摘要】介绍了链霉菌的活体制剂和代谢产物在植物病害生物防治中的应用;综述了链霉菌的生防机制,包括拮抗作用、竞争作用、重寄生作用、诱导作用和抗生作用;指出了链霉菌在植物病害防治中存在的问题并提出了对策;展望了链霉菌生物防治今后的研究方向.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2017(045)001【总页数】3页(P145-147)【关键词】链霉菌;应用;生防机制;存在问题;展望【作者】毛良居;毛赫【作者单位】吉林省林业厅,吉林长春130022;吉林省林业科学研究院,吉林长春130033【正文语种】中文【中图分类】S476在提倡绿色生态、安全生态的今天，农业生产也越来越重视无公害、无污染。

传统的化学农药防治农业灾害已不能满足当今社会加强环境保护、坚持农业可持续发展的理念，因此，寻找健康、安全、有效的农业生物灾害防治手段成为当务之急。

利用一种或一类有益生物来抑制或杀死有害生物的生物防治方法应运而生，为今后的农药工业发展提供了方向。

放线菌作为生防菌对很多病原菌有明显的拮抗效果。

随着农用抗生素的应用，作为抗生素产生菌的放线菌越来越被广泛研究。

链霉菌是高等放线菌，是种类和数量较多的放线菌之一，在防治植物病害中起重要作用。

笔者综述了链霉菌生物防治研究现状，以期为链霉菌的生防作用研究提供参考。

链霉菌的研究开始较早，但人们一直无法准确地对链霉菌进行分类，直到1943年，Waksman和Henrici才首次提出了链霉菌属[1]。

1962年数值分类法开始应用，1983年Williams等[2]对链霉菌及相关属的473个菌株的139项特征进行了测定，Kämpfer等[3]对链霉菌属和链轮丝菌属821个菌株的329个特征进行了测定。

Lechevalier等[4]在1976年又提出了化学分类研究，以化学与形态特征相结合，而随着质谱、色谱等技术的不断发展，其在分类中的应用，使得分类研究更快速、准确。

几丁质酶在农作物免疫防御中的应用研究进展

Food Science And Technology And Economy粮食科技与经济2023 年4月第48卷第2期Apr. 2023Vol.48, No.4随着世界人口的日益增长，粮食的需求量随之上升，导致农作物在全球的种植面积需求越来越大，而农作物病虫害的发生是造成农作物产量和质量降低的最主要因素，每年因病虫害造成粮食（农作物）减产20％～40％，直接损失超过2 000亿美元[1]。

目前在病虫害防治方面，主要还是依靠化学防治的方式和手段[2]，然而过度依赖化学防治方式会造成环境生态污染。

为了生态环境的可持续发展，降低化学试剂对土壤环境的影响，生物技术在农业建设过程中的应用逐渐被重视。

将生物技术应用于农业病虫害防治中，能够有效减少传统的化学农药防治方法给环境带来的负面影响，推动绿色农业的可持续发展[3]，而几丁质酶在农作物生物防治方面具有巨大的潜在应用价值。

几丁质酶（Chitinase, EC 3.2.1.14）是水解几丁质的酶，能够催化几丁质的β-1,4-糖苷键，将其降解成N -乙酰葡糖胺（N -actyl glucosamine, NAG ），并能由各种微生物，包括病毒、细菌和真菌，以及昆虫、高等植物和动物合成[4]。

几丁质由β-1,4-糖苷键将N -乙酰-D -氨基葡萄糖（Be -ta -1,4-linked Repeating N-acetylaminoglucose Units, GlcNAc ）分子连接而成，以结构多糖的形式存在于真菌细胞壁、节肢动物的外骨骼、甲壳纲动物的外壳以及寄生线虫的外壳中，但尚未在植物体内鉴定出几丁质的存在[5]。

几丁质酶能够通过降解真菌性病毒细胞壁中的几丁质和破坏昆虫及线虫的消化膜等方式达到抗病虫害的效果，且不会对植物体产生伤害。

同时，几丁质酶也是植物防御系统中重要的防卫因子，可以增强植物的防御系统，在抵御病原真菌以及病虫害中发挥着重要作用[6]。

一株链霉菌的鉴定及其产格尔德霉素的发酵工艺研究

一株链霉菌的鉴定及其产格尔德霉素的发酵工艺研究杨鹭;袁源;方志锴;林如;江红;周剑【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2024(40)6【摘要】【目的】对链霉菌Streptomyce sp.FIM18-0592进行菌种鉴定,并对其胞外格尔德霉素产量进行发酵工艺优化,旨在提高产量并降低发酵成本。

【方法】通过形态特征、培养特征和生理生化特性,结合16S rDNA序列分析构建系统发育树进行菌种鉴定;采用单因素试验优化培养条件及培养基配方,进一步使用最陡爬坡试验和响应面试验优化培养基配方的含量。

【结果】通过对链霉菌FIM18-0592的形态特征、培养特征及生理生化特征进行初步培养观察发现,其在ISP2等培养基上生长较好,气生菌丝旺盛,产黑色素。

结合16S rDNA分子鉴定,确定该菌为格尔德霉素链霉菌(Streptomyces geldanamycininus)。

通过单因素试验对发酵条件以及培养基配方进行优化,得到最适宜菌株发酵的培养条件为转速140 r/min、装液量12%(体积分数)、接种量7%(体积分数)、培养时间144 h。

最佳的碳源、氮源、无机盐分别为葡萄糖、黄豆饼粉和硫酸铵。

采用最陡爬坡试验和响应面优化试验确定了其最优的发酵培养基为:葡萄糖10.42%、黄豆饼粉1.68%、硫酸铵0.3%、乳酸0.3%、甘油4%、硫酸镁0.1%、碳酸钙0.4%,在此条件下,格尔德霉素的发酵效价达到2887μg/mL,较原始发酵工艺效价提高了66%。

【结论】链霉菌FIM18-0592为格尔德霉素链霉菌,通过对其发酵工艺进行优化显著提高格尔德霉素的产量,为格尔德霉素及其衍生物的开发和利用奠定基础。

【总页数】11页(P299-309)【作者】杨鹭;袁源;方志锴;林如;江红;周剑【作者单位】福建医科大学药学院;福建省微生物研究所福建省新药(微生物)筛选重点实验室【正文语种】中文【中图分类】TS2【相关文献】1.一株产木聚糖酶链霉菌的鉴定及发酵产酶2.一株链霉菌的鉴定及其产bafilomycin A1的发酵工艺研究3.一株产红色素的壮观链霉菌分离鉴定及其发酵条件优化4.MarR家族蛋白Orf17在自溶链霉菌格尔德霉素生物合成中的调控作用5.唐德链霉菌产尼可霉素Z的菌种生长特性及发酵液预处理条件优化因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

二化螟几丁质酶基因家族及几丁质含量的分析

二化螟几丁质酶基因家族及几丁质含量的分析几丁质是昆虫外骨骼的主要组成成分,具有支撑身体,阻碍捕食者的捕食,防御病原体侵入等功能,表皮物质中大约40%的成分是几丁质。

几丁质也存在于部分昆虫前肠和后肠的肠衬、口器和唾液腺中,同时中肠的围食膜也主要是由几丁质和蛋白构成。

几丁质的合成和降解分别需要几丁质合成酶和几丁质酶,这两种酶与昆虫的生长发育具有密切关系。

根据几丁质酶基因结构的最新研究表明,几丁质酶可以分为8个Group,8个Group除了结构不同外,每个Group的功能也不相同。

为了研究二化螟体内的几丁质酶的结构和功能,本文以鳞翅目螟蛾科昆虫二化螟(Chilo suppresalis)为研究对象,利用RACE 术克隆了 4个几丁质酶基因cDNA全长并对其基因序列和表达量进行分析,同时研究结果表明不同的几丁质酶在不同龄期高表达,我们猜测与几丁质的含量和成分有关,因此我们对几丁质在二化螟体内的含量进行了测定。

1)二化螟几丁质酶基因的全长克隆从二化螟转录组数据中获得4个几丁质酶相关蛋白的基因片段,即CsCht1、CsCht2、CsCht3和CsCht4。

经序列验证后,利用RACE技术,成功获得这4个基因的cDNA序列全长,对4个基因蛋白序列的分子量、等电点预测发现,CsCht1、CsCht2和CsCht3的分子量在40-85 kD之间,PI值在5-7之间;而CsCht4的分子量为37.11 kD,其PI值达到9.25,同时发现4个几丁质酶蛋白序列均含有α螺旋、延伸链、β折叠和无规则卷曲等二级结构。

2)二化螟几丁质酶基因家族的分析对二化螟12个几丁质酶基因序列的基因结构、蛋白结构域及系统发育进行分析。

结果表明,12个几丁质酶序列的外显子和内含子的数量不相同,所含外显子和内含子的长度也不相同。

CsCht5和家蚕、赤拟谷盗、黑腹果蝇和意大利蜜蜂的Cht5在基因结构上也不相同,表明Cht5基因在序列上具有保守性,而基因结构却发生了改变;蛋白结构域方面,12个几丁质酶序列都属于糖基水解酶18家族(GH18),CsCht1、CsCht3、CsCht5和CsCht7都含有保守结构域ChtBD2,CsCht10含有保守结构域ChtBD3;通过构建几丁质酶系统进化树,发现CsCht5和CsCht7两个基因属于GroupⅠ,CsCht3 和 CsCht9 两个基因属于 Group Ⅱ,CsCht1 和CsCht6属于 Group Ⅲ,CsCht2、CsCht4、CsCht8、CsCht11和CsCht12和属于Group Ⅳ;Group Ⅵ含有 CsCht10 基因,而Groups Ⅴ、Ⅶ和Ⅷ中尚未发现二化螟的几丁质酶基因。

生防链霉菌gCLA4遗传转化体系的建立与优化

生防链霉菌gCLA4遗传转化体系的建立与优化徐萌萌;张红;何姣;涂璇;颜霞;黄丽丽【摘要】[目的]建立生防菌淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendularectus)gCLA4的遗传转化体系,为定向改造基因、提高基因表达水平及其生防分子机制研究奠定基础.[方法]以具有安普霉素(Apramycin)抗性基因标记的整合型质粒pSET152为出发质粒,Escherichia coli ET12567(pUZ8002,pSET152)为供体,淡紫灰链霉菌gCLA4为受体进行接合转移试验,并对影响接合效率的培养基、热激温度、接合转移时间和筛选转化子培养基等因素进行优化.[结果]成功地将质粒pSET152转入到了生防链霉菌gCLA4中,明确了可用于筛选链霉菌gCLA4转化子的抗生素为安普霉素或四环素;链霉菌gCLA4孢子50℃热激时转化效率较高,接合效率在16,18,20 h下没有明显差异,MS培养基作为接合转移培养基时转化效率最高,接合产物涂布到高氏一号抗性培养基上进行阳性转化子筛选的效果最好.[结论]建立了生防链霉菌gCLA4的遗传转化优化体系.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(044)010【总页数】5页(P121-125)【关键词】生防链霉菌gCLA4菌株;接合转移;遗传转化;质粒pSET152【作者】徐萌萌;张红;何姣;涂璇;颜霞;黄丽丽【作者单位】西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨凌712100;旱区作物逆境生物学国家重点实验室,陕西杨凌712100;西北农林科技大学理学院,陕西杨凌712100;旱区作物逆境生物学国家重点实验室,陕西杨凌712100;西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨凌712100;旱区作物逆境生物学国家重点实验室,陕西杨凌712100;三峡大学生物与制药学院,湖北宜昌443002;西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨凌712100;旱区作物逆境生物学国家重点实验室,陕西杨凌712100;西北农林科技大学植物保护学院,陕西杨凌712100;旱区作物逆境生物学国家重点实验室,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】Q933淡紫灰链霉菌gCLA4(Streptomyces lavendularectus,GenBank登录号为EF469608,菌种保藏号为GCMCC 2131)是旱区作物逆境生物学国家重点实验室分离自黄瓜叶片的一株拮抗菌，该菌株及其发酵液对番茄早疫病菌(Alternaria solani)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiotum)、苹果树腐烂病菌(Valsa mali)等多种重要的植物病原菌均有很强的抑制作用，有良好的生防应用潜力[1]。

抑制真菌病害几丁质酶产生菌的筛选、鉴定

１２１固体几丁质培养基．．
胶状几丁质１．，５０ｇ酵
母粉３０ｇ（ｎ２Ｏ．，Ｓ ’ Ｈ００３ｇ．，ＮＨ）Ｓ４１０ｇＭｇＯ４５２．，
Ｋ２Ｏ．６，ＨＰ４３琼脂１．，１ｇ５０ｇ加水至１０。用００ｍＬ
Ｒｈ￣ｃｏａｓｌｉａｄＧｉｂｒｌ￣ｔｉｏｔｎｉｏａｎｎｂｅｅｌｅｅ．ＴｈｔａｎＷａＫⅣｅｏｂｅｃｉｉａｅｐｏｕｉｃｅｉ。ａｌｅｓｒｉｓｐｄｔｅａｎｗｈｔｓ－ｒｄｃｎｂｔｒｔｎｇａｍａｗｈｉｈｗａｅｔｆｄａｔｅｃｓｉｎｉｅＳｒｐ－ｄｉｓｔｍｙｅｏｉｐｒｓｂ￣ｈｌｇｃｄｐｙｉｃｅｃｈｒｃｅｓｉ．ｏｃｓｂｓｏｕｙｍｏｏｏｉａｈｓｈｍｉａｃａａｔｒｔｓｇｌｌａｎｏｌｉｃＫｅｒｓＳｒｐｏｃｓｇｏｉｐｒｓｈｔａｅ；ｂｏｃｎｍｌｙｗｏｄ：ｔｅｔｍｙｅｌｂｓｏｕ；ｃｉｉｓｎｉ－ｏｔ
ＺＨＥＮＧｕｌ，－Ｘｉ—ｉＺＩＥＮＧ —ｉｇ。ＳｔＡｉｐｎＯＮＧｎ —ａＹｏｇｙｎ，ＺＨＯＵａｑａｇ。Ｈｕ－ｉｎＴＡＮ — ｇ。ｎＦｕｍｎＬＩＰｉｇ’
（ｃｓａｃｎｔｕｅｏｉｕｎＡｒｕｕａｉｅｓｙｉｕｎＷｅａｇ６１３Ｃｉ）ＲｉＲｅｅｒｈＩｓｉｔｆｃａｇｉｌｌＵｎｖｒｉ，Ｓｃａ￣ｉ１１０，ｈｎｅｔＳｈ
１材料与方法
１１材料．

基于基因组挖掘策略的链霉菌活性天然产物发现

基于基因组挖掘策略的链霉菌活性天然产物发现韩昕;贺海燕【期刊名称】《中国医药生物技术》【年(卷),期】2024(19)3【摘要】目的利用基因组挖掘策略在链霉菌中发现活性天然产物。

方法首先,全测序获得马来西亚链霉菌(Streptomyces malaysiensis DSM 41697)全基因组序列。

利用antiSMASH等在线工具对马来西亚链霉菌编码的潜在次级代谢产物生物合成基因簇进行初步预测。

利用Blast、2ndFind等网站,确认基因簇中各基因的边界并对其功能进行注释,寻找目标基因簇。

其次,尝试不同的发酵条件,并通过HPLC、LC-MS初步确定目标化合物是否产生。

最后,分离和纯化目标化合物,并鉴定其结构。

结果来自马来西亚链霉菌基因组的两个基因簇分别被命名为帕达酰胺生物合成基因簇和苯扎他汀生物合成基因簇。

结合Blast和2ndFind软件分析,对基因簇进行边界确定和功能注释。

通过尝试多种发酵条件,分离纯化获得了3种帕达酰胺类化合物和1种苯扎他汀类化合物。

它们分别被鉴定为帕达酰胺A、帕达酰胺B、帕达酰胺A'和马来霉素。

结论以基因组挖掘策略为指导,从微生物基因组中发现可能的天然产物生物合成基因簇,并通过多种发酵条件确定目标基因簇对应的产物是可行的。

该策略为解决各类天然产物的来源及发现新结构天然产物提供了新思路,为活性化合物的寻找及其合成生物学奠定了基础。

【总页数】9页(P197-205)【作者】韩昕;贺海燕【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委微生物药物生物技术重点实验室【正文语种】中文【中图分类】G63【相关文献】1.利用基因组发掘技术指导链霉菌SH-62中活性天然产物的分离及鉴定2.基于微生物基因组的新型天然产物发现策略3.利用"移树养苗"策略挖掘粤蓝链霉菌隐性活性次级代谢产物4.基于基因组挖掘的农抗120活性成分制霉菌素和丰加霉素的发现和鉴定5.基于基因组挖掘的一个新的吡嗪酮类天然产物的发现因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

玫瑰黄链霉菌几丁质酶基因及抗生素合成基因簇研究

玫瑰黄链霉菌几丁质酶基因及抗生素合成基因簇研究链霉菌是一种广泛分布于土壤中的革兰氏阳性菌,是重要的天然抗生素和几丁质酶产生菌。

几丁质酶可通过催化几丁质的水解,破坏植物病原真菌细胞壁的主要组分,从而起到抑制植物病害发展的作用。

本研究应用平板稀释法从棉花根围土壤样品中分离到了360株链霉菌,采用双层平板法测定它们对棉花黄萎病菌生长的抑制作用。

此外还对本实验室保存的24株生防链霉菌进行了抑菌活性测定,这24株生防链霉菌对棉花黄萎菌都表现出很好的抑菌效果。

对表现抑菌活性的185株拮抗链霉菌菌株使用透明圈法测定,发现其中115株有几丁质酶活性。

采用水煮法、STE法、SDS法、微波法等4种方法提取链霉菌的DNA,并以链霉菌16SrDNA引物来扩增提取到的DNA。

结果表明除STE法外,其他3种方法所提样品都能扩增出预想的约1.6Kb的片段,且利用水煮法可以更快速、有效的提取出适用于PCR分子探测的链霉菌DNA。

从GenBank中检索到26个链霉菌几丁质酶基因序列,根据保守序列,设计了两对PCR引物(Chi-1/Chi-2和Chi-3/Chi-4)。

对115株有几丁质酶活性的菌株进行PCR扩增,有112株可以扩增出预期的特异片段。

其中48株菌株对两对引物都有扩增产物,92株对Chi-1/Chi-2引物有产物,68株对Chi-3/Chi-4引物有产物。

分别选择两菌株的两对引物组合的扩增产物测序,BLAST比较发现这些产物与其对应的几丁质酶基因类型一致,从而证明了两对引物的可靠性,建立了一套可以快速鉴定几丁质酶产生菌的PCR探测方法。

Men-myco-93-63菌株是从马铃薯疮痂病自然衰退土壤中分离得到链霉菌菌株,经鉴定为玫瑰黄链霉菌。

该菌及其次生代谢产物对不同致病力的棉花黄萎病菌及其它多种植物病原菌均表现较强的抑制作用。

在本实验室前期研究的基础上进行了该菌株生防相关基因克隆的研究: 1.克隆了Men-men-93-63几丁质酶基因C的催化域区域;PCR 扩增得到包含信号肽区、纤维素结合区、几丁质结合区三个结构功能域的变铅青链霉菌几丁质酶C(S.lividans ChiC)基因片段,此片段与催化域部分、质粒pET23b(+)连接,构建成表达载体pLCH转化大肠杆菌,转化子诱导表达后在几丁质酶培养基上表现几丁质酶蛋白活性。

产几丁质酶菌株的筛选与鉴定及几丁质酶酶学性质研究的开题报告

产几丁质酶菌株的筛选与鉴定及几丁质酶酶学性质研究的开题报告标题：产几丁质酶菌株的筛选与鉴定及几丁质酶酶学性质研究一、论文简介：随着人们对生态环境的关注度不断提高，利用微生物降解环境污染物已经成为了一种重要的手段。

几丁质是海洋生物、昆虫等生物体中普遍存在的一种寡聚糖，具有材料的天然，广泛应用于生物材料、食品工业等领域。

几丁质酶是一种能够降解几丁质的酶，是利用几丁质资源的关键。

本文旨在从环境中筛选出一株具有高效几丁质酶产生能力的菌株，并对该酶的酶学性质进行初步研究，为几丁质酶产业化研究提供理论参考。

二、研究目的：1. 通过环境筛选、鉴定和比较，寻找一株优异的几丁质酶产生菌株。

2. 分离、纯化并表征出所筛选的几丁质酶的分子量、催化效能、热稳定性等酶学特性。

三、研究内容与方法：1. 采用实验室分离、培养等方法，从野外样品中筛选出几个具有几丁质酶生产能力的菌株，通过形态学、生理学和生化检测等手段进行鉴定和比较。

2. 对所筛选出菌株的几丁质酶进行分离、纯化、组分鉴定和物化特性等分析，包括所得几丁质酶的分子量、催化效能、pH和温度对催化活性的影响等酶学特性。

3. 对所筛选出菌株产生的几丁质酶进行产酶条件的优化和工艺参数的调整，最终以高活力和低成本的方式实现几丁质酶的产业化生产。

四、研究意义：本文的研究旨在寻求一种高效、环保、经济的几丁质资源化利用方式。

一方面，研究结果能够为工业化生产几丁质酶提供强有力的理论依据；另一方面，研究结果有望为几丁质生物降解技术的推广和应用提供新的途径，有助于缓解环境污染问题。

五、研究展望：几丁质酶作为一种生物酶，其产生机制、分离纯化和活性调整等问题仍然存在许多亟待解决的问题。

今后的研究可以进一步探讨几丁质酶的基因结构和修饰方式，寻求提高几丁质酶催化效率和抗污染能力等优化措施。

同时，也可以借助生化技术和生物工程技术，开创出更多有益的降解技术和应用领域。

几丁质酶高产芽孢杆菌的筛选及基因克隆与表达

几丁质酶高产芽孢杆菌的筛选及基因克隆与表达本研究从武汉土壤中筛选出了六株产几丁质酶的芽孢杆菌。

通过16S rRNA 基因分子鉴定,确定其中4株(D1,D2,D3和D4)为Paenibacillus illinoisensis,另外2株(CDY-607和W1)为解木聚糖类芽孢杆菌(Paenibacillus xylanilyticus),以解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607为出发菌株获得研究结果如下:解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607几丁质酶发酵液最适反应温度为55℃,最适反应pH 值为6.5和8.0,金属离子Fe2+对几丁质酶酶活力有促进作用。

对解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607产几丁质酶发酵培养基配方及培养条件进行优化,结果表明CDY-607产几丁质酶最佳发酵时间为96 h,最佳接种量为5%,最佳装瓶量为100 mL,最佳培养基pH值为6.5。

产几丁质酶最适发酵培养基配方为胶体几丁质5 g/L,硫酸亚铁2 g/L,蛋白胨2 g/L,酵母膏5 g/L。

在最适条件下测定的发酵液酶活力(49.26 mU/m L)是未优化发酵培养基发酵液酶活力(24.62 mU/m L)的2倍。

在PCR扩增获得解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607几丁质酶基因部分保守片段后,通过Tail-PCR成功扩增出几丁质酶基因两侧DNA 片段。

拼接后发现几丁质酶基因长996 bp。

该基因只含有一个第18糖苷酶家族催化结构域。

编码该结构域的序列大小为912 bp,共304个氨基酸,预测编码的蛋白质分子量大小为33.42kDa。

将该基因与载体p FLAG-CTS重组后于大肠杆菌DH5a中分泌表达,经IPTG诱导培养12 h后,采用DNS法测定培养液几丁质酶酶活力为17 mU/m L。

此外,SDS-PAGE亦成功检测到分泌表达的几丁质酶,大小在33.4 kDa左右,与预测结果相符。

产几丁质酶真菌菌株的筛选及产酶抑菌活性的检测

产几丁质酶真菌菌株的筛选及产酶抑菌活性的检测张宇;贺丹;周鑫;田庄;郭亮;王丽【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(036)001【摘要】目的:分离真菌菌株,筛选出几丁质酶高产菌株,检测其粗酶液对临床常见假丝酵母的抑菌作用,为抗真菌药物的开发提供研究基础.方法:利用刚果红几丁质平板法和3,5-二硝基水杨酸(DNS)法筛选出几丁质酶高产菌株,并用纸片法检测粗酶液的抑菌作用.结果:从环境中分离的47株真菌菌株中得到产几丁质酶菌株6株,其中高产菌2株(烟曲霉JLC 50134和木霉JLC 31235);JLC 50134粗酶液对白假丝酵母、热带假丝酵母的抑制作用强于JLC 31235,抑菌圈直径分别为4～5 cm和约2 cm;JLC 31235粗酶液对克柔假丝酵母、光滑假丝酵母的抑制作用强于JLC 50134,抑菌圈直径分别为约2 cm和1 cm.结论:烟曲霉JLC 50134和木霉JLC31235是几丁质酶高产菌株,两种粗酶液对临床常见假丝酵母有抑制作用.【总页数】4页(P67-70)【作者】张宇;贺丹;周鑫;田庄;郭亮;王丽【作者单位】吉林大学基础医学院病原生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院病原生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院病原生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院病原生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院病原生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院病原生物学教研室,吉林长春,130021【正文语种】中文【中图分类】R379【相关文献】1.一株产几丁质酶菌株的筛选及产酶条件研究 [J], 郑爱芳;魏和平;许远;芮辰飞;王枫;宋伟佳2.土壤产几丁质酶菌株的筛选鉴定及产酶条件 [J], 张荣奎;贺淹才;刘爱花;魏巍;李红然3.一株产几丁质酶菌株的筛选鉴定与产酶条件优化 [J], 苗飞;孟阳;王悦;袁春营;崔青曼4.产低温几丁质酶菌株的筛选、鉴定与产酶条件优化 [J], 陈立功;吴家葳;张庆芳;迟乃玉;王晓辉5.产几丁质酶菌株GXUN-20的筛选、鉴定及其产酶条件优化 [J], 张奇;王一兵;申乃坤;姜明国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

一株产几丁质酶、抑真菌的侧孢芽孢杆菌

一株产几丁质酶、抑真菌的侧孢芽孢杆菌
赵秋敏;陈月华;蔡峻;卢伟
【期刊名称】《中国生物防治》
【年(卷),期】2006(000)0S1
【摘要】从524株芽孢杆菌中筛选出一株几丁质酶活力高的侧孢芽孢杆菌1.864菌株。

研究表明该菌对小麦赤霉菌等6种病原真菌具有明显的抑制作用。

通过几丁质酶抑制剂以及酶活力变化对抑制真菌活性的相关研究,初步认为该菌株的抑菌物质为几丁质酶。

生物测定表明1.864的几丁质酶粗酶对蚊幼具有较高的活性,同时对Bt制剂杀虫活性具有明显的增效作用。

【总页数】5页(P)
【作者】赵秋敏;陈月华;蔡峻;卢伟
【作者单位】南开大学生命科学学院微生物学系/天津市微生物功能基因组学重点实验室;南开大学生命科学学院微生物学系/天津市微生物功能基因组学重点实验室;天津
【正文语种】中文
【中图分类】S476
【相关文献】
1.一株产几丁质酶芽孢杆菌分离鉴定及产酶活性初步研究 [J], 缪承杜;赵培静;夏枫耿;吴翠玲
2.产几丁质酶侧孢短芽孢杆菌M64的产酶条件优化及部分酶学性质研究 [J], 刘蒲
临;程德勇;缪礼鸿
3.一株产几丁质酶渤海丝状真菌(Alternaria tenuissima)的筛选及鉴定 [J], 刘丹;孟凡欢;李爽;冯欣;孟庆恒;孙建华
4.产几丁质酶侧孢短芽孢杆菌的筛选及其酶学性质研究 [J], 刘蒲临;程德勇;缪礼鸿
5.侧孢芽孢杆菌产生的抑真菌蛋白酶 [J], 张楹
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两株链霉菌及一株黑孢霉菌的次生代谢产物研究的开题报告

两株链霉菌及一株黑孢霉菌的次生代谢产物研究的开题报告一、背景链霉菌和黑孢霉菌都是优秀的次生代谢产物生产菌株，能够产生多种具有生物活性的天然产物，包括抗生素、生物碱、环糊精等。

目前，已经发现了大量链霉菌和黑孢霉菌的新型生物活性天然产物，这些天然产物具有广泛的应用前景，如治疗癌症、糖尿病和心血管疾病等。

因此，对链霉菌和黑孢霉菌的生物活性天然产物进行研究具有重要的意义，可以挖掘出更多的新型化合物，丰富天然药物资源，为人类健康事业做出贡献。

二、研究内容本次研究计划对两株链霉菌和一株黑孢霉菌的次生代谢产物进行研究，主要步骤包括以下几个方面：1. 菌株的鉴定和培养：通过形态学、生化特性等方法对菌株进行鉴定，并进行适宜的培养条件探索。

2. 次生代谢产物的提取和分离：采用不同的提取和分离方法，提取并纯化菌株的次生代谢产物。

3. 生物活性的筛选和鉴定：通过一系列体内和体外实验，对次生代谢产物的生物活性进行筛选和鉴定。

4. 结构鉴定和合成：对具有生物活性的次生代谢产物进行结构鉴定，进一步确定其化学结构，并进行化合物的合成。

三、研究意义本次研究的意义在于：1. 挖掘链霉菌和黑孢霉菌的新型生物活性天然产物，为天然药物开发提供更多的选择和发展空间。

2. 提高我国在天然药物研究领域的竞争力和科研水平。

3. 推动现代化医学的发展，提高人类健康事业水平。

四、研究方法和预期结果本次研究采用的方法包括菌株鉴定和培养、次生代谢产物提取和分离、生物活性筛选和鉴定、结构鉴定和合成等。

预期的结果是：1. 获得两株链霉菌和一株黑孢霉菌的次生代谢产物，并进行分析和鉴定。

2. 发现多个具有生物活性的天然产物，并确定其生物活性。

3. 确定多个化合物的结构，为后续的合成和研究提供依据。

链霉菌9-1-1产几丁质酶的发酵条件研究

链霉菌9-1-1产几丁质酶的发酵条件研究奚家勤;尹启生;宋纪真;周汉平;魏春阳【期刊名称】《中国烟草学报》【年(卷),期】2008(014)0z1【摘要】从烟草根际土样中分离、筛选得到1株几丁质酶活性比较高的链霉菌9-1-1,为评价该菌株利用价值,对其发酵条件(碳源、氮源、初始pH、表面活性剂及发酵时间)进行了研究.结果表明:该菌株的最佳发酵条件以1%胶体几丁质为碳源,发酵液初始pH值为6.5,以1%蛋白胨为氮源,0.1%吐温80作为表面活性剂,发酵时间为96 h,接种量为1%,最高酶活达到56 U/mL.【总页数】3页(P33-35)【作者】奚家勤;尹启生;宋纪真;周汉平;魏春阳【作者单位】中国烟草总公司郑州烟草研究院,郑州高新技术产业开发区枫杨街2号,450001rn;中国烟草总公司郑州烟草研究院,郑州高新技术产业开发区枫杨街2号,450001rn;中国烟草总公司郑州烟草研究院,郑州高新技术产业开发区枫杨街2号,450001rn;中国烟草总公司郑州烟草研究院,郑州高新技术产业开发区枫杨街2号,450001rn;中国烟草总公司郑州烟草研究院,郑州高新技术产业开发区枫杨街2号,450001【正文语种】中文【中图分类】S476.1【相关文献】1.响应面法优化链霉菌A0901产几丁质酶抑制剂的发酵条件 [J], 陈志斌;张洪斌;胡雪芹;张宇琪2.链霉菌9—1—1产几丁质酶的发酵条件研究 [J], 奚家勤;尹启生;宋纪真;周汉平;魏春阳3.微杆菌 Z4产几丁质酶的发酵条件研究 [J], 缑敬轩;董文宾;曾桥4.链霉菌A048产几丁质酶最佳发酵工艺研究 [J], 邱立友;王明道;戚元成;袁培林;贾新成5.MEW06产几丁质酶响应面发酵条件优化研究 [J], 袁淑博;陈晓通;余梦林;陈玲;倪红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

肯尼亚拟盘多毛孢几丁质酶基因鉴定及表达分析

肯尼亚拟盘多毛孢几丁质酶基因鉴定及表达分析隋文静;杨俊聪;范世昌;李明娇;张琰卿;李靖【期刊名称】《西南林业大学学报(自然科学)》【年(卷),期】2024(44)1【摘要】利用生物信息学方法从重寄生肯尼亚拟盘多毛孢(Pestalotiopsis kenyana)PG52菌株基因组中挖掘几丁质酶基因并分析,通过检测锈孢子诱导不同时间段基因的表达情况筛选重寄生相关几丁质酶基因。

结果表明:在PG52中共鉴定到20个GH18家族和1个GH19家族几丁质酶基因,分子量38.0~177.2 kDa,理论pI值范围3.97~9.25;其中7个有信号肽,13个定位在胞外。

所有PGChns基因都含有GH18家族或GH19家族保守结构域;与木霉几丁质酶序列聚类分析显示,PG52含有7个sgA、4个sgB、8个sgC、1个sgD几丁质酶基因。

锈孢子诱导下共18个几丁质酶基因在转录组中被检测到表达,7个基因在诱导24 h时表达量最高,6个基因在经诱导后持续下调表达,4个基因在诱导72 h时表达量最高。

对6个表达量高以及表达倍数高的基因进行RT-qPCR分析,所有基因均出现显著差异表达,并在诱导72 h时表达量最高。

经诱导后上调表达的PGChns很可能在PG52菌株重寄生过程中发挥破坏锈孢子壁的作用,需要后续进一步验证。

【总页数】10页(P21-30)【作者】隋文静;杨俊聪;范世昌;李明娇;张琰卿;李靖【作者单位】西南林业大学生命科学学院【正文语种】中文【中图分类】S182【相关文献】1.虫生广布拟盘多毛孢蛋白酶、几丁质酶、脂肪酶产生水平及其毒力关系研究2.石楠锈孢锈菌重寄生拟盘多毛孢的分离鉴定及抑菌活性3.一株木防己拟盘多毛孢的鉴定及其次生代谢产物分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

链霉菌A048产几丁质酶最佳发酵工艺研究

链霉菌A048产几丁质酶最佳发酵工艺研究邱立友;王明道;戚元成;袁培林;贾新成【期刊名称】《微生物学通报》【年(卷),期】2006(33)2【摘要】将链霉菌A048在完全培养基中培养至对数生长末期,离心洗涤收集菌丝体,然后接种入发酵产酶培养基中,进行二步发酵工艺生产几丁质酶,几丁质酶活力比一步发酵工艺提高1.1倍,发酵周期共54 h,比一步发酵工艺缩短66h;把菌丝体与几丁质粉共固定化,接入发酵产酶培养基中培养36 h,几丁质酶活力比一步发酵工艺提高1.8倍,发酵周期缩短54 h;在二步发酵工艺中另添加0.4%纤维素,几丁质酶活力可提高4倍,比一步发酵工艺提高10倍,酶活力达18.52 U/mL.采用几丁质和纤维素双因子诱导二步发酵工艺可能是链霉菌A048生产几丁质酶的最佳工艺.【总页数】5页(P58-62)【作者】邱立友;王明道;戚元成;袁培林;贾新成【作者单位】河南农业大学生命科学学院,郑州,450002;河南农业大学生命科学学院,郑州,450002;河南农业大学生命科学学院,郑州,450002;河南农业大学生命科学学院,郑州,450002;河南农业大学生命科学学院,郑州,450002【正文语种】中文【中图分类】Q936【相关文献】1.产转谷氨酰胺酶链霉菌的发酵罐生产工艺研究 [J], 蔡慧农;王灼维;杨秋明;郭兴要;刘新征;韩兆鹏;王璋2.响应面法优化链霉菌A0901产几丁质酶抑制剂的发酵条件 [J], 陈志斌;张洪斌;胡雪芹;张宇琪3.链霉菌9-1-1产几丁质酶的发酵条件研究 [J], 奚家勤;尹启生;宋纪真;周汉平;魏春阳4.链霉菌9—1—1产几丁质酶的发酵条件研究 [J], 奚家勤;尹启生;宋纪真;周汉平;魏春阳5.一株链霉菌的鉴定及其产bafilomycin A1的发酵工艺研究 [J], 周剑;方志锴;孙菲;江红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。