西安电子科技大学食品中微量铁的测定实验讲义(word版本)

实验三食品中微量铁的测定

一、实验目的

1.了解分光光度计的使用方法，并了解此仪器的主要构造。

2.掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。

3.掌握朗伯－比耳定律及其应用。

4.掌握吸收曲线及标准曲线的概念及其应用。

二、实验原理

葡萄、大枣、味精及酱油等食品中铁含量的测定可以采用邻菲罗啉可见分光光度法，通过这种测定方法，可以对铁进行定量测定。

分光光度法测定物质含量是应注意的主要是显色反应的条件和测量吸光度的条件。显色反应的条件有显色剂的用量、介质的酸度、显色时间、显色时溶液的温度、干扰物的消除方法等。测量吸光度的条件包括应选择的入射光波长，吸光度范围和参比溶液等。

本实验主要选用邻二氮菲光度法测铁在入射光波长、络合物溶液的稳定性、显色剂浓度、溶液pH 值的影响等几个方面确定实验的最佳条件。

三、仪器、药品及实验装置

1.仪器

721 型分光光度计，1 cm 吸收池，2 mL ,1 mL, 10 mL 吸量管，50 mL 比色管等

2.试剂

1.0×10 -3 mol·L -1 铁标准溶液，100μg·mL-1 铁标准溶液，0.15%邻二氮菲水溶液，10% 盐酸羟胺溶液，乙酸钠溶液，

四、实验步骤

1.吸收曲线的制作和测量波长的选择

在50ml 比色管中按次序准确加入以下溶液，10μg/ml铁标准溶液5ml，10%盐酸羟胺1ml，再加入1mol/LNaAc5ml，0.15%邻二氮菲3ml。用水稀释至刻度。在分光光度计上，用1cm 比色皿以水为参比溶液，从440~580nm 之间测定吸光度（A）。每隔20nm 测定一次，其中从480~540nm，每隔10nm 测定一次。最后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线。从吸收曲线上找出最大吸收的波长，用以进行铁的标定。

2.铁含量的测定

（1）标准曲线的制作

在6 个50ml 比色管中，用吸管分别加入0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ml 10μg/ml 铁标准溶液，10%盐酸羟胺1ml，再加入1mol/LNaAc5ml，0.15%邻二氮菲2ml。用水稀释至刻度。摇匀放置10min。用1cm 比色皿，以试剂为空白（以试剂为空白），在所选择的波长下，测量各溶液的吸光度。以含铁量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

由绘制的标准曲线，重新查出相应铁浓度的吸光度，计算Fe2+-邻二氮菲络合物的摩尔吸光系数ε。

（3）试样中铁含量的测定

准确吸取试样试液于50ml 容量瓶中，按标准曲线的制作步骤，加入各种试剂，测量吸光度。从标准曲线上查出和计算试样中铁的含量μg/ml。

（4）数据处理说明

各种实验曲线以及标准曲线的绘制可以手工也可以使用计算机进行处理。

五、数据记录和处理

1.吸收曲线的绘制

表1 吸收曲线的绘制

波长λ/nm

吸光度A

2.标准曲线的绘制

表2 标准曲线的绘制

铁质量浓度/（mg·L -1）

吸光度A

3.试样含铁量的测定

表3 试样含铁量的测定

编号 1 2 3

吸光度A

铁质量浓度/（mg·L -1）

六、问题与讨论

1.吸收曲线与标准曲线有何区别？在实际应用中有何意义？

2.邻二氮菲与铁的显色反应，其主要条件有哪些？

3.邻二氮菲分光光度法测定微量铁时为何要加入盐酸羟胺溶液？