大鼠肺微血管内皮细胞使用说明
丙戊酸钠对烧伤休克大鼠肺微血管内皮细胞活化和通透性的影响
丙戊酸钠对烧伤休克大鼠肺微血管内皮细胞活化和通透性的影响周国勇;胡森;贾赤宇【摘要】目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)对大鼠50% TBSA Ⅲ度烧伤休克模型肺微血管内皮细胞(PMEC)活化和通透性的影响.方法雄性SD大鼠随机分为4组:假烫组,烫伤组(给予50%TBSA Ⅲ度烫伤),烫伤+VPA组及烫伤+2M2P组(烫伤后即刻皮下注射VPA 300 mg/kg或对照药物2-甲基-2-戊烯酸,即2M2P 300 mg/kg).分别于烫伤后2 h、6 h及12 h,伊文斯蓝(EB)染色法检测肺血管通透性;采血检测红细胞压积(HCT)及脏器功能指标;HE染色观察肺组织病理变化,干湿重法检测肺组织含水率;免疫组化法检测肺组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)、E-选择素(E-selectin)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达;TUNEL法检测肺微血管内皮细胞(PMEC)凋亡率.结果与烫伤组比较,伤后2 h及6 h烫伤+VPA 组和烫伤+2M2P组血HCT和肺组织含水率降低,肺血管通透性明显降低(P<0.05),肺水肿等病理改变减轻;烫伤+VPA组PMEC凋亡率低于烫伤+2M2P组(P<0.05).烫伤+VPA组VEGF、E-selectin、ICAM-1阳性率均显著低于烫伤组和烫伤+2M2P组(P<0.05).结论 VPA能抑制烧伤休克大鼠肺血管内皮细胞的活化以及凋亡,从而减少血管通透性增加引起的血容量丢失.【期刊名称】《解放军医药杂志》【年(卷),期】2013(025)012【总页数】5页(P11-15)【关键词】烧伤;休克;丙戊酸;肺微血管内皮细胞;大鼠;Sprague-Dawley【作者】周国勇;胡森;贾赤宇【作者单位】100091,北京,解放军309医院烧伤整形科;100091,北京,解放军309医院烧伤整形科;100091,北京,解放军309医院烧伤整形科【正文语种】中文【中图分类】R-332严重烧伤早期往往出现大量体液和血浆渗出到体外及第三间隙，其引起的低血容量性休克是严重烧伤后器官功能损伤及预后不良的病理生理基础。
sciencell内皮细胞培养基说明书
sciencell内皮细胞培养基说明书Sciencell内皮细胞培养基是一种特异性和高效性培养内皮细胞的基质，能够有效地维持和生长内皮细胞，并促进它们的分化和功能发挥。
以下是Sciencell内皮细胞培养基的详细说明：一、培养基配方Sciencell内皮细胞培养基主要包含以下成分：1. DMEM/F12培养基2. 10% FBS3. 内皮细胞生长因子（EGF、VEGF、FGF、呋喃丙酸等）4. 抗生素/抗菌素（penicillin和streptomycin）5. L-酪氨酸、谷氨酰胺和葡萄糖等。
二、适用范围Sciencell内皮细胞培养基适用于以下内皮细胞的培养：1. 人类内皮细胞（HEC、HUAEC、HPMEC等）2. 小鼠内皮细胞（MEC、MAEC等）3. 大鼠内皮细胞（REPEC、RAEC等）4. 其他动物内皮细胞。
三、培养条件1. 培养温度：37℃2. CO2浓度：5%3. 外源性添加物：Sciencell内皮细胞培养基中已经包含了必要的营养因子、生长因子和抗生素/抗菌素，不需要额外添加外源性添加物。
4. 培养密度：内皮细胞的培养密度应当根据不同细胞类型和研究需要适当调整，一般为1-3x10^4 cells/cm2。
5. 培养时间：培养时间应当根据不同细胞类型和实验需要适当调整，一般为4-7天。
四、保存条件Sciencell内皮细胞培养基应当在4℃低温保存，避免阳光直射和冻结。
保存期长达6个月，但是在保质期内使用会更好。
打开后，建议在一个月内使用完毕。
五、使用说明1. 移液操作：使用Sciencell内皮细胞培养基时应当采用无菌条件下的移液操作，并避免出现气泡和异物。
2. 细胞接种：将内皮细胞接种到预先涂覆的细胞培养底物上，并根据需要进行细胞划分和培养状态监测。
3. 细胞增殖：使用Sciencell内皮细胞培养基可促进内皮细胞的增殖和生长，建议每3-4天更换新的培养基。
4. 细胞检测：在细胞培养期间需监测细胞的培养状态、生长状态和增殖情况。
急性肺损伤大鼠呼吸膜 AQP1和 AQP5的表达
急性肺损伤大鼠呼吸膜 AQP1和 AQP5的表达岳胜;朱平;岳磊;乔国华【摘要】目的：确定水通道蛋白 AQP1及 AQP5是否在大鼠肺泡毛细血管膜（呼吸膜）表达，进而研究急性肺损伤（ALI）大鼠 AQP1和 AQP5的表达调节及激素干预的作用。
方法采用亲和的抗人 AQP1和 AQP5抗体，应用免疫组化及免疫电镜的方法研究AQP1及AQP5在呼吸膜的分布。
选用肺泡内灌注脂多糖（LPS）制作大鼠 ALI 动物模型，研究 ALI 时呼吸膜 AQP1及 AQP5的变化。
结果免疫染色显示 AQP1主要表达于正常肺组织的微血管内皮，而 AQP5主要表达于肺泡 I型上皮细胞。
免疫组化分析进一步表明 LPS 灌注后4h ～48hAQP1及 AQP5在呼吸膜的表达均下降；AQP1蛋白于 LPS 灌注后24h 及激素干预后有部分恢复（P ＜0．05），而 AQP5无这种恢复现象。
结论 ALI 时 AQP1及 AQP5在呼吸膜的表达减少，提示 ALI 时 AQP1和 AQP5的下降表达可能与其液体转运的异常有关。
%Objective To determine if aquaporin1 ( AQP1) and aquaporin5( AQP5) are expressed in the alveolar-capillary membrane in rats, and to investigate the changes of AQP1 and AQP5 expression in the rat with acute lung injury.Methods The distribution of AQP1 and AQP5 in alveolar capillary membrane was investigated by immunohistochemistry and immunoelectron microscopy with affinity-purified antibodies to human AQP1 and AQP5.The possibility that alveolar capillary membrane AQP1and AQP5 undergo altered regulation was studied by a rat model established using intra-tracheal instillation of lipopolysaccharide (LPS).Results Immunolabelling showed that AQP1 was stained primarily in the microvascular endothelium of normal lungs, while AQP5 was expressedin type I pneumocytes. Immunohistochemical analysis showed a significant decrease in the expression of AQP1 and AQP5 in injured lungs at 4 -48 h after LPS instillation.AQP1 protein was resumed partly at 24 h after LPS instillation and steroid administration, whereas AQP5 was unchanged.Conclusions The decreased expressions of AQP1 and AQP5 in injured lungs suggest that both of them may play a role in abnormal fluid transportation.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2016(026)008【总页数】6页(P70-74,90)【关键词】水通道蛋白 1;水通道蛋白 5;急性肺损伤;激素【作者】岳胜;朱平;岳磊;乔国华【作者单位】郑州大学附属洛阳中心医院急诊科，河南洛阳 471000;郑州大学附属洛阳中心医院急诊科，河南洛阳 471000;郑州大学附属洛阳中心医院急诊科，河南洛阳 471000;郑州大学附属洛阳中心医院急诊科，河南洛阳 471000【正文语种】中文【中图分类】R-33临床中，肺水肿的形成涉及肺间质和毛细血管的液体转运，近年来关于肺组织中液体转运的分子机制的研究显示，水通道蛋白(aquaporins，AQPs)是一组在哺乳动物体内表达的水选择通道的分子家族,它们可以增强浆膜面水通透力的功能，因而可以提供快速液体转运的通路[1，2]。
肺纤维化大鼠肺微血管内皮细胞[Ca 2+]i变化及其机制探讨
![肺纤维化大鼠肺微血管内皮细胞[Ca 2+]i变化及其机制探讨](https://img.taocdn.com/s3/m/cd5466731711cc7931b71649.png)
原 代 培 养 肺 微 血 管 内皮 细 胞 ， 利 用 激 光 扫 描 共 聚 焦 显 微 镜 测
定细胞 内［ ｃ ａ “］ ｉ 及 中电导 钙激 活钾 通 道蛋 白 １ （ Ｉ Ｋ ｃ ａ １ ） 表 达， 计算机 图像分 析免疫细胞化学法 Ｉ Ｋ ｃ ａ ｌ的表达 ．结 果 ： 激
光扫描 共 聚 焦 显 微 镜 检 测 Ｐ Ｍ Ｖ Ｅ Ｃ ｓ内 ［ ｃ ａ “］ ｉ ： Ｐ Ｆ组 为
０ ． ０ １ ） ．结论 ： Ｐ Ｆ时 ， 肺微血管 内皮细胞 ［ ｃ ａ ］ ｉ 过载 ， 其发 生
机制可能与 Ｉ Ｋ ｃ ａ 活性 异常有关．
【 关键词 】肺 纤维化 ； 肺微 血管 内皮细胞 ； ［ ｃ ａ ］ ｉ ； 中电导钙
激 活钾 通 道 蛋 白 １
ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ｒ ｅ ｃ ｅ ｉ ｖ ｅ ｄ Ｂ Ｌ Ｍ（ ５ ｍ ｇ ／ ｋ ｇ ）ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｉ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｒ ａ ｃ ｈ ｅ ｌｌ ａ ｙ ， ｗ ｈ ｅ ｒ ｅ —
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・
研 究 原著 ・
文章 编号 ： １ ０ ０ ０ － ２ ７ ９ ０ （ ２ ０ ０ ７ ） １ ３ － １ ２ ３ ８ － ０ ３
肺 纤维 化大 鼠肺 微 血管 内皮 细胞 ［ Ｃ ａ ２ ］ ｉ 变化 及 其 机 制探 讨
南海 燕 ， 崔 光彬 ， 颜林 枫 ， 殷 茜 ， 魏经 国 （ 第四军医大学唐都医院放射科 ， 陕西 西安 ７ １ ０ ０ ３ ８ ）
【 中图号】Ｒ ３ １ ８ ． １ ３
【 文献标识码 】Ａ
０ 引言
近 年来 对肺 纤 维 化 （ ｐ ｕ ｌ ｍ ｏ ｎ ａ ｒ ｙ ｆ ｉ ｂ ｒ ｏ ｓ ｉ Байду номын сангаас ， Ｐ Ｆ） 发 病
大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞使用说明
大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞编号名称规格北京派瑞金GK1003大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞5×105cells/瓶为能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
大鼠II型肺泡上皮细胞简介：1、名称：大鼠II型肺泡上皮细胞2、组织来源：正常大鼠3、规格：25cm2培养瓶4、细胞简介：肺泡上皮细胞由肺泡I型(AECI)上皮细胞和肺泡Ⅱ型(AECII)上皮细胞构成，其比例约为1：2，这两类细胞在功能上和形态上明显不同。
AEC II在数量上比AECI 多，但是即使将AECⅡ顶部的微绒毛计算在内，其所占的肺泡上皮表面面积的比例也不足10%。
AECⅡ呈立方形，胞浆里面含有板层小体是其基本特征，是鉴别AECⅡ的主要依据。
肺泡Ⅱ型上皮细胞是肺泡上皮组织干细胞，在正常的细胞更新和修复过程中，它既可以分化为AECⅡ，也可以通过有丝分裂来维持自身细胞群。
本公司生产的大鼠II型肺泡上皮细胞采用胰酶和胶原酶消化制备而来，细胞总量约为5X105个/瓶，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5、培养基信息：1）培养基类型：M1992）添加因子：FBS、Penicillin、Streptomycin等大鼠II型肺泡上皮细胞使用方法：收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1.取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
血管内皮细胞培养方法
血管内皮细胞培养方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：血管内皮细胞（vascular endothelial cell，VEC）是血管内膜上的一种细胞，它们起着维持血管结构和功能的重要作用。
近年来，血管内皮细胞的培养方法逐渐成为生物医学领域的研究热点之一。
良好的血管内皮细胞培养方法不仅有助于研究心血管疾病的发生机制，还可以为新药的研发提供重要参考依据。
本文将详细介绍血管内皮细胞培养的方法和技巧，希望对相关研究人员和医学工作者有所帮助。
一、血管内皮细胞来源血管内皮细胞可以从多种来源获得，包括人类或动物的血管组织。
通常情况下，从人体的脐带血、外周血或组织中分离得到的血管内皮细胞具有较高的纯度和活性，适合于体外培养。
一些商业生物技术公司也提供血管内皮细胞的原代细胞培养服务，可以方便地购买到高质量的细胞用于研究。
二、血管内皮细胞培养基的选择血管内皮细胞培养基是培养血管内皮细胞的基本营养液，不同类型的细胞需要不同种类的培养基。
一般来说，常用的血管内皮细胞培养基包括Eagle's minimum essential medium（EMEM）、Dulbecco's modified Eagle's medium（DMEM）和Medium 199等。
这些培养基通常含有必需氨基酸、维生素、矿物质、生长因子、胎牛血清等营养成分，可以提供适宜的环境促进细胞生长。
1、原代细胞的分离和培养将采集到的组织样本进行酶消化处理，分离出血管内皮细胞，并通过贴壁法或悬浮培养法将其传代培养。
在传代培养的过程中，需要定期更换培养基、观察细胞的形态和数量变化，以确保细胞的健康生长。
2、细胞的传代和冻存随着细胞的传代次数增加，细胞的增殖能力和活性逐渐下降，需要进行细胞的传代和冻存。
传代前需要对细胞进行细胞数计数和活力检测，传代后要及时观察细胞的形态和生长情况，确保细胞的健康状态。
3、细胞的实验处理在进行实验前，需要对培养的细胞进行处理，如细胞分裂抑制（如丙酮酸、羟基脲等）、细胞增殖刺激（如VEGF、EGF等）等。
大鼠肺成纤维细胞原代提取及培养实验具体步骤及方法
大鼠肺成纤维细胞原代提取及培养实验具体步骤及方法大鼠肺成纤维细胞原代提取及培养实验具体步骤及方法将大鼠的肺成纤维细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的生长培养基培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。
一、实验材料准备1. 动物出生后1-4天的Wistar乳鼠1只。
2. 试剂PBS、培养液(Hyclone的低糖DMEM，含Hyclone的10%新生牛血清、100 U/ml 青链霉素、1%明胶PBS、0.25%胰酶(含EDTA，GIBCO)，碘酒和酒精绵球。
3. 器械眼科直剪2把、眼科弯剪2把、眼科直镊2把、眼科弯镊2把、玻璃平皿3套，25 cm2塑料培养瓶(Costar)。
二、具体操作1. 明胶包被培养瓶过夜(准备2-3个)，取出明胶，用2 ml培养液冲洗培养瓶一遍，置于超净台中。
2. 解剖取肺：将乳鼠在酒精中浸泡后取出，转移至超净台上的玻璃培养皿中，用碘酒消毒胸部皮肤，再用酒精棉球脱碘。
左手捏紧乳鼠颈背部皮肤以充分展露胸部，右手以眼科直剪剪开皮肤，充分撕拉开，再用酒精棉球消毒，继而以另一把眼科弯剪沿胸骨柄左下缘向上剪开肋骨，然后在切口中间横剪胸骨。
用眼科镊取出肺，置于盛有PBS(含有200U/ml青链霉素)的玻璃平皿中，冲洗去血。
3. 用眼科剪将肺分成几个肺叶，用镊子去除周边的血凝块及纤维组织，用眼科剪剪去肺门处的支气管和血管，再用含有双抗的PBS冲洗1遍。
4. 用眼科弯剪将肺组织剪碎成1 mm3大小，加入含有双抗的PBS，将肺组织块吹打开，静置15 min后，更换新的PBS。
5. 用200 ul微量加样器(最好是超净台中专用的，临用时用酒精绵球好好擦拭枪柄)取200 ul加样枪头一个，剪去尖，在酒精灯上用火焰烧弯。
用枪头吸取组织块接种于培养瓶中，每瓶20-25块左右，每小块间距0.5 cm左右。
组织块放置好后，轻轻将培养瓶翻转，让瓶底朝上，向瓶内加入2 ml左右的培养液，盖好瓶盖，将培养瓶倾斜放置在温箱中，干贴壁2-4 h后，将培养瓶慢慢翻转平放，继续静置培养。
乙酰化白藜芦醇对脂多糖诱导急性肺损伤中微循环修复作用机制探究
•论著・乙酰化白藜芦醇对脂多糖诱导急性肺损伤中微循环修复作用机制探究闫雪I崔蕊I熊晓毅I张敏龙2|咸阳职业技术学院医学院712000；2空军军医大学唐都医院呼吸科，西安710038通信作者：张敏龙，Email：740720039@【摘要】目的观察脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤大鼠肺组织中微循环的变化，探讨乙酰化白藜芦醇对其干预作用及机制。
方法32只SD大鼠随机分为空白对照组、LPS处理组、乙酰化白藜芦醇预处理组和白藜芦醇预处理组，每组8只。
采用气管内滴注LPS(5mg/kg)的方法制作急性肺损伤动物模型，观察病理变化、肺组织湿/干重比值，用伊文思蓝法检测肺微血管通透性，用酶联免疫吸附试验法检测肺组织中肿瘤坏死因子a和白细胞介素邛的含量，用蛋白质印迹法检测细胞骨架重构相关蛋白FAK、cofilin的表达变化，免疫荧光观察肺微血管内皮细胞单层细胞间隙改变情况。
结果LPS干预4h后，大鼠肺部损伤明显，肿瘤坏死因子a和白细胞介素10的含量增高，肺湿/干重比值及通透性明显增加，FAK-cofilin通路明显激活，肺微血管内皮单层细胞间隙明显增加；乙酰化白藜芦醇预处理显著减轻了LPS导致的急性肺损伤，减少了炎症因子的释放，并且抑制了FAK-cofilin通路的激活及肺微血管内皮单层细胞间隙的增加。
结论肺微循环的改变参与了LPS诱导肺损伤的发生发展，乙酰化白藜芦醇能够通过抑制FAK-cofilin通路减轻肺损伤。
【关键词】急性肺损伤；脂多糖类；FAK-cofilin通路；微循环；乙酰化白藜芦醇基金项目：咸阳职业技术学院重大科学研究项目(2019KYA02)DOI：10.3760/l31368-20200806-007003,5,4，-Tri-O-acetyiresveratrol alleviates lipopolysaccharide-induced acute lung injury by regulatinglung microcirculationYan Xue1,Cui Rui1,Xiong Xiaoyi1,Zhang Miniong21School of Medicine,Xianyang Vocational Technical College,Xianyang712000,China;2De p art merit o f Respiratory Medicine,Tangdu Hospital,the Fourth Military MedicalUniversity,Xi'an710038,ChinaCorresponding author:Zhang Minlong,Email:740720039@[Abstract!Objective To observe the change of lung microcirculation in lipopolysaccharide(LPS)-induced acute lung injury,and explore the intervention effect and the mechanism of3,5,4-Tri-()-acetylresveratrol.Methods Thirty-two rats were randomly divided into four groups:normalcontrol group,LPS group,3,5,4-Tri-O-acetylresveratrol pre-treated group and acetylresveratroipre-treated group,eight rats in each group.The acute lung injury animal model was made by5mg/kgLPS instillation into the airway.The pathological changes,wet/dry weight ratio of lung tissues wereobserved.Evans blue method was used to detect pulmonary microvascular permeability.Enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect the levels of tumor necrosis factor-a and interleukin-ipin lung tissues.Western blot was used to detect the expressions of FAK and cofilin.Theimmunofluorescence was used to observe the changes of monolayer permeability of pulmonarymicrovascular endothelial cells.Results After LPS stimulation for four hours,the lung injury ofrats was obvious,the levels of tumor necrosis factor-a and interleukin-lp were increased,the wet/dry weight ratio and permeability of lung tissues were increased,FAK-cofilin pathway wasactivated,and the monolayer permeability of pulmonary microvascular endothelial cells wasincreased.Pretreatment with3,5,4-Tri-O-acetylresveratrol significantly attenuated LPS-inducedacute lung injury,reduced the release of inflammatory factors,and inhibited the activation of FAK-cofilin pathway and the increase of monolayer permeability of pulmonary microvascular endothelial cells.Conclusions The changes of lung microcirculation are involved in the occurrence and development of LPS-induced lung injury.3,5,4/-Tri-O-acetylresveratrol can reduce lung injury by inhibiting FAK cofilin pathway.【Keywords】Acute lung injury;Lipopolysaccharides;FAK-cofilin;Microcirculation;3,5,4^-T r i-()-acetylresveratrolFund program:Key Research Projects of Xianyang Vocational Technical College(2019KYA02) DOI:10.3760/l31368-20200806-00700急性肺损伤是由多种因素(如感染、创伤、休克、吸入理化物质等)引起的以顽固性呼吸困难及低氧血症为主要特征的一类肺部疾病，如未得到及时诊治，会逐渐发展成为ARDS。
血府逐瘀汤对肺动脉内皮细胞间质转化的影响及机制
网络出版时间：２０２４－０１－１０１１：０１：２９ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｕｒｌｉｄ／３４．１０８６．Ｒ．２０２４０１０８．１８３２．０４６◇复方药物药理学◇血府逐瘀汤对肺动脉内皮细胞间质转化的影响及机制曾作梅，王昕癑，田雷瑜，崔力丹，郭 健，陈俞材（北京中医药大学中医学院，北京 １０００５０）收稿日期：２０２３－０９－２０修回日期：２０２３－１１－１５基金项目：国家自然科学基金青年项目（Ｎｏ８２００３９８３）；北京中医药大学“解码中医”揭榜挂帅项目（Ｎｏ２０２２ ＪＹＢ ＪＢＺＲ ００３）；分子药理和药物评价教育部重点实验室开放课题（ＮｏＰ２０２２０１）作者简介：曾作梅（１９９７－），女，硕士生，研究方向：心脑血管药理学与中药药理学，Ｅ ｍａｉｌ：ｚｅｎｇｚｕｏｍｅｉ９７０７０６＠１６３．ｃｏｍ；陈俞材（１９９０－），男，博士，讲师，研究方向：心脑血管药理学与中药药理学，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：２０１８０１００９＠ｂｕｃｍ．ｅｄｕ．ｃｎ；郭 健（１９７０－），女，教授，博士生导师，研究方向：中药药理学，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｇｕｏｊｉａｎ＠ｂｕｃｍ．ｅｄｕ．ｃｎｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２３０７０３４文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２４）０１－０１５５－０７中国图书分类号：Ｒ ３３２；Ｒ２８５ ５；Ｒ３２２ １３；Ｒ３２２ ３５；Ｒ５４４摘要：目的 研究血府逐瘀汤对转化生长因子 β１（ＴＧＦ β１）诱导的大鼠肺微血管内皮细胞（ｐｕｌｍｏｎａｒｙｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎ ｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ＰＭＶＥＣｓ）内皮间质转化（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｔｏ ｍｅｓ ｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，ＥｎｄＭＴ）的影响，并从ＴＧＦ β１／Ｓｍａｄ信号通路进一步分析其作用机制。
方法 采用ＴＧＦ β１（５μｇ·Ｌ－１）建立ＥｎｄＭＴ细胞模型。
小鼠肺微血管内皮细胞使用说明
小鼠肺微血管内皮细胞小鼠肺微血管内皮细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠肺微血管内皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠肺微血管内皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠肺微血管内皮细胞注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠肺微血管内皮细胞其他相关小鼠原代细胞：小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞小鼠肺大动脉内皮细胞小鼠前脂肪细胞小鼠肺动脉成纤维细胞小鼠成骨细胞小鼠肺大静脉内皮细胞小鼠关节软骨细胞小鼠气管和支气管上皮细胞小鼠胎儿表皮角质形成层细胞小鼠胰岛细胞小鼠成年表皮角质形成层细胞小鼠胰腺星状细胞小鼠皮下脂肪细胞小鼠胰腺导管上皮细胞小鼠内脏脂肪细胞小鼠颌下腺上皮细胞小鼠脑动脉血管内皮细胞小鼠腮腺细胞小鼠脑动脉血管平滑肌细胞小鼠乳腺上皮细胞小鼠脑静脉血管内皮细胞小鼠胰腺上皮细胞小鼠脑静脉血管平滑肌细胞小鼠甲状腺上皮细胞小鼠脑膜细胞小鼠淋巴管内皮细胞小鼠神经胶质细胞小鼠淋巴成纤维细胞小鼠海马神经元细胞小鼠外周血白细胞小鼠脑微血管内皮细胞小鼠骨髓基质细胞小鼠脑成纤维细胞小鼠食管上皮细胞小鼠神经小胶质细胞小鼠食管平滑肌细胞小鼠雪旺氏细胞小鼠肠动脉内皮细胞小鼠小脑颗粒细胞小鼠肠静脉内皮细胞小鼠嗅鞘细胞小鼠肝实质细胞小鼠视网膜微血管内皮细胞小鼠肝动脉内皮细胞小鼠小梁网细胞小鼠肝动脉平滑肌细胞小鼠视网膜色素上皮细胞小鼠小肠血管内皮细胞小鼠视网膜muller细胞小鼠小肠隐窝上皮细胞小鼠虹膜色素上皮细胞小鼠肝内胆管上皮细胞小鼠晶状体上皮细胞小鼠胃粘膜上皮细胞小鼠角膜上皮细胞小鼠肝窦内皮细胞小鼠视网膜神经节细胞小鼠肝星形细胞小鼠角膜成纤维细胞小鼠直肠平滑肌细胞小鼠脉络膜血管细胞小鼠小肠平滑肌细胞小鼠牙乳头细胞小鼠结肠平滑肌细胞小鼠肝外胆管上皮细胞小鼠肠上皮细胞小鼠肝Kupffer细胞小鼠肠微血管细胞小鼠骨髓间充质干细胞小鼠肠巨噬细胞小鼠下丘脑神经元细胞小鼠子宫内膜上皮细胞小鼠睾丸支持细胞小鼠卵巢颗粒细胞小鼠心肌微血管内皮细胞小鼠子宫颈上皮细胞小鼠真皮微血管上皮细胞小鼠子宫平滑肌细胞小鼠胚胎成纤维细胞小鼠卵巢上皮细胞小鼠心脏干细胞小鼠子宫成纤维细胞小鼠神经干细胞小鼠卵巢成纤维细胞小鼠骨髓来源内皮祖细胞小鼠肾实质细胞小鼠椎间盘髓核细胞小鼠肾系膜细胞小鼠肾足突细胞小鼠膀胱上皮细胞小鼠肾小管平滑肌细胞小鼠膀胱平滑肌细胞小鼠肾成纤维细胞小鼠肾动脉内皮细胞小鼠尿道上皮细胞小鼠肾动脉平滑肌细胞小鼠输尿管上皮细胞小鼠肾小管上皮细胞小鼠肾管状上皮细胞小鼠肾小球内皮细胞小鼠心肌细胞小鼠前列腺上皮细胞小鼠心肌成纤维细胞小鼠肾上皮细胞小鼠主动脉内皮细胞小鼠膀胱成纤维细胞小鼠主动脉平滑肌细胞小鼠血管外膜成纤维细胞。
氯化血红素对大鼠肺微血管内皮细胞氧化损伤的保护作用
氯化血红素对大鼠肺微血管内皮细胞氧化损伤的保护作用作者：宗俊青马捷来源：《中国当代医药》2013年第24期[摘要] 目的探讨氯化血红素（hemin）对过氧化氢（H2O2）诱导大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）氧化应激损伤的保护作用。
方法①应用SD雄性大鼠的肺组织，进行大鼠PMVECs的原代培养并传代培养；通过倒置显微镜观察其形态，Ⅷ因子相关抗原免疫荧光鉴定。
②应用H2O2构建PMVECs氧化应激损伤模型，并用hemin与H2O2共同孵育PMVECs。
③采用MTT比色法检测各组细胞活力变化，用比色法检测内皮细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的含量，Western-blot检测各组内皮细胞微管相关蛋白1轻链3（LC-3）含量。
结果①体外培养的大鼠PMVECs呈梭形或多角形，形成单层后呈典型的鹅卵石样或铺路石样排列，免疫荧光检测FITC标记的Ⅷ相关抗体呈阳性，阳性率90%以上，成功建立了PMVECs的原代培养方法；②H2O2使内皮细胞活力下降，且呈剂量依赖性，200 μmol/L H2O2内皮细胞活力下降50%左右；③H2O2组LDH含量均高于hemin组及正常对照组（P[关键词] 氯化血红素；肺微血管内皮细胞；过氧化氢；自噬[中图分类号] R-332 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）08（c）-0006-04肺损伤常发生在体外循环、心肺联合移植、肺切除、肺栓塞、复张性肺水肿、休克及心肺复苏等多种临床情况下。
在各种原因引起的肺损伤中，肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells，PMVECs）是活性氧类的重要靶细胞之一。
PMVECs构成半选择性屏障，该屏障对于肺气体交换，调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义。
虽然肺微血管内皮和肺大血管内皮之间有一定相似的功能和表型，但是并不完全相同。
文献报道微血管和大血管表型和功能有显著不同[1]。
大鼠血管内皮细胞培养研究
大鼠血管内皮细胞培养研究血管内皮细胞是血管中重要的细胞类型，其在维护血管生理特性以及参与血管病理反应中都具有重要的作用。
大鼠作为实验动物，其血管内皮细胞的研究也是非常重要的。
在这篇文章中，我们将重点介绍大鼠血管内皮细胞的培养技术及其在血管生物学研究中的应用。
一、大鼠血管内皮细胞培养技术1.1 资源准备大鼠动脉、静脉组织、FBS、DMEM/F12、胰酶、胰酶抗性味粉、细胞凝集素、槲皮素、PBS、二氧化碳培养箱、显微镜、离心机、相位对比显微镜、细胞均质器等。
1.2 组织消化将新鲜的大鼠动脉或静脉取出，去除外膜及脂肪组织，用PBS缓冲液清洗数次。
接着，用胰酶液消化组织，割碎后转移到消化液中，37℃孵育1-2小时，直到组织消化完全。
1.3 筛选基质消化完全的组织过筛，筛子孔径为80目。
去掉筛子上的淋渣后，产出的细胞可以用显微镜观察并鉴定是否为血管内皮细胞。
1.4 细胞培养将产出细胞悬浮在完全培养基（DMEM/F12，10% FBS，100ug/mL嘌呤鸟嘌呤，100ug/mL青霉素和50ug/mL链霉素）中，在培养室内孵育。
按细胞密度不同，可选用不同的培养方法，比如单细胞悬浮培养、半贴壁培养和全贴壁培养等。
1.5 纯化细胞如果需要纯化大鼠血管内皮细胞，还需要使用血管壁内形成的凝集素贴壁分离技术，配合药物槲皮素进行消除非内皮细胞。
二、大鼠血管内皮细胞在血管生物学研究中的应用2.1 血管内皮损伤与修复在血管损伤修复研究中，常常会使用拉环法、加热法、切割法、放置血栓等手段产生不同程度的血管内皮损伤模型，进而观察、探究血管内皮细胞的响应和修复机制。
例如研究大鼠颈动脉内皮细胞在内膜损伤后的DNA修复机制是一个非常热门的研究课题。
2.2 血管疾病如高血压、动脉硬化、心血管疾病等，都与血管内皮细胞的损伤和功能异常有关。
通过培养大鼠血管内皮细胞，可以模拟这些血管疾病模型，如在培养基中将NO剂加入，从而模拟高血压或将脂质压入细胞内，模拟动脉硬化等，可以帮助我们更好的探究血管疾病的病理生理机制。
大鼠股动脉血管原代内皮细胞的分离与培养
-596•安徽医科大学学报Ada Unwersitatis Medicinalis Anhut2621Apr；56(4)网络出版时间：2621-3-116：50网络出版地址：https：//k/ki.3W/kcms/dwPH34.1025.R.26216317.1521.html大鼠股动脉血管原代内皮细胞的分离与培养刘倩，韩陈陈,罗婷婷，张雨，李浩，马场，魏伟摘要目的体外分离、培养并鉴定大鼠股动脉血管原代内皮细胞,为相对较小血管来源的原代内皮细胞功能研究提供细胞模型。
方法无菌取大鼠股动脉血管，胶原酶消化大鼠股动脉血管内皮细胞使其分离,流式细胞术检测内皮细胞纯度;流式分选出CD30阳性细胞，并用激光共聚焦鉴定内皮细胞;以CCK-C法、高内涵细胞成像法检测内皮细胞增殖能力，以法、Mv/gW胶法检测其迁移和成管功能。
结果胶原酶消化分离所得股动脉血管原代内皮细胞在2627-29-17接收基金项目：国家自然科学基金（编号：51562123、51330051、51273444）作者单位:安徽医科大学临床药理研究所，合肥230234作者简介:刘倩，女,硕士研究生；魏伟，男，博士，教授，博士生导师，责任作者,E-mVi：wwei@ahmu.efu.ch；马场，女，博士，副教授，责任作者，E-mail:mayane_ahmu@ 14~16d细胞覆盖培养瓶面积的2/3以上，细胞呈现典型铺路石状。
流式检测其纯度为3&34%,分选后利用CD30进行荧光染色鉴定，细胞均为CD30阳性；PGE3可显著上调CD30阳性内皮细胞增殖、迁移、成管功能。
结论该研究采 用简便的方法成功分离得到股动脉血管原代内皮细胞,为研究相对较小血管来源的原代内皮细胞功能提供体外细胞模型。
关键词大鼠;股动脉;原代血管内皮细胞;分离培养;鉴定中图分类号R394.26；R322.120文献标志码A文章编号1000-1492（2620）04-0566-05 doi：r6.19465/p cnki.isspl000-0492.2621.04.hl7根据血管的结构、功能和运输方向差异,分为动脉、静脉和毛细血管。
原代细胞的培养与鉴定方法
1、大鼠骨髓来源肥大细胞原代培养并鉴定：脱颈法处死SD大鼠（体重约200g），75%酒精浸泡消毒3min。
转入超净工作台内操作，剪开后肢皮肤，去除腿部肌肉，暴露出股骨，尽可能将股骨外部肌肉剥离干净，剪下股骨。
剪去股骨两端的股骨头，使用5ml注射器吸取RPMI 1640基础培养基后将骨髓吹打出来，吹打过程中尽可能将骨髓冲洗干净。
使用巴氏吸管将骨髓吹打成单细胞悬液，1000rmp/min离心5min收集细胞如发现收集的细胞中有大量红细胞时需使用红细胞裂解液处理。
使用肥大细胞专用培养基重悬细胞，接种至T25瓶内培养。
培养过程中每2-3天换液一次，当发现有细胞变圆脱落时，收集脱落细胞至新的T25瓶内诱导培养，培养四周时肥大细胞诱导成熟，取成熟的肥大细胞进行甲苯胺蓝染色鉴定；取脱落细胞培养一周、二周、三周、四周的细胞培养上清进行组胺含量检测。
2、小鼠骨髓来源肥大细胞原代培养与鉴定：小鼠经脱颈椎处死，75%酒精消毒后，取完整股骨，用1mL注射器吸取无菌PBS从股骨一端刺入，将骨髓细胞洗出，直到骨髓腔变白。
离心收集细胞，加入3mL红细胞裂解液，室温裂解3min之后，用PBS漂洗2次。
采用现配的原代细胞培养工作液（含青、链霉素各1000U/mL，10% FBS，IL-3 10 ng/mL，SCF 10ng/mL的RPMI-1640培养基培养液）将细胞重悬，按照106个/mL接种于六孔板中，每孔加3mL培养液，置于37℃，5% CO2的培养箱中培养，每7d 将悬浮细胞按照106个/mL转移到新的培养板中，继续培养，4-6周细胞分化成熟。
四周后收集悬浮细胞，部分细胞用于流式检测纯度，部分用含10% FBS的RPMI-1640培养基重新接板。
纯度检测：向诱导分化细胞中按1：200加入肥大细胞表面标志物APC-CD117 ，FITC- FcεRIα，4℃孵育60min ，无菌PBS 漂洗3次，流式检测肥大细胞纯度。
（SCF：Stem cell factor，干细胞因子；又称肥大细胞生长因子MGF）3、大鼠腹腔肥大细胞的分离与培养：选用体重220-250g的SD大鼠。
内皮细胞成管实验步骤
内皮细胞成管实验步骤内皮细胞是一种具有重要生物学功能的细胞类型，其在血管形成和维持血管功能方面起着关键作用。
内皮细胞成管实验是一种常用的实验方法，用于研究内皮细胞的管腔形成能力和血管生成的机制。
下面将介绍内皮细胞成管实验的详细步骤。
步骤一：细胞培养和准备1.1 培养内皮细胞：从小鼠或人的血管组织中分离内皮细胞，并将其培养在含有内皮细胞培养基的培养皿中，细胞密度一般为1×10^4 - 1×10^5个细胞/ml。
1.2 细胞的准备：用内皮细胞培养基洗涤细胞，将细胞悬浮于含有血清的培养基中。
步骤二：细胞的涂层和培养2.1 准备基质涂层：在培养皿中加入适量的基质涂层溶液（如胶原、玻璃纤维基质等），在室温下静置1小时或在4°C下静置过夜。
2.2 细胞的涂层：将细胞悬液加入基质涂层的培养皿中，使细胞均匀分布在涂层表面。
2.3 培养细胞：将培养皿放入细胞培养箱中，以37°C、5% CO2的条件下培养。
步骤三：细胞的处理和观察3.1 添加适当的刺激物：在培养基中加入适当的刺激物（如VEGF、FGF等），以促进内皮细胞的管腔形成。
3.2 处理时间的控制：根据实验的需要，控制细胞处理的时间，通常为24-72小时。
3.3 细胞的观察：使用光学显微镜观察培养皿中的细胞形态变化，特别注意细胞的管腔形成情况。
步骤四：结果分析和图像获取4.1 细胞成管评价：根据观察到的管腔形成情况，使用成管指数等评价指标对细胞成管能力进行定量分析。
4.2 图像获取：使用显微镜和成像设备获取细胞成管的图像，用于结果展示和进一步分析。
步骤五：数据分析和结果呈现5.1 数据的统计分析：使用合适的统计学方法对实验结果进行分析，比较不同处理组之间的差异。
5.2 结果的呈现：将实验结果以表格、图表或图片的形式进行呈现，准确描述实验结果和得出的结论。
内皮细胞成管实验是研究内皮细胞生物学功能的重要方法之一。
通过对内皮细胞的培养、处理和观察，可以深入了解内皮细胞的管腔形成过程和相关的信号通路。
大鼠肺微血管内皮细胞的培养
Ｃ Ｅ ｕ－ｕ ．Ｚ Ａ ｉ ８ ．Ｎ Ｕ ｈ ｎｙ ．Ｚ Ａ ｉｇ Ｚ Ａ Ｙ －ｉ ． Ｄ ｐ ｒ ｅ ｔห้องสมุดไป่ตู้ｆ Ｈ Ｎ Ｒ ｉ ａ Ｈ Ｏ Ｚ— ｈ ｇ Ｉ Ｃ ｕ —ｕ Ｈ Ｎ Ｊ ．Ｈ ＮＧ ｕｐｎ ｎ ｇ ｅａｔ ｎ ｍ ｏ
Ｐ ｔｏｈｓ ｌｌｙ Ｈ ｂｉ ｏｔ 渤 ｅ ａｈｐ ｙｉ ｏ 。 ｅｅ Ｎ ｒ ｏ ｇ ｈ 。 ｈ ｎｊ ｋ ｕ ７ ０９。 ｈｎ Ｚ ａ ｇｉ ｏ ５２ Ｃ ｉａ ａ ０
ｃ ｔｒ ｔ ｏ ａ ｍｐ ｏ ｅ ｘ ｅ ｍｅ ｔａ ｉ ｌ ｃ ｔ ｒ ｌ ｕ ｕ ｅｍｅｈ ｗ ｓ ｉ ｒ ｖ ｄ ｉ ｅ ｐ ｒ ｎ ｎｍａ， ｕ ｕ ｅ—ｍｅ ｉ ，ｔ ｓ ｅ ｂｏ ｋ ｍｅｈ ，ｆ ｔ ｏ ｉ ｅ ｓ ｒ ｄ ｎ ｉ ｌ ｄｍｎ ｉ ｕ ｌｃ ｔ ｏ ｓ ｄ ｅａ ｂ ｖｎ ｅ － ｌ
陈瑞华， 自 牛春 雨 张 静 ， 赵 刚， ， 张玉平
【 摘要】 目的 建立简单有效地获取大鼠肺微血管内皮细胞（ Ｍ Ｅ ） Ｐ Ｖ Ｃ 的培养方法。方法 从实
验动物 、 培养基 、 植块方法 、 牛血清浓度等 方面对植块 培养法进行 改进 ， 用 Ｗｉａ 雄性 大 鼠的肺组 胎 应 ｓｒ ｔ 织， 进行 Ｐ Ｅ ＭＶ Ｃ的原代培养并传代培养 ； 通过倒置 显微镜 、 扫描 、 透射 电镜 观察其形 态 ， 进行免疫组 并 织化学鉴定 。结果 结论 体外 培养 的大 鼠 Ｐ Ｅ ＭＶ Ｃ呈梭形或 多角形 ， 形成单层 后呈典 型的鹅 卵石样或铺 路 石样排列 ， 获得的血管 内皮细胞纯度 较高 ， Ⅷ因子 阳性反应 ， 抗 成功 建立 了 Ｐ Ｅ ＭＶ Ｃ的 原代培养 方法 。 改进的植块培养法 简便 、 可靠 ， 获得的 Ｐ Ｅ ＭＶ Ｃ纯度高 ， 生长状态 良好 ， 保持 了内皮细胞 的结 构和 功能 ， 可用于其功 能特性的进一步研究。
大鼠肺成纤维细胞原代提取及培养实验具体步骤及方法
大鼠肺成纤维细胞原代提取及培养实验具体步骤及方法将大鼠的肺成纤维细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的生长培养基培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。
一、实验材料准备1. 动物出生后1-4天的Wistar乳鼠1只。
2. 试剂PBS、培养液(Hyclone的低糖DMEM，含Hyclone的10%新生牛血清、100 U/ml 青链霉素、1%明胶PBS、0.25%胰酶(含EDTA，GIBCO)，碘酒和酒精绵球。
3. 器械眼科直剪2把、眼科弯剪2把、眼科直镊2把、眼科弯镊2把、玻璃平皿3套，25 cm2塑料培养瓶(Costar)。
二、具体操作1. 明胶包被培养瓶过夜(准备2-3个)，取出明胶，用2 ml培养液冲洗培养瓶一遍，置于超净台中。
2. 解剖取肺：将乳鼠在酒精中浸泡后取出，转移至超净台上的玻璃培养皿中，用碘酒消毒胸部皮肤，再用酒精棉球脱碘。
左手捏紧乳鼠颈背部皮肤以充分展露胸部，右手以眼科直剪剪开皮肤，充分撕拉开，再用酒精棉球消毒，继而以另一把眼科弯剪沿胸骨柄左下缘向上剪开肋骨，然后在切口中间横剪胸骨。
用眼科镊取出肺，置于盛有PBS(含有200U/ml青链霉素)的玻璃平皿中，冲洗去血。
3. 用眼科剪将肺分成几个肺叶，用镊子去除周边的血凝块及纤维组织，用眼科剪剪去肺门处的支气管和血管，再用含有双抗的PBS冲洗1遍。
4. 用眼科弯剪将肺组织剪碎成1 mm3大小，加入含有双抗的PBS，将肺组织块吹打开，静置15 min后，更换新的PBS。
5. 用200 ul微量加样器(最好是超净台中专用的，临用时用酒精绵球好好擦拭枪柄)取200 ul加样枪头一个，剪去尖，在酒精灯上用火焰烧弯。
用枪头吸取组织块接种于培养瓶中，每瓶20-25块左右，每小块间距0.5 cm左右。
组织块放置好后，轻轻将培养瓶翻转，让瓶底朝上，向瓶内加入2 ml左右的培养液，盖好瓶盖，将培养瓶倾斜放置在温箱中，干贴壁2-4 h后，将培养瓶慢慢翻转平放，继续静置培养。
血管内皮细胞分类
血管内皮细胞分类
血管内皮细胞是一类位于血管内膜上的细胞，主要起到调节血管生理功能的作用。
根据其形态和功能的不同，可以将血管内皮细胞分为以下几类：
1. 连续型内皮细胞：形态规则，致密排列，互相连接形成连续层，具有重要的物质转运和保持血管壁细胞完整性的作用。
2. 断裂型内皮细胞：形态不规则，互相之间有间隙，通常出现在高流动速度的血管中（如肺毛细血管、骨骼肌毛细血管），有助于维持局部血流动力学。
3. 吞噬型内皮细胞：表面上有许多微绒毛，能够吞噬血管内的微生物、细胞碎片和血小板，起到清除血管内异物的作用。
4. 非常规型内皮细胞：具有特殊的分泌功能，如分泌血管紧张素、血栓素等调节血管收缩和凝血的物质。
了解不同类型的血管内皮细胞的特点和功能，对于深入研究血管生理学和疾病的发生和发展具有重要意义。
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大鼠血管内皮细胞的分离、鉴定及传代培养
关键词 血 管 内皮细胞
分 离培养
大 鼠主动脉
文献标识码 ：Ａ 文章编号：１ ０ ０ ７ — １ ７ ３ ３ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ４ － ０ ０ ０ ８ － ０ ３
主 动 脉 。 取 出胸 主 动 脉 ， 用 Ｐ Ｂ Ｓ 冲洗３ － ４次 后 ， 放 入 另一‘
中图分 类号：￥ ８ ５ ２ ． １ ６ ３
１ ． ３ ． １ 细胞形 态 倒 置显 微镜 下观察 不 同代 次的细 胞形 态 ，是否呈现 内皮 细胞典型 的折光性强 、“ 铀路石” 样等特
点ｔ ， 。
和磷 酸二氢钾 ，天津 科密 欧化 学试剂 有 限公司 ：多聚 甲 醛 、甲醇 、硫酸铜 、碳酸氢Ｃ ｔ ￣ Ｊ Ｓ ｎ Ｎａ ２ Ｈ Ｐ Ｏ ４ ・ １ ２ Ｈ２ Ｏ，国药集
含２ ０ ％Ｆ ＢＳ 、４ ｎ ｇ ／ ｍｌ Ｖ ＥＧ Ｆ １ ６ ５ ￣ ｌ ｆ ｌ Ｏ ０ ￣ ｇ ／ ｍｌ 肝素的Ｄ ＭＥ Ｍ培 养液培养［ １ ，液体 仅遮盖 主动脉 即可 。培 养４ ｄ 后 ，弃去 主动脉植块 ，２ ～ ３ ｄ 换液 １ 次。
细胞 的体 外培养方 法对 于研 究 内皮 细胞特 性 、对作用 于 血管 的药 物及抗 肿瘤药 物 的研 究 具有重 要意 义 。本试 验
采用植块 法分 离大 鼠血管 内皮细 胞 ，通 过条 件培养 以及
Ｃ Ｄ ３ ｌ 免疫 组 化 和 管 形 成 鉴 定 ， 建 立 了 大 鼠主 动 脉 血 管 内
１ ． ２ ． ２ 传代培 养 原代细 胞培 养约 １ ２ － １ ４ ｄ ，迁 出生长 的
细 胞覆盖培养 瓶 面积 的２ ／ ３ 以上 时即 可传代 【 ３ 】 。弃去培养 液 ，用Ｐ Ｂ Ｓ冲 洗 培 养 瓶 后 ， 加 ０ ． ２ ５ ％胰 蛋 白酶 消 化 ３ ￣ ５ ｍｉ ｎ ，见 内皮细 胞收缩 变 圆 ，立 即加入 等体积 的含胎 牛 血 清 的ＤＭＥ Ｍ培 养 液 终 止 消 化 ， 吸 管轻 轻 吹打 并 混 匀 ，移 入 １ ０ ｍｌ 离心 管中 ，１ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ 离心 ｌ Ｏ ｍｉ ｎ ，弃上清 ，
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大鼠肺微血管内皮细胞
编号名称规格北京派瑞金GK1001大鼠肺微血管内皮细胞5×105cells/瓶
为能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的大鼠肺微血管内皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的大鼠肺微血管内皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
大鼠肺微血管内皮细胞简介：
1、名称：大鼠肺微血管内皮细胞
2、组织来源：大鼠肺血管组织
3、规格：5×105cells/25cm2培养瓶
4、细胞简介：
大鼠肺微血管内皮细胞分离自正常大鼠肺血管组织，血管内皮细胞密切参与包括再生、发育、伤口愈合等一系列生理及炎症反应。
细胞呈梭形或多角形,形成单层后呈典型的鹅卵石样或铺路石样排列。
肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障，该屏障对于肺气体交换，调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义。
本公司生产的大鼠肺微血管内皮细胞总量约为5×105cells/瓶，细胞纯度
75%~85%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5、培养基信息：
1）培养基类型：1640培养基(GIBCO，添加NaHCO31.5g/L，Sodium Pyruvate0.11g/L) 2）添加因子：优质胎牛血清10%，细胞生长因子等
大鼠肺微血管内皮细胞使用方法：
收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1.取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2.待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3.细胞传代
1)吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2)添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；
3)用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察。
之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。
大鼠肺微血管内皮细胞注意事项：
1.培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2.在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3.传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4.建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5.该细胞只可用于科研。
备注：由于实验所用试剂与操作环境的不同，以上方法供各实验室参考
大鼠肺微血管内皮细胞相关的大鼠原代细胞：
大鼠子宫平滑肌细胞大鼠脑静脉血管内皮细胞
大鼠子宫内膜上皮细胞大鼠脑动脉血管平滑肌细胞
大鼠子宫颈上皮细胞大鼠脑动脉血管内皮细胞
大鼠子宫成纤维细胞大鼠脑成纤维细胞
大鼠椎间盘髓核细胞大鼠脉络膜血管细胞
大鼠主动脉平滑肌细胞大鼠卵巢上皮细胞
大鼠主动脉内皮细胞大鼠卵巢颗粒细胞
大鼠直肠平滑肌细胞大鼠卵巢成纤维细胞
大鼠支气管上皮细胞大鼠淋巴管内皮细胞
大鼠支气管成纤维细胞大鼠淋巴成纤维细胞
大鼠真皮成纤维细胞大鼠晶状体上皮细胞
大鼠胰腺星状细胞大鼠结肠平滑肌细胞
大鼠胰腺上皮细胞大鼠角膜上皮细胞
大鼠胰腺导管上皮细胞大鼠角膜成纤维细胞
大鼠胰岛细胞大鼠甲状腺上皮细胞
大鼠牙乳头细胞大鼠滑膜细胞
大鼠血管外膜成纤维细胞大鼠虹膜色素上皮细胞
大鼠雪旺氏细胞大鼠颌下腺上皮细胞
大鼠嗅鞘细胞大鼠海绵体内皮细胞
大鼠心脏微血管内皮细胞大鼠海马神经元细胞
大鼠心肌细胞大鼠冠状动脉平滑肌细胞
大鼠心肌成纤维细胞大鼠冠状动脉内皮细胞
大鼠小脑颗粒细胞大鼠关节软骨细胞
大鼠小梁网细胞大鼠骨细胞
大鼠小肠粘膜上皮细胞大鼠骨髓来源内皮祖细胞
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大鼠小肠血管内皮细胞大鼠骨髓基质细胞
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大鼠外周血白细胞大鼠肝星形细胞
大鼠胎儿表皮角质形成层细胞大鼠肝实质细胞
大鼠输尿管上皮细胞大鼠肝内胆管上皮细胞大鼠视网膜微血管内皮细胞大鼠肝窦内皮细胞
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大鼠食管上皮细胞大鼠肺血管平滑肌细胞大鼠食管平滑肌细胞大鼠肺微血管内皮细胞大鼠肾足突细胞大鼠肺动脉成纤维细胞大鼠肾脏巨噬细胞大鼠肺大静脉平滑肌细胞大鼠肾小球内皮细胞大鼠肺大静脉内皮细胞大鼠肾小管上皮细胞大鼠肺大动脉平滑肌细胞大鼠肾小管平滑肌细胞大鼠肺大动脉内皮细胞大鼠肾系膜细胞大鼠肺成纤维细胞
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大鼠腮腺细胞大鼠皮下脂肪细胞
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大鼠前列腺上皮细胞大鼠膀胱平滑肌细胞
大鼠气管上皮细胞大鼠膀胱成纤维细胞
大鼠气管平滑肌细胞大鼠尿道上皮细胞
大鼠气管和支气管上皮细胞大鼠内脏脂肪细胞
大鼠破骨细胞大鼠脑微血管内皮细胞大鼠脑静脉血管平滑肌细胞大鼠脑膜细胞。