肿瘤的基因治疗

此外，还有Nishihara等用反转录病毒 载体将IFN-g、IL-4、IL-6或TNF-a等基因 分别转染至小鼠细胞株J774A.1，发现该
细胞对肿瘤细胞的杀伤活性明显增强。 Mizuno等则将IFN-g基因转染至LAK细胞 增强其杀肿瘤活性。
树突状细胞介导的基因治疗
DC细胞是人体最有效的APC，能致敏 和激活静止T细胞和B细胞。T细胞直接或 通过分泌细胞因子，B细胞通过分泌抗体， 作用于靶细胞或病原体上，最终消灭靶细 胞或病原体。最近几年，DC细胞作为肿 瘤生物治疗和基因治疗的方案已获FDA批 准并进入III期临床。该疗法比传统的LAK 细胞疗法和CIK细胞疗法具有更特异及更 强大的杀瘤活性，被誉为当前肿瘤生物治 疗和基因治疗最有效的手段。
肿瘤的基因治疗
现已证明，肿瘤的发生是由于某些原 癌基因的激活、抑癌基因的失活以及凋亡 相关基因的改变导致细胞增殖分化和凋亡 失调的结果。针对肿瘤发生的ຫໍສະໝຸດ Baidu传学背景， 将外源性目的基因引入肿瘤细胞或其他体 细胞内以纠正过度活化或补偿缺陷的基因， 从而达到治疗肿瘤的目的，即为肿瘤的基 因治疗。
目前，肿瘤基因治疗的主要途径包括： 抑癌基因治疗，癌基因治疗，免疫基因治 疗，药物敏感基因（自杀基因）治疗，多 药耐药基因治疗，肿瘤血管基因治疗等。
DC细胞增强抗肿瘤免疫反应的另一机制是编 码CD40配体的基因转录。CD40配体的表达可通 过DC 已表达的CD40之间的相互作用自动激活， 这可直接刺激抗原特异性的CD8＋T细胞而无需 CD4＋T细胞的介导。事实上，在小鼠黑色素瘤
中，这种机制可引起肿瘤退化，生存期限延长。 Kikuchi等研究发现，同时向肿瘤内注射表达有 CD40的腺病毒载体和改造过的DC，可引发肿瘤
一.针对抑癌基因的基因治疗
研究表明，几乎一半的人类肿瘤均存在 抑癌基因的失活，可见抑癌基因的失活与 肿瘤的生长有着密切的关系。因此，将正 常的抑癌基因导入肿瘤细胞中，以补偿和 代替突变或缺失的抑癌基因，达到抑制肿 瘤的生长或逆转其表型的抑癌基因治疗策 略，必将成为肿瘤基因治疗中的一种重要 的治疗模式。
特异性的免疫反应，抑制肿瘤生长，并增加肿瘤 CD40配体的表达。因此，肿瘤细胞转基因CD40 配体的表达可明显增强DC表达CD40，从而增强 其抗肿瘤活性
针对肿瘤细胞的免疫基因治疗
增加肿瘤细胞表达细胞因子
Shiau等用含IFN-γ的逆转录病毒进行膀胱癌切除后的免疫基 因治疗，即增加肿瘤细胞在局部产生IFN-γ，以诱导淋巴细胞的 反应而达到治疗目的。Hull等用伴有IL-12/B7（AdmIL-12）表达 的腺病毒感染具有较差免疫原性的RM-9鼠前列腺癌模型，发现 在感染的RM-9鼠肿瘤细胞中AdmIL12/B7能介导IL-12分泌和增加 B7-1在细胞表面的表达，明显减少肿瘤体积和增加鼠的存活率。 Lv等用腺病毒介导的IL-2基因及B7-1基因联合转染G422胶质母细 胞瘤，结果发现肿瘤生长明显减慢，脑内接种的动物存活期明显 延长，NK、LAK和CTL的杀伤活性增强，说明IL-2基因转移确实 能使肿瘤细胞的致瘤原性下降。
1. 二.针对癌基因的治疗
2. 癌基因是指细胞基因组中具有能够使正常
细胞发生恶性转化的一类基因。因此，这种基 因在人的正常细胞中就已存在。在绝大部分情 况下，这类潜在的癌基因处于不表达状态，或 其表达水平不足以引起细胞的恶性转化，或野 生型蛋白的表达不具有恶性转化作用。但是当 这些基因改变时，就会导致基因异常活化而启 动细胞生长，从而发生恶性转化。如Ras、Myc、 Src等基因，由于突变而使其功能处于异常活跃 状态，不断地激活细胞内正性调控细胞生长和 增殖的信号传导途径，促使细胞异常生长。因 此将癌基因反义序列导入癌细胞使之封闭，是 抑制肿瘤的另一种方式。
1. Wei等用反义Myc(片段构建)重组腺病 毒载体Ad-As-Myc，发现能显著抑制肺腺 癌GLC-82和SPC-A-1细胞生长和克隆形成， 并诱导其凋亡。RT-PCR和Western印迹显 示MYC基因表达下降，凋亡相关基因Bcl2和Bax分别出现下调和上调。瘤内注射 Ad-As-Myc可抑制裸鼠皮下移植肿瘤的生 长(抑瘤率为52％)。对肝癌细胞BEL-7402、 HCC-9204、QSG-7701和SMMC-7721、胃 癌细胞MGC-803、SGC-823均有抑制作用， 表明反义Myc具有广谱的抗肿瘤作用。
比较成熟的制备DC细胞的方法是采用抗原基因、 抗原和细胞因子来转染和修饰DC细胞。常用的有： ①抗原肽刺激和各种抗原基因，如大肠癌-APC、 CL3；宫颈癌-E7、E6; 前列腺癌-FTI-1、PSA等；②
肿瘤提取物；③细胞因子。动物实验结果表明，转
导肿瘤特异性抗原基因的DC细胞可使肿瘤组织减小。 Wang等用小鼠肝癌总RNA转染的树突状细胞体外诱 导特异性细胞毒T淋巴细胞的研究发现，转染的DC 其组织相容性分子(MHC-I、II)及共刺激分子(B7-1、 B7-2)表达明显增高，刺激同基因型小鼠T细胞可使 增殖能力增强，且还能诱导Hepa1-6肝癌细胞特异性 的CTL产生。Fan等构建的AFP-DC（AFP，Alpha fetoprorein, 甲胎蛋白，在原发性肝癌中呈高表达） 瘤苗不仅能产生和分泌AFP，而且还能上调自身的 B7分子和MHC分子，明显刺激T细胞增殖及提高 CTL的杀伤作用。
三.免疫基因治疗
1. 针对免疫应答细胞：常用的免疫细胞有 两种：免疫效应细胞和树突状细胞。
2. 针对肿瘤细胞的免疫基因治疗
免疫效应细胞介导的基因治疗
将细胞因子导入抗肿瘤效应细胞中以增强抗肿瘤作用，
并以免疫效应细胞为载体将细胞因子基因携带至体内靶细胞， 使细胞因子局部浓度提高，从而更有效地激活肿瘤局部及周 围的抗肿瘤免疫功能。常用的免疫效应细胞有TIL、LAK、 Mφ、NK等，可供选择的目的基因有白介素、干扰素、肿瘤 坏死因子、集落刺激因子、趋化因子等。在这些目的基因中， 早期尤以IL-2的研究最多。Tam等根据NK细胞的杀伤活性及 扩增能力等依赖于IL-2的特点，将IL-2基因转染至一株对多 种肿瘤细胞具有杀伤作用的人NK细胞株NK-92(依赖外源IL2)，构建了不再依赖外源IL-2的新型NK细胞株NK-92MI(高 表达IL-2)及 NK-92CI(低表达IL-2)，发现NK-92MI及NK92CI对肿瘤细胞株(K562、Raji等)的杀伤活性与NK-92相比 无显著差异，也不影响正常的造血前体细胞的功能。