植物组织石蜡切片制作
201410植物组织石蜡切片的制作
植物组织石蜡切片的制作一、器具石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片、切片架等。
二、试剂酒精、二甲苯、甲醛、冰乙酸、番红、固绿、明胶、中性树胶、蒸馏水等三、全都过程1．固定2．脱水3．脱酒精4．浸蜡和封埋5．切片6．粘片7．脱蜡8．染色9．胶封10. 拍照四、操作步骤：1、固定和保存（Fixation）FAA固定液(事先冷却)固定24 h以上，然后转移到70%酒精中保存。
固定时，真空抽滤2-3次，以促使固定更充分。
2．脱水与硬化（Dehydration）3．脱酒精（透明）Dehydration in a series of ethanolDay 185% Ethanol 1 Hr on ice95% Ethanol + 0.1% Eosin OVERNIGHT 4°CDay 2100% Ethanol 30 min room temp100% Ethanol 30 min room temp100% Ethanol 1 Hr room temp100% Ethanol 1 Hr room temp25% Xylene+75% Ethanol 1 Hr room temp50% Xylene+50% Ethanol 1 Hr room temp75% Xylene+25% Ethanol 1 Hr room temp100% Xylene 1 Hr room temp100% Xylene 1 Hr room temp100% Xylene 1 Hr room temp4．浸蜡和封埋（Embedding）（1）从二甲苯逐步梯度更换纯石蜡，使组织渗透彻底。
（2）将材料移入纸盒中，依将所要切的方向，妥善排列，再以两手平持纸盒，移至冷水(about 18°C)中，用口在蜡面上吹气，促其凝结，待蜡面凝成簿层时(about 1 minute)，将纸盒全部沉入。
石蜡切片的详细制作过程
石蜡切片的制作过程石蜡切片的制作过程主要包括：取材，固定，脱水，透明，透蜡，包埋，切片，贴片，染色，透明，封藏等步骤。
1．取材材料的好坏直接影响到切片的质量，无论取哪一种动植物材料，以下几点是必须注意的。
（1）植物材料选择时须尽可能不损伤植物体或所需要的部分；动物材料取用时常对动物施以麻醉，常用的麻醉剂有氯仿和乙醚，或将动物杀死后迅速取出所需要的组织。
（2）取材必须新鲜，这一点对于从事细胞生物学研究尤为重要，应该尽可能割取生活着的组织块，并随即投入固定液。
（3）切取材料时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤。
（4）切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。
一般厚度不超过2mm，大小不超过5×5mm2。
2．固定组织和细胞离开机体后，在一定时间内仍然延续着生命活动，会引起病理变化直至归于死亡。
为了使标本能反映它生前的正常状态，必须尽早地用某些化学药品迅速地杀死组织和细胞，阻抑上述变化，并将结构成分转化为不溶性物质，防止某些结构的溶化和消失。
这种处理就是固定。
除了上述作用外，固定剂会使组织适当硬化以便于随后的处理，还会改变细胞内部的折射系数并使某些部分易于染色。
固定剂的作用对象主要是蛋白质，至于其他成分如脂肪和糖，在一般制作时不加考虑，如要观察这些物质，可用特殊的方法将其固定下来。
固定剂的作用表现在对材料体积的改变、硬化的程度、穿透的速度以及对染色的影响等方面。
这些作用的好坏、大小，都依所固定的材料性质而定，同样一种固定液对某一材料来说是良好的，但对另外一些组织可能就不很适用。
良好的固定剂必须具备的特征是：穿透组织的速度快。
，能将细胞中的内含物凝固成不溶解物质，不使组织膨胀或收缩以保持原形，硬化组织的程度适中，增加细胞内含物的折光度，增加媒染和染色能力，具有保存剂作用。
固定剂有简单固定剂和混合固定剂的划分。
简单固定剂即单一的固定剂，常用的有乙醇、甲醛、冰醋酸、升汞、苦味酸、铬酸、重铬酸钾和锇酸。
植物组织切片制作以及注意事项
植物组织石蜡切片的制作以及注意事项1 植物组织石蜡切片的制作方法⑴固定：用50%或70% FAA固定液（50%或70%酒精：甲醛：冰乙酸=18:1:1; 幼嫩材料用50 % FAA；老的材料用70%的FAA），置于4℃固定24 h。
配方:福尔马林(38%甲醛) 5 ml冰醋酸5ml70%酒精90 ml5 ml甘油(丙三醇)⑵脱水：将固定液倒去，加入50%乙醇，室温静置30 min；重复一次，室温静置20 min。
换成1%番红O溶液(用70%酒精配制)，室温脱水染色过夜。
次日继续脱水，酒精浓度梯度和时间依次为：80% 乙醇1h、95% 乙醇1h、无水乙醇1h、40min（2次）。
⑶透明：1/2无水乙醇+二甲苯混合液1h，纯二甲苯1h、40 min（2次）。
最后加入少量二甲苯（浸没材料即可）和碎蜡，放入38℃温箱中过夜。
⑷浸蜡：将温箱温度调至56℃，计时1h；换成二级蜡1h；三级蜡（3次）各1h、1h、40min（从温度上升到56℃开始计时）。
⑸包埋：将带有材料的液体蜡倒入叠好的纸槽中，迅速放入冰水中使蜡凝固，防止气泡产生，以及凝蜡不匀。
⑹切片：修整蜡块，用Lica RM2126切片机切片，厚度5-10 μm。
⑺贴片: 在载玻片上涂少许粘片剂，将切好的蜡带放入温水中，捞至载玻片上，最后置于37℃恒温箱过夜烤片。
⑻脱蜡及染色：①番红-固绿对染ⅰ脱蜡：二甲苯60min，二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、1%番红室温过夜。
ⅱ染色：80%乙醇5 min，1%固绿（用95%酒精配制）迅速蘸一下，大约10s，直接放到95%乙醇5min 、无水乙醇5min、无水乙醇5min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5min、二甲苯5 min（2次）。
②甲苯胺蓝染色ⅰ脱蜡：二甲苯60 min、二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、70%乙醇5 min、50%乙醇5 min 、30%乙醇5 min、蒸馏水5 min。
石蜡包埋组织切片制作过程
石蜡包埋组织切片制作过程石蜡包埋组织切片制作过程是组织学研究中常用的一种技术，下面将对其进行详细的介绍。
一、取材首先需要取得需要制作切片的组织样本，这些样本可以是动物或植物的组织，也可以是人体组织。
取材时需要注意保持组织完整性，避免破坏或变形。
二、固定取得组织样本后，需要进行固定处理，以保持组织的形态和结构。
常用的固定剂有福尔马林、乙醛等，其中福尔马林是最常用的固定剂之一。
固定时间一般为24小时左右。
三、脱水固定后的组织需要进行脱水处理，以去除其中的水分。
脱水的过程中需要使用一系列浓度逐渐升高的乙醇溶液，一般从低浓度的乙醇开始逐渐升高，直至使用100%乙醇。
四、浸渍脱水后的组织需要进行浸渍处理，以使其与包埋剂充分接触。
常用的包埋剂有石蜡、聚乙二醇等，其中石蜡是最常用的包埋剂之一。
浸渍的时间一般为24小时左右。
五、包埋浸渍后的组织需要进行包埋处理，以使其固定在切片机上。
包埋的过程中需要使用熔化的包埋剂，将组织置于包埋剂中，使其充分浸泡。
包埋剂熔化的温度一般在60-70℃左右。
六、切片包埋后的组织需要进行切片处理，以获得所需的切片。
切片机是常用的切片工具，切片机通过旋转刀片将包埋的组织切成薄片。
切片厚度一般在5-10微米之间。
七、染色切片完成后，需要进行染色处理，以使组织结构更加清晰。
常用的染色剂有血液学染色剂、组织学染色剂等，其中最常用的是血液学染色剂，如伊红染色、苏木精染色等。
以上就是石蜡包埋组织切片制作过程的详细介绍，这个技术在组织学研究中具有重要的应用价值。
石蜡切片的详细制作过程
石蜡切片的制作过程石蜡切片的制作过程主要包括：取材，固定，脱水，透明，透蜡，包埋，切片，贴片，染色，透明，封藏等步骤。
1．取材材料的好坏直接影响到切片的质量，无论取哪一种动植物材料，以下几点是必须注意的。
（1）植物材料选择时须尽可能不损伤植物体或所需要的部分；动物材料取用时常对动物施以麻醉，常用的麻醉剂有氯仿和乙醚，或将动物杀死后迅速取出所需要的组织。
（2）取材必须新鲜，这一点对于从事细胞生物学研究尤为重要，应该尽可能割取生活着的组织块，并随即投入固定液。
（3）切取材料时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤。
（4）切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。
一般厚度不超过2mm，大小不超过5×5mm2。
2．固定组织和细胞离开机体后，在一定时间内仍然延续着生命活动，会引起病理变化直至归于死亡。
为了使标本能反映它生前的正常状态，必须尽早地用某些化学药品迅速地杀死组织和细胞，阻抑上述变化，并将结构成分转化为不溶性物质，防止某些结构的溶化和消失。
这种处理就是固定。
除了上述作用外，固定剂会使组织适当硬化以便于随后的处理，还会改变细胞内部的折射系数并使某些部分易于染色。
固定剂的作用对象主要是蛋白质，至于其他成分如脂肪和糖，在一般制作时不加考虑，如要观察这些物质，可用特殊的方法将其固定下来。
固定剂的作用表现在对材料体积的改变、硬化的程度、穿透的速度以及对染色的影响等方面。
这些作用的好坏、大小，都依所固定的材料性质而定，同样一种固定液对某一材料来说是良好的，但对另外一些组织可能就不很适用。
良好的固定剂必须具备的特征是：穿透组织的速度快。
，能将细胞中的内含物凝固成不溶解物质，不使组织膨胀或收缩以保持原形，硬化组织的程度适中，增加细胞内含物的折光度，增加媒染和染色能力，具有保存剂作用。
固定剂有简单固定剂和混合固定剂的划分。
简单固定剂即单一的固定剂，常用的有乙醇、甲醛、冰醋酸、升汞、苦味酸、铬酸、重铬酸钾和锇酸。
石蜡切片步骤
石蜡切片制作大致步骤：取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。
1、取材植物材料选择时必须尽可能不损伤植物体或所需要的部分。
取材必须新鲜，尽可能割取所需要的组织块，并随即投入固定液。
取材时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤。
切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。
一般厚度不超过2mm，大小不超过5*5mm2。
2、固定用适当的化学药液—固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。
固定液的选用：FAA固定液FAA固定液配制：福尔马林（38%甲醛）5 ml冰醋酸 5 ml70%酒精 90 ml5 ml甘油（丙三醇）固定时间根据材料块的大小及松密程度而定。
3、洗涤与脱水固定后的组织材料需要除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。
多数用流水冲洗：使用含有苦味酸的固定液固定的则需要用酒精多次浸洗；如果组织经酒精或酒精混合液固定，则不必洗涤，可直接进行脱水。
酒精为常用的脱水剂，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行，通常从30%或50%酒精开始，经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1-数小时，如不能及时进行脱水，材料可以放在70%酒精中保存，因高浓度酒精易使组织收缩硬化。
4、透明选用二甲苯为酒精和石蜡的浸媒液，替换出组织内的酒精。
通常组织先经过纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1-2小时，再转入纯透明剂中浸渍。
时间根据材料块大小而定。
5、浸蜡与包埋用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。
通常把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1-2小时，再先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍3小时左右，浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右的温箱中进行，以利于石蜡浸入组织内。
浸蜡后的组织材料块放在装有蜡液的容器中（摆好在蜡中的位置），待蜡液表层凝固即迅速放入冷水中冷却，即做成含有组织块的蜡块。
植物组织石蜡切片制作
植物组织石蜡切片的制作一、实验目的1．熟练掌握石蜡切片的方法。
2．掌握永久制片的制作过程，为研究植物的内部结构奠定基础。
3．学会植物内部结构的比较研究方法。
二、实验器具与试剂1．器具石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。
2．试剂10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。
三、实验材料幼嫩植物各部分，根据季节选择材料。
四、实验内容与方法石蜡切片法是显微技术上最重要、最常用的一种方法。
它是把材料封埋在石蜡里面，用旋转切片机切片，可以切出很薄的切片。
凡是精细的工结构，大都用石蜡切片。
全都过程如下：1．固定 2．洗涤 3．脱水与硬化 4．脱酒精 2．封埋 6．切片7．粘片 8．脱蜡 9．染色 10．脱水 11. 透明 12．胶封（一）固定1．固定的意义：固定就是用药品把细胞杀死，使细胞的原生质凝固，死后不发生变化，尽可能保持原来的结构以供我们观察。
良好的固定剂，应是穿透力强，使细胞立刻致死，原生质全部凝固；不发生任何变形，增强折光率，并且不妨碍染色。
2．固定液的种类：固定液的种类很多，根据配制成分可划分为：(1) 简单固定液：以一种化学药品配制的固定液。
常用的简单固定液有：A．酒精即乙醇，用作固定液，常用纯酒精或95％酒精。
酒精穿透力强，固定时间常在1小时以内。
高浓度酒精有使材料收缩的作用。
70％的酒精可作保存液。
配制低度酒精必需要用普通酒精即95％的酒精，绝不可用纯酒精。
酒精为还原剂，不能与铬酸、锇酸、重铬酸钾等氧化剂配合。
酒精可使核酸，蛋白质及肝醣等发生沉淀，但能溶解脂肪及拟脂。
B．福尔马林即甲醛，具强烈刺激性的气味，纯净的甲醛，为无色透明液体。
固定用的浓度为4-10％甲醛也是强还原剂。
不能与铬酸、锇酸等氧化剂配合。
经固定后，材料变硬，通常不引起皱缩，但随后经过他种药剂处理时，就每每出现皱缩。
石蜡切片制作
石蜡切片的制作及组织形态的观测试验准备工作1.试剂的配制：配制70%、80%和95%的乙醇溶液，苏木精染液、伊红染液、0.5~1%盐酸酒精分化液、蛋白甘油；准备二甲苯、无水乙醇数瓶等。
2.溶蜡：将固体新蜡装缸，置电炉上，等蜡块溶解冒烟时，关掉，冷却后再打，如此反复8次以上，可用作石蜡Ⅰ和Ⅱ，石蜡Ⅲ和包埋蜡尽量多用一些旧蜡。
3.载玻片和盖玻片的准备：新买的载玻片（磨沙边）和盖玻片（长的）应分开在酸液中浸泡过夜，用自来水冲洗干净，蒸馏水浸泡，纱布擦干备用。
4.木块的准备：收集或制作足够的2~3cm3的木块。
将一面锯成“井”字形槽，便于固定蜡块。
5.纸盒、纸袋的准备：用质地光滑、有一定硬度的纸张（彩页广告纸等）折叠成纸盒，作包埋容器；用擦镜纸折叠成纸袋，钉书机钉好，装入组织块再浸蜡。
石蜡切片的制作过程1.冲洗：从10%的甲醛溶液中取出组织块，用刀片切下宽0.5cm的长组织样，修剪整齐。
与同组同部位的组织块一起包扎于纱布中，置烧杯内，流动的自来水冲洗24h。
2.脱水：冲洗后的组织分别置70%乙醇（24h）→80%乙醇（24h）→95%乙醇（10～12h）→无水乙醇Ⅰ（1.5h）→无水乙醇Ⅱ（1.5h）。
3.透明：脱水过的组织投入无水乙醇：二甲苯（1:1）30min→二甲苯Ⅰ（10～15min）→二甲苯Ⅱ（10min左右），眼观判断，透明好的组织呈柠檬黄色。
透明过度，组织易碎。
4.浸蜡：石蜡Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及包埋蜡等提前放在烘箱中熔化好。
于45℃烘箱中进行以下浸蜡步骤：将透明好的组织样按同组同部位装入同一纸袋中，放入标记好的硫酸纸，投入二甲苯：石蜡（1:1）30min→石蜡Ⅰ（30min）→石蜡Ⅱ（60min）→石蜡Ⅲ（60min）。
5.包埋：表面皿中倒入少许包埋蜡，用酒精灯稍微加热使其保持液态。
将组织块从纸袋中倒入表面皿。
标记好的纸盒中倒满包埋蜡，迅速用小镊子将组织块夹起，并包埋在纸盒中，位置摆正。
等纸盒中的蜡凝固后，方可移动纸盒。
石蜡切片的制作过程
石蜡切片的制作过程（一）花药切片制片法1．取材2．固定：FAA液中固定24h，并保存在其中。
3．脱水：经70％乙醇、85%乙醇，每级3~4h，含1%伊红的95％乙醇中3~4h（可以过夜），无水乙醇2次，每次1~2h。
4．透明、加蜡：5级氯仿透明，每级3~4h，纯氯仿2次，每次2h，加碎蜡，然后置36℃温箱中1~2d5．浸渗、包埋：50%、70%蜡各3h，再经纯蜡A、纯蜡B、纯蜡C三杯，每杯1h，包埋。
6．修蜡块、切片：粘蜡块时组织块直立于台木上，并用单面刀片切除先端石蜡，浸水软化后放在切片机上坐横切片，切片厚12μm。
7．展片、粘片、烘片：蜡片先镜检，每张载玻片上放2个蜡片，展片后将材料平放在摊片盘上，放置36℃温箱中烘干。
8．脱蜡、透明：二甲苯脱蜡、透明各1次。
9．染色（番红-固绿双重染色）：在已脱蜡的材料上滴注无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、30%乙醇、蒸馏水各4~5s，苯胺番红染色5~10min，用蒸馏水洗去浮色。
10．脱水、透明：各级乙醇脱水（30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇），苯胺固绿复染30~40s，再经95%乙醇，无水乙醇，1/2无水乙醇+1/2二甲苯、二甲苯2次，各约4~5s，最后置二甲苯缸中。
11．封片、烘片：加拿大树胶封片。
封片后将材料平放在摊片盘上，放置36℃左右的温箱内烤数天即可烤干。
最后，将干燥好的切片上的浮色擦净，并在玻片的左端粘上标签，注明组织切片的名称、染色方法、固定方法、年月日。
制片日程（二）花芽纵切片制片法1．取材2．固定：FAA液中固定24h，并保存在其中。
3．整染：经70％乙醇、50%乙醇各2~4h，转入爱氏苏木精稀释液（爱氏苏木精原液1份，加入50%乙醇及乙醇各半的混合液1份）中整染2~3d。
4．水洗、反蓝：蒸馏水浸洗，勤换水至无浮色渗出，再转入自来水中，换1~2次水，至样品由紫色变深蓝色为止，共需时约1d。
石蜡切片制作方法
石蜡切片用途：1.研究植物组织内部结构；2.原位杂交，揭示基因在植物体的表达部位或者特定的发育时期；3.组织化学，显示细胞内的某些化学成分（核酸，多糖，淀粉，脂肪，木质素等）。
制作步骤：Day1 取样固定FAA固定液固定：真空抽气30min，室温下24h，4℃存储。
目的：保持细胞组织在活体状态下的成分和结构。
1.FAA配方(1L)：福尔马林100ml，乙酸30ml，50%乙醇870ml；2.固定用的容器：青霉素小瓶，10ml离心管，蓝盖瓶等。
Day2 脱水切片材料脱水：除去组织内的水分，使细胞组织变硬，也便于透明剂进入细胞内。
30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇，各1.5h。
材料在70%乙醇中过夜或者4℃长期保存。
Day3 继续脱水、透明、透蜡1. 70%乙醇中过夜的材料继续脱水; 85%(1.5h)→95%(1.5h)→100%（1h）→100%（1h）为了使材料脱水彻底，纯乙醇要换2次，每次1h。
2. 透明：使透明剂二甲苯进入组织内，以便使石蜡透入组织。
1/5二甲苯+4/5乙醇（1h）→2/5二甲苯+3/5乙醇（1h）→3/5二甲苯+2/5乙醇（1h）→4/5二甲苯+1/5乙醇（1h）→纯二甲苯（1h）→纯二甲苯（1h）。
在装有材料的小瓶上画5格刻度线，每次吸取一格加入二甲苯，直至纯二甲苯。
3.透蜡：透蜡注意从低浓度到高浓度，从低温到高温，使石蜡慢慢透入组织中，透蜡过程逐步升温37℃→42℃→58℃（可不用）。
【将二甲苯吸出，仅剩没过材料的二甲苯，加入碎蜡至瓶满，碎蜡一完全融化，再加入碎蜡，直至瓶满。
】透蜡持续三天。
Day7 纯蜡透蜡、包埋1. 换用纯蜡继续透蜡，换纯蜡3次，每次2h，包埋。
（此处在60℃--65℃恒温中进行，依蜡熔点而确定）。
此时要换入液体状纯蜡，先将固体纯蜡在烧杯中80℃水浴或者用电炉烧开水使其熔化，然后放到60℃--65℃恒温箱中备用。
2. 包埋：使用包埋机进行, 叠小盒子并作标记，将纸盒注入适量的蜡（依材料大小而定）。
石蜡切片的详细制作过程
石蜡切片的详细制作过程石蜡切片的制作过程石蜡切片的制作过程主要包括：取材，固定，脱水，透明，透蜡，包埋，切片，贴片，染色，透明，封藏等步骤。
1．取材材料的好坏直接影响到切片的质量，无论取哪一种动植物材料，以下几点是必须注意的。
（1）植物材料选择时须尽可能不损伤植物体或所需要的部分；动物材料取用时常对动物施以麻醉，常用的麻醉剂有氯仿和乙醚，或将动物杀死后迅速取出所需要的组织。
（2）取材必须新鲜，这一点对于从事细胞生物学研究尤为重要，应该尽可能割取生活着的组织块，并随即投入固定液。
（3）切取材料时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤。
（4）切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。
一般厚度不超过2mm，大小不超过5×5mm2。
2．固定组织和细胞离开机体后，在一定时间内仍然延续着生命活动，会引起病理变化直至归于死亡。
为了使标本能反映它生前的正常状态，必须尽早地用某些化学药品迅速地杀死组织和细胞，阻抑上述变化，并将结构成分转化为不溶性物质，防止某些结构的溶化和消失。
这种处理就是固定。
除了上述作用外，固定剂会使组织适当硬化以便于随后的处理，还会改变细胞内部的折射系数并使某些部分易于染色。
固定剂的作用对象主要是蛋白质，至于其他成分如脂肪和糖，在一般制作时不加考虑，如要观察这些物质，可用特殊的方法将其固定下来。
固定剂的作用表现在对材料体积的改变、硬化的程度、穿透的速度以及对染色的影响等方面。
这些作用的好坏、大小，都依所固定的材料性质而定，同样一种固定液对某一材料来说是良好的，但对另外一些组织可能就不很适用。
良好的固定剂必须具备的特征是：穿透组织的速度快。
，能将细胞中的内含物凝固成不溶解物质，不使组织膨胀或收缩以保持原形，硬化组织的程度适中，增加细胞内含物的折光度，增加媒染和染色能力，具有保存剂作用。
固定剂有简单固定剂和混合固定剂的划分。
简单固定剂即单一的固定剂，常用的有乙醇、甲醛、冰醋酸、升汞、苦味酸、铬酸、重铬酸钾和锇酸。
植物组织石蜡切片的制作
• (1) 明胶液：这是粘片最常用的胶液，简便优良，配法是100毫 升纯水中，加明胶4毫克，加热熔化，过滤即得。
• (2) 梅氏蛋白质： • 鸡蛋清 50ml • 甘 油 50m1 • 水杨酸纳 1g • 用蛋白与甘油搅拌，同时加入水杨酸纳，调匀过滤，应用时以滤
液15滴，放入纯水50毫升中即得。 • (3) Land氏液： • 阿拉伯胶 1克 • 重铬酸钾 0.2克 • 纯 水 100毫升
贰
修块、粘块、整修的步 骤：
叁
选取所要切片的材料， 从包埋的石蜡块上用单 面刀片切割下来，注意 不可损伤包埋的组织。
肆
确定切面的方位，用刀 片将石蜡块的四面作初 步的整修。保证材料四 周都有石蜡包围。但不 可太多。切面的上、下 边平行。
01
点燃酒精灯，并准备一把旧的解 剖刀。
02
左手大拇指与食指间持整修好的 石蜡块，材料向上用其余三指夹 住台木。此时将解剖刀在酒精灯 上加温后，即放在台木与石蜡块 之间，因解剖刀已加温，遇上两 面的石蜡都会融化，可立即将解 剖刀抽出，石蜡块迅速压在台木 上。
切成的蜡带到2030厘米时，即以右 手用另一只毛笔轻 轻将蜡带挑起，平 放在黑电光纸上。 靠刀的一面较光滑， 应向下，较皱的一 面向上。
切下的蜡片是否良 好，此时应先行检 查。
切片工作结束后， 仍将刀片用具擦拭 干净。
01
贴片：贴附牢固，在染色时不易脱落；是皱褶的蜡片伸展平整。
02
用具：载玻片、粘片剂、解剖刀、蒸馏水、展片机及铐片机。
用解剖刀将蜡带切成小段， 每段的长度应以盖玻片的 长度为准，一般应比盖玻 片短约1/5-2/5。分片应 从蜡带交界处分。
将蜡带轻轻移到涂有水的载玻片上，蜡片光面应向下贴在载 玻片上，依次排列整齐。留出右端贴标签处。
植物组织切片制作以及注意事项(精)
植物组织石蜡切片的制作以及注意事项1 植物组织石蜡切片的制作方法⑴固定:用50%或70% FAA固定液(50%或70%酒精:甲醛:冰乙酸=16:1:1; 幼嫩材料用50 % FAA;老的材料用70%的FAA,置于4℃固定24 h。
⑵脱水:将固定液倒去,加入50%乙醇,室温静置30 min;重复一次,室温静置20 min。
换成1%番红O溶液(用70%酒精配制,室温脱水染色过夜。
次日继续脱水,酒精浓度梯度和时间依次为:80% 乙醇1h、95% 乙醇1h、无水乙醇1h、40min(2次。
⑶透明:1/2无水乙醇+二甲苯混合液1h,纯二甲苯1h、40 min(2次。
最后加入少量二甲苯(浸没材料即可和碎蜡,放入38℃温箱中过夜。
⑷浸蜡:将温箱温度调至56℃,计时1h;换成二级蜡1h;三级蜡(3次各1h、1h、40min(从温度上升到56℃开始计时。
⑸包埋:将带有材料的液体蜡倒入叠好的纸槽中,迅速放入冰水中使蜡凝固,防止气泡产生,以及凝蜡不匀。
⑹切片:修整蜡块,用Lica RM2126切片机切片,厚度5-10 μm。
⑺贴片: 在载玻片上涂少许粘片剂,将切好的蜡带放入温水中,捞至载玻片上,最后置于37℃恒温箱过夜烤片。
⑻脱蜡及染色:①番红-固绿对染ⅰ脱蜡:二甲苯60min,二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、1%番红室温过夜。
ⅱ染色:80%乙醇5 min,1%固绿(用95%酒精配制迅速蘸一下,大约10s,直接放到95%乙醇5min 、无水乙醇5min、无水乙醇5min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5min、二甲苯5 min(2次。
②甲苯胺蓝染色ⅰ脱蜡:二甲苯60 min、二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、70%乙醇5 min、50%乙醇5 min 、30%乙醇5 min、蒸馏水5 min。
石蜡切片的制作
石蜡切片的制作的实验指导石蜡制片法是将材料经过固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方法，是永久制片法。
是光学显微镜的制片技术中最常用的一种方法。
（一）材料的采集与分割•采集材料应根据制片的目的和要求而定，材料要有代表性，无病虫害或其它损伤，如要观察病理解剖，则要取病斑、病症部位。
为使固定液能迅速的渗透材料，材料要进行分割。
分割时动作要迅速，以防材料萎蔫。
分割块的大小，宜小不宜大，一般不超过1cm3，分割后立即杀死固定。
•操作：取来桐花叶子数片，用刀片将其切割成小于1cm3大小的小块取材原则：•植物材料的取材（注意季节；横切面，纵切面）•动物组织的取材（各器脏的全部组织结构或重要结构，如消化管包括粘膜、粘膜下层、肌肉和外膜四层结构；切割方向，取材大小）注意事项：•遵循准确、典型、完整、适时原则•固定剂的选择•刀须锐利•详细记录时期、采集地点、标本名称、年龄、性别、取材部位、断面和所用固定剂等（二）杀死与固定•利用药剂迅速把细胞杀死，以保持材料本来的状态和结构。
•将F.A.A固定液放在具塞小瓶中，投入材料，盖好瓶盖，时间为24小时。
说明：F.A.A固定液既是良好的固定剂，也是保存剂，因此材料可长期保存在固定液中备用。
卡诺固定液穿透力强，固定较小材料一般1~6小时即可，最多不超过24小时。
因卡诺固定液不能做保存剂，所以固定后要用95%、85%酒精浸洗，每级约20min.，然后保存在70%的酒精中备用。
（乙醇+醋酸：F.A.A，也称卡诺氏固定液）固定和固定剂•固定的概念和目的••将所要观察的新鲜组织割取后立即投入某种固定剂中，通过化学药品的作用保存组织、细胞的形态结构，不使其改变形态和变质的一种措施•固定的作用和目的••防止组织自溶和腐败，保存细胞内蛋白质、脂肪、糖、酶等成分••使细胞成分沉淀和凝固，因而产生不同折射率，造成光学上的差异，使某些看不清的结构变得清晰，而且有些固定剂可使细胞各部分容易染色••固定剂兼有硬化作用，使组织硬化不易变形，利于后续操作••固定的主要目的是保持材料生活时的状态。
石蜡切片的制作
石蜡切片的制作试验药品和仪器试验药品：酒精、二甲苯、石蜡、番红、固绿、冰醋酸、甲醛、明胶、甘油、石碳酸、中性树胶。
试验仪器：石蜡切片机、组织包埋机、水浴锅、染缸、烘箱。
试验方法1 叶片组织结构的观察对叶片组织结构的观察采用石蜡切片法。
具体操作步骤如下：1. 取材。
选取生长良好的叶片，用水清洗干净，擦干，沿主脉切取2m m×5mm 的小段。
2. 固定。
将切取的植物材料立即放入FAA固定液中（材料与固定液比例1:20），用真空泵抽气（使固定液尽快渗入材料中，并排除材料内气泡的干扰），固定时间48h以上。
FAA固定液配方：50%酒精、冰乙酸、甲醛（37%-40%）按18:1:1的比例配置。
3. 冲洗。
材料从固定液中取出后，用70%的酒精冲洗3次，每次间隔2h，并在70%酒精中过夜。
4. 脱水。
酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行：70%酒精—80%酒精—95%酒精—无水酒精—无水酒精，每级酒精中放2h，无水酒精分2次，一次2h。
5. 透明。
纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的酒精。
材料块在这类媒浸液中浸渍，出现透明状态，此液即称透明剂，透明剂浸渍过程称透明。
通常组织先经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1～2小时，再转入纯透明剂中浸渍。
具体为：1/3二甲苯+2/3无水酒精（加番红染色，以便透明后找到材料）—1/2二甲苯+1/2无水酒精—2/3二甲苯+1/3无水酒精—二甲苯—二甲苯，每级二甲苯中放2h，纯二甲苯分2次，每次放1h。
材料进入无水的透明剂中后，若透明剂变浑浊，说明材料中的水分未脱干净，必须回到前面一级无水的脱水剂中再次脱水。
6. 浸蜡。
夏季采用熔点较高的石蜡（56-58）,冬季宜选用熔点较低的石蜡（52-54）。
新蜡应溶一次，增加密度，反复溶的旧蜡包埋效果更好。
在溶蜡箱中进行55-60℃，恒温。
石蜡切片实验报告
石蜡切片实验报告石蜡切片实验报告实验目的：熟悉石蜡切片技术的操作方法，了解石蜡切片制备的过程，并观察切片的结构。
实验原理：石蜡切片是一种常用的组织学检查方法，常用于生物组织的切片制备。
石蜡可以通过渗透，浸渍和固化来固定生物组织，并使其变硬，便于切割。
切片制备过程中，石蜡会填充生物组织的间隙，使组织保持形状和结构，便于显微镜下的观察。
实验材料：1. 组织样本：动物组织片或植物组织片2. 10% 罗丹明B 染液3. 显微镜玻片和盖玻片4. 切片刀、切片夹、玻璃棒5. 石蜡实验步骤：1. 取出石蜡块并加热至熔化状态。
注意，石蜡的熔点通常在60-65°C。
2. 取出组织样本，并用10% 罗丹明B 染液浸泡片段10-15分钟，以染色组织。
3. 将熔化的石蜡倒入切片模具中，随后将组织样本放入石蜡中，确保完全浸没。
4. 将切片模具放入冷却器中，降温至室温，使石蜡凝固。
5. 取出切片模具，用切片刀将切片切下。
切割时，角度和刀的质量对切片质量都有影响，所以操作要尽量快速、准确。
6. 将切片用切片夹固定在显微镜玻片上。
7. 用玻璃棒平均地将切片摊开，以避免切片叠合。
8. 将切片放入加热板上烘干至石蜡融化。
9. 取出加热板，用盖玻片覆盖在切片上。
实验结果：通过显微镜观察切片，可以清晰地看到组织的细胞结构和细胞器，以及组织之间的关系。
切片的质量和染色效果会受到操作技术和实验条件的影响。
实验总结：本实验通过熟悉石蜡切片技术的操作方法，使我了解了石蜡切片制备的过程，并通过观察切片的结构，加深了对生物组织的了解。
同时，实验也提示了切片制备中的一些注意事项，例如切割角度和切片刀的质量对切片质量的影响等，这将为今后的实验操作提供有益的参考。
植物石蜡切片的制作
一、实验目的：通过对材料的固定、脱水透明、浸蜡、包埋、切片等实验操作，了解石蜡切片的基本过程，掌握石蜡切片的制作方法。
二、实验准备：1．用具小标本瓶，指管，眼科镊子，蜡杯，载玻片，毛笔，蜡铲，刀片，量筒（10）毫升，漏，滴管，酒精灯，小木块，切片木框，切片盒，吸水纸，标签纸，切片刀，熔蜡箱，展片台，真空泵，解剖针。
2．器皿的清洗指管的清洗：切片所用的载玻片必须洗得很干净，否则切片容易脱落。
新的载玻片用洗液浸泡半天取出，用自来水冲洗后，用纱布擦干净，放入盒内备用。
擦拭时应捏住玻片两端的边缘操作，手指勿与玻片的表面接触，以免手指上的脂肪沾污玻片。
盖玻片的擦洗：新的盖片可放入95%酒精内浸泡数十分钟，或用洗液浸泡。
注意盖片要一片片投入，使盖片的二面都接触到液体，浸泡后，水冲洗干净后再放入95%酒精中浸泡，然后用干净白布擦拭。
擦拭时应注意，手指不能接触玻面，应以左手拇指和食指夹持盖片，右持布趁酒精未干时，一一擦拭之。
3．实验需用药品及其配制70%、85%、95%、100%的酒精，二甲苯，甘油蛋白，固定液，石蜡。
1各种浓度酒精配制实验室常以95%酒精来配制各种低浓度的酒精，因100%纯酒精系由95%酒精再蒸馏而成，价格昂贵，一般不用于稀释。
配制方法：配70%酒精时，可取95%酒精70毫升再加入蒸馏水25毫升即得。
一般遵照以下原则：无论用任何浓度的酒精稀释时，即稀释多大浓度就取多少毫升的酒精，然后用蒸馏水加至该酒精原有浓度即可。
2固定液的配制采用卡诺氏醋酸酒精固定液，醋酸用冰醋酸，酒精用纯酒精，体积比为醋酸：酒精=1：3。
注意须现配现用。
取鸡蛋的蛋白加入等量的甘油搅拌混合，至均匀为止。
加入约为1%量的麝香酚小块，借以防止微生物的侵入和腐败。
放入冰箱备用。
三、实验材料：蚕豆根尖或洋葱根尖等。
四、实验步骤：取材固定发芽的蚕豆，当其根尖长到一粒米大小时，用刀片切下来，立即投入盛有固定液体的标本瓶中，贴上标签，注明固定日期、固定液名称。
植物解剖学方法-石蜡切片
常用的粘片剂为明胶粘贴剂： 甲液：明胶 甘油 1克 15毫升
蒸馏水 100毫升 苯酚
乙液：甲醛 蒸馏水
2克
4毫升 100毫升
8. 脱蜡及复水
顺序： 二甲苯→1/2 二甲苯+1/2纯酒精→100%酒精→95％酒精 →85％酒精→70％酒精→50％酒精→30％酒精→水→染色 以上各级约需5～10分钟。
6. 切片
常用的切片机为轮转切片机。 通常切片厚度为8～12微米，将切好的蜡带用毛笔 轻托轻放在纸上。
7. 粘片与展片
在载玻片上涂抹粘片剂，再滴蒸馏水，放上蜡片， 至于展片台上铺展，最后用滤纸吸除多余水分， 将载玻片放入25-30℃温箱中干燥。
应将蜡片背面（光滑面）与载玻片接触粘贴。
固定组织时应注意： 保持组织新鲜，勿使其干燥，尽快固定处理。 固定液必须有足够的量，一般大于组织20倍以上。 抽气：使固定液尽快渗入材料内部，并排除材料内 气泡的干扰。最简单的抽气方法是将材料及固定液 10-15ml装入医用注射器中，用左手食指堵住注射器 针管吸口，右手抽气，反复多次直至材料下沉为止。 通常在冰箱中4℃存放。
3. 脱水
脱水是用脱水剂逐步取代样品中水分的过程。
酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混。 为了避免组织材料的急剧收缩，应按从低浓度到高浓度递增 的顺序进行. 50%---70%---85%---95%--100%--- 100% 每步30-60分钟左右。 （若固定液酒精浓度为70%，则直接从70%浓度酒精开始梯度 脱水） 材料如需过夜，应当停留在70%酒精中。
脱水后的材料 无水乙醇1/3 二甲苯 2/3
无水乙醇2/3 二甲苯 1/3
无水乙醇1/2 二甲苯 1/2 纯二甲苯
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植物组织石蜡切片的制作一、实验目的1．熟练掌握石蜡切片的方法。
2．掌握永久制片的制作过程，为研究植物的内部结构奠定基础。
3．学会植物内部结构的比较研究方法。
二、实验器具与试剂1．器具石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。
2．试剂10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。
三、实验材料幼嫩植物各部分，根据季节选择材料。
四、实验内容与方法石蜡切片法是显微技术上最重要、最常用的一种方法。
它是把材料封埋在石蜡里面，用旋转切片机切片，可以切出很薄的切片。
凡是精细的工结构，大都用石蜡切片。
全都过程如下：1．固定 2．洗涤 3．脱水与硬化 4．脱酒精 2．封埋 6．切片7．粘片 8．脱蜡 9．染色 10．脱水 11. 透明 12．胶封（一）固定1．固定的意义：固定就是用药品把细胞杀死，使细胞的原生质凝固，死后不发生变化，尽可能保持原来的结构以供我们观察。
良好的固定剂，应是穿透力强，使细胞立刻致死，原生质全部凝固；不发生任何变形，增强折光率，并且不妨碍染色。
2．固定液的种类：固定液的种类很多，根据配制成分可划分为：(1) 简单固定液：以一种化学药品配制的固定液。
常用的简单固定液有：A．酒精即乙醇，用作固定液，常用纯酒精或95％酒精。
酒精穿透力强，固定时间常在1小时以内。
高浓度酒精有使材料收缩的作用。
70％的酒精可作保存液。
配制低度酒精必需要用普通酒精即95％的酒精，绝不可用纯酒精。
酒精为还原剂，不能与铬酸、锇酸、重铬酸钾等氧化剂配合。
酒精可使核酸，蛋白质及肝醣等发生沉淀，但能溶解脂肪及拟脂。
B．福尔马林即甲醛，具强烈刺激性的气味，纯净的甲醛，为无色透明液体。
固定用的浓度为4-10％甲醛也是强还原剂。
不能与铬酸、锇酸等氧化剂配合。
经固定后，材料变硬，通常不引起皱缩，但随后经过他种药剂处理时，就每每出现皱缩。
所以甲醛一般不单独作固定，而与其他液体混合使用。
C．醋酸：为无色透明的液体，刺激性极强，冷则凝结成冰，故又叫冰醋酸。
醋酸以与水和酒精配成各种比例的溶液，所用浓度为0.2～5％，也常与其他固定剂配合使用。
醋酸穿透性很强，单独使用，有使原生质膨胀的作用，故常与酒精，甲醛等合用，醋酸为固定染色体的优良固定液，因此固定染色体的固定液中，几乎都含有醋酸。
(2) 混合固定液：由几种药剂，适量配制而成。
常用的有下列几种：A、F.A.A固定液(又称万能固定液)：[用途]这个固定液在植物研究上，应用最多，为植物组织最常用的固定液。
固定时间，不受限制，短为24小时，长可延至数月或数年。
野外工作，非常便利。
并且固定的材料，不妨碍染色，但对染色体的固定不佳。
材料固定后，用50％酒精洗涤数次。
[配法]50％或70％酒精 90毫升冰醋酸 5毫升福尔马林 5毫升柔软材料用50％酒精，坚硬材料用70％酒精配制。
B、卡尔诺氏(Carnoy's)固定液[用途]此液作组织细胞的固定，有极快的渗透力，固定根尖和花药只需40-60分钟。
固定后用95％酒精冲洗，在组织不能立即处理时，需转入70％酒精中保存。
配法有两种：C．纳瓦兴(Navaschjn's)固定液[用途]此液在植物制片上应用甚广，是细胞学及组织学上一种优良的固定液。
此液原来的配方已很少应用，现所用的都是改良液，且种类很多，如材料较柔嫩，含水量较多，可用配方I、Ⅱ；材料较坚硬，含水量较少，可用Ⅳ、V 配方，其中配方Ⅱ对植物胚胎学制片特别适用。
为了使用方便，常分别配成甲、乙两种基液，用时临时等量配合。
固定时间为12-24小时，固定后用70％酒精洗涤数次。
(二)洗涤材料固定后，药剂继续留在组织中，易使组织破坏，必须用水或酒精洗去。
用什么去洗，可根据三条原则：1．凡用水溶液配制的固定液，特别是含有铬酸、重铬酸钾的固定液，一律用水洗。
2．凡用酒精配制的固定液，一律用同浓度的酒清洗。
3．如固定液中含有苦味酸．在70％酒清中停留稍久时，可除去黄色。
如用升汞固定的材料，在洗涤时，须加碘液，可除去汞的结晶。
（三）脱水与硬化材料洗涤后，其中含水，水与石蜡不能混合，必须洗去。
去水用酒精，材料由水入酒精中，不能操之过急，须由低度酒精渐至高度酒精。
通常由30％、50％、70％、80％、90％，每次须经半小时，材料大的，时间须延长。
若暂时不能埋蜡、材料可放在70％酒精中保存，经久不坏。
在高度酒精中，不能过久．因酒精能使材料硬化，过久则材料由硬而脆，切时易于粉碎。
（四）脱酒精材料脱水后，材料中全含酒精，酒精与蜡也不能混合，仍须除去。
脱酒精通常用二甲苯，材料由酒精入二甲苯，最好也渐次进行，先经纯酒精二甲苯混合液，再入纯二甲苯中，纯二甲苯须换一、二次才行。
时间每次约半小时。
二甲苯不仅脱去酒精，并且透明，所以又叫透明剂。
（五）埋蜡埋蜡是把材料封埋在石蜡里面，便于切片。
一方面材料太小太软封在石蜡中，石蜡硬度适中，靠石蜡支持，才能切成薄片。
另一方面，材料封埋后，不仅材料外面包着蜡，材料内面所有空隙也都充满着蜡。
这样，材料的各部分都能保持原来的结构与位置，切片不致发生破裂或其他变形。
所用石蜡，质地必须纯净，溶点通常在48～56℃这个范围内，以52℃的石蜡用得更多。
在材料不硬，天气不热时，宜用较低熔点的蜡。
材料硬，天气热的情形下，宜用高溶点的蜡。
石蜡选定后，将石蜡切成小块，置瓷皿中加热溶蜡，待石蜡近于全部熔化时，置于温箱中。
在进行封埋的全部过程中，石蜡的温度，总以高于溶点2℃为宜，过低石蜡凝固，过高伤害材料。
材料脱酒精后，要进行浸蜡，再进行埋蜡。
浸蜡也宜于渐次进行，一般先用石蜡和二甲苯的混合液浸蜡，再用纯石蜡换一、二次，每次的时间，视材料大小而定，通常每次半小时，材料大，时间必须加长。
在浸蜡的过程中，须注意温度，不能超过2℃以上。
浸蜡后，须将材料封埋在蜡块中，通常以磅纸折成纸盒(如图所示)。
在盒内底上，用软铅笔反书材料及日期等，然后把蜡倒入盒内，将材料移入纸盒中，依将所要切的方向，妥善排列，再以两手平持纸盒，移至冷水中，用口在蜡面上吹气，促其凝结，待蜡面凝成簿层时，将纸盒全部沉入。
水冷凝后，将纸撕去，即获蜡块，至此埋蜡完成。
折纸盒按下列顺序折叠：(1) 折AA'及BB'；(2) 折CC'及DD'；(3) 折CE'与AE'、向外夹出EE'。
同样折出FF'，GG'及HH'；(4) 使CE'E与E'IE两三角形相叠，并沿E'C和EI重叠的折痕向后转折。
同样折其余三只角；(5)折RIJF向外，同样折出GKLH，即折成所需的纸盒。
（六）切片石蜡切片，用旋转切片机。
一个旋转切片机，可分三个部分，一个是安装切片刀的部分，有调节刀片斜度和固着刀片的螺旋。
一个是安装材料的部分，也有螺旋可以调节材料的位置。
另一个是操纵在旋转中向前推进的部分，控制着切片的厚薄，是比较重要而复杂的部分。
切片步骤：1．先将冷凝的蜡块，切成小块，粘固在小木头上。
2．安装切片刀，刀的斜度，非常重要，最好先切除的蜡块试刀，以确定刀的斜度，一经调度适合后，就不要随便变动，以免每次试刀的麻烦。
3．修整蜡块，刀片斜度调好后，将刀片移近蜡块，使小蜡块的下边与刀锋平行，然后把它固定，再转下蜡块．呈矩形才行。
只有平整的蜡块，才能切出平整的蜡带。
4．最后根据需要，调整控制切片厚度的机制。
调度后，把它固定下来。
上述四步骤完成后，就可进行切片，将切出的蜡带，平展于盒内以供粘片。
（七）粘片材料切成薄片后，须将切片粘在玻璃片上，加热展开，这叫粘片。
所用载玻片必须清洁才能使用。
粘片时，需把胶液(或称粘贴剂)置簿玻片上，再取切片，浮置胶液上，然后置烘片台上，使切片展开烫平，材料不现皱纹为度。
最后将切片依次排好，用滤纸吸去多余水分，同时以记号笔在玻片上编号，放入温箱中烘干，温度30～40℃约1小时即干。
常用的胶液有下列三种：(1) 明胶液：这是粘片最常用的胶液，简便优良，配法是100毫升纯水中，加明胶4毫克，加热熔化，过滤即得。
(2) 梅氏蛋白质：鸡蛋清 50ml甘油 50m1水杨酸纳 1g用蛋白与甘油搅拌，同时加入水杨酸纳，调匀过滤，应用时以滤液15滴，放入纯水50毫升中即得。
(3) Land氏液：阿拉伯胶 1克重铬酸钾 0.2克纯水 100毫升（八）脱蜡玻片烘干后，须将蜡脱去，才能染色，脱蜡用二甲苯，再经酒精入水中，而后染色，其顺序如下：二甲苯→1/2 二甲苯十1/2纯酒精→100%酒精→95％酒精→85％酒精→70％酒精→50％酒精→30％酒精→水→染色以上各级约需5～10分钟。
（九）染色染色的方法很多，视研究目的加以选择。
现就研究植物组织和研究细胞分裂常用的两种染色方法介绍如下：1．番红与固绿色法番红用l％的水溶液，固绿用0.5％的酒精液(用95％的酒精配制)，染色步骤如下：讨论和注意点：(1) 用番红和固绿这个组合染成的切片，木化、栓化和角质的细胞壁，被番红染成鲜红色，纤维素的细胞璧，被固绿成绿色。
就维管束来讲，木质部染红，韧皮部染绿，区别极清楚。
(2) 在50％酒精中脱色，需经实践，如脱色不够，绿色难得染好，脱色太过分，做出来的切片，红色太淡，甚至于全是绿色，失掉了二色染法的用意。
(3) 染色时间，不是绝对的，常因材料种类，切片的厚簿而不同，在没有把握时，最好选用少数材料试染，试染成功后，再依次大批染色。
2．海氏铁矾—苏木精染色法：海氏铁矾—苏木精染色法的特点，是在染苏木精以前，用铁明矾做媒染剂，在染苏木精以后，又用铁明矾液鉴定(脱色或分色)。
所用铁明矾液，为2～4％的水溶液，此液须在用前数日临时配制。
配成后不能见光，须置暗处，或用有色玻瓶装。
也不能保存太久，大约二月内可用，用时，每次更换。
所用苏木精液，为0.5％的水溶液。
此液配成后，须经1～2月，待它氧化成熟以后才能应用，故必须先配制。
苏木精在水中溶解很慢，约需10日才能完全溶解，若需用不急，可直接用蒸馏水配制。
若想加速溶解，可先用酒精溶解，再加入蒸馏水。
苏木精 0.5克酒精 10毫升蒸馏水 90毫升染色步骤如下：此染色法在细胞学及胚胎学制片上应用很广，是显示细胞一般结构及细胞分裂的优良染色液，染色结果可使染色体呈兰黑一—紫色，细胞质染成浅兰色或浅灰色。
在染色过程中所需注意的是：① 分色后，用水洗净铁矾液，最好用流水，如无流水，须多更换水。
若冲洗不净，将来继续褪色。
② 在铁矾液中分色，须时常取出在显微镜下检查，到细胞质的染色很淡即止。
（十）脱水、透明、胶封脱水用酒精，由低浓度酒精至高浓度酒精依次进行，最后入纯酒精更换一次，用二甲苯透明，用树胶封片，其步骤与前面所述永久制片相同。