第三章 人工抗体的制备
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第三章 人工抗体的制备
是将 Ig 的 H 链和 L 链的 V 区基因 相连，转染大肠杆菌表达的抗体分子，又称单 链 FV分子。
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四、其他基因工程抗体：
如:Ig相关分子：将抗体分子部分片段连接到与 抗体无关的序列上得到。
噬菌体抗体：将已知特异性的抗体分子的
所细有菌五，V区模、基拟全因免套在疫噬抗选菌体择体过基中程因构，库建使基具因有库相，应用特噬异菌性体的感重染
如：在抗肿瘤方面的应用。在戒毒上 也有重要应用价值。
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三、多克隆抗体制备过程
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第二节 单克隆抗体
一、概念： 是指由一个B细胞分化增殖的子代
细胞（浆细胞）产生的针对单一抗原决定簇 的抗体，简称单抗。
特点：高特异性、高均一性
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抗体产生细胞
多克隆性
单克隆性 二、单抗与多抗的比较
同质性
高度异质
高度同质
特异性 高，与特定
较高，与抗原上
决定簇 结合
小鼠腹水： 0.5~1.0
10~15
其他血清蛋白
有
体外培养：少量
牛血清白蛋白
小鼠腹水：少量杂蛋白
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三、建立B细胞杂交瘤与单克隆抗体生产 基本过程
度均一性： 纯度很高的均一性抗体
高度专一性： 只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应。
大量产生及稳定性： 杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖之传代。
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五、单克隆抗体的应用
（一）在血清学技术方面。 （二）在免疫学基础研究方面。 （三）在肿瘤治疗方面。如生物导弹。 （四）在抗原纯化方面。 （五）用于制备实用抗文档独特型抗体疫苗。
第三节 基因工程抗体
一、概念： 利用基因工程技术制备的抗体分子，
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四、其他基因工程抗体：
如:Ig相关分子：将抗体分子部分片段连接到与 抗体无关的序列上得到。
噬菌体抗体：将已知特异性的抗体分子的
所细有菌五，V区模、基拟全因免套在疫噬抗选菌体择体过基中程因构，库建使基具因有库相，应用特噬异菌性体的感重染
如：在抗肿瘤方面的应用。在戒毒上 也有重要应用价值。
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三、多克隆抗体制备过程
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第二节 单克隆抗体
一、概念： 是指由一个B细胞分化增殖的子代
细胞（浆细胞）产生的针对单一抗原决定簇 的抗体，简称单抗。
特点：高特异性、高均一性
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抗体产生细胞
多克隆性
单克隆性 二、单抗与多抗的比较
同质性
高度异质
高度同质
特异性 高，与特定
较高，与抗原上
决定簇 结合
小鼠腹水： 0.5~1.0
10~15
其他血清蛋白
有
体外培养：少量
牛血清白蛋白
小鼠腹水：少量杂蛋白
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三、建立B细胞杂交瘤与单克隆抗体生产 基本过程
度均一性： 纯度很高的均一性抗体
高度专一性： 只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应。
大量产生及稳定性： 杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖之传代。
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五、单克隆抗体的应用
（一）在血清学技术方面。 （二）在免疫学基础研究方面。 （三）在肿瘤治疗方面。如生物导弹。 （四）在抗原纯化方面。 （五）用于制备实用抗文档独特型抗体疫苗。
第三节 基因工程抗体
一、概念： 利用基因工程技术制备的抗体分子，
免疫学导论于善谦 第3章 抗体
(2)亚类
IgG：IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 IgA：IgA1, IgA2 IgM: IgM1, IgM2
2.型和亚型(根据轻链C区抗原特异性不同分型) (1)型 κ(kappa)型 λ(lambda)型 (2)亚型(λ链)： OZ(+) (或λ1) ：第190位(亮氨酸) OZ(-) (或λ2) ：第190位(精氨酸) Kern(+)(或λ3) ：第154位(甘氨酸) Kern(-)(或λ4) ：第154位(丝氨酸)
☆结合细胞表面的Fc受体发挥调理作用、 ADCC作用、介导I型超敏反应 IgG、IgM的Fc段与吞噬细胞表面的FcγR、 FcμR结合，增强其吞噬能力，通常将抗体促 进吞噬细胞吞噬功能的作用称为抗体的调理 作用 (opsonization)。
当IgG与带有相应抗原的靶细胞结合后， 其Fc段可与NK细胞、Mф细胞、单核细胞 的FcγR结合，促使细胞毒颗粒的释放，发 挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用 (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)，导致靶细胞溶解。
pathway）和以次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶脱氧核苷（T）为原料进行补救
（亦称替代或称中间）合成（salvage pathway）2个途径。由于氨基蝶呤可 阻碍起始合成途径，所以培养基中含有它时，细胞便只有补救合成途径可以
利用，如果培养基中额外提供或补充H和T，正常细胞就可以通过补救合成途
径合成DNA的核酸原料。用于细胞融合的骨髓瘤是的在遗传上缺失中间合成 途径的永生化细胞系，在HAT培养基中将失去增殖能力趋于死亡，而产生特 异性抗体的脾细胞是正常细胞，不能长期传代。融合后的杂交瘤细胞不仅具 有了永生化和抗体分泌的特性，同时还由于补充了替代合成途径，因此可以 在HAT筛选培养基中生存并增殖，未融合的脾细胞增殖数代后逐渐死亡，而 骨髓瘤细胞因补救合成途径缺陷而全部死亡。据此，把混存于细胞群中的杂 交瘤细胞与正常脾细胞和骨髓瘤细胞通过筛选培养进行自动选择。
8.6 人工制备抗体
人工制备抗体
多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）
用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体的总和。
所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物，称为多克隆抗体。
单克隆抗体（monoclonal antibody, mAb）
由识别一种抗原决定簇的细胞克隆所产生的均一性抗体。
•mAb is the specific Ab produced by one B cell clone and recognize one antigenic epitope only. •With same structure, high purity and specificity.
发明单克隆抗体技术Nobel Prize in 1984
小结
1．掌握抗体、免疫球蛋白的概念，免疫球蛋白的基本结构，免疫球蛋白的功能；
2．熟悉免疫球蛋白的水解片段，J链和分泌片；
3．了解各类免疫球蛋白的特性。
THANKS!。
第03章抗体制备
3.刺激淋巴细胞的增殖分化，增强和扩大免疫应答。
第三节 多克隆抗体的制备及应用
一、免疫动物的选择
抗原与动物种属之间的关系 动物的个体因素 抗原的性质与动物种类 抗体的用量和要求
IgY有如下几方面的优点
无需采血，只需收集免疫母禽产下的禽蛋即可提取 抗体；
使用少量的抗原免疫禽类既可获得大量的质量均一 的特异性IgY；
噬菌体抗体库主要工作流程
从外周血或其他免疫组织器官克隆出全套抗体基因菌体表达，构建全部Ig cDNA的噬菌体抗体库。
筛选含有目的Ig表达的噬菌体。 建立目的Ig表达的噬菌体抗体库。 扩增制备噬菌体抗体。 纯化抗体。
噬菌体抗体库技术的主要特点
IgY抗体耐酸、耐热，经巴氏消毒后活性依然存在， 因此容易保存和运输；
由于种系发生距离相差很大，禽类IgY与哺乳动物免 疫球蛋白之间不会发生交叉反应；
IgY不激活哺乳动物的补体系统，不与类风湿因子或 Fc受体相结合，避免在免疫检测过程中产生假阴性或假阳 性结果；
IgY对哺乳动物抗原的敏感性高。
二、抗原剂量的选择
四、采血方法
颈动脉放血法 静脉采血法 心脏采血法
五、抗血清鉴定及保存
抗体效价和纯度的测定 抗体特异性的鉴定 抗体亲和力的鉴定 抗血清的保存
六、抗体的纯化
IgG类抗体的纯化：盐析法粗提γ-球蛋白、离子交换 层析提取IgG、亲和层析法。
特异性抗体的纯化：亲和层析法、吸附法
七、多克隆抗体的特性和应用
用于某些疾病的紧急预防，例如破伤风和Rh不合的 新生儿溶血症等。
用于某些感染性疾病和移植排斥反应等的治疗。 应用于某些疾病的临床检验。 在科研中常用于免疫印迹和免疫组化等。
第四节 单克隆抗体的制备及应用
第三节 多克隆抗体的制备及应用
一、免疫动物的选择
抗原与动物种属之间的关系 动物的个体因素 抗原的性质与动物种类 抗体的用量和要求
IgY有如下几方面的优点
无需采血，只需收集免疫母禽产下的禽蛋即可提取 抗体；
使用少量的抗原免疫禽类既可获得大量的质量均一 的特异性IgY；
噬菌体抗体库主要工作流程
从外周血或其他免疫组织器官克隆出全套抗体基因菌体表达，构建全部Ig cDNA的噬菌体抗体库。
筛选含有目的Ig表达的噬菌体。 建立目的Ig表达的噬菌体抗体库。 扩增制备噬菌体抗体。 纯化抗体。
噬菌体抗体库技术的主要特点
IgY抗体耐酸、耐热，经巴氏消毒后活性依然存在， 因此容易保存和运输；
由于种系发生距离相差很大，禽类IgY与哺乳动物免 疫球蛋白之间不会发生交叉反应；
IgY不激活哺乳动物的补体系统，不与类风湿因子或 Fc受体相结合，避免在免疫检测过程中产生假阴性或假阳 性结果；
IgY对哺乳动物抗原的敏感性高。
二、抗原剂量的选择
四、采血方法
颈动脉放血法 静脉采血法 心脏采血法
五、抗血清鉴定及保存
抗体效价和纯度的测定 抗体特异性的鉴定 抗体亲和力的鉴定 抗血清的保存
六、抗体的纯化
IgG类抗体的纯化：盐析法粗提γ-球蛋白、离子交换 层析提取IgG、亲和层析法。
特异性抗体的纯化：亲和层析法、吸附法
七、多克隆抗体的特性和应用
用于某些疾病的紧急预防，例如破伤风和Rh不合的 新生儿溶血症等。
用于某些感染性疾病和移植排斥反应等的治疗。 应用于某些疾病的临床检验。 在科研中常用于免疫印迹和免疫组化等。
第四节 单克隆抗体的制备及应用
第三章抗体123
（二）免疫球蛋白的水解片段
胃蛋白酶(pepsin)裂解IgG：得到一个具 有双价活性的F（ab’）2段和若干个小 分子多肽碎片（pFc’）。
（三）免疫球蛋白的功能区
Ig的H链、L链每隔110个氨基酸即由链 内二硫键连接形成一个能行使特定功能 的球性单位，称为Ig的结构域或功能区 （domain）。
C区的功能：
Fc片段的生物学活性：该片段无结合抗原 活性，但与抗体分子的生物学活性有密切 关系： 1、选择性地通过胎盘； 2、与补体结合活化补体； 3、决定Ig分子的亲细胞性(即与带Fc受体
细胞的结合)； 4、Ig通过粘膜进入外分泌液等都是Fc片段
的功能。
补体结合位点位于CH2上；Fc受体结合
位点在CH3上。
(1) B细胞的制备：可用提纯的抗原免疫 Balb/c或其他品系小鼠，免疫2-3次间隔24周，最后一次免疫后3-4d，取小鼠脾脏， 制成103/ml的脾细胞悬液，即为亲本的B 细胞。
(2) 骨髓瘤细胞的制备：用与免疫相同品系 小鼠的骨髓瘤细胞，要求其本身不能分 泌Ig，而且具有某种营养缺陷，可用 SP2/0或NS-1，它们缺少次黄嘌呤--鸟嘌 呤磷酸核糖转移酶，不能在HAT培养基 上生长。
4. J链和分泌片
J链是一条多肽链，富含半胱氨酸，由浆 细胞合成，以二硫键的形式共价结合到Ig 的重链上。
分泌片：由黏膜上皮细胞合成和分泌， 以非共价形式结合到二聚体上，保护IgA， 使之不受环境中酶的破坏，并介导IgA的 转运。
（二）免疫球蛋白的水解片段
木瓜蛋白酶(papain)水解IgG：得到两个相 同的Fab段和一个Fc段。
3、基因工程抗体：利用基因工程技术来 制备的抗体分子称为基因工程抗体，是 分子水平的抗体。
3 免疫球蛋白分子(Immunoglobulin,Ig)
基因定位：H--14
二 、 基因重排与转录：一种V区基因可与多 种不同C基因连接，一种C 区基因可与多种不 同V基因连接(RSS: 5’ 7-12-9; 3’ 7-23-9)
三 类别转换：类别转换重组酶， CD40+CD40L/启动类别转换 IL4/IgM--IgE TGF/IgG--IgA 四 遗传特点：等位基因排斥，多基因 控制一条多肽链合成。 五 抗体多样性及其机制 1 外因：抗原多样性 2 内因：胚系基因多样性，连接多样性， 体细胞突变，组装多样性。
1.识别抗原(TCR/BCR,MHCI/MHCII) 2.信号转导(CD4/CD8) 3.活化细胞(CKR) 4.粘附细胞(AM) 5.参与抗体转运(FcR)
第三节 Ig基因的遗传控制：
一 、基因定位及基因库：
K--2 λ—22号染色体 基因库：H-VDJC K/λ-VJC H:V/51--D/30--J/6 Cμα1.2γ1.2.3.4δε/9 Mu；Delta；Alpha；Gamma；Epsilon IgM IgD IgA IgG IgE K:v/50 J/5 C/1 λ:V/50 J/7 C/7
2 制备过程（preparation） ： 五步
Immune B cell+myeloma→hybridoma →clonal →positive clones expand →get antibody
免疫脾细胞+瘤细胞→杂交瘤细胞→克隆化 →阳性克隆筛选→转感度。 4 应用：诊断治疗及科研工作。
第三章 免疫球蛋白分子 (Immunoglobulin,Ig)
内容简介
Ig概述 2. IgSF概念、组成及功能 3. Ig基因遗传控制 4. 抗体的人工制备 5. Ig异常与疾病
二 、 基因重排与转录：一种V区基因可与多 种不同C基因连接，一种C 区基因可与多种不 同V基因连接(RSS: 5’ 7-12-9; 3’ 7-23-9)
三 类别转换：类别转换重组酶， CD40+CD40L/启动类别转换 IL4/IgM--IgE TGF/IgG--IgA 四 遗传特点：等位基因排斥，多基因 控制一条多肽链合成。 五 抗体多样性及其机制 1 外因：抗原多样性 2 内因：胚系基因多样性，连接多样性， 体细胞突变，组装多样性。
1.识别抗原(TCR/BCR,MHCI/MHCII) 2.信号转导(CD4/CD8) 3.活化细胞(CKR) 4.粘附细胞(AM) 5.参与抗体转运(FcR)
第三节 Ig基因的遗传控制：
一 、基因定位及基因库：
K--2 λ—22号染色体 基因库：H-VDJC K/λ-VJC H:V/51--D/30--J/6 Cμα1.2γ1.2.3.4δε/9 Mu；Delta；Alpha；Gamma；Epsilon IgM IgD IgA IgG IgE K:v/50 J/5 C/1 λ:V/50 J/7 C/7
2 制备过程（preparation） ： 五步
Immune B cell+myeloma→hybridoma →clonal →positive clones expand →get antibody
免疫脾细胞+瘤细胞→杂交瘤细胞→克隆化 →阳性克隆筛选→转感度。 4 应用：诊断治疗及科研工作。
第三章 免疫球蛋白分子 (Immunoglobulin,Ig)
内容简介
Ig概述 2. IgSF概念、组成及功能 3. Ig基因遗传控制 4. 抗体的人工制备 5. Ig异常与疾病
人工制备抗体
中被清除，从而影响到达肿 瘤局部的抗体浓度。
小分子抗体的类型：
（1）Fcb片段， （2）单域抗体， （3）Fv片段， （4）单链抗体（ScFc）， （5）最小识别单位（MRU）， （6）双价小分子抗体 （diabody）， （7）双特异性小分子抗体， （8）微抗体（minibody）。
（二）噬菌体抗体
三、基因工程抗体
概念：又称重组抗体，利
用基因工程技术制备抗体 分子，这是分子水平的抗 体。
基因工程抗体的优势：
去除或减少无关结构，保留 或增加天然抗体特异性和生
物学活性。
基因工程抗体包括：
（一）改造鼠源性抗体
（二）噬菌体抗体 （三）胞内抗体
（一）改造鼠源性抗体
1.人-鼠嵌合抗体
2.改型抗体或人源化抗体 3.小分子抗体
2.改型抗体或人源化抗体
概念：指利用基因工程技术，将
鼠单抗V区中互补性决定区（CDR）
序列取代人源抗体CDR序列，重
构成既具有鼠源性单抗的特异性
又保持人抗体亲和力的CDR移植
抗体。
改型抗体或人源化抗体的特点：
保留亲本鼠单克隆抗体的亲 和力和特异性，又降低了其
异源性，有利应用于人体。
3.小分子抗体
二、单克隆抗体
概念：1975年，Kohler和 Milstein在自然杂交基础上 创建杂交瘤技术，其产生的 抗体只针对单一程示意图
单克隆抗体的特点：
•高特异性
•高均质性
单克隆抗体的应用：
1、在血清学技术方面, 2、在免疫学基础研究方面, 3、在抗原纯化方面, 4、在肿瘤治疗方面，如生物导 弹, 5、用于制备抗独特型抗体疫苗。
（3）细菌增殖快，培养成本低，适
合大规模生产，为临床上大量应用
小分子抗体的类型：
（1）Fcb片段， （2）单域抗体， （3）Fv片段， （4）单链抗体（ScFc）， （5）最小识别单位（MRU）， （6）双价小分子抗体 （diabody）， （7）双特异性小分子抗体， （8）微抗体（minibody）。
（二）噬菌体抗体
三、基因工程抗体
概念：又称重组抗体，利
用基因工程技术制备抗体 分子，这是分子水平的抗 体。
基因工程抗体的优势：
去除或减少无关结构，保留 或增加天然抗体特异性和生
物学活性。
基因工程抗体包括：
（一）改造鼠源性抗体
（二）噬菌体抗体 （三）胞内抗体
（一）改造鼠源性抗体
1.人-鼠嵌合抗体
2.改型抗体或人源化抗体 3.小分子抗体
2.改型抗体或人源化抗体
概念：指利用基因工程技术，将
鼠单抗V区中互补性决定区（CDR）
序列取代人源抗体CDR序列，重
构成既具有鼠源性单抗的特异性
又保持人抗体亲和力的CDR移植
抗体。
改型抗体或人源化抗体的特点：
保留亲本鼠单克隆抗体的亲 和力和特异性，又降低了其
异源性，有利应用于人体。
3.小分子抗体
二、单克隆抗体
概念：1975年，Kohler和 Milstein在自然杂交基础上 创建杂交瘤技术，其产生的 抗体只针对单一程示意图
单克隆抗体的特点：
•高特异性
•高均质性
单克隆抗体的应用：
1、在血清学技术方面, 2、在免疫学基础研究方面, 3、在抗原纯化方面, 4、在肿瘤治疗方面，如生物导 弹, 5、用于制备抗独特型抗体疫苗。
（3）细菌增殖快，培养成本低，适
合大规模生产，为临床上大量应用
详细介绍抗体的生产制备
添加 标题
抗体的人工进化技术的流程：抗体的人工进化技术包括抗体基因的突变、重组、表达、筛选和选择等步骤。 通过这些步骤可以获得具有更高亲和力、更低免疫原性、更稳定等特性的抗体。
添加 标题
抗体的人工进化技术的应用：抗体的人工进化技术广泛应用于药物研发、生物治疗、诊断试剂等领域。通过 该技术可以获得针对特定疾病靶点的抗体用于治疗和诊断疾病。
随着肿瘤免疫疗 法、自身免疫性 疾病等领域的快 速发展抗体药物 的需求量将进一 步增加。
抗体药物的研发 和生产技术不断 创新为抗体药物 的产业化发展提 供了有力支持。
抗体药物的国际 市场竞争激烈国 内企业也在逐步 崛起未来发展前 景广阔。
抗体药物的生产工艺和质量控制
抗体药物的细胞 培养技术：介绍 细胞培养的基本 原理、培养基的 选择与优化、细 胞培养的过程控 制等方面的知识。抗体药物的来自发和注册审批流程添加 标题
抗体药物的研发：从靶点发现到临床试验阶段需要经过大量的实验和验证以确保药物的安全性和有效性。
添加 标题
注册审批流程：新药在进入市场前需要经过国家药品监管部门的注册审批。这一过程需要提供大量的数据和 资料包括药效、安全性、生产质量等方面的信息。
添加 标题
抗体药物的产业化：随着技术的不断发展抗体药物的生产已经实现了产业化。产业化可以大大提高生产效率 和降低成本使更多的患者能够受益于抗体药物的治疗。
02 抗体的生产过程
抗体的来源和制备方法
抗体的来源：动物免疫血清、单克隆抗体 制备方法：杂交瘤技术、基因工程、噬菌体展示技术等
免疫原的制备和免疫动物的接种
免疫原的制备：将抗原物质与佐剂混合形成免疫原以增强免疫反应。 免疫动物的接种：将免疫原注射到动物体内刺激动物产生特异性抗体。 接种途径：可采用皮下、皮内、肌肉注射等多种途径进行免疫接种。 接种剂量：根据动物种类、免疫原性质等因素确定适当的接种剂量。
人单克隆抗体制备
人单克隆抗体制备一、引言人单克隆抗体是由一种单一的免疫细胞克隆产生的抗体，具有高度特异性和亲和力。
与传统的多克隆抗体相比，人单克隆抗体具有更好的一致性和稳定性，因此在医学研究和临床应用中具有重要意义。
二、制备方法人单克隆抗体的制备可以通过以下步骤完成：1. 免疫原选择：选择与目标疾病相关的适当免疫原，如病毒、细菌、肿瘤抗原等。
2. 免疫动物免疫：将免疫原注射到合适的动物体内，如小鼠、大鼠等，以激发免疫反应。
3. 混合细胞免疫：从免疫动物中获取免疫细胞，如B细胞，与骨髓细胞融合，形成杂交瘤细胞。
4. 杂交瘤细胞筛选：使用选择性培养基筛选出能够产生目标抗体的杂交瘤细胞。
5. 单克隆细胞扩增：将合适的杂交瘤细胞注射到小鼠或裸鼠体内，获得单个克隆的杂交瘤细胞。
6. 抗体表达和纯化：将单克隆细胞培养并收集上清液，通过亲和层析、离子交换层析等技术纯化目标抗体。
三、应用领域人单克隆抗体在医学领域有广泛的应用，主要包括以下几个方面：1. 治疗：人单克隆抗体可以用于治疗各种疾病，如癌症、自身免疫性疾病等。
通过与靶标分子结合，抑制病理过程或刺激免疫系统，达到治疗效果。
2. 诊断：人单克隆抗体可以作为诊断试剂，用于检测疾病的标志物或特定分子。
例如，通过检测血清中的特定抗体可以判断是否感染某种病原体。
3. 研究工具：人单克隆抗体可以作为研究工具，用于研究特定分子的功能、相互作用等。
例如，可以使用单克隆抗体来检测蛋白质在细胞中的定位和表达水平。
4. 药物研发：人单克隆抗体也可以作为药物研发的载体。
通过将药物结合到抗体上，可以提高药物的靶向性和稳定性，减少副作用。
四、发展前景人单克隆抗体制备技术的不断发展，为医学研究和临床治疗带来了巨大的机遇。
随着基因工程和生物技术的进步，越来越多的人单克隆抗体将被制备出来，并在各个领域得到广泛应用。
然而，人单克隆抗体的制备过程还存在一些挑战和限制。
例如，制备过程中可能出现杂交瘤细胞的不稳定性和纯化困难等问题。
第三章 人工抗体的制备
h
9
五、单克隆抗体的应用
（一）在血清学技术方面。
（二）在免疫学基础研究方面。
（三）在肿瘤治疗方面。如生物导弹。
（四）在抗原纯化方面。
h
10
第三节 基因工程抗体
一、概念： 利用基因工程技术制备的抗体分子，称为基因工程抗体。这是分子水平的抗体。
优势：去除或减少 无关结构，保留或 增加天然抗体特异 性和生物学活性。
五、全套抗体基因库
h
15
第四节 催化抗体
一、概念： 是具有催化活性的免疫球蛋白，也叫抗体酶。具有抗体的高度选择性和酶的高效催化性。
优点： 具有抗体的高
度选择性和酶的高
效催化性。
h
16
二、催化抗体的制备：
如：细胞融合法、基因工程抗体技术、引入辅助因子法等。
三、催化抗体的应用：
如：在抗肿瘤方面的应用。在戒毒上也有重要应用价值。
h
17
h
11
基本制备过程：
h
12
一、嵌合抗体：
是指在同一抗体分 子中含有不同种属来 源抗体分子片段的抗 体。
嵌合抗体多为“鼠-
人”类型。
h
13
二、重构抗体：
将鼠抗体超变区基因嵌入人抗体Fab骨架区编码基因中，再将 此DNA片段与人Ig恒定区基因相连，转染杂交瘤细胞，并表达嵌合的V 区抗体。
三、单链抗体：
单
需适当选择 产生高纯度抗体
无 悬浮培养：0.01~0.05
中空纤维： 小鼠
体外培养液：无7
三、建立B细胞杂交瘤与单克隆抗体生产基本过程
h
8
四、单克隆抗体的优势
高度均一性： 纯度很高的均一性抗体
高度专一性： 只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应。
[课件]第3章抗体的人工制备PPT
![[课件]第3章抗体的人工制备PPT](https://img.taocdn.com/s3/m/251c4063be1e650e52ea9944.png)
一、嵌合抗体
嵌合抗体 （chimeric antibody)是指同一 抗体分子中含有不同种属来源抗体片段 的看体，又称杂种抗体．主要有“鼠－ 人类型。”Fab或Ｆ（ab）2来源于鼠类， Fc来源于人类。这种杂交瘤细胞分泌的 抗体特异性和亲和力与原杂交瘤细胞相 同，但减少了鼠源性成分。
二、重构抗体
为进一步减少鼠源蛋白在嵌合抗体中 的含量，将鼠抗体超变区基因嵌入人 抗体Fab骨架区的编码基因中，在将 此基因片段与人Ig恒定区基因相连， 然后转染杂交瘤细胞，使之表达V区 抗体，即为重构抗体（reshaping antibody）
三、单链抗体
单链抗体（single—chain antibody）又 称Fv分子。由VL区氨基酸序列VH区氨 基酸序列经肽连接物（linker）连接而成。 肽连接物还可以将药物、毒素或同位素 与单链抗体相连。这种抗体分子小，免 疫原性低；在血清中清除快；无FC片段， 避免非特异性杀伤；能进入实体瘤周围 的微循环等。
四、Ig相关分子
将抗体的部分片段连接到一些有治 疗作用的毒素或药物上，取代Fc片 段，可直接发挥毒素或药物的治疗 作用，起“生物导弹”作用。 例如：CD4免疫黏附素治疗AIDS。
五、噬菌体抗体
噬菌体抗体（phage antibody）是 将一直特异性抗体分子的所有V区 基因在噬菌体中构成基因库，用噬 菌体感染细菌，模拟免疫选择过程， 具有相应特异性重链和轻链可变区 即可在噬菌体表面呈现出来。这种 技术成为噬菌体表面展示技术 （phage display technology）
脾
B 细 胞
骨髓瘤小鼠 取腹水
抗原
骨髓瘤细胞 + PEG, 融合 杂交瘤细胞
Ab1 Ab2 Ab3 Ab4
《医学免疫学 》教学课件：第三章 抗体
抗体主要存在于血清和体液中，是介导特异性体液免疫作 用的重要效应分子。它们能与病原体等相应抗原特异性结 合，并在其他固有免疫细胞和分子协助下产生抗感染免疫 效应。
表 达 于 B 细 胞 表 面 的 膜 型 免 疫 球 蛋 白 M （ membrane immunoglobulin M, mIgM）为IgM 单体，其胞外区结构与 血液中的IgM基本相同，且具有特异性识别结合相应抗原 表位的功能，故称之为B细胞抗原受体（BCR）。
多克隆抗体：由多个B细胞克隆产生的针对多种抗原 表位的混合抗体。
特点：来源广泛，制备容易，但特异性不高，易发生 交叉反应。
单克隆抗体：由单一克隆杂交瘤细胞产生的只识别 某一特定抗原表位的同源抗体。
特点：结构高度专一，特异性强，效价高，少或无交 叉反应，可大量生产。
单克隆抗体的制备原理和方法：
与Tiselius一起，用电 泳证明了抗体是丙种球 蛋白。
Elvin A. Kabat （1914-2000）
Adapted from A. Tiselius and E. A. Kabat, J. Exp. Med. 1939, 69:119
The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1972
同种型
同种异型
独特型
（种属型标志） （个体型标志） （细胞型标志）
同种型
同一种属所有个体抗体分子共有的抗原特异性， 为种属型标志。 同种型抗原决定基位于CH、CL。 根据CH抗原特异性的不同将抗体分成五类。 亚类：因重链恒定区内某些抗原表位及二硫键数 目和位置存在差异，IgG分四个亚类（IgG1～4）， IgA分两个亚类（IgA1～2）。 根据CL抗原特异性的不同将Ig分成两型：κ、λ。 亚型：λ型轻链恒定区内由于某些抗原表位存在差 异，可将其分为λ1～4四个亚型。
表 达 于 B 细 胞 表 面 的 膜 型 免 疫 球 蛋 白 M （ membrane immunoglobulin M, mIgM）为IgM 单体，其胞外区结构与 血液中的IgM基本相同，且具有特异性识别结合相应抗原 表位的功能，故称之为B细胞抗原受体（BCR）。
多克隆抗体：由多个B细胞克隆产生的针对多种抗原 表位的混合抗体。
特点：来源广泛，制备容易，但特异性不高，易发生 交叉反应。
单克隆抗体：由单一克隆杂交瘤细胞产生的只识别 某一特定抗原表位的同源抗体。
特点：结构高度专一，特异性强，效价高，少或无交 叉反应，可大量生产。
单克隆抗体的制备原理和方法：
与Tiselius一起，用电 泳证明了抗体是丙种球 蛋白。
Elvin A. Kabat （1914-2000）
Adapted from A. Tiselius and E. A. Kabat, J. Exp. Med. 1939, 69:119
The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1972
同种型
同种异型
独特型
（种属型标志） （个体型标志） （细胞型标志）
同种型
同一种属所有个体抗体分子共有的抗原特异性， 为种属型标志。 同种型抗原决定基位于CH、CL。 根据CH抗原特异性的不同将抗体分成五类。 亚类：因重链恒定区内某些抗原表位及二硫键数 目和位置存在差异，IgG分四个亚类（IgG1～4）， IgA分两个亚类（IgA1～2）。 根据CL抗原特异性的不同将Ig分成两型：κ、λ。 亚型：λ型轻链恒定区内由于某些抗原表位存在差 异，可将其分为λ1～4四个亚型。
3.抗体的人工制备
第三章抗体的人工制备由一个祖先细胞增殖而形成的一群细胞称为克隆(clone，无性繁殖系)一个B细胞克隆只能产生针对一种抗原表位的抗体;一个浆细胞只能分泌一种类型的抗体第1节多克隆抗体一、多克隆抗体的概念①将抗原物质经不同途径注入动物体内，经数次免疫后采取动物血液，分离出血清，由此获得的抗血清即为多克隆抗体(polyclonal antibody, PcAb)，简称多抗。
②从天然感染康复动物采取的血清。
无论是细菌抗原，还是病毒抗原，都含有多种抗原成分。
即使是纯蛋白质抗原分子也含有多种抗原表位，进入机体后可激活多种淋巴细胞克隆，机体可产生针对各种抗原或抗原决定簇(表位)的抗体, 由此获得的抗血清是一种多克隆的混合抗体，具有高度的异质性。
进一步讲，针对同一抗原决定簇的抗体仍是由不同B细胞克隆产生的不同质的抗体。
二、多克隆抗体制备的基本过程1.抗原制备2.动物免疫3.试血测定抗体效价4.血清分离与保存5.多抗纯化与标记三、多克隆抗体的用途1.用于血清学实验——作为阳性血清或标记抗体(血清凝集实验/沉淀实验/补体结合实验/中和实验/免疫标记技术/免疫转印技术) 2.治疗制剂——可用于一些传染病的紧张预防和治疗第 1 页/共 6 页第2节单克隆抗体一、单克隆抗体的概念单克隆抗体是指由一个B细胞分化增殖的子代细胞(浆细胞)产生的针对单一抗原决定簇的抗体。
将产生特异性抗体的B细胞与骨髓瘤细胞融合，形成B细胞杂交瘤，这种杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞无限繁殖的特性，又具有B细胞分泌特异性抗体的能力，由克隆化的B细胞杂交瘤产生的抗体即为单克隆抗体(monoclonal antibody，McAb)，简称单抗。
二、单抗与多抗的比较与多克隆抗体比较，单克隆抗体具有无可比拟的优越性：高特异性、高纯度、均质性好、亲和力不变、重复性强、效价高、成本低并可大量生产等。
三、建立B细胞杂交瘤与单克隆抗体的制备1.B细胞的制备小鼠脾细胞悬液2.骨髓瘤细胞的制备免疫相同来源的小鼠骨髓瘤细胞3.饲养细胞的决定融合之前, 将饲养细胞制成所需的浓度参加培养板孔中。
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三、多克隆抗体制备过程
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第二节 单克隆抗体
一、概念： 是指由一个B细胞分化增殖的子代细胞
（浆细胞）产生的针对单一抗原决定簇的抗 体，简称单抗。
特点：高特异性、高均一性
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二、单抗与多抗的比较
特性
对免疫原的要求
抗体产生细胞 同质性 特异性
稳定性 标准化 交叉反应 沉淀反应
多抗
免疫原纯度高， 抗体纯度才高 多克隆性 高度异质
较高，与抗原上 多种决定簇结合
较好 较难 很常见
有
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单抗
不纯的抗原即可 产生高纯度抗体 单克隆性 高度同质 高，与特定 决定簇 结合 较差 简单 不常见 大多数没有
二、单抗与多抗的比较
特性
适用的血清学实验
供应量 有效抗体含量 0.01~0.05
（mg/mL） 1.0~5.0
1.0~5.0 无关Ig含量 （mg/mL） 0.5~1.0
噬菌体抗体：将已知特异性的抗体分子的所有V 区基因在噬菌体中构建基因库，用噬菌体感染细菌， 模拟免疫选择过程，使具有相应特异性的重链和轻 链可变区在噬菌体表面呈现出来。
五、全套抗体基因库
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第四节 催化抗体
一、概念： 是具有催化活性的免疫球蛋白，也叫抗体
酶。具有抗体的高度选制备的抗体分子，称
为基因工程抗体。这是分子水平的抗体。
优势：去除或减少 无关结构，保留或 增加天然抗体特异 性和生物学活性。
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基本制备过程：
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一、嵌合抗体：
是指在同一抗体分 子中含有不同种属来 源抗体分子片段的抗 体。
嵌合抗体多为 “鼠人”类型。
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二、重构抗体：
将鼠抗体超变区基因嵌入人抗体Fab骨架区编 码基因中，再将此DNA片段与人Ig恒定区基因相连， 转染杂交瘤细胞，并表达嵌合的V区抗体。
三、单链抗体：
是将 Ig 的 H 链和 L 链的 V 区基因相连， 转染大肠杆菌表达的抗体分子，又称单链 FV 分子。
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四、其他基因工程抗体：
如:Ig相关分子：将抗体分子部分片段连接到与抗体 无关的序列上得到。
优点： 具有抗体的高
度选择性和酶的高 效催化性。
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二、催化抗体的制备：
如：细胞融合法、基因工程抗体技术、引入辅 助因子法等。
三、催化抗体的应用：
如：在抗肿瘤方面的应用。在戒毒上也有 重要应用价值。
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第三章 抗体的人工制备
人工抗体有四类： 多克隆抗体 单克隆抗体 基因工程抗体 催化抗体
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第一节 多克隆抗体
一、概念： 采用传统免疫方法，将抗原物质经
不同途径注入动物体内，数次免疫后采 血，分离血清，由此获得抗血清即为多 克隆抗体。简称多抗。
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二、多克隆抗体用途
1.用于抗原物质的鉴别、定位、分析和提纯。 2.作为疾病的诊断、检疫试剂。 3.作为人和动物的某些疾病的治疗制剂。
其他血清蛋白
多抗
适用大多数 抗体纯度才高
有限 0.1~1.0
10~15
有 精品课件
单抗
需适当选择 产生高纯度抗体
无限 悬浮培养：
中空纤维：
小鼠腹水：
体外培养液：无 小鼠腹水：
体外培养：少量
三、建立B细胞杂交瘤与单克隆抗体生 产基本过程
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四、单克隆抗体的优势
高度均一性： 纯度很高的均一性抗体
高度专一性： 只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应。
大量产生及稳定性： 杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖之传代。
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五、单克隆抗体的应用
（一）在血清学技术方面。 （二）在免疫学基础研究方面。 （三）在肿瘤治疗方面。如生物导弹。 （四）在抗原纯化方面。 （五）用于制备抗独特型抗体疫苗。
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第三节 基因工程抗体
三、多克隆抗体制备过程
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第二节 单克隆抗体
一、概念： 是指由一个B细胞分化增殖的子代细胞
（浆细胞）产生的针对单一抗原决定簇的抗 体，简称单抗。
特点：高特异性、高均一性
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二、单抗与多抗的比较
特性
对免疫原的要求
抗体产生细胞 同质性 特异性
稳定性 标准化 交叉反应 沉淀反应
多抗
免疫原纯度高， 抗体纯度才高 多克隆性 高度异质
较高，与抗原上 多种决定簇结合
较好 较难 很常见
有
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单抗
不纯的抗原即可 产生高纯度抗体 单克隆性 高度同质 高，与特定 决定簇 结合 较差 简单 不常见 大多数没有
二、单抗与多抗的比较
特性
适用的血清学实验
供应量 有效抗体含量 0.01~0.05
（mg/mL） 1.0~5.0
1.0~5.0 无关Ig含量 （mg/mL） 0.5~1.0
噬菌体抗体：将已知特异性的抗体分子的所有V 区基因在噬菌体中构建基因库，用噬菌体感染细菌， 模拟免疫选择过程，使具有相应特异性的重链和轻 链可变区在噬菌体表面呈现出来。
五、全套抗体基因库
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第四节 催化抗体
一、概念： 是具有催化活性的免疫球蛋白，也叫抗体
酶。具有抗体的高度选制备的抗体分子，称
为基因工程抗体。这是分子水平的抗体。
优势：去除或减少 无关结构，保留或 增加天然抗体特异 性和生物学活性。
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基本制备过程：
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一、嵌合抗体：
是指在同一抗体分 子中含有不同种属来 源抗体分子片段的抗 体。
嵌合抗体多为 “鼠人”类型。
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二、重构抗体：
将鼠抗体超变区基因嵌入人抗体Fab骨架区编 码基因中，再将此DNA片段与人Ig恒定区基因相连， 转染杂交瘤细胞，并表达嵌合的V区抗体。
三、单链抗体：
是将 Ig 的 H 链和 L 链的 V 区基因相连， 转染大肠杆菌表达的抗体分子，又称单链 FV 分子。
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四、其他基因工程抗体：
如:Ig相关分子：将抗体分子部分片段连接到与抗体 无关的序列上得到。
优点： 具有抗体的高
度选择性和酶的高 效催化性。
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二、催化抗体的制备：
如：细胞融合法、基因工程抗体技术、引入辅 助因子法等。
三、催化抗体的应用：
如：在抗肿瘤方面的应用。在戒毒上也有 重要应用价值。
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第三章 抗体的人工制备
人工抗体有四类： 多克隆抗体 单克隆抗体 基因工程抗体 催化抗体
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第一节 多克隆抗体
一、概念： 采用传统免疫方法，将抗原物质经
不同途径注入动物体内，数次免疫后采 血，分离血清，由此获得抗血清即为多 克隆抗体。简称多抗。
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二、多克隆抗体用途
1.用于抗原物质的鉴别、定位、分析和提纯。 2.作为疾病的诊断、检疫试剂。 3.作为人和动物的某些疾病的治疗制剂。
其他血清蛋白
多抗
适用大多数 抗体纯度才高
有限 0.1~1.0
10~15
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单抗
需适当选择 产生高纯度抗体
无限 悬浮培养：
中空纤维：
小鼠腹水：
体外培养液：无 小鼠腹水：
体外培养：少量
三、建立B细胞杂交瘤与单克隆抗体生 产基本过程
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四、单克隆抗体的优势
高度均一性： 纯度很高的均一性抗体
高度专一性： 只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应。
大量产生及稳定性： 杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖之传代。
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五、单克隆抗体的应用
（一）在血清学技术方面。 （二）在免疫学基础研究方面。 （三）在肿瘤治疗方面。如生物导弹。 （四）在抗原纯化方面。 （五）用于制备抗独特型抗体疫苗。
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第三节 基因工程抗体