毒理学 第六章-一般毒性作用(人卫)
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
度评定的重要内容，在制定卫生标准及管理毒理学 决策方面具有重要意义
5
二、动物选择和染毒方式 一、实验动物选择
1. 物种和 2.品系 选择基本原则
* 毒性反应与人最接近
* 自然寿命不太长
选择原则
* 易于饲养和操作
*经济并易于获得
6
物种和品系
啮齿类（rodent species） 大鼠：Sprague-Dawley（SD）、Wistar 小鼠：昆明种（KM）、ICR（美国 癌 症研究所，Institute of Cancer Research）、 NIH 豚鼠 家兔 非啮齿类（nonrodent species） 狗或猴
上-下移动法
35
急性毒性替代试验
1. 限量实验 （limit test）
适用于受试物毒性很低的情况
20只大鼠 或小鼠， 雌雄各半
给予最大剂量 （10g/kg）， 观察14天
无动物死亡， LD50大于此 剂量
有动物死亡， 其他方法
36
2. 固定剂量法 （fixed dose procedure）
固定剂量：5、50、500或2 000mg/kg。 结果判定分为高毒(T+)，有毒(T)，有 害(H)和不分级。 观察指标是“明显毒性”(clear sign on toxicity)，而非死亡。
有关急性毒性评价，错误的是 A．目前世界各国采用的急性分 级标准多以LD50为标准进行划分 的 B．LD50只是一个点剂量 C．仅用LD50参数反映某物质的 急性毒性有局限 D．LD50应结合剂量一反应关系 曲线斜率及毒作用特征共同评价 E．一般来说LD50是一个稳定的 常数
34
（二）急性毒性替代试验
27
实验动物分组与数量
✓ 根据组数和每组数量来 决定总数量
✓ LD50，一般为5-7组 ✓ 大、小鼠每组10只，犬
类6只 ✓ 严格遵循随机、均衡的
原则
下述有关急性毒性试验的实验动 物要求中，不正确的是 A．一般选择哺乳动物，以大小 鼠最为常用 B．使用刚成年、健康未交配和 未受孕的动物 C．通常用雄性动物进行实验 D．实验动物分组时应严格遵循 随机原则 E．实验动物需要预检
气管内注入
14
下列关于急性毒性实验中经呼吸道 染毒的叙述中，错误的是 A．研究气体、蒸汽、烟、尘等形式 存在的污染物的急性毒性 B．呼吸道染毒可分为静式和动式吸 入两种方式 C．静式染毒的优点为设备简单、操 作方便 D．动式染毒的不足之处为装置复杂、 价格昂贵 E．静式染毒可以使实验动物得到充足 的氧气补充
为清洁级、SPF和无菌级，取消了普
通级。豚鼠、地鼠和兔仍保留四级。
犬和猴分为普通级和SPF级。
8
4. 性别
✓ 雌雄各半 ✓ 如雌、雄动物毒效应有明显差异，应
分别并求出雌性和雄性动物的LD50值 ✓ 特殊的试验研究可仅作单一性别的急
性毒性试验
9
5. 年龄和体重
✓ 急性：刚成年、健康、未曾交配和受孕的动物， 2月龄以上
第六章 一般毒性作用
公共卫生学院 徐莉春
1
第一节 概述
第二节 急性毒性作用
第三节 局部毒性作用
第四节 短期、亚慢性和慢性毒性作用
2
第一节 概 述
一、一般毒性作用的概念和意义 二、一般毒性试验动物选择和染毒方式
3
一、一般毒性作用的概念和意义 1. 概念
外来化学物在一定剂量、一定接触时间和 接触方式下对试验动物产生的综合毒效应
✓ 同一次试验同一批实验动物体重变异范围 不应超过平均体重的20%
大鼠180～240g 小鼠18～25g 家兔2～2.5kg
豚鼠200～250g Beagle犬4～6kg 杂种犬8～15kg
10
亚慢性
年龄：性刚成熟 大鼠6-8周，体重100g左右 小鼠体重15g左右 犬 8~12月
慢性
年龄：刚离乳 大鼠3-4周，体重约50-70g 小鼠3周，体重约10-15g 犬一般在4-6月
毒性
一般毒性 （基础毒性）
特殊毒性
急性毒性
致突变
亚急性
致癌
wk.baidu.com
（短期、重复剂量毒性
致畸
亚慢性毒性
…
4
慢性毒性
2. 研究目的
研究目的
确定受 试物毒 作用的 表现和 性质
确定受 试物毒 作用剂 量-反应 （效应） 关系
确定受 试物毒 作用的 靶器官
确定损 害的可 逆性
一般毒性作用是认识化学物毒性的基础，危险
先使用化学法脱毛或机械法脱毛，将动 物脊柱两侧背毛脱去，去毛面积常为体表 面积的10％。
将受试物均匀涂敷于动物背部皮肤染 毒区，然后用油纸覆盖，以无刺激胶布 固定，防止动物舔食。
17
4. 经注射途径染毒 腹腔注射、肌内注射、皮下注射、
静脉注射。
图9—3 小鼠腹腔注射
图9－4 小鼠尾静脉注射
兔耳缘静脉注射
18
第二节 急性毒性作用
一、急性毒性的概念 二、急性毒性试验方法的目的 三、急性毒性试验方法要点 四、急性毒性分级
19
1984年，印度博帕尔事件
12月2日晚，美国联合碳化公司在印度博帕尔市 农药厂，地下储罐剧毒异氰酸甲酯因压力升高爆炸 外泄。45吨毒气形成一股浓密烟雾，以5000m/h速 度袭击博帕尔市区。
38
4. 上-下法 （up/down method）
“上-下”法最早诞生于第二次世界大战中， 适用一种“全或无”的反应。 用1只动物序贯进行 不死亡，下一只提高一档剂量， 死亡，就降一档剂量做。 但每一只存活动物都需观察至14 d， 后期死亡动物在统计结果时也要记为死亡
GB 21826-2008-T 化学品 急性经口毒性试 验方法 上下增减剂量法(UDP)
32
（2）预试验
先用少量动物，以较大的剂量间隔染毒，找出 10%-90%（或0%-100%）的致死剂量范围。
可根据以下公式计算出组距
i=(lgLD90-lgLD10)／(n-1) 或i=(lgLD100-lgLD0)／(n-1)
i为组距，相邻的两个剂量组对数剂量之差； n为设计的剂量组数。
1
2
3
4
有关急性毒性试验设计及方法
曲线拟合：概率 单位法，即Bliss 法
插值法：寇氏法
中，不正确的是
A．采用寇氏法和 Bliss 法一般 设5～8组 B．寇氏法和 Bliss 法一般以
一般设5～8个剂量 组；霍恩法固定设4 个剂量组。
i=(LD100 –LD0 )/(n-1)公式计算 组距 C．使用霍恩氏法固定设4个剂 量组
风向 21
一、急性毒性概念
急性毒性（acute toxicity） 实验动物或人一次或24h内多次接触一定剂量外源 化学物短期内所产生的健康损害作用和致死效应。 观察指标包括一般行为和外观改变、大体形态变 化以及死亡效应。
急性毒性的观察时间，一般为14天，如有 必要可延长至14天以上。
22
正确理解急性毒性概念
39
（三） 急性毒性作用观察
中毒症状和体征 体重 死亡情况和时间分布 病理检查
40
1. 中毒症状
NOAEL C．评价外源化学物对 机体毒性剂量一反应 关系，并根据LD50 进 行毒性分级
依据和建议。
D．为致癌试验的剂量
4.为毒作用机制研究提供初步线索。
设计提供依据 E．测试并求出毒物的
毒性参数如 LD50
24
二、急性毒性试验方法的要点
（一）经典的急性毒性试验
25
（一）经典的急性毒性试验
实验动物的选择
急性接触的次数
一次 经口、经注射，一次 操作瞬间给予实验动物 一定量的受试物； 经皮、经呼吸道，在 一段规定时间内使实验 动物持续接触受试物。
24h内多次 外源化学物毒性很
低，一次最大容积染 毒不足以充分了解急 性毒性作用，24h内 多次染毒。不超过3 次，间隔至少4h。
23
二、急性毒性试验的目的
28
实验动物的饲养环境
恒定的温度：22±3℃ 湿度：30~70% 光照度：昼夜各半 饲料合格、饮水合格、垫料合格
29
实验动物的给药前禁食处理
经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食 大鼠、小鼠——隔夜进食。 大动物——染毒前不喂食即可。 染毒后继续禁食2~4h，但在禁食时要保障饮水。
30
LD50计算方法
11
6. 生理与健康状况
健康、未产未孕 给药前检疫观察 大、小鼠、兔、豚鼠1周，犬、猴2~3周 ①适应新环境，减少环境和生理条件变化可 能对试验结果的影响 ②筛检健康状况不符合试验要求的动物
12
（二） 染毒方式
最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮及注射途径。 ❖ 工业化学物：经皮肤和呼吸道 ❖ 农用化学物：经口、经皮肤和呼吸道 ❖ 药品：经口和注射 ❖ 食品：经口 ❖ 环境污染物：经口、皮肤和呼吸道
37
3.急性毒性分级法 （acute toxic class method）
选用剂量(25、200、2 000 mg/kg)之一，单性别3只动物进 行试验，确定动物的生死后再进行下一步试验。 有3种可能的结局：
a. 不需进一步试验即可分级， b.下一阶段以相同剂量再做另一性别试验， c.下一阶段以较高或较低的剂量水平进行。 根据在某一染毒剂量下，死亡发生的数量来判定大致的 LD50值范围，直接进行危害评估和毒性分级。
D．使用霍恩氏法组距分别定
为 2.15或 3.16 倍，形成两个剂
量系列
E．在食品、保健品等毒理学
鉴定中多采用最大耐受实验法
（低毒化学物）
31
寇氏法和 Bliss 法剂量选择 （1）查阅文献
了解化学物的结构、理化特性， 获得类似化学物的毒性资料。
预实验的预期毒性中值取与受 试物类似化学物的LD50
13
1. 经呼吸道染毒（inhalation）
静式吸入染毒 密闭容器，加入一定量的气态或 易挥发液态化学物。 优点：设备简单 ，操作方便 ，消 耗受试物少 缺点：受试物浓度难以维持恒定
动式吸入染毒 空气流动的动式染毒柜。 优点：新鲜空气补充，受试化学物 浓度不变，二氧化碳分压恒定 缺点：受试物消耗的量大，设备复 杂、价格昂贵
有关急性毒性试验目
的，不正确的是 1.确定LD50等急性毒性参数，并根 A．阐明外源化学物毒
据LD50对急性毒性进行分级
性作用的中毒机制
2.观察中毒表现和死亡情况，初步 B．确定 LOAEL 和
评价受试物的毒性、毒效应特征、靶 器官和剂量-反应（效应）。
3.为亚急性、亚慢性和慢性毒性试 验染毒剂量设计和观察指标选择提供
7
3. 级别
GB 14922-1994《实验动物 微生物学和寄生虫学监测等 级（啮齿类和兔类）》
普通级 一级
清洁级 二级
无特定病原体级（SPF级） 三级
无菌级 四级
GB 14922.2-2001《实验动物 微生物
学等级及监测》(2002年5月1日开始实
施)
新标准对实验动物等级进行了重新
设定，将小鼠和大鼠微生物学等级分
5
LgLD0 LgLD0+i LgLD0+2i LgLD0+3i LgLD0+4i •••
以最低剂量值（LD0）的对数剂量加上一个i值，即是 第二个组的对数剂量，依次类推直至最高剂量组。
33
经典急性毒性试验的局限性
1. 经典急性毒性试验消 耗动物数量大，一次实 验至少需要30~50只
2. LD50波动性很大， 影响因素很多，如种 系、性别、年龄、身 体状况、环境条件等。
3R原则 优化（refinement） 减少（reduction） 取代（replacement）
OECD （organization for economic cooperation and development， 经济合作与发展组织 ，经合
组织）
USEPA （美国环保局）
固定剂量法
+
限量实验
急性毒性分级法
种属和品系
性别、年龄、体重
微生物学等级 饲养环境
动物数目 实验前处理
26
实验动物
种属和品系 首选大鼠 还需选择一种非 啮齿动物：狗
性别、年龄、体重
雌雄各半 刚成年、健康、未曾 交配和受孕的动物
大鼠180～240g 小鼠18～25g 家兔2～2.5kg
豚鼠200～250g Beagle犬4～6kg 杂种犬8～15kg
15
2. 经消化道（口）染毒（oral exposure） 灌胃、喂饲和胶囊。灌胃是最常用的染毒途径。
将受试物配制成溶液或混悬液， 利用等容量灌胃法。 灌胃法优点是剂量准确，缺点是工作量 大，并有误入气管和伤及食道的可能。
图 小鼠灌胃 法
16
3. 经皮肤染毒（dermal exposure） 先脱毛，再染毒
直接致死：2.5万人，间接致死：55万人， 永久 残废：20多万人，受影响人口多达150余万，约占 博帕尔市总人口的一半。
20
氯气作为化学武器，进行毒气战
1915年4月22日，比利时的伊普尔战役 德军向英法联军施放了180吨氯气，形成一道6000 米宽的黄绿色浓雾。 英法联军5000名士兵死亡，15000名士兵中毒。
5
二、动物选择和染毒方式 一、实验动物选择
1. 物种和 2.品系 选择基本原则
* 毒性反应与人最接近
* 自然寿命不太长
选择原则
* 易于饲养和操作
*经济并易于获得
6
物种和品系
啮齿类（rodent species） 大鼠：Sprague-Dawley（SD）、Wistar 小鼠：昆明种（KM）、ICR（美国 癌 症研究所，Institute of Cancer Research）、 NIH 豚鼠 家兔 非啮齿类（nonrodent species） 狗或猴
上-下移动法
35
急性毒性替代试验
1. 限量实验 （limit test）
适用于受试物毒性很低的情况
20只大鼠 或小鼠， 雌雄各半
给予最大剂量 （10g/kg）， 观察14天
无动物死亡， LD50大于此 剂量
有动物死亡， 其他方法
36
2. 固定剂量法 （fixed dose procedure）
固定剂量：5、50、500或2 000mg/kg。 结果判定分为高毒(T+)，有毒(T)，有 害(H)和不分级。 观察指标是“明显毒性”(clear sign on toxicity)，而非死亡。
有关急性毒性评价，错误的是 A．目前世界各国采用的急性分 级标准多以LD50为标准进行划分 的 B．LD50只是一个点剂量 C．仅用LD50参数反映某物质的 急性毒性有局限 D．LD50应结合剂量一反应关系 曲线斜率及毒作用特征共同评价 E．一般来说LD50是一个稳定的 常数
34
（二）急性毒性替代试验
27
实验动物分组与数量
✓ 根据组数和每组数量来 决定总数量
✓ LD50，一般为5-7组 ✓ 大、小鼠每组10只，犬
类6只 ✓ 严格遵循随机、均衡的
原则
下述有关急性毒性试验的实验动 物要求中，不正确的是 A．一般选择哺乳动物，以大小 鼠最为常用 B．使用刚成年、健康未交配和 未受孕的动物 C．通常用雄性动物进行实验 D．实验动物分组时应严格遵循 随机原则 E．实验动物需要预检
气管内注入
14
下列关于急性毒性实验中经呼吸道 染毒的叙述中，错误的是 A．研究气体、蒸汽、烟、尘等形式 存在的污染物的急性毒性 B．呼吸道染毒可分为静式和动式吸 入两种方式 C．静式染毒的优点为设备简单、操 作方便 D．动式染毒的不足之处为装置复杂、 价格昂贵 E．静式染毒可以使实验动物得到充足 的氧气补充
为清洁级、SPF和无菌级，取消了普
通级。豚鼠、地鼠和兔仍保留四级。
犬和猴分为普通级和SPF级。
8
4. 性别
✓ 雌雄各半 ✓ 如雌、雄动物毒效应有明显差异，应
分别并求出雌性和雄性动物的LD50值 ✓ 特殊的试验研究可仅作单一性别的急
性毒性试验
9
5. 年龄和体重
✓ 急性：刚成年、健康、未曾交配和受孕的动物， 2月龄以上
第六章 一般毒性作用
公共卫生学院 徐莉春
1
第一节 概述
第二节 急性毒性作用
第三节 局部毒性作用
第四节 短期、亚慢性和慢性毒性作用
2
第一节 概 述
一、一般毒性作用的概念和意义 二、一般毒性试验动物选择和染毒方式
3
一、一般毒性作用的概念和意义 1. 概念
外来化学物在一定剂量、一定接触时间和 接触方式下对试验动物产生的综合毒效应
✓ 同一次试验同一批实验动物体重变异范围 不应超过平均体重的20%
大鼠180～240g 小鼠18～25g 家兔2～2.5kg
豚鼠200～250g Beagle犬4～6kg 杂种犬8～15kg
10
亚慢性
年龄：性刚成熟 大鼠6-8周，体重100g左右 小鼠体重15g左右 犬 8~12月
慢性
年龄：刚离乳 大鼠3-4周，体重约50-70g 小鼠3周，体重约10-15g 犬一般在4-6月
毒性
一般毒性 （基础毒性）
特殊毒性
急性毒性
致突变
亚急性
致癌
wk.baidu.com
（短期、重复剂量毒性
致畸
亚慢性毒性
…
4
慢性毒性
2. 研究目的
研究目的
确定受 试物毒 作用的 表现和 性质
确定受 试物毒 作用剂 量-反应 （效应） 关系
确定受 试物毒 作用的 靶器官
确定损 害的可 逆性
一般毒性作用是认识化学物毒性的基础，危险
先使用化学法脱毛或机械法脱毛，将动 物脊柱两侧背毛脱去，去毛面积常为体表 面积的10％。
将受试物均匀涂敷于动物背部皮肤染 毒区，然后用油纸覆盖，以无刺激胶布 固定，防止动物舔食。
17
4. 经注射途径染毒 腹腔注射、肌内注射、皮下注射、
静脉注射。
图9—3 小鼠腹腔注射
图9－4 小鼠尾静脉注射
兔耳缘静脉注射
18
第二节 急性毒性作用
一、急性毒性的概念 二、急性毒性试验方法的目的 三、急性毒性试验方法要点 四、急性毒性分级
19
1984年，印度博帕尔事件
12月2日晚，美国联合碳化公司在印度博帕尔市 农药厂，地下储罐剧毒异氰酸甲酯因压力升高爆炸 外泄。45吨毒气形成一股浓密烟雾，以5000m/h速 度袭击博帕尔市区。
38
4. 上-下法 （up/down method）
“上-下”法最早诞生于第二次世界大战中， 适用一种“全或无”的反应。 用1只动物序贯进行 不死亡，下一只提高一档剂量， 死亡，就降一档剂量做。 但每一只存活动物都需观察至14 d， 后期死亡动物在统计结果时也要记为死亡
GB 21826-2008-T 化学品 急性经口毒性试 验方法 上下增减剂量法(UDP)
32
（2）预试验
先用少量动物，以较大的剂量间隔染毒，找出 10%-90%（或0%-100%）的致死剂量范围。
可根据以下公式计算出组距
i=(lgLD90-lgLD10)／(n-1) 或i=(lgLD100-lgLD0)／(n-1)
i为组距，相邻的两个剂量组对数剂量之差； n为设计的剂量组数。
1
2
3
4
有关急性毒性试验设计及方法
曲线拟合：概率 单位法，即Bliss 法
插值法：寇氏法
中，不正确的是
A．采用寇氏法和 Bliss 法一般 设5～8组 B．寇氏法和 Bliss 法一般以
一般设5～8个剂量 组；霍恩法固定设4 个剂量组。
i=(LD100 –LD0 )/(n-1)公式计算 组距 C．使用霍恩氏法固定设4个剂 量组
风向 21
一、急性毒性概念
急性毒性（acute toxicity） 实验动物或人一次或24h内多次接触一定剂量外源 化学物短期内所产生的健康损害作用和致死效应。 观察指标包括一般行为和外观改变、大体形态变 化以及死亡效应。
急性毒性的观察时间，一般为14天，如有 必要可延长至14天以上。
22
正确理解急性毒性概念
39
（三） 急性毒性作用观察
中毒症状和体征 体重 死亡情况和时间分布 病理检查
40
1. 中毒症状
NOAEL C．评价外源化学物对 机体毒性剂量一反应 关系，并根据LD50 进 行毒性分级
依据和建议。
D．为致癌试验的剂量
4.为毒作用机制研究提供初步线索。
设计提供依据 E．测试并求出毒物的
毒性参数如 LD50
24
二、急性毒性试验方法的要点
（一）经典的急性毒性试验
25
（一）经典的急性毒性试验
实验动物的选择
急性接触的次数
一次 经口、经注射，一次 操作瞬间给予实验动物 一定量的受试物； 经皮、经呼吸道，在 一段规定时间内使实验 动物持续接触受试物。
24h内多次 外源化学物毒性很
低，一次最大容积染 毒不足以充分了解急 性毒性作用，24h内 多次染毒。不超过3 次，间隔至少4h。
23
二、急性毒性试验的目的
28
实验动物的饲养环境
恒定的温度：22±3℃ 湿度：30~70% 光照度：昼夜各半 饲料合格、饮水合格、垫料合格
29
实验动物的给药前禁食处理
经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食 大鼠、小鼠——隔夜进食。 大动物——染毒前不喂食即可。 染毒后继续禁食2~4h，但在禁食时要保障饮水。
30
LD50计算方法
11
6. 生理与健康状况
健康、未产未孕 给药前检疫观察 大、小鼠、兔、豚鼠1周，犬、猴2~3周 ①适应新环境，减少环境和生理条件变化可 能对试验结果的影响 ②筛检健康状况不符合试验要求的动物
12
（二） 染毒方式
最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮及注射途径。 ❖ 工业化学物：经皮肤和呼吸道 ❖ 农用化学物：经口、经皮肤和呼吸道 ❖ 药品：经口和注射 ❖ 食品：经口 ❖ 环境污染物：经口、皮肤和呼吸道
37
3.急性毒性分级法 （acute toxic class method）
选用剂量(25、200、2 000 mg/kg)之一，单性别3只动物进 行试验，确定动物的生死后再进行下一步试验。 有3种可能的结局：
a. 不需进一步试验即可分级， b.下一阶段以相同剂量再做另一性别试验， c.下一阶段以较高或较低的剂量水平进行。 根据在某一染毒剂量下，死亡发生的数量来判定大致的 LD50值范围，直接进行危害评估和毒性分级。
D．使用霍恩氏法组距分别定
为 2.15或 3.16 倍，形成两个剂
量系列
E．在食品、保健品等毒理学
鉴定中多采用最大耐受实验法
（低毒化学物）
31
寇氏法和 Bliss 法剂量选择 （1）查阅文献
了解化学物的结构、理化特性， 获得类似化学物的毒性资料。
预实验的预期毒性中值取与受 试物类似化学物的LD50
13
1. 经呼吸道染毒（inhalation）
静式吸入染毒 密闭容器，加入一定量的气态或 易挥发液态化学物。 优点：设备简单 ，操作方便 ，消 耗受试物少 缺点：受试物浓度难以维持恒定
动式吸入染毒 空气流动的动式染毒柜。 优点：新鲜空气补充，受试化学物 浓度不变，二氧化碳分压恒定 缺点：受试物消耗的量大，设备复 杂、价格昂贵
有关急性毒性试验目
的，不正确的是 1.确定LD50等急性毒性参数，并根 A．阐明外源化学物毒
据LD50对急性毒性进行分级
性作用的中毒机制
2.观察中毒表现和死亡情况，初步 B．确定 LOAEL 和
评价受试物的毒性、毒效应特征、靶 器官和剂量-反应（效应）。
3.为亚急性、亚慢性和慢性毒性试 验染毒剂量设计和观察指标选择提供
7
3. 级别
GB 14922-1994《实验动物 微生物学和寄生虫学监测等 级（啮齿类和兔类）》
普通级 一级
清洁级 二级
无特定病原体级（SPF级） 三级
无菌级 四级
GB 14922.2-2001《实验动物 微生物
学等级及监测》(2002年5月1日开始实
施)
新标准对实验动物等级进行了重新
设定，将小鼠和大鼠微生物学等级分
5
LgLD0 LgLD0+i LgLD0+2i LgLD0+3i LgLD0+4i •••
以最低剂量值（LD0）的对数剂量加上一个i值，即是 第二个组的对数剂量，依次类推直至最高剂量组。
33
经典急性毒性试验的局限性
1. 经典急性毒性试验消 耗动物数量大，一次实 验至少需要30~50只
2. LD50波动性很大， 影响因素很多，如种 系、性别、年龄、身 体状况、环境条件等。
3R原则 优化（refinement） 减少（reduction） 取代（replacement）
OECD （organization for economic cooperation and development， 经济合作与发展组织 ，经合
组织）
USEPA （美国环保局）
固定剂量法
+
限量实验
急性毒性分级法
种属和品系
性别、年龄、体重
微生物学等级 饲养环境
动物数目 实验前处理
26
实验动物
种属和品系 首选大鼠 还需选择一种非 啮齿动物：狗
性别、年龄、体重
雌雄各半 刚成年、健康、未曾 交配和受孕的动物
大鼠180～240g 小鼠18～25g 家兔2～2.5kg
豚鼠200～250g Beagle犬4～6kg 杂种犬8～15kg
15
2. 经消化道（口）染毒（oral exposure） 灌胃、喂饲和胶囊。灌胃是最常用的染毒途径。
将受试物配制成溶液或混悬液， 利用等容量灌胃法。 灌胃法优点是剂量准确，缺点是工作量 大，并有误入气管和伤及食道的可能。
图 小鼠灌胃 法
16
3. 经皮肤染毒（dermal exposure） 先脱毛，再染毒
直接致死：2.5万人，间接致死：55万人， 永久 残废：20多万人，受影响人口多达150余万，约占 博帕尔市总人口的一半。
20
氯气作为化学武器，进行毒气战
1915年4月22日，比利时的伊普尔战役 德军向英法联军施放了180吨氯气，形成一道6000 米宽的黄绿色浓雾。 英法联军5000名士兵死亡，15000名士兵中毒。