细菌分离培养及鉴定
有氧细菌分离培养、鉴定的方法和手段
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微生物分离鉴定步骤
微生物分离鉴定步骤
微生物的分离和鉴定是微生物学研究中非常重要的步骤，它可
以帮助我们了解微生物的种类和特性。
通常，微生物的分离和鉴定
包括以下步骤：
1. 样品收集，首先需要收集来自环境、生物体表面或其他来源
的微生物样品。
这可能涉及到采集土壤、水样、食品、空气或生物
体组织等样品。
2. 稀释和接种，将样品进行适当的稀释，然后在培养基上进行
接种。
这有助于分离出单一的微生物菌落，以便进行后续的鉴定。
3. 培养，接种后，将培养皿放入恒温培养箱中进行培养。
不同
类型的微生物可能需要不同类型的培养条件，如温度、氧气含量等。
4. 分离，在培养一段时间后，可以观察到菌落的形成。
选择单
一的菌落，进行分离培养，以获得纯培养物。
5. 形态学特征观察，观察微生物的形态学特征，包括细胞形态、大小、颜色等，可以初步了解微生物的特征。
6. 生理生化特性测试，进行一系列生理生化特性测试，如对不同营养物质的利用、酶活性、氧气需求等，以进一步了解微生物的特性。
7. 分子生物学鉴定，利用分子生物学方法，如16S rRNA序列分析，可以对微生物进行更精确的鉴定，包括确定其属种和种的分类位置。
以上是常规的微生物分离和鉴定步骤，通过这些步骤可以全面地了解微生物的特征和分类位置。
值得注意的是，不同的微生物可能需要不同的鉴定方法，有时可能需要结合多种手段进行鉴定，以确保鉴定结果的准确性。
细菌分离培养实验报告
细菌分离培养实验报告
实验目的：
通过对样品的细菌分离和培养，观察和鉴定细菌种类及其生长特征，为日后的研究奠定基础。
实验原理：
细菌分离培养是指将样品中的微生物通过特定的方法分离出来，并且在适宜的培养基上进行培养。
主要步骤包括选择样品、消毒、接种、分离和鉴定。
实验步骤：
1.选择样品：本次实验选用的是口腔拭子样品。
2.消毒：将口腔拭子放入细菌营养液中，充分均匀振荡，将细
菌营养液倒入灭菌瓶中。
3.接种：将灭菌瓶中的细菌营养液，均匀地涂抹在培养基平板上，用铁环进行接种。
4.分离：将铁环进行细菌分离，标记好分离点。
5.鉴定：根据样品的菌落形态、生长特征及其他相关检测方法，进行初步鉴定和筛选，待进一步的鉴定。
实验结果与分析：
在培养基平板上观察到了菌落的生长，初始生长时间为48小时。
根据菌落的形态、颜色、大小和特征等，初步判断菌落为链球菌属（Streptococcus）。
结论：
通过细菌分离培养实验，成功分离出一株链球菌属的菌落，并进行初步鉴定，为日后的进一步研究提供了基础。
细菌的分离、培养和鉴定
生化鉴定管
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养 基质的分解能力也不一样，因而代谢产物 或多或少地各有区别，可供鉴动化微生物鉴 Expression： 定和药敏分析系统
分子生物学技术
分子生物学鉴定目前比较流行的主要是核 酸检测技术, 酸检测技术, 包括基因测序、指纹图谱技术、 基因探针技术、聚合酶链反应( PCR)、 基因探针技术、聚合酶链反应( PCR)、GC 含量测定等。 PCR和核酸杂交单独或结合在仪器已经形成 PCR和核酸杂交单独或结合在仪器已经形成 比较经典的核酸检测技术, 比较经典的核酸检测技术, 目前这两者已经 得到了较大范围的推广和应用
具体操作： 具体操作：
• 取病料，将体表的泥沙等杂物用清水冲洗干净 取病料， • 取干净托盘，将病料置于托盘中 取干净托盘， • 托盘置于工作台上，接种前准备好酒精灯、接种 托盘置于工作台上，接种前准备好酒精灯、
环、酒精棉球、解剖刀、剪刀、镊子等。事先作 酒精棉球、解剖刀、剪刀、镊子等。 好准备工作， 好准备工作，把所用的物品器械摆好 • 解剖病料，将接种环烧红冷却后接触病变部位， 解剖病料，将接种环烧红冷却后接触病变部位， 平板划线。如体表创伤溃烂部位，病变内脏。 平板划线。如体表创伤溃烂部位，病变内脏。腹 水可直接涂布平板 • 平板置于28℃ 恒温培养箱培养24h，观察细菌生 平板置于28℃ 恒温培养箱培养24h， 长状况 注意： （注意：操作台在使用前后都需要用酒精棉球擦拭 台面，保持操作台的整洁） 台面，
鱼的解剖结构：
2）无菌操作
无菌操作是指在环境中一切有生命活动的微生物的 营养细胞及其芽孢或孢子都不存在的状态。微生物 研究过程中，既要避免各种外界的微生物进入操作 对象又要杜绝操作对象污染周围环境的操作技术。 无菌操作是对微生物学工作者最基本的要求，必须 经过严格训练才能形成无菌操作素养。不论何种情 况下，头脑中都应该有这个概念。 无菌操作贯穿于整个分离过程，例如：病料的采集、 器材的准备、具体的操作。所用器械及物品均应事 先灭菌备用，金属器具包装后高压灭菌或煮沸 30min，玻璃器皿可高压灭菌也可干热灭菌，胶皮 30min，玻璃器皿可高压灭菌也可干热灭菌，胶皮 塞、培养基等则要高压灭菌。
细菌的分离与鉴定题目
细菌的分离与鉴定一、名词解释1、细菌分离及鉴定：使用人工的方法使细菌在适当的环境和营养基质中生长繁殖，获取纯种、进行鉴定与研究等。
2、培养基：人工配置的供细菌生长繁殖的营养基质，是用人工方法将多种营养物质按照各种细菌的需要而组合成的混合营养料。
3、选择性培养基：在培养基中加有出营养成分以外的抑制物质，使之具有选择性，有利于目的细菌的检出和识别，而抑制其他非目的菌的生长或使其生长不佳。
4、鉴别培养基：利用各种细菌分解糖类和蛋白质能力及代谢产物的不同，在培养基中加入特定的作用底物，观察细菌在其中生长对底物的利用，从而鉴别细菌的培养基。
5、系统鉴定：通过病原菌的形态结构、生长特性、抗原性和病原性等检测，并用已知标准免疫血清确定分离细菌的属、种和型。
6、基因探针技术：用标记物标记细菌染色体或质粒DNA上的特异性片段之辈成细菌探针，待检标本经过短时间培养后，经过点膜、裂解变性、预杂交和杂交后，利用探针上标记物发出的信号可以知道杂交结果并判断杂交结果并判断病原体的性质。
7、毒力：病原细菌的致病能力的强弱。
通常病原细菌的毒力越大，其致病性越强。
8、半数致死量：在一定的时限内能使半数实验动物感染后发生死亡所需的活的细菌量或毒素量。
9、复杂染色法：应用两种或两种以上的染料或再加媒染剂进行染色的方法称为复杂染色法。
10、抑制剂：用于抑制非检出菌的生长或使其少生长，以利于检出菌的生长。
二、填空1、培养基的主要成分有营养物质、水分、凝固物质、抑制剂和指示剂。
2、当琼脂含量为1%-2%时可制成固体培养基，含量为0.3%-0.5%时可制成半固体培养基。
3、常用的抑制剂有胆盐、煌绿、亚硫酸钠、亚硒酸盐、四硫磺酸盐、叠氮钠、一些染料及某些抗生素等。
4、常用指示剂有酚红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中性红、甲基红、酸性复红等。
5、鉴别培养基主要供生化反应试验用，如糖发酵培养基、七叶苷培养基等。
6、常用的接种方法有平板划线接种法、斜面接种法、倾注培养法、穿刺接种法、半固体培养基接种法、液体接种法、平板涂布接种法。
细菌培养及鉴定
细菌培养及鉴定
微生物的培养和鉴定是现代医学的重要科学技术和服务,它在临床诊断,分子生物学和生物科技方面有重要作用，是进行细菌分离、鉴定和品种筛选的重要手段。
同时，也是医学上许多治疗、预防和诊断技术的重要环节。
细菌培养和鉴定的步骤包括：第一步，样品的获取和分离，并将获得的纯细菌样本放置到壳斗中；第二步，培养，即复活细菌培养，将细菌培养在特殊的培养基中，未来的培养表现就可以被观察到；第三步，鉴定，判断细菌种类和数量，准备将细菌培养表现比较到已知菌株，从而确定细菌种类。
细菌培养需要恒温恒湿和特定PH值的环境，培养基的选择也是有许多变化的，它可以是常规的抗性別、非抗药和复合培养基，也可以是非常规的培养基，以满足特定细菌种类的需要。
此外，还需要实现细菌表面及毒力活性鉴定，以确定细菌类型及抗性基因，例如抗血清，优势抗生素，和发酵代谢物，以及放射性和分子生物学技术来推测大量细菌信息。
最后，通过上述步骤，细菌培养及鉴定的结果得到正确。
微生物菌种分离和鉴定技术
微生物菌种鉴定技术
表征（表型）特征 形态特征 生理和代谢特征 生态特征
遗传（基因型）特征 蛋白质比较 核酸碱基组成 核酸序列
分子标尺
多相鉴定技术 Polyphasic Identification
新型显色培养基：
利用微生物自身代谢产生的酶与相应显色底物反应显色的原理来检测微生物 的培养基 。
微生物快速分离、计数方法
Petrifilm Plate (3M)
微生物快速分离、计数方法
3M Petrifilm Plate
Aerobic Count Plate Coliform Count Plate Rapid Coliform Count Plate E. coli /Coliform Count Plate Enterbacteriaceae Count Plate Yeast and Mold Count Plate Staph. aureus Express Count Plate Environmental Listeria Plate
单细胞（孢子）分离
选择培养基分离
传统选择性培养基
血平板：适于各类细菌的生长，一般细菌检验标本的分离，都应接种此平板。 巧克力血平板：其中含有V和X因子，适于接种疑有嗜血杆菌、奈瑟菌等的标
本。 中国蓝平板或伊红美蓝平板：可抑制革兰阳性细菌，有选择地促进G-菌生长，
是较好的弱选择性培养基。 麦康凯平板：具中等强度选择性，抑菌力略强，有较少革兰阴性菌不生长。 SS琼脂：有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。 碱性琼脂：用于从粪便中分离霍乱弧菌及其它弧菌。 血液增菌培养基：用于从血液、骨髓中分离常见病原菌。 营养肉汤：用于标本及各类细菌的增菌
细菌分离培养与鉴定程序
细菌分离培养与鉴定程序一、背景记录1、猪的临床症状2、不同猪的发病阶段（早、中、晚、解剖前宰杀还是解剖前已死亡）3、解剖病变（保存好照片）二、分离用培养基1、常用培养基：鲜血琼脂培养基、巧克力培养基2、非常用培养基：麦康凯培养基、沙门氏菌选择性培养基三、病料的选取和保存1、首选来自刚宰杀后的活畜禽或死后2-4小时内的畜禽2、得到病料后应该立即进行细菌分离，分离细菌前最长保存时间（在4℃冰箱内）最好不要超过3-4小时。
分离细菌前应将病料保存在4℃冰箱不得放入-20℃冰箱。
分离细菌后如需要根据细菌生长鉴定情况来决定病料用途（需再次接种、需再次触片、需接种动物等等）可先将病料暂存4℃冰箱，但不得超过2天。
一般情况下分离细菌后应及时将需长期保存的少量病料分装到塑料瓶中进行记录保存，多余的病料进行无害化处理。
四、分离路线1、选择分离细菌的目标脏器：根据疑似疾病和病理变化确定，一般选病变比较严重的脏器做为分离细菌的目标脏器，并选择脏器的病健交界处做为细菌分离的最终部位。
一头猪应该选择多个脏器或部位分离细菌。
并对不同部位细菌在整个疾病中的作用有一定的评价，如：心血中的细菌多为全身感染分布的病原；关节、肠道、创口、及肺脏则可能只是局部分布的细菌。
）2、分离细菌一般采用鲜血琼脂培养基划线培养、怀疑存在只能在巧克力培养基上且需要一定二氧化碳才能生长的细菌（如：副猪嗜血杆菌、传染性胸膜肺炎放线杆菌等）感染时、应同时采用巧克力培养基划线、放到烛缸进行培养。
划线时应该在做到无菌操作的前提下尽量取较大的一块组织或较多量的分泌物、先在培养基表面涂布一小片区域，然后弃去病料再用接种环从涂布区域开始进行划线。
这样一方面可保证分离到病料中的细菌，另一方面也能保证长出单个菌落为进一步鉴定提供方便，同时也为评价病料中细菌含量及不同细菌数量比例的评价提供依据。
如果病料来自病程较长或死亡动物且细菌种类复杂、难以确定病原菌的情况下、可考虑分离细菌的同时取病料接种小鼠、再从小鼠分离细菌，二者互为参考。
细菌分离与鉴定实验报告
细菌分离与鉴定实验报告引言细菌分离与鉴定是微生物学领域中的一项重要实验技术。
通过该实验，我们可以将复杂的细菌群体分离出单一细菌菌株，并对其进行鉴定和分类。
本实验报告将详细介绍实验步骤和结果分析。
实验材料和方法1.实验材料：–细菌培养基–细菌样本–灭菌培养皿–恒温培养箱–微量移液器–菌液均匀涂布器–培养皿铺平仪2.实验步骤：1.从细菌样本中取一小滴，用微量移液器滴入灭菌培养皿中。
2.使用菌液均匀涂布器将细菌样本涂布在含有细菌培养基的培养皿上。
3.使用培养皿铺平仪将培养皿铺平，确保细菌样本均匀分布。
4.将培养皿放入恒温培养箱中，设置适当的温度和时间。
5.取出培养皿，观察并记录细菌菌落的形态特征。
实验结果在所使用的细菌样本中，我们成功地分离出了多个细菌菌株。
根据观察，我们将这些菌株分为三类，分别是A、B和C。
•类别A：这类菌株呈现出圆形和平坦的菌落形态，表面光滑，边缘清晰。
在培养基上呈现出浅黄色。
•类别B：这类菌株的菌落形态较类别A更为凹凸不平，表面稍显粗糙。
在培养基上呈现出乳白色。
•类别C：这类菌株的菌落形态与类别A和B有较大差异，呈现出不规则形状。
在培养基上呈现出淡红色。
结果分析通过观察细菌菌落的形态特征，我们可以初步推测出这些菌株属于不同的细菌属。
进一步的鉴定和分类需要进行生化试验和分子生物学分析。
通过这些分析，我们可以确定这些细菌的种属、毒力和抗生素抗性等特性。
结论细菌分离与鉴定实验是一项基础而重要的技术，它为研究细菌的特性和功能奠定了基础。
通过本实验，我们成功地分离和初步鉴定了多个细菌菌株。
进一步的实验将有助于更深入地了解这些菌株的特性，并为相关领域的研究提供重要的支持。
细菌分离与鉴定实验的结果对医学领域、环境科学和食品安全等方面具有重要的应用价值。
在未来的研究中，我们将进一步挖掘这些菌株的潜力，探索更多关于细菌的奥秘，并为人类的健康和环境保护做出贡献。
一般细菌培养及鉴定 yi
一般细菌培养及鉴定 yi一般细菌培养及鉴定引言：细菌是一类微小的生物体，广泛存在于自然界中的各种环境中，包括水体、土壤、空气等。
它们的数量庞大，种类繁多，对人类和环境有着重要的影响。
了解、培养和鉴定细菌，在微生物学研究和应用中具有重要的意义。
一、细菌培养细菌培养是指将细菌分离于自然环境或患者样品中，通过合适的培养基和环境条件，培养细菌使其生长繁殖。
常用的培养基有固体培养基和液体培养基两种。
一、固体培养基固体培养基是以琼脂作为凝胶剂制成，通常为糖和蛋白质组成的基础培养基，如普通营养琼脂培养基、肉膏蛋白琼脂培养基等。
它们透明或半透明，适合于分离单个细菌菌落并鉴定。
制备固体培养基时，需要先将琼脂与所需的营养物加入适量的水中，经加热至溶解，然后热纯化，最后倒入培养皿中，等待凝胶化。
在接种菌落时，可用支架将细菌接种环插入琼脂中，在清洁环境条件下进行。
二、液体培养基液体培养基是指无琼脂的培养基，通常为糖和蛋白质组成的溶液，如普通液体培养基、牛肉膏培养基等。
液体培养基适合于大量培养，为细菌提供了较好的营养环境。
制备液体培养基时，需要将所需的营养物加入适量的水中，按照一定的比例加入各种营养物质，然后进行煮沸和杀菌，最后配制成适合细菌生长的pH值。
二、细菌鉴定细菌鉴定是指通过一系列检测和实验手段，确定从样品中分离出的细菌的种类和特性。
细菌鉴定主要包括形态学特征、生理生化特性、免疫学性质和分子特征等几个方面。
一、形态学特征形态学特征是指通过显微镜观察细菌的形态结构、形态特点以及细菌间的排列方式进行鉴定。
包括细菌的形状、大小、胞内结构等。
常用的显微镜观察方法有普通显微镜观察和电子显微镜观察。
二、生理生化特性生理生化特性是指通过生物化学实验，了解细菌的生长特性、代谢能力和对不同物质的反应性。
常用的生理生化鉴定实验有氧气需氧性实验、产酸性实验、芳香化合物降解实验等。
三、免疫学性质免疫学性质是指通过免疫学实验，检测细菌对特定抗原的反应和免疫学特性进行鉴定。
(完整word版)微生物菌种的分离纯化、培养、鉴定及保藏实验
实验微生物菌种的分离纯化、培养、鉴定及保藏一、实验目的和要求1。
了解微生物的分离纯化方法。
2.学习检测水中大肠菌群的方法。
3。
学习微生物的保藏及鉴定方法。
4。
熟悉革兰氏染二、实验原理多管发酵法多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管.乳糖能起选择作用,因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气.1.初发酵试验水样接种于发酵管内，37℃下培养,24小时内小套管中有气体形成,并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群,为阳性结果。
48小时后仍不产气的为阴性结果。
2。
平板分离初发酵管24至48小时内产酸产气的均需在复红亚硫酸钠琼脂（远藤氏培养基）或伊红美蓝琼脂，平板上划线分离菌落。
3.复发酵试验以上大肠菌群阳性菌落,经涂片染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，通过此试验再进一步证实。
原理与初发酵试验相同，经24小时培养产酸产气的，最后确定为大肠菌群阳性结果。
三、实验器材及试剂1。
水样污水样本2、培养基及试剂：二甲苯、苯酚、琼脂粉、香柏油、乳糖胆盐液体培养基、伊红美蓝琼脂（EMB）、营养琼脂培养基、革兰氏一液、革兰氏二液、革兰氏三液、革兰氏四液。
3、器材及耗材：双目显微镜、恒温培养箱、恒温干燥箱、洁净工作台、紫外线灯管、紫外线灭菌手推车、接种环、试管、酒精灯、滤纸、擦镜纸、载玻片、打火机、棉花、滴瓶、长塑料篓、纱布、吸耳球、产气管、培养皿、移液管等四、实验方法及步骤1。
第一天实验前的准备1）配制3支乳糖胆盐液体培养基，每支10mL,并加入产气管.配置营养琼脂培养基，灌装进2支试管中，配置200mL伊红美兰培养基150mL,于121℃高温高压灭菌20分钟，后放进恒温干燥箱。
2）包扎5套培养皿，包扎6根1mL、1根10mL移液管和3支滴管。
于121℃高压灭菌锅中灭菌20分钟。
3）称取一定量的液体石蜡,约为锥形瓶的三分之一。
于121℃高温高压灭菌20分钟。
细菌鉴定实习实验报告
一、实验目的1. 熟悉细菌培养与鉴定的一般原理和方法。
2. 掌握细菌的分离、纯化、染色、观察等基本技能。
3. 通过实际操作，提高对细菌形态、生理生化特性的认识。
二、实验原理细菌鉴定是指根据细菌的形态、生理生化特性等特征，确定其种类的过程。
细菌鉴定方法主要包括分离培养、染色观察、生理生化反应等。
三、实验材料与用具1. 实验材料：细菌样品、细菌培养基、生理盐水、接种环、无菌水、染色液等。
2. 实验用具：恒温培养箱、显微镜、酒精灯、接种针、培养皿、试管等。
四、实验步骤1. 细菌分离培养（1）取适量细菌样品，加入无菌生理盐水中，充分振荡，制成悬液。
（2）取少量悬液，涂布于细菌培养基表面，进行平板划线。
（3）将平板倒置放入恒温培养箱中，培养24-48小时。
2. 细菌染色观察（1）将培养好的细菌菌落用接种针挑取，制成涂片。
（2）用酒精灯火焰固定涂片。
（3）用革兰氏染色法对涂片进行染色。
（4）用显微镜观察细菌形态、染色特性。
3. 细菌生理生化反应（1）根据细菌的生理生化特性，选择合适的生理生化反应实验。
（2）将细菌接种于相应培养基中，进行培养。
（3）观察并记录细菌的生理生化反应结果。
五、实验结果与分析1. 细菌分离培养实验中成功分离出细菌，培养出的菌落呈白色，表面光滑。
2. 细菌染色观察通过革兰氏染色，观察到细菌的形态、染色特性。
实验结果显示，该细菌为革兰氏阳性菌。
3. 细菌生理生化反应实验结果显示，该细菌具有以下生理生化特性：（1）能发酵葡萄糖，产生酸和气体。
（2）不能发酵乳糖。
（3）吲哚反应阳性。
（4）甲基红反应阳性。
根据实验结果，结合细菌的形态、染色特性和生理生化特性，初步判断该细菌为葡萄球菌属。
六、实验总结通过本次细菌鉴定实习实验，我掌握了细菌分离、纯化、染色、观察等基本技能，提高了对细菌形态、生理生化特性的认识。
在实验过程中，我深刻体会到理论与实践相结合的重要性，为今后从事微生物学相关领域的研究奠定了基础。
细菌的分离与鉴定
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：
KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4`7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g ①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属 于哪类培养基？ 固体培养基 选择培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按 对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个 小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板, 除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格 (即80个小方格)的酵母菌数. (6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方 格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左 方线上的酵母细胞). (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计 算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.
• 抑制非目的微生物生长
• 从混杂微生物中分离目的微生物
1、利用选择培养基进行直接分离
选择培养基 只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
选择培养基
可抑制细菌、放线 菌细胞壁主要成分 肽聚糖的合成
其细胞壁是由纤 维素、几丁质、 葡聚糖组成
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以 三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌 落数在50个左右为最好。
感染病原微生物的分离和鉴定技术
感染病原微生物的分离和鉴定技术病原微生物是引起疾病的原因之一。
因此，当怀疑病人患有感染性疾病时，需要进行微生物分离和鉴定。
这项技术可以用于确定病原微生物的身份、了解病原微生物的潜在危险以及确定最佳治疗方案。
本文将介绍常见的微生物分离和鉴定技术。
1.细菌分离和鉴定细菌是最常见的病原体之一，因此需要进行细菌分离和鉴定。
一种常用的细菌分离技术是“血平板法”，该技术涉及到将病原体培养在含有富含营养物质的平板上。
之后，将血清添加到平板上，检测是否会有细菌菌落的形成。
如果有形成，则表明这个平板上有可能存在细菌。
鉴定细菌可以通过筛选一系列不同的培养基来实现，例如酸敏素、米斯敦抑制剂、麦康凯脱氧胆汁盐紫、以及气孔试验等。
这些试验基于细菌菌株的不同特征，根据这些特征，可以确定细菌的身份并提供最佳治疗方法。
2.真菌分离和鉴定真菌在感染中也扮演着关键角色，因此需要进行真菌的分离和鉴定。
真菌分离可以通过使用含有营养物质的试管培养基，以及空气稀释，将真菌放置在伏井玻璃中进行。
真菌会在此处生长，并形成真菌菌落。
然后，将这些菌落移动至可供鉴定的培养基上。
鉴定真菌通常涉及使用孢子分析、显微镜观察、以及通过生物技术方法应用基因测序等。
这些方法可以帮助确定真菌的身份，并提供治疗建议。
3.病毒分离和鉴定病毒分离是通过将病毒放入终端宿主细胞中，利用宿主细胞来复制病毒。
在病毒复制完成后，通过对复制物进行抽取和鉴定，可以确定病毒的身份。
病毒的鉴定可以通过许多方法来完成，包括免疫学方法、PCR、以及使用重组DNA技术等。
这些方法通常涉及到分析病毒抗原的特征，使用核酸杂交等技术来分析病毒的序列信息，以及将对病毒有抵抗力的DNA结合到相同的DNA中以产生抗体。
4.寄生虫的分离和鉴定寄生虫的分离通常涉及将其放置在带有试管中的培养基中，以便在培养基中生长和复制。
这提供了一种寄生虫的纯化方法，然后可以将其在不同的培养基上进行鉴定。
鉴定寄生虫方法包括孢子分析，通过显微镜观察寄生虫组织，以及使用PCR等技术。
细菌分离培养及鉴定
临床标本培养基选择
生殖道标本根据临床医生所写的检验项 目接种相应的平板及操作：
淋球菌培养接种淋球菌平板;念珠菌培养接 种沙保罗培养基；支原体培养则按《支原体培 养的操作规程》操作；作普通培养则接种血平 板和巧克力平板
观察细菌在平板上的生长现象
血平板：大小、形状、边缘、颜色、表 面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 mac平板：大小、形状、颜色、透明度、 湿润度、黏度 巧克力平板：大小、形状、颜色、透明 度、湿润度、黏度
采集标本后立即送检！
标本接收原则
严格实行核对制度 ：包括姓名、性别、年
龄、门诊号/住院号、病床号、标本类型、容 器、标识、检验目的等。
所有拒收或退回标本均应在登记本上登 记，登记内容包括：病人姓名、病区、床号
送检医师、送检项目、拒收 ( 退回 ) 原因、拒收 时间、经手人等
痰标本涂片染色低倍镜下分类
抗酸染色注意事项
为防止交叉感染，标本先高压灭菌后再 涂片染色 染色充分 脱色时间宁长勿短 在涂抹痰标本时严禁对载玻片进行加热
临床标本培养基选择
血： 血培养瓶 中断尿：血平板、mac平板 脑脊液：血培养瓶、血平板、巧克力平 板 穿刺液：血培养瓶、血平板、巧克力平 板、mac平板 胆汁：血平板、巧克力平板、mac平板 大便:.麦康凯、SS、血平板
革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片 干燥 固定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
革兰染色程序
初染 媒染 脱色 复染
冲洗
冲洗
冲洗
结晶紫 1’ 1’
冲洗
碘液 1’
95%乙醇 30” 复红
细菌分离鉴定实验报告
细菌分离鉴定实验报告细菌分离鉴定实验报告引言：细菌是一类微生物，广泛存在于我们周围的环境中。
它们的分离和鉴定对于研究微生物的特性以及应用于医学、环境和食品领域具有重要意义。
本实验旨在通过细菌分离鉴定实验，探索不同样本中的细菌种类和特性，并了解其对人类和环境的影响。
材料与方法：1. 实验室提供的样本：包括水、土壤、食物等。
2. 细菌培养基：选择适宜的培养基，如营养琼脂培养基、大肠杆菌选择性琼脂培养基等。
3. 培养皿和试管：用于细菌的分离和培养。
4. 培养箱和恒温器：提供适宜的温度和湿度条件。
5. 显微镜和染色剂：用于观察和染色细菌。
实验步骤：1. 样本处理：将不同样本（如水、土壤、食物）分别取样，用无菌技术将其转移到试管中。
2. 稀释：将样本进行适当稀释，以便于后续的细菌分离。
3. 分离：取适量的稀释液，均匀涂布在培养基上，用无菌棉签进行均匀涂抹，然后在培养箱中培养一段时间。
4. 鉴定：观察培养基上的菌落形态、颜色、大小等特征，并进行显微镜观察。
根据菌落特征和显微镜观察结果，初步鉴定细菌种类。
5. 染色：根据需要，对细菌进行染色，如革兰氏染色、抗酸染色等，以进一步鉴定细菌种类。
6. 结果记录：将观察到的菌落特征、显微镜观察结果和染色结果记录下来，形成实验报告。
实验结果与讨论：在实验过程中，我们从不同的样本中成功分离出了多种细菌。
根据菌落形态、颜色和显微镜观察结果，初步鉴定了其中的一些细菌种类。
例如，在水样中，我们观察到了革兰氏阴性菌的存在，这可能是由于水中存在有机物质和微生物污染所致。
而在土壤样本中，我们发现了一些革兰氏阳性菌，这与土壤中丰富的有机质和微生物群落相关。
通过进一步的染色实验，我们对细菌种类进行了更准确的鉴定。
例如，通过革兰氏染色，我们确定了水样中存在的大肠杆菌，这是一种常见的致病菌，可能来源于粪便污染。
而在土壤样本中，我们发现了一种抗酸菌，这可能与土壤中的特定环境条件有关。
细菌的分离和鉴定不仅有助于了解微生物的多样性和分布情况，还对于环境和食品安全具有重要意义。
细菌分离鉴定实验报告
一、实验目的1. 掌握细菌分离和鉴定的基本原理和方法。
2. 学会使用培养基和试剂进行细菌的分离和鉴定。
3. 培养无菌操作技能，提高实验操作的准确性。
二、实验原理细菌分离鉴定是微生物学的重要实验技术之一，通过对细菌的分离、培养、观察和鉴定，可以了解细菌的形态特征、生理生化特性以及致病性等。
实验过程中，常用的方法有平板划线法、涂布分离法、显微镜观察、生化反应等。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：土壤、水、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、葡萄糖、乳糖、酵母提取物、氯化钠、硫酸铜、氢氧化钠、酚红指示剂等。
2. 实验试剂：无菌水、无菌棉签、无菌平板、无菌试管、无菌移液器、酒精灯、火焰灯、显微镜、烧杯、玻璃棒、试管夹、镊子等。
四、实验方法1. 土壤样品的采集：在野外选择合适地点，采集表层土壤样品。
2. 培养基的制备：将牛肉膏、蛋白胨、琼脂等按比例混合，加入适量的水，煮沸溶解，冷却至50-60℃，加入酚红指示剂，调整pH至7.2-7.4，分装于无菌平板中，待凝固。
3. 平板划线法：将无菌棉签蘸取土壤样品，在平板上划线，划线方向要垂直，重复划线，使细菌分散。
4. 涂布分离法：将无菌棉签蘸取土壤样品，均匀涂布于平板表面，用无菌镊子轻轻按压，使细菌均匀分布。
5. 微生物培养：将平板倒置，放入培养箱中，37℃恒温培养24小时。
6. 鉴定：观察菌落特征，如颜色、形状、大小等，根据菌落特征进行初步鉴定。
7. 生化反应：将纯化后的细菌接种于含有不同底物的培养基中，观察细菌的生长情况，进行生理生化鉴定。
五、实验结果与分析1. 菌落特征：在平板上观察到多种菌落，颜色、形状、大小各异。
2. 生化反应：通过生理生化反应，初步鉴定出以下细菌：（1）金黄色葡萄球菌：菌落呈金黄色，边缘整齐，表面光滑，有光泽，触之粘稠。
生化反应：发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖，不发酵蔗糖、鼠李糖；产生吲哚、硫化氢、氨气；不产生过氧化氢酶。
（2）大肠杆菌：菌落呈白色，边缘整齐，表面光滑，有光泽。
细菌分离与鉴定方法
细菌分离与鉴定方法1.纯培养纯培养是将混合细菌通过稀释法或不同稀释度悬浮液的涂布、扩散或稀释平板接种法接种在适宜的培养基上，使各菌种生长成独立的菌落。
这样可以得到洁净的菌液或洁净的菌落。
2.菌落形态观察经纯培养得到菌落后，可以观察菌落特征，如菌落形状、颜色、大小、边缘等。
这些特点有助于初步区分不同的菌种。
3.各种培养基的利用根据细菌对不同种类培养基的利用差异，可以采用不同种类培养基进行分离与鉴定。
例如，选择亲水性对细菌有选择性的培养基可以分离出产胆红素的细菌。
4.微生物常规方法利用常规的生理生化特性进行鉴定，包括氧需求情况（需氧、厌氧、需气氛）、产气性、产酸性、产胆红素等特征。
5.细胞形态与结构鉴定利用显微镜观察细菌的形态特征，包括形状、大小、聚集方式等。
染色方法，如革兰氏染色和抗酸染色，可以帮助确定细菌的细胞壁结构、染色性质、胞内结构等。
6.生化反应测试通过观察细菌在特定生化反应条件下产生的能量代谢产物，如产气、酸碱反应等，可以推测出细菌的代谢途径和能力。
常用的生化反应试剂盒，如API系统和VITEK系统，可以通过细菌的酶活性、营养利用和代谢产物等参数对细菌进行鉴定。
7.16SrRNA基因分析16SrRNA基因是细菌特有的核糖体RNA的组成部分，其序列具有高度保守性和广泛分布性。
通过对16SrRNA基因的测序和比对，可以确定细菌的亲缘关系和系统发育位置，进而确定细菌的名称和分类。
细菌分离与鉴定方法的选择取决于需求和目标。
对于一般的实验室课程或常规鉴定需要，常规的菌落形态观察、生理生化试验和染色方法可以满足要求。
而对于复杂的鉴定和分类，特别是对于新菌种或未知细菌的鉴定，16SrRNA基因分析是一种非常有力的方法。
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菌 落 精选ppt
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菌落与菌苔
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菌落的三个类型：
1.光滑型菌落（Smooth type Colony） ：又称S 型
2.粗糙型菌落（Rough type Colony）：又称R型 3.粘液型菌落（Mucoid type Colony）又称M型
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S型菌落
2020/8/2
A
>25
<10
B
>25
<25
C
<10
>25
A、B两种情况的痰适合做培养，C不合格，应重新留标本
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常用的培养基种类和用途
哥伦比亚血平板—营养要求高的细菌
巧克力平板—含V、X因子，主要培养嗜血杆菌、脑 膜炎球菌和淋球菌用
中国蓝/麦康凯平板—G-杆菌用
SS平板—沙门氏菌和志贺氏菌用
M-H平板—细菌药敏用
TCBS平板—弧菌科细菌用
沙包氏平板—真菌培养用
真菌显色平板—真菌培养用
罗氏培养基—分枝杆菌精选用ppt
7
接种工具
接种针和接种环 ：由三部分组成，即环 （针）、金属柄和绝缘 柄 接种针：用于穿刺接种细菌 接种环：用于固体、液体培养基的细菌 接种
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器具：接种环（上）和接种针（下）
2—5cm
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清洁中段尿液
尽量取早晨第一次尿液
嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水 女性病人 ➢收冲集洗标尿本道前口用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水 ➢排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿 男性病人 ➢翻转包皮，清洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流,采集中段尿
采集标本后立即送检！
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标本接收原则
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细菌在固体培养基中的生长现象
菌落 ★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形
成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透
明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型
（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物 。
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细菌在半固体培养基中的生长现象
无动力 现象
有动力 现象
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斜面接种法
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接种斜面后菌落生长示意图（菌苔）
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革兰染色
原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形
成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌 由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密， 故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小 ，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，， 因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈 紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含 量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类 脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻 挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍 呈无色，再经复红等红色染料复染，就使革兰氏阴性 菌呈红色。
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R型菌落
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M型菌落
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细菌在液体培养基中的生长现象
混浊 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜：多见于厌氧菌
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细菌在液体培养基中的生 长现象：
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细菌在半固体培养基中的生长现象
有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向 外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线 边缘清晰。
细菌培养及鉴定
杭州余杭邦尔医院检验科 钟 剑
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1
标本采集原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查
2.在抗菌药物使用前采集标本
3.采样时严格执行无菌操作
4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂
5.采样后立即送检
6.送检标本应注明来精源选ppt和检验目的
2
咳痰方法
病人先漱口，清洁口腔，去除表面的菌群 病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液 无痰可用3％～5％NaCl 5ml雾吸约5min导痰 以清晨第二口痰为佳 标本采集后放置时间不超过2小时
冲洗
滤纸干燥 精选ppt 油镜观察
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革兰染色
甲菌
乙 菌
紫紫色色（（GG＋＋）） 初染 媒染 脱色 复染
革结兰晶氏紫 染碘色液步骤乙示醇 意图稀释复红
红色（G-）
革兰染色步骤示意图
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【结果】
细菌被染成紫色者，称为革兰阳性菌； 而细菌染成红色者，称为革兰阴性菌；
阳性菌——紫色（G+b
阴性菌——红色（G-b)
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11
细菌接种法
平板划线接种法：
★目的：使混合的细菌呈单个分散生长， 形成单个菌落，以便获得纯菌。
★方法：
★分区划线法：适用于含菌量较多的标本
★连续划线法：适用于含菌量较少的标本
液体培养基接种法
穿刺接种法 :用于观察细菌动力
斜面接种法
倾注培养法:用于细菌计数
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12
分区划线法(3区) 第一区划线
灭菌接种环
第二区划线
灭菌接种环
第三区划线
灭菌接种环
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13
连续划线法
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15
细菌培养法
一般培养（需氧培养）： ★培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h
二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养 箱 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧 罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等
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30
革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
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31
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
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32
革兰染色程序
初染
媒染
脱色
复染
冲洗
冲洗
冲洗
结晶紫 1’ 碘液 1’ 95%乙醇 30” 复红 1’
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G+ 球菌
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G-杆菌
Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells
柄约22cm
5—8安装环(针)的螺口(约8mm)
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9
操作原则：无菌操作（烧灼灭菌）
Aseptic area 10-20cm
外焰 内焰 焰芯
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10
细菌接种的基本程序
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本
沾取标本
接种
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境
严格实行核对制度 ：包括姓名、性别、年
龄、门诊号/住院号、病床号、标本类型、容器 、标识、检验目的等。
所有拒收或退回标本均应在登记本上登 记，登记内容包括：病人姓名、病区、床号
送检医师、送检项目、拒收(退回)原因、拒收 时间、经手人等
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5
痰标本涂片染色低倍镜下分类
分级 白细胞（个） 上皮细胞（个）