比色分析法

因此，溶液的颜色与溶液的浓度和溶液的厚度乘积成正比。
则有色溶液的吸光度与溶液的浓度和溶液的厚度乘积成正比。
这个规律称为朗伯-比耳定律。
其数学表达式为：A=kbC
k是吸光系数，它随入射光的波长、有色物质的性质和溶液的
温度而变化。
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当溶液的浓度为1mol/L、厚度为1cm时，在一定温度和波长下 测得的吸光度称为该物质的摩尔吸光系数。用ε表示。
三、吸光度范围的选择：
✓ T=0.368、 A=0.434， 测量的相对误差最小 ✓ T=15％～65％ A＝0.2～0.8 时测量的相对误差≤2% 控制方法：(1)计算并且控制试样的称出量，含量高→少取样或稀释
含量低→多取样或萃取富集 (2)如果溶液已显色，则可通过改变比色皿的厚度来调节 吸光度的大小。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
管中加入一定量试剂和蒸馏水，再用标准有色溶液滴定，边滴边用
眼睛从上往下比较颜色，滴至两支比色管的颜色相同，记录滴加的
体积。
计算公式：C被测物
二、分光光度法 ：
C标液V标 V水样
(一) 定义：通过分光光度计测定显色的吸光度大小来确定被测物 质含量的方法称为分光光度法 。
(二)特点：
1．仪器昂贵，耗费高；
分别测出标准管和被测管的吸光度，用下 面公式计算。适用于单组分的测定。
C被物
A水样C标液V标 A标V水样
三、示差法：它是测定高含量组分常用的方法。即配制与被测物浓
度略低的标准有色溶液，用该标准有色溶液调节分光光度计的零点，
再测被测溶液显色后的有色溶液吸光度△A，用朗伯-比耳定律计算
出△C，则被测物浓度C被测=C标+ △C。
上往下比较颜色，用移液管吸出一部分颜色深的比色管中的溶液至
两支比色管的颜色相同，记录吸出的体积(不能超总体积的一半)。
计算公式：
当标液溶液深时：C
被测物
C标液V标 (1
V吸 V配
)
C标液V标 (V配
V吸 )
V测
V测V配
当被测溶液深时：C
被测物
C标液V标
V测
(1
V吸 V配
)
C标液V标V配 V测 (V配 V吸 )
第四节 测量条件的选择
一、入射光波长的选择： A 应为最大吸收峰的波
长，才能保证测定的灵敏
度和准确度。
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λ1
λ2
λ
二、参比溶液的选择：
在测量吸光度时，利用参比溶液来调节仪器的零点及T = 100 ％，可以消除由于比色皿、溶剂及试剂对人射光的反射和吸收带来 的误差。
1.当试液及显色剂均无色时→用蒸馏水； 2.当显色剂无色时，待测试液中存在其他有色离子→用不加 显色剂的试液； 3.如显色剂和试液均有色→试剂空白(不加试样)。
原因何在？
是因为瓶子的厚度远远没有水库的深度大，光线照射后，被吸 收的光线量远远没有水库吸收的光线量多，那么剩余的互补光也没 有水库中剩余互补光多，故其颜色也就越深。
结论：溶液的厚度越大，其颜色越深。
将瓶中的水取一半，加蒸馏水稀释一倍，再观察其颜色，又有 什么现象？
结论：稀释后溶液颜色变浅。即溶液浓度越大，其颜色越深。
3．生成物恒定。是指生成的有色物质的化学性质稳定。
4．生成的有色物颜色与加入的物质(称为显色剂)颜色对比度大， 即λ显色化合物 ―λ显色剂 = △λ＞60nm 。
三、显色反应条件的选择： 1.显色剂的用量；
2. 溶液的酸度大小；
3.显色的温度；
4.显色的时间；
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5.溶剂的种类；
6.干扰物质。
四、显色剂：
具体操作：取至少6支相同规格的比色管或容量瓶，向其中加 入不同体积(由小到大)的同一种标准溶液，向另一支比色管中加入 被测溶液；再向以上比色管中加入相同的显色试剂，加蒸馏水至刻 线，混匀，放置一段时间后，用眼睛从上往下比较有色溶液颜色介 于哪两支标准管的颜色之间。则其中的有色物质浓度为标准管10中有 色物质浓度的平均值。
一溶液时，其中一部分频率的辐射能→ 被溶液介质吸收→质点由基态→激发态 (激发态不稳定)→基态→能量(以光线的 红 形式放出)，能量大小不同，释放的光 线的颜色也不同。
由于不同物质，其结构不同、能级
不同，故吸收的光线也不同。
白光
青蓝
蓝 紫
结论：物质对光有选择性吸收。
4．吸收曲线：以波长(λ)为横坐标，
以溶液对光的吸收程度(Α)为纵坐标→吸
收曲线→λmax(吸收峰)
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二、光吸收的基本定律——朗伯-比尔定律： 1．透光率和吸光度：
当一束平行的单色光通过有色溶液时：
入射光强度(IO) → 一部分反射(Ir) ←
→一部分吸收(Ia) → 一部分透过(It)
则： I0 = Ia＋Ir＋It ∵ 比色皿的质材、厚度相同。可略去反射部分。
1.无机显色剂 ：如硫氰酸根、钼酸根等。 2.有机显色剂：偶氮类、三苯甲烷类、磺基水杨酸、丁二酮肟、 邻二氮菲、二苯硫腙等。 五、三元配合物：即由一种金属离子与两种配位体形成的配合物， 常见的混配物、缔合物和胶束配合物。 目前应用较多的是三元配合物和四元配合物，其中四元配合物 是加入了一种表面活性剂，其实质是增大有色物质的溶解性。主要 的表面活性剂有：氯(溴)化十六烷基吡啶、溴化三甲基十六烷基铵、 十二烷基苯磺酸钠、十二烷基硫酸钠、吐温-80、OP、Triton-100等。
∴ I0 = Ia＋It 透射光强度It与入射光强度IO之比，称为透光度或透光率，用T 表示。T It
Io
溶液的T愈大，表示溶液对光的吸收愈少；反之亦然。
A lg 1 lg T lg Io
T
It
2．朗伯-比尔定律：
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从水库取一瓶水，看其颜色与水库中的颜色有什么区别？ 结论：瓶中的颜色浅、水库中的颜色深。
2．操作繁琐，耗时长； 13
3．准确性比目视比色法高。
(三)基本原理：利用入射光线与穿透光线对光电池作用产生的电 流的大小来测定有色溶液的颜色深浅，从而测定物质的含量。
(四)主要部件：
光源
主要部件：五个单元组成
有光源(碘钨灯)、单色器 单色器
(棱镜式、光栅式)、反光镜、 稳压器、转盘、比色杯架、光
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3．稀释法：即用一支比色管配制一个标准有色溶液，用两支比
色管分别装被测溶液和不含被测物溶液显色后，用被测管与标准管
比较，然后吸取第三支比色管中溶液加入到颜色深的一支比色管中
至两个颜色相同来得出其含量的方法。
具体操作：取1支比色管，向其中加入一定体积的标准溶液，
向另两支同规格比色管中分别加入被测溶液和蒸馏水；再向三支比
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1、目视比色法有哪些操作方法？ 目视比色法操作方法有：标准系列法、吸出法、稀释法、滴定
法。 2、分光光度计的主要部件有哪些？
分光光度计的主要部件有：光源单色器样品池、记录装置、检 测器。 3、称取0.500g钢样，
显色反应应具备灵敏度高、选择性好、生成物恒定、生成的有 色物颜色与称为显色剂颜色对比度大等条件；
2. 复合光和单色光： （1）复合光：不同波长的单色光按一定的比例混合而成的光。
例如：白光 （可见光） λmax =400～760nm
2
（2）单色光：只有一种波长的光。
（3）互补光：适当波长(颜色)的单色光按一定强度比例混合→
白光。 互补光对应的颜色→互补色
绿
黄
青
3．光的选择性吸收: 当一定光源所产生的电磁波通过某 橙
量调节器、硒光电池、放大器、 记录装置
微电流计等组成。
样品池 检测器
(五)光电池：
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第六节 吸光光度法的应用
一、工作曲线法或标准曲线法：即通
过测定不同浓度标准溶液配制的标准
有色溶液的吸光度，再用浓度与吸光
度作图，最后测定出被溶液的吸光度
在标准曲线上查出其浓度。适用于单
组分的测定。
二、比较法：按吸出法的配制出有色溶液，
四、类型：目视比色分析法、光电比色法 (又称为分光光度法， 分为可见分光光度法和紫外分光光度法)
第二节 分光光度法的基本原理
一、光的性质和有色物质对光的吸收：
1. 光的基本性质：
1
(1)光的分类：按波长大小分
紫外 ︳紫 ︳蓝 ︳青 ︳ 绿 ︳黄 ︳橙 ︳ 红 400 450 480 500 560 600 650 750
第八章 比色分析法
第一节 概论
一、定义：通过有色物质溶液颜色的深浅来测定物质含量的分
析方法称为比色分析法。
二、比色分析法的特点： 1.灵敏度高：达0.001%。 2.结果准确度高：目视比色法的相对误差5%~10%，而分光光 度法的相对误差2%~5%。 3.操作简便、测定迅速。
三、适用范围：有色物质或能转变为有色物质的物质。
应从显色剂的用量、溶液的酸度大小、显色的温度、显色的时 间、溶剂的种类、干扰物质等方面控制。
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本章的作业： 1、为什么物质对光线具有选择性吸收？ 2、摩尔吸光系数的意义是什么？它受哪些因素的影响？ 3、显色反应应具备哪些条件？应从哪些方面控制其条件？ 4、目视比色法有哪些操作方法? 5、分光光度计的主要部件有哪些？
四、双波长法：适用于多组分的同时测定
⑴ 若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在各自最大吸收波长
处分别进行测定。这本质上与单组分测定没有区别。
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⑵ 若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根据吸光度的加合性求 解联立方程组得出各组分的含量。
Aλ1= εaλ1bCa＋εbλ1bCb Aλ2= εaλ2bCa＋εbλ2bCb
当被测溶液深时：C
被测物
C标液V标
V测
V配 V配 V加
C标液V标 (V配 V加 ) V测V配
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4．滴定法：将被测溶液显色定容后，向另一支比色管中加入一 定量试剂和蒸馏水，再用标准有色溶液滴定至两个比色管颜色相同 来得出其含量的方法。