真菌多糖药理作用及其提取_纯化研究进展
香菇多糖提取工艺的研究进展
香菇多糖提取工艺的研究进展香菇多糖提取工艺的研究进展香菇Lentinusedodes 为担子菌纲伞形科真菌，是世界上第二大食用菌。
香菇多糖是香菇中最重要的一种生物活性物质，具有抑制肿瘤、调节免疫、抗病毒和抗氧化等多方面的药理活性，且毒副作用小。
香菇多糖的提取常用水提醇沉法、酸碱提取法，但存在提取工艺复杂、溶剂使用量大、时间长等缺点，而且容易造成多糖降解，生物活性降低。
本文主要对近年来香菇多糖提取工艺优化研究方面的进展进行阐述。
1.超声波提取超声波提取法是利用超声波特殊的物理性质，加速介质质点运动、空化作用、振动匀化等以增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，从而使药效物质加速融人溶剂提高有效成分的得率。
王恒等用超声波辅助法从香菇中提取香菇多糖，通过实验优化确定出香菇多糖最佳提取工艺为超声功率200W ，料液比35：1，超声时间40min ，香菇多糖提取率为6.72 ％。
王俊颖等采用超声法浸提香菇多糖通过正交试验设计确定的最佳工艺为料水比1 : 25，超声温度60° C超声时间30min , 超声功率300W ，多糖得率为8.72 ％。
李宏睿等采用正交试验设计，对香菇多糖的提取条件进行优化，并与单纯的热水浸提进行比较。
结果表明，在料水比l：25 ，超声时间35min ，超声功率105W ，热水浸提温度90 ％，浸提时间20min 的条件下，提取效果最好，多糖提取率为13.75 ％，比单纯热水浸提法提高6.22％。
2.微波提取微波辅助提取技术主要是通过调节微波加热的参数，有效地加热物料中的目标成分，对目标成分进行选择性提取。
刘小丽等研究微波辅助法提取香菇多糖采用单因素试验对固液比、微波辐射功率、辐射时间、乙醇用量以及杂蛋白的去除条件分别进行了考察。
试验结果表明最佳提取工艺条件为固液比1：20mL ，微波辐射功率为280W ，辐射时间5min，乙醇与多糖提取液体积比为4：1，香菇多糖提取率可达到9.46 ％。
多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展
多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展多糖是一类含有多个糖基的生物高分子化合物，广泛存在于植物和动物体内。
多糖具有多种生理功能，如调节免疫系统、抗氧化、抗菌、抗肿瘤等。
多糖的提取纯化、化学修饰和抗氧化性研究对于开发多糖的生物活性和应用具有重要意义。
多糖的提取和纯化是多糖研究的基础工作。
传统的多糖提取方法包括浸提法、酶解法和离子溶液沉淀法等。
浸提法是将原料与溶剂接触，在适当条件下提取多糖。
酶解法是通过适当的酶对原料进行酶解，从而获得多糖。
离子溶液沉淀法是利用离子溶液与多糖反应，形成离子复合物，再通过沉淀和洗涤等步骤获得纯净的多糖。
还有一些新型的多糖提取方法，如超声波辅助法、微波辅助法和离子液体辅助法等。
这些新型的提取方法能够更高效、更快速地提取多糖，并且能够减少对环境的污染。
多糖的纯化是为了去除多糖样品中的杂质，提高多糖的纯度。
目前常用的纯化方法有超滤、透析、凝胶渗透层析和离子交换层析等。
超滤是利用超滤膜的筛分作用，将多糖和较小分子的杂质分离。
透析是通过半透膜的选择性渗透，将多糖和低分子物质分开。
凝胶渗透层析是利用凝胶颗粒的孔隙大小分离不同分子大小的物质。
离子交换层析是通过阳离子交换剂和阴离子交换剂对多糖样品进行交换，从而实现多糖的分离纯化。
化学修饰是将多糖分子与化学试剂反应，改变多糖的化学结构和性质。
常用的化学修饰方法有酯化、醚化、羧化、硫酸化和甲基化等。
酯化是将多糖中的羟基与酸反应，形成酯键的修饰方法。
醚化是将多糖中的羟基与醚试剂反应，形成醚键的修饰方法。
羧化是将多糖中的羟基与羧基试剂反应，形成酯键或酰胺键的修饰方法。
硫酸化是将多糖中的羟基与硫酸试剂反应，形成硫酸酯的修饰方法。
甲基化是将多糖中的羟基与甲基试剂反应，形成甲基基团的修饰方法。
化学修饰能够改变多糖的理化性质和生物活性，拓宽多糖的应用领域。
多糖的抗氧化性是指多糖对有害自由基的清除能力和抑制氧化反应的能力。
多糖的抗氧化性主要通过两种方式实现：直接清除自由基和间接抑制氧化反应。
真菌多糖药理作用研究进展
真菌多糖药理作用研究进展【关键词】真菌多糖；，，构效关系；，，，药理作用摘要：对真菌多糖的药理作用、种类及构效关系等研究进行综述。
真菌多糖作为“生物反应调节剂”，具有调节机体免疫力、抗肿瘤、抗病毒、健胃护肝、降血脂、血糖和胆固醇、抗血栓、抗衰老、抗辐射、祛痰镇咳等多种药理作用。
真菌多糖是新药开发的重要途径之一。
关键词：真菌多糖；构效关系；药理作用多糖是由许多单糖分子以糖苷键结合而成的天然高分子化合物，是生命有机体的重要组成部分，广泛存在于各种生物体组织中。
真菌多糖是从食药用真菌子实体、菌丝体和发酵液中分离出的代谢产物，在国际上被称为“生物反应调节剂”（简称BRM），它能够控制细胞分裂分化，调节细胞生长衰老的一类活性多糖，具有抗肿瘤、抗病毒、护肝、排毒、提高免疫力等多种生物活性［1］。
真菌多糖作为一种生物非特异性免疫促进剂，现正为人们所关注。
20世纪70年代，日本学者千原羽田首次证实了香菇多糖的抗肿瘤活性，从此国内外对真菌多糖在生物学、医学、药理学、食品科学等领域进行了大量的研究。
本文仅就真菌多糖的药理作用、种类、结构及构效关系几方面进行阐述，旨在为真菌多糖药用价值和开发利用提供参考。
1 真菌多糖结构及构效关系1.1 结构通过近二十多年对各类真菌多糖组成和结构的研究，真菌多糖的结构可分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。
一级结构是指其单糖残基的组成、排列序列、连接方式等。
真菌多糖的一级结构主链主要有两种：（1）葡聚糖，真菌多糖中的主要构成部分，以β（1→3）糖苷键连接为主，并兼有少量β（1→4）、（1→6）或其他糖苷键，香菇多糖、茯苓多糖、云芝多糖等都属于这种连接。
（2）甘露聚糖，主要由α糖苷键连接，以α（1→3）、α（1→2）糖苷键为主，侧链有α（1→3）、（1→5 ）和（1→6）糖苷键，如虫草多糖、银耳多糖、灵芝多糖等。
真菌多糖的二级结构是指多糖骨架链间以氢键结合形成的各种聚合体，这只关系到其分子主链的构象，不涉及侧链的空间排布。
真菌胞内多糖提取方法的研究进展
。国内外在真菌多糖的研究及 开
。史琦云等［4］总结归纳了食用菌 多
发利用方面的 进 展 很 快， 其 中 真 菌 多糖 的 提取 是 研究与应用的基础。真菌多糖 的 提取 过 程 就 是 使 之从细胞 内释 放、 穿 过基 质、 扩 散 到 溶 剂中的过
作者简介: 阿燕
糖提取工艺流程: 原 料 → 烘 干 至 恒 重 → 粉碎 → 准 确称量→复水→热水浸提→离 心 分离 → 上 清 液 脱 色 → 去 除 蛋 白 质 → 醇 析 → 离 心 → 干燥 → 菌 多糖
2
酸提法
心组合实验方法进行 3 因 素 3 水 平 的 实 验 设 计， 结果表明， 热水浸提香菇多糖的最佳工艺条件: 浸 提温度 78． 6 ℃ ， 浸 提 时 间 120 min， 料液比 1 58． 3 ( g / mL) ， 在此条件下的多糖得 率 和 含 量 分 别 为 14． 22% 和 38． 57% 。 热 水 浸 提 法 的 优点 为 试 验设 备 简 单， 操 作方 便， 提取 成 本 低， 适 用 于 大规 模的工业生产， 但此 法 存 在 的 不 足 是 需 经 多 次 浸 提， 而 且 费 时 费 料， 劳 动 强 度 大， 过长的浸提时间 还 会 破 坏 多 糖 的 结 构， 进而导致其生物活性的 降低。 随着工业技术的 发 展， 一些改进的热水浸提 ［7 ］ 法开始 应 用 于 真 菌 多糖 的 提取。 刘 美 娜 等 利 用加压水提法对黑木耳子实体多糖提取过程进行 得出子实体多糖的最佳条件: 浸提时间为 了优化， 90 min， 料水 比 为 1 35 ( g / mL ) ， 浸 提 温度 为 115 ℃， 提取率 7． 1 g /100 g。结果 表 明， 在 浸 提 时 间、 温度、 料水比相同的条件下， 加压水提法的多糖提 ， 取率较高 升高压力有利于缩短提取时间， 且对多 糖本身没有破坏 作用， 相比热水浸提法有利于保 持多糖的稳定性， 防 止 多糖 在 提取 的过 程 中 发 生 水解， 也可以防止多糖失活。 亚临界水提法也是当前兴起的一种多糖提取 方法， 所谓亚临界水也被称为过热水、 高压热水或 热液态水。当水在 374． 2 ℃ 和 22． 1 MPa 以 上 的 高温、 高压条件下， 可形成既非液体又非气体的第 4 状态， 。在 此 状 态 下 的 水 即 所 谓“超 临 界 状 态 ” “超 临 界 水 ” 。 在 稍 微 低 于 此温度 和 压 力 下 称为 的水称 为“亚 临 界 水 ” 。 娄 冠 群 等 采用 亚 临 界水技术提取香菇子实体多糖， 结果表明， 最佳提
大型药用真菌多糖分离纯化技术研究进展
大型药用真菌多糖分离纯化技术研究进展邹昆中文摘要英文摘要多糖(polysaccharides)又称多聚糖，广泛存在于自然界中，是含量最丰富的生物聚合物，也是构成生命活动的四大基本物质之一。
大量文献表明，多糖不仅是作为能量资源或结构材料，且参与了生命科学中细胞的各种活动，具有多种多样的生物学功能和装载丰富生物信息的能力。
多糖作为食药用菌主要有效成分, 具有的抗肿瘤、抗病毒、增强免疫、降低血糖、抗衰老、抗辐射等功效, 越来越受到人们的关注[1](王晓洁，蔡德华，杨立红，等. 食用菌学报，2005，1（2 1）：9~13.)食药用菌生产技术水平不断发展, 食药用菌多糖的提取工艺不断优化, 传统的水提醇析法, 盐析法等由于提取效率低, 产品纯化困难等限制因素已得不到更深层次的应用[2](王卫国，赵永亮.中草药，2000，3（1 8）：584~585.)。
而新兴的现代提取分离技术, 如超声波法, 酶解法,超滤法, 透析法, 色谱法等已越来越受到研究工作者的重视,有些技术已经运用于实际生产中。
本文主要综述了近年来现代提取分离技术在药用真菌多糖分离纯化中的应用, 并对其优缺点及应用前景作了简要探讨, 对在研究或实际生产中选取合适的食药用菌多糖分离纯化方法有一定的指导意义。
1 药用真菌多糖的初步提取药用真菌多来自天然野生及人工栽培的子实体和通过菌株深层发酵培养的菌丝体，不管是哪一种都要对细胞进行处理，使其细胞内多糖最大限度的分离出来，从而使粗品得率最高。
处理方法有很多种，常用的一般有超声波法, 酶解法等。
1.1超声波法超声波可在液体中产生空化作用, 而空化作用产生的冲击波和剪切力可破坏食药用菌细胞壁和细胞膜的结构, 从而增加细胞内容物通过细胞膜与细胞壁的穿透力。
其在食药用菌多糖提取中的应用越来越广泛。
张文超等利用微波和超声波强化作用下提取金针菇子实体多糖。
他们发现, 两者都能显著增加提取液中多糖的提取率: 微波可使多糖提取率提高83.67%; 超声波可使多糖提取率提高76.22%。
医学：真菌多糖的生理活性、研究技术
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生物材料
真菌多糖可作为生物材料用于组织工程和再生医学领域。
要点二
生物工程
真菌多糖可作为生物工程的支持材料，促进细胞生长和分 化。
展望未来研究方向
深入探究真菌多糖的生理活性机 制
未来研究应进一步探究真菌多糖发挥生理 活性的机制，为其在药物、食品和生物工 程等领域的应用提供理论支持。
优化真菌多糖的提取和纯化技术
构效关系
多糖的构效关系是指多糖的结构与其 生理活性之间的关系，通过研究构效 关系可以深入了解多糖的作用机制， 为新药研发提供理论依据。
05 真菌多糖的应用与展望
药物开发与治疗
01
02
03
04
抗肿瘤药物
真菌多糖具有抑制肿瘤细胞生 长和扩散的作用，可用于开发
抗肿瘤药物。
抗病毒药物
某些真菌多糖具有抗病毒活性 ，可应用于抗病毒药物的研发
从平菇中提取的多糖，具有抗氧化、抗炎等生理活性。
药用真菌多糖
01
02
03
灵芝多糖
从灵芝中提取的多糖，具 有抗肿瘤、免疫调节、保 肝等生理活性。
冬虫夏草多糖
从冬虫夏草中提取的多糖， 具有抗肿瘤、免疫调节、 抗氧化等生理活性。
桑黄多糖
从桑黄中提取的多糖，具 有抗炎、抗肿瘤等生理活 性。
海洋真菌多糖
褐藻多糖
提高机体抗肿瘤能力
真菌多糖能够提高机体的免疫力，增强机体对肿瘤的抵抗力。
抗病毒活性
抑制病毒复制
01
真菌多糖能够抑制病毒在宿主细胞内的复制，降低病毒载量。
减轻病毒引起的炎症反应
02
真菌多糖能够抑制病毒引起的炎症反应，缓解临床症状。
真菌多糖
真菌多糖的研究综述摘要：真菌多糖是一类从真菌的子实体或菌丝体分离出来的天然高分子化合物。
真菌多糖具有抗病毒、抗凝血、降血脂、抗肿瘤、免疫调节、延缓衰老等多种生物活性，成为当今研究的重点。
本文综述了真菌多糖的种类和生理功能，并对真菌多糖的应用与开发前景作了概述。
关键词:真菌多糖；生理功能；应用多糖(Polysaccharide)是由单糖之间脱水形成糖苷键。
并以糖苷键线性或分枝连接而成的链状聚合物。
一般将多于20个糖基的糖链则称为多糖。
多糖广泛存在于动物细胞膜、植物和微生物细胞壁中，是一类天然高分子化合物，它是由醛糖或酮糖通过糖苷键连接在一起的多聚物，是构成生命的四大基本物之一[1]。
真菌多糖系是从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离出的，能够控制细胞分裂分化，调节细胞生长衰老的一类活性多糖[2]。
真菌多糖具有很强烈的抗肿瘤活性，对癌细胞有较强的抑制力。
当前，对真菌多糖的研究主要包括真菌多糖的提取纯化及结构分析和利用一些免疫指标分析其生物活性及免疫机理两个方面。
1真菌多糖的结构1.1真菌多糖的结构层次按照多糖的结构分类方法,真菌多糖的结构可分为一级、二级、三级和四级结构。
一级结构是指真菌多糖中单糖残基的组成、排列顺序、连接方式、异头物构型以及糖链有无分支,分支的位置与长短等:；二级结构指真菌多糖骨架链间以氢键结合所形成的各种聚合体，只关系到多糖分子中主链的构象，不涉及侧链的空间排布；三级结构指多糖残基中的羟基、羧基、氨基以及其他官能团之间通过非共价作用而导致的有序、规则而粗大的空间构象；四级结构指多糖的多聚链间以非共价作用力而结合形成的聚集体[3]。
1.2真菌多糖的结构分析真菌多糖的结构分析包括对其一级结构和高级结构的分析。
真菌多糖的一级结构分析包括对单糖组分,糖基连接方式、糖苷键的构型及不同苷键组成比例等的分析。
在单糖组分的分析中，一般先对多糖进行完全水解,再用纸层析、薄层层析、气相层析等方法进行鉴定；在糖基连接方式的分析中，通常采用甲基化分析法、高碘酸氧化法、Smith降解法、核磁共振等方法;在糖苷键构型的分析中,可采用糖苷酶水解、核磁共振、质谱等方法;对不同糖苷键比例的分析可通过测红外光谱相对面积来完成。
新疆阿魏菇多糖的分离纯化与结构的研究
新疆阿魏菇多糖的分离纯化与结构的研究引言：阿魏菇（Pleurotus eryngii）是一种重要的食用菌，常被用于烹饪和药用。
近年来，许多研究发现阿魏菇中含有多种生物活性物质，其中包括多糖。
多糖是一类具有重要生物功能的大分子化合物，在保健和药物领域具有广泛的应用前景。
因此，研究阿魏菇多糖的分离纯化与结构，对于了解其生物活性和开发利用具有重要意义。
一、多糖的提取与分离纯化1. 样品的准备我们选取了新疆地区的阿魏菇作为研究对象。
新鲜的阿魏菇样品经过清洗和去皮处理后，切碎成细小颗粒，以便更好地进一步提取目标物质。
2. 多糖的提取采用热水提取方法来提取阿魏菇中的多糖。
将阿魏菇样品加入适量的蒸馏水中，随后在恒温搅拌下加热，提取多糖。
3. 多糖的沉淀与去蛋白通过醇沉淀法去除多糖中的蛋白质。
在多糖溶液中加入适量的乙醇，使多糖与乙醇反应形成沉淀。
沉淀经过离心后收集，将乙醇洗涤干净。
4. 多糖的进一步纯化对于得到的多糖沉淀，可以利用薄层层析、凝胶层析等方法进行进一步分离纯化。
选择合适的分析方法可以得到纯度较高的多糖样品。
二、多糖的结构分析1. 糖类组分的检测利用紫外光谱（UV）和红外光谱（IR）等方法来检测多糖样品中的糖类组分。
UV光谱可以用于分析多糖中的糖苷键的存在情况，而IR光谱可以提供关于糖类组分官能团的信息。
2. 分子质量的测定多糖的分子质量是了解其结构特征的重要指标之一。
可以利用激光束光散射仪（Laser Light Scattering，LLS）或者凝胶渗透色谱（Gel Permeation Chromatography，GPC）等方法来测定多糖的分子质量。
3. 糖链的构建糖链的构建对于多糖的结构与生物活性密切相关。
利用核磁共振（NMR）等高分辨率技术可以获取多糖糖链的具体构建信息。
结论：通过对，我们可以得到纯度较高的多糖样品，并了解其结构特征。
多糖的提取纯化过程中使用的热水提取方法以及醇沉淀法在实验中证明具有较好的效果。
多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展
多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展多糖是一类具有重要生物活性和药用价值的天然产物，广泛存在于植物、动物和微生物体内。
由于其丰富的生物学活性，多糖在医学、食品、化妆品、材料等领域具有重要的应用价值。
多糖提取纯化、化学修饰和抗氧化性研究一直是多糖研究的热点之一。
本文将对多糖提取纯化、化学修饰和抗氧化性的研究进展进行综述，以期为多糖的应用研究提供参考。
一、多糖的提取纯化多糖的提取纯化是多糖研究的基础，其提取纯化的方法和工艺对多糖的质量和性质具有重要影响。
常见的多糖提取方法包括水提取、酸提取、酶提取、超临界流体萃取等。
水提取是最常用的多糖提取方法之一，其操作简单、成本低，适用于大多数多糖的提取。
酸提取利用酸性条件可以破坏细胞壁和细胞膜，从而释放出细胞内的多糖，适用于坚硬的植物材料和微生物细胞。
酶提取利用蛋白酶等酶类可以专一地降解细胞壁和细胞膜，从而释放出细胞内的多糖，适用于柔软的植物材料和动物细胞。
超临界流体萃取是一种高效的多糖提取方法，其操作条件温和、提取速度快、对多糖的抗性小，适用于一些热敏性和易氧化的多糖。
多糖的纯化方法包括沉淀法、凝胶过滤法、离子交换法、凝胶聚集法、超滤法等。
沉淀法是最常用的多糖纯化方法之一，其操作简单、效率高，适用于多糖的初步分离和粗提纯。
凝胶过滤法利用多糖分子在凝胶的排列和扩散特性，可以进行多糖的分子量分布分析和精细提纯。
离子交换法利用多糖和固定相之间的静电作用，可以进行多糖的离子成分分析和深度提纯。
凝胶聚集法利用多糖分子在凝胶聚集时的排列和凝聚特性，可以进行多糖的聚合状态分析和超高效提纯。
超滤法利用多糖分子在压力梯度下的分子量分布特性，可以进行多糖的分子量分布分析和高效提纯。
二、多糖的化学修饰多糖的化学修饰是多糖研究的重要方向之一，其可以改变多糖的物理性质、化学性质和生物活性，从而拓展多糖的应用领域和提高多糖的性能。
常见的多糖化学修饰方法包括羟甲基化、甲基化、硫酸化、醋酸化、酯化、酰化、醚化等。
真菌多糖的研究的现状与前景展望
真菌多糖的研究的现状与前景展望zaq摘要：真菌多糖因其无毒副作用是目前最有开发前途的保健食品和药品新资源。
本文从其提取纯化、构效关系、生物活性以及其真菌多糖的开发利用现状和研究前景等几个方面对其进行简单介绍。
关键词：真菌多糖；提取纯化；构效关系；生物活性前言：真菌多糖是从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离出的，由10个以上的单糖以糖苷键连接而成的具有生物活性的高分子多聚物。
大量的药理实验表明，真菌多糖化合物具有免疫增强与调节、抗肿瘤、抗病毒、抗凝血、抗衰老等作用，其中对多糖免疫增强作用机制的研究最为成熟，已深入到分子和受体水平[1]。
随着对真菌多糖功效的更深入的了解，真菌多糖必将被应用于更多领域，尤其是制药及保健品行业。
目前，日本、韩国以及欧美等国在真菌多糖的研究方面处于领先地位。
我国的真菌多糖研究近年来也有很大的进展，但对多糖的研究仍多偏重于药用多糖的提取、分离、精制、化学组成等方面，大多数品种尚处于实验阶段或仅用于滋补品和饮料，与国外相比仍有一定的差距。
1 真菌多糖的提取纯化技术1.1 预处理为了提高多糖的溶出率以及去除干扰性成分，通常在正式提取之前对样品进行预处理。
比如：减小样品粒度—对子实体进行粉碎、对菌丝体进行匀浆、研磨、对细胞或孢子进行超声波破碎和酶解等；用石油醚、乙醚等溶剂除去脂溶性杂质；用85%乙醇除去单糖、低聚糖及苷类[2，3]。
1.2 提取一般多糖用水作溶剂来提取，可以用冷水也可采用热水浸提法，热水浸提法具有多糖溶出率较高、有机溶剂使用量少、对多糖活性破坏小、操作简便和节约等优点。
水提取的多数是中性多糖，用碱提法可以提取含有糖醛酸的多糖，酸性条件往往引起多糖中糖苷键的断裂，提取时应该尽量避免采用酸提法[4]。
根据多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对多糖进行分离。
对于蛋白多糖，可利用酶提取法提取多糖，如在提取液中加入果胶酶等单酶或双酶。
或者用复合酶法，在水溶液中先加入中性链蛋白酶、果胶酶和纤维素酶酶解后提取多糖[5]。
真菌多糖药理作用及其提取、纯化研究进展
真菌多糖药理作用及其提取、纯化研究进展
李磊;王卫国
【期刊名称】《河南工业大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2008(029)002
【摘要】真菌多糖由于其独特的生理活性及结构,有望成为保健食品与药品行业重点开发的新资源之一.本文综述了近年来国内外关于真菌多糖药理作用的研究现状及其提取与纯化的基本方法与过程,并结合当前实际分析了真菌多糖在医疗保健、动物养殖及其他行业的应用与发展前景.
【总页数】6页(P87-92)
【作者】李磊;王卫国
【作者单位】河南工业大学,生物工程学院,河南,郑州,450001;河南工业大学,生物工程学院,河南,郑州,450001
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.2
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广西松茸胞外多糖的提取与药理学作用研究
广西松茸胞外多糖的提取与药理学作用研究松茸是一种珍贵的食用菌，在世界各地都有着广泛的应用和研究。
其中，广西松茸的药物价值被人们所关注。
松茸胞外多糖是松茸中最重要的生物活性物质之一，其有着广泛的药理学功效。
本文将从提取和药理学两个方面，对广西松茸胞外多糖的研究进行探讨。
一、松茸胞外多糖的提取松茸胞外多糖是松茸的一种重要成分，因其水溶性，可被提取出来并分离成多种纯化级别的萃取物和纯化单体。
大多数的萃取方法都是建立在蒸馏水或其他有机溶剂的基础上，以高温高压或超声波处理为主要手段。
而其中最为常见的方法便是酸或碱性水溶液的浸提法。
此外，还有凝胶层析法和酶解法等其他方法。
然而，不同的提取方法所得到的松茸胞外多糖含量和纯度是有区别的。
研究表明，酸性水溶液的提取法所得到的松茸胞外多糖含量最高，但纯度较低；碱性水溶液的提取法所得到的松茸胞外多糖则含量较低，但纯度较高。
因此，对于广西松茸胞外多糖的提取需根据具体实验目的和目标，选择最适合的提取方法。
二、广西松茸胞外多糖的药理学作用1. 抗肿瘤作用广西松茸胞外多糖对肿瘤细胞的增殖具有抑制作用。
研究发现，它具有人体免疫调节作用，可以抑制细胞凋亡，从而达到抑制肿瘤的目的。
2. 免疫调节作用广西松茸胞外多糖是天然免疫增强剂，在肿瘤治疗和免疫调节方面具有很大的潜力。
它能够激活机体的免疫细胞，促进细胞增殖和免疫细胞的生长，从而调节人体免疫系统。
3. 抗氧化作用松茸胞外多糖具有很强的抗氧化作用。
在人体内，它可以清除自由基，从而达到延缓衰老的效果。
此外，它还能够增加人体免疫力，对治疗老年痴呆病等疾病有帮助。
4. 改善胆固醇和血糖广西松茸胞外多糖还能帮助人体减少胆固醇和降低血糖。
其中，降低血糖的作用是通过抑制胰岛素分泌，促进胰岛素感受性和改善胰岛素抵抗产生的。
三、结论广西松茸胞外多糖是一种有着重要的药物功效的活性成分，其药理学作用涉及到抗肿瘤、免疫调节、抗氧化和改善胆固醇和血糖等方面。
香菇多糖的提取,纯化及研究进展
粗多糖经 DEAE-52层析柱后分离得到 Len1、Len2 两个组分(见图) , Len1在蒸馏水洗脱阶段被洗脱, Len2在磷酸盐缓冲液梯度洗脱阶段被洗脱。
从香菇中提取的粗多糖 经过DEAE-52层析柱层 析柱进一步分离纯化, 得到两个香菇多糖组分 Len1-A、Len2-A, 糖质 量分数达到91.15% 和 92.13 %, 相对分子质量 分别为375× 103、718 ×103, 红外光谱显示 Len1-A、Len2-A 均有 多糖的特征吸收峰, 且 均为A-构型的吡喃糖。
3.香菇多糖的抗病毒活性 日本石田博士研究认为，香菇含有一种双链核 糖核酸，能刺激人体网状细胞及白血球释放干扰素， 而干扰素具有抗病毒作用。香菇菌丝体提取物可抑 制细胞的吸附疱疹病毒，从而防治单纯疱疹病毒、 巨细胞病毒引起的各类疾病。英国从培养的香菇菌 丝体中提取到一种物质，可使因艾滋病病毒感染的 T淋巴细胞复原，刺激巨噬细胞，有助于产生抗体 治疗艾滋病，且安全无副作用。 近年来，有学者发现硫酸化香菇多糖具有抗艾 滋病病毒（HIV）的活性，可干扰反转录病毒及其 他病毒的吸附和侵入。日本学者报道，从香菇子实 体中获得的一种具有良好抗肿瘤作用的葡聚糖的硫 酸化衍生物可抑制HIV的活性。
香菇多糖的应用
1.香菇多糖在医药领域的应用 香菇多糖在治疗胃癌、结肠癌、肺癌等方面具有良好疗效。作为 免疫辅助药物，香菇多糖主要用来抑制肿瘤的发生、发展与转移，提 高肿瘤对化疗药物的敏感性，改善患者的身体状况，延长其寿命。 香菇多糖与化疗剂联合使用，有减毒、增效的作用。化疗药物杀 伤肿瘤细胞的选择性较差，对正常细胞也具有杀伤作用，产生毒副作 用，造成化疗不能按期按量进行；由于化疗的剂量不足，常引起肿瘤 细胞的耐药性，成为难治性癌症，影响疗效。化疗过程中服用香菇多 糖，可以增强化疗的疗效，并减轻化疗的毒性作用；同时，化疗过程 中患者的白细胞下降的发生率、胃肠毒性、肝功能损害及呕吐的发生 明显降低。这充分说明了香菇多糖与化疗并用可以增效、减毒，并增 强患者机体的免疫功能。 香菇多糖配合其他药物治疗慢性乙型肝炎，可提高乙肝病毒标志 物的转阴作用，减少抗病毒药物的副作用。此外，香菇多糖可用于治 疗结核杆菌感染。
真菌多糖的研究进展与开发前景
浓厚 的兴趣 ， 并对真菌多糖的化 学结构 、 物活 生 性进行 了深入细致的研究， 取得 了丰硕 的成果 。 ３１ ． 免疫调节作用 真菌多糖对免疫系统可发挥多方 面的调节 作用 。 如灵芝多糖有广泛药理 活性 和保 健作 用 ， 具有提高机体免疫力 、 抑制肿瘤 、 增强机体 耐缺 氧能力 、 消除 自由基 、 抗衰老 、 抗辐射等作用 。 王 镜 等通过姬松茸对 消化道肿 瘤的疗效 观察发 现， 姬松茸有增强机体免疫的作用 。 银耳 多糖 能 促进正常小 鼠和免疫功能受抑制小 鼠的溶血 素 形成 ， 从而提高体液免疫反应 ， 促进体细胞免疫 和体液免疫功能。 ３２抗肿瘤作用 ． 真菌多糖并不直接杀灭肿瘤细胞 ，而是作 为一种生物 反应修饰剂 （ Ｒ ， 强机体 免疫 Ｂ Ｍ）增 功能 ， 问接地抑制肿瘤 细胞 生长 起到扶正 固本 作 用 。猪 苓 多 糖 ［ｏ ｐ￣ｓ ｕ ｅ ａ （ｅｓ Ｐ ｌ ｏ ｍｂＨ ｍｓ Ｐｒ ｙ ｎ） 】对小 鼠移植 性 肉瘤 Ｓ ８ １０有 明显抑 制作 用 ； 多糖对小 鼠移植 型 Ｓ ８ 云芝 １０肉瘤有明显抑 制作用 ；茯苓 多糖 腹腔 给药 可 明显 抑制 小 鼠 ｓ ８ 和移植性皮下肿瘤 的生长 ， １０ 但未经 化学改 取， 与传统 方法相 比具 有省时 、 作 简便 、 件 造的茯苓多糖 抗肿瘤 活性 很低 ， 化学方法处 操 条 用 温和、 纯度高、 提取 率高等优点。 理 Ｂ 一茯苓聚糖后 ，才能使之转化成 为具有 １１去除蛋 白质 ． 抗 肿 瘤 活 性 的 羧 甲基 茯 苓 多 糖 （ ａ ｏｙ ｅ Ｃ ｒ ｘｍ ｂ 常用方法 有 Ｓｖｇ法 、 ｅａ 鞣酸法 、 白酶法 、 ｔｙ ａｈｍａａ Ｃ ） 蛋 ｈｌ ｃｙ ｒｎ， ＭＰ 。 ｐ 三氟三氯乙烷法 、 氯乙酸法等 ， 中 Ｓ ｖｇ 三 其 ｅａ 法 ３３健 胃保肝 ． 常用氯仿 、 正丁醇或 正戊醇按 ５： １混合后 ， 加到 有 ＿些真菌多糖 具有健 胃保肝 的作用 ， 如 样品水溶 液中振摇 、离 心除去形成凝胶状的蛋 猴头菌 多糖可增加骨液分泌 、 释胃酸、 护溃 稀 保 疡面、 促进 黏膜再生 ， 胃癌 、 对 慢性 萎缩性 胃炎 、 白质 ， 反复多次直至蛋白质除尽为止。 １ 去色素 ． ２ 食道癌 、 十二指肠溃疡有显著疗效 。 云芝多糖对 有 些真 菌子实 体或 菌丝体 中含 有大量 色 慢性肝炎 、 乙型肝炎 皆有 防治作用 。香菇 多糖、 素， 不仅对分 光光度计 的准确度有影响 ， 而且影 树舌提取物有保肝 、增强排毒能力 以及增 强对 响成品品质 ， 因此需要 除去 色素。 由于真菌多糖 洋地黄毒素 的抵抗 能力 。茯苓多糖具有增 强机 色素大多呈 负性离 子，因此不能用活性炭吸附 体免疫能力 、 护肝解毒作用 。 剂脱色 ，而用 Ｄ Ａ 一纤维 素或 Ｄ ｏ ｔ — ＥＥ ｕ ｌ Ａ Ｔ吸 ｉ ｅ ３４ 降血糖 、 ． 血脂作用 附或者使 用氧化脱 色法 。 真菌多糖能有效增强冠状动脉 机能 、扩大 １ ． 除小分子物质 ３去 冠体 流量 ， 增强 心肌供氧能力 ， 降低血 脂 ， 防 预 采 用半 透膜逆 向流水 透析 法和 柱离子 交 动脉硬化 ， 改善血液循环 。Ｋ ｂｔ ｕ ｏ１ ３ 等曾进行 了灰 换法等除去低聚糖 、 氨基酸等小分子物质。 树花 多糖治疗高血脂症大 鼠的实验， 发现 灰树 ２纯度鉴定 花多糖具有 明显的降血脂 和增加脂肪代谢 的能 多糖 纯度 的测定一般采 用纸层析法 、 旋光 力 。 薛惟建 在研究猴头菌 多糖对 实验性高血糖 测定法 、 压电泳法 、 离心分析 法 、 高 超 高效 液相 的防治作用 中发现 ，猴头菌多糖对 四氧 嘧啶诱 色谱法 、 光谱 扫描法 和凝胶 柱层析法。 多糖纯度 发 的 糖 尿 病 具 有 明 显 的 预 防 及 治 疗 作 用 。 不能用通 常化合物 的纯度标准衡 量 ， 好建立 Ｈｉｉｏ 从灵芝子实体 中分 离得到 两种具有 降 最 ｋｎ 等 多项指标 ， 一项指标测定 一种不 同的特 性 ， 每 一 血糖活性的多糖对正常小 鼠及 四氧 嘧啶诱 发的 般用 ３ 以上方法测定 的结果 才能对某 一多糖 高血糖小 鼠都有明显降糖活性 。 种 的均一 眭做 出结论 。其 总茧测定 采用苯酚 一硫 ３５ 抗 衰 老 作 用 ． 酸法、 酮 ～硫 酸法及 间接测量法。 蒽 真菌多糖有清除 自由基 、提高抗氧化酶活 ３多糖 的生物活性 性和抑制脂质过氧化 的活性 ，起到保护生物膜 真 菌 多 糖 具 有 很 强 的 生 物 活 性 ， 自 １ ５ 和延缓衰老 的作用 。 ９８ 李连德 等用虫 草多糖证 明 年 Ｂａｄｒ报 道 了 酵 母 细 胞 壁 多 糖 ｆＺ ｍ ｓｎ 了其抗衰老作用。 ｒｎ ｅ ｙ ａａ ） 宗灿华 等证 明黑术耳多糖 能 具有抗肿瘤 作用以来，人们对真 菌多糖产生 了 不 同 程 度 的 增 加 衰 老 小 鼠 血 浆 中 Ｓ Ｄ、 Ｏ
真菌多糖的研究进展
四、结论
真菌多糖作为一种具有复杂结构和丰富功能的天然高分子化合物，其独特的生 物化学特性和功能使其在医药、保健品、化妆品等领域具有广泛的应用前景。 未来，对真菌多糖的深入研究将有助于我们更好地利用这一宝贵的自然资源。
参考内容二
引言
在自然界中，真菌是一种广泛存在的生物群体，具有多种多样的形态和功能。 其中，真菌多糖是一种重要的生物活性物质，具有许多对人体健康有益的药用 和保健功能。本次演示将介绍真菌多糖的分类、功能和应用，以及它与人体健 康的紧密关系，为人们认识和利用真菌多糖提供参考。
真菌多糖的分类
真菌多糖是由真菌细胞壁提取的一种高分子化合物，具有多种不同的结构和化 学性质。根据来源和结构，真菌多糖可分为以下几类：
1、甲壳素类多糖：甲壳素是一种由N-乙酰基-D-葡萄糖胺组成的线性多糖， 广泛存在于真菌和甲壳类动物中。根据取代基的不同，甲壳素类多糖可分为脱 乙酰甲壳素和低脱乙酰甲壳素。
3、临床应用研究：虽然真菌多糖在许多体外和体内实验中显示出了显著的生 物活性，但仍需要更多的临床试验来验证其在医疗和健康领域的应用效果。这 些研究不仅可以提供更可靠的证据支持真菌多糖的广泛应用，也有助于解决当 前面临的重大健康挑战。
参考内容
真菌多糖，一种具有复杂结构和丰富功能的天然高分子化合物，近年来已成为 生物化学领域的研究热点。本次演示将探讨真菌多糖的生物化学特性、功能及 其应用前景。
1、结构与活性关系：尽管真菌多糖的结构复杂，但我们需要更深入地理解其 结构与活性之间的关系。通过解析真菌多糖的精细结构，我们可以更好地理解 其生物活性的来源，并以此为依据设计和优化其功能。
2、提取方法优化：目前用于提取真菌多糖的方法仍有许多不足，如效率低下、 环境不友好等。因此，我们需要开发更高效、更环保的提取技术，以满足大规 模生产的需求。
真菌多糖的研究进展 Microsoft Office Word 97-2003 文档
真菌多糖的研究进展魏天儒1，张战峰2(1.杨凌职业技术学院,陕西杨凌712100；2.户县中心苗圃,陕西户县710307)摘要:本文综述了真菌多糖提取和纯化的方法、分子结构分析的方法、构效关系的研究现状和最新进展,并对真菌多糖的种类和生物学活性作了概述。
关键词:真菌多糖;构效关系;抗肿瘤作用中图分类号:Q539文献标识码:A文章编号:1001-2117(2007)02-0042-03Research Progress of Fungi PolysaccharidesWEI Tian-ru1,ZHANG Zhan-feng2(1.Y angling V ocational and Technical College,Y angling712100,Shaanxi,China;2.Center Nursery of Hu County,Hu County710307,Shaanxi,China)Abstract:A summary about fungi polysaccharides in terms of its extraction and purification methods,molecular structural analysis method and structure-activity relationship weremade.Analysis of its bioactivity as well as its typologies was described.Key words:Fungi polysaccharides;structure-activity relationship;tumor resistance.真菌被作为药物，在我国已有悠久的历史。
明代李时珍的《本草纲目》及清初汪昂的《本草备要》分别记载20多种真菌的药效[1～2]。
现已证明,各种食(药)用真菌的活性成分主要在于其中的真菌多糖。
真菌菌丝多糖的提取研究进展
真菌菌丝多糖的提取研究进展袁 巍1, 潘宗琴2, 潘 攀2, 冯乙巳2(1.蚌埠医学院,安徽蚌埠 233000;2.合肥工业大学,安徽合肥 230009)摘 要:真菌多糖由于其显著的生物活性和低毒性而成为目前的研究热点,国内外对其提取方面的研究非常活跃,并且有些方法已经开始应用于实际生产.本文归纳了菌丝多糖提取方面的研究进展,分别从细胞破壁、浸提、分离三方面对现有的各种方法进行了分析比较,总结了各自存在的问题.为进一步系统研究真菌多糖提取工艺提供了线索和依据.关键词:真菌菌丝多糖;细胞破壁;浸提中图分类号:Q539 文献标识码:A 文章编号:1001-2443(2008)06-0576-04 我国食药用真菌资源丰富,目前发现有价值的真菌多糖已有30多种,其中香菇多糖、猪苓多糖、灵芝多糖等多种多糖制剂已经通过鉴定投放市场,并收到了很好的经济效益和社会效益.真菌多糖是从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离出的一类活性多糖,是食用菌中所含的最重要的药效成分,具有广泛的药理活性[1].科学实验表明真菌多糖具有很强的抗肿瘤活性,对癌细胞有很强的抑制力,且在免疫调节、降血压、降血脂、抗血栓、健胃保肝等方面起着重要的作用,现已广泛应用于免疫缺陷性疾病、自身免疫疾病和肿瘤等疾病的临床辅助治疗,因而被称为一种重要的生物效应调节剂[2].另外,多糖可以改善食品的食用品质、加工特性和外观特性,可用于抑制脂质氧化,稳定酸性饮料[3],也可作为乳化剂等,在食品中的用途也十分广泛.由于其显著的生物活性,且几乎没有任何毒副作用,所以许多真菌多糖还被用作保健食品的功能添加剂,如真菌多糖啤酒已在我国问世,因此真菌多糖是目前最有开发前途的保健食品和药物新资源. 目前,国内外对真菌多糖的研究及开发利用进展得很快,其中真菌多糖的提取是其广泛研究与应用的基础.传统的真菌多糖提取多采用子实体为材料,但由于子实体栽培周期长,劳动强度大,受气候、环境的影响,产量及质量不稳定,且子实体木质化程度高,多糖提取利用率较低.与之相反,采用生物发酵技术生产菌丝体,周期短、成本低、产量大,且有工业化生产前景,因此利用生物发酵技术生产菌丝体多糖是当前的主要方法.而且已有研究表明,菌丝体多糖具有和子实体多糖同样的药理活性.因此如何科学高效地从真菌菌丝体中提取多糖成分是目前的核心问题.本文将对菌丝多糖提取方面的研究进行综述.1 细胞破壁 由于菌丝在发酵过程中,有的将多糖分泌到胞外,形成胞外多糖,有的只留在胞内,形成胞内多糖[4].对于胞外多糖,可以直接将发酵液经浓缩沉淀而得到.而对于胞内多糖,在提取前应对菌丝体进行一定程度的预处理,利用细胞破壁技术破坏其细胞壁,使胞内多糖较易从细胞内释放出来. 常用细胞破壁技术分为机械法和非机械法两类.机械法按破碎方法分为靠固体剪切作用进行破碎的珠磨法、压榨法以及靠液体剪切作用进行破碎的高压匀浆法和超声破碎法.非机械法按破碎方法分为靠溶胞作用进行破碎的酶溶法、化学法和物理法以及利用干燥处理技术进行破碎.目前,高速珠磨匀浆法和高压匀浆法不仅在实验室被广泛采用,而且已在工业生产中应用;酶溶法和化学渗透法亦已在实验室内应用.1.1 机械法1.1.1 超声破碎 超声破碎主要是利用超声波空化产生的极大压力造成被破碎物细胞壁及整个生物体破裂,而且整个破裂过程在瞬间完成;同时超声波产生的振动作用加强了胞内物质的释放、扩散及溶解,加速有效成分进入溶剂,使其进一步增大了有效成分的溶出.收稿日期:2008-06-10作者简介:袁巍(1964-),女,安徽萧县人,讲师.第31卷6期2008年11月 安徽师范大学学报(自然科学版)Journal of Anhui Normal University (Natural Science )Vol.31No.6Nov .2008 方其兵等[5]采用4种方法对真菌菌丝进行细胞破碎研究,结果表明采用先加石英砂再进行超声破碎的方法最好,使真菌菌丝破碎和细胞内含物释放充分,且操作时间短、操作简便,在操作过程中真菌细胞内含物性状稳定,变性少.有研究表明采用超声波处理猪苓菌丝后,能显著提高粗多糖的提取率,在最佳工艺条件下,猪苓菌丝粗多糖的得率可达11%. 也有采用超声波与酶法连用进行细胞破壁以提取胞内多糖的,如采用超声波协同纤维素酶法提取黑木耳多糖,结果发现由于作用温度低,所得到的多糖颜色浅,有利于多糖产品的进一步精致[6].超声的不足之处是可能会导致可溶性多糖发生降解,但超声并不影响水溶性多糖的生物性能,超声法提取具有高效、节能、省时的特点.因此,超声辅助提取法是一种高效实用的多糖提取方法.1.1.2 反复冻融法 该法是利用细胞内冰粒的形成和细胞液浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎,从而可以促使多糖尽快从胞壁中释放出来.文献报道固体发酵蜜环菌得到的菌丝体冷冻前浸提多糖含量约1.375g/100g 菌丝体;冷冻后浸提可得到多糖约1.4l6g/100g 菌丝体.通过冷冻前后提取多糖的比较,说明冷冻可以提高多糖的提取效率[7]. 此外,还有研磨法、高压匀浆法、高速球磨法等用于细胞破壁.其中研磨法较简单,但破碎效果不佳,还可能造成细胞内含物变性,因此不宜用于易变性的细胞内含物的分析研究.高压匀浆法和高速球磨法较为常用,破壁效果优于研磨法,但产量小,很难工业化生产.1.2 非机械法1.2.1 酶溶法 酶溶法是通过酶反应将原料组织分解,以除去细胞壁和膜上的果胶、纤维素及蛋白质等成分,从而降低提取难度,有利于细胞壁内多糖的溶出,使多糖提出率提高.目前常用的破壁酶主要有纤维素酶、蜗牛酶、溶壁酶、果胶酶等,主要实施方法有单一酶法、复合酶法和分别酶法. 如对白灵菇菌丝体进行酶处理后,多糖得率最高可达8.23%,远高于未经酶处理时的得率[8].由于酶具有专一性和选择性的特点,因此应用时多采用复合酶.针对真菌菌丝多糖分布部位及细胞结构特征的不同,采用不同的复合酶体系,在各种酶协同作用下,能充分破坏菌体细胞结构,最大限度提高多糖的得率,同时保持有效物质的固有结构与活性.张立娟等[9]通过单因素和正交试验研究了细胞破壁酶(纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶)在黑木耳多糖提取中的最佳作用条件,他们先加入复合酶(纤维素酶与果胶酶)作用,再加入蛋白酶反应.结果发现经此法处理后,多糖提取率高达16.83%,提取时间缩短到140min ,较以往只用热水提法和碱法提取具有明显的优点.可见酶溶法不仅可以使多糖的得率大幅度增加、浸提时间缩短,还具有反应条件温和,能保持多糖的活性构象,更好地保持多糖的药效的优点.因此,利用酶法破壁应用前景十分广阔. 存在问题:易造成产物抑制作用,这可能是导致胞内物质释放率低的一个重要因素.而且溶酶价格高,限制了大规模利用.若回收溶酶,则又增加了分离纯化溶酶的操作.另外酶溶法通用性差,不同菌种需选择不同的酶.1.2.2 超临界流体技术 超临界流体是指处于临界温度和临界压力之上的流体,它具有类似于气体的低粘度和类似于液体的高密度,有较好的流动、传质和溶解性能.常用CO 2作为超临界流体,高压CO 2易于渗透到细胞内,突然降压使细胞内外压差急剧增大而膨胀破裂,同时在降压过程中流体体积膨胀,温度降低,可防止因升温引起生物活性物质失活;其次,超临界CO 2能破坏胞壁上的脂溶性成分,降压时破裂发生在一定位置,此性质使得细胞在破碎时仅在某些位置上破裂,而不是整个细胞破碎,破碎后的细胞壁碎片较大,使下游分离过程变得简单. 廖周坤等[10]用SEF -CO 2萃取装置试验从藏药雪灵芝中萃取多糖,在最佳萃取条件下,SFE 萃取法与传统溶剂萃取工艺相比,多糖收率可以提高至1.62倍.另外,超临界流体的密度和介电常数随着密闭体系的压力增加而增加,极性增大,利用程序升压,可以将不同极性的成分进行分步提取.可见超临界CO 2萃取技术萃取能力强,提取效率高,生产周期短,极少损失易挥发组分或破坏生理活性物质,没有溶剂残留,产品质量高.1.2.3 微波辐射法 微波法是靠微波电子管发出的电磁波,感应生电,又转化成分子的动能而发热,从而导致细胞内的极性物质,尤其是水分子,产生大量热量,使得细胞内的温度迅速上升,液态水汽化产生的压力将细胞膜和细胞壁冲破,形成微小的孔洞,进一步加热,导致细胞内部和细胞壁水分减小,细胞收缩,表面出现裂纹.由于孔洞和裂纹的存在,胞外溶剂容易进入细胞内,溶解并释放胞内多糖.微波的频率很高,能深入渗77531卷第6期 袁 巍,潘宗琴,潘 攀: 真菌菌丝多糖的提取研究进展875安徽师范大学学报(自然科学版)2008年透物体,对细胞的结构有较大作用,而且微波加热的热效率高,温度升高快速而均匀,因此,应用微波加热提取手段,能够显著缩短萃取时间,较大程度地提高多糖的萃取效率.有文献报道,发现利用微波辅助法提取黑木耳多糖的平均得率为13.26%,比常规水提法的得率提高约51%,而时间也缩短了将近5/7[11]. 微波法不论在节能、高效,还是在操作方面都具有优越性,具有快速、高效、安全的特点;可见利用微波强化固液浸取过程是一种颇具发展潜力的新型辅助提取技术. 此外,还有将化学渗透法、真空气流破壁法等用于细胞破壁方面的研究.其中化学渗透法主要是利用化学药品改变细胞壁或膜的通透性,从而使内含物有选择地渗透出来.存在的问题是:时间长,效率低,化学试剂毒性较强,同时对产物有毒害作用,通用性差,因此不常用.真空气流细胞破壁技术是通过压力的变化使细胞内水份急速沸腾并汽化以至使细胞内部压力迅速升高,细胞壁因无法承受如此巨大的压力变化而破碎,此技术特点为细胞破壁率高、破壁完全.已有研究将此法用于提取中药金银花、黄芪中有效成分的前处理过程,结果表明,能大幅度缩短提取时间、降低生产成本.2 溶剂浸提 提取真菌多糖的常见方法有:热水浸提法、碱提法、酸提法,对于水可溶性多糖可采用热水浸提,水不溶性多糖一般用酸或碱提取,常用三氯乙酸、稀盐酸、草酸铵、氢氧化钠等.2.1 水提法 热水浸提法由于具有有机溶剂使用量少、所需提取剂蒸馏水经济易得、对多糖活性破坏小、操作简便和节约等优点,成为最为常见的使用方法.如用1L热水对绒状火菇菌丝体在70-80℃浸提8h后,多糖得率为9.5%[12].但此法存在的不足是需经多次浸提,而且费时费料,因此在应用上受到一定的限制.也有研究表明,单纯水浸提多糖的提取率非常低,为提高多糖溶出率,可以加入一些中性盐,使细胞膜结构发生变化,细胞内成分扩散出来,盐浓度越高这种破坏作用越显著,同时细胞内膜上的结合多糖由于中性盐离子的作用部分溶解到液体中,增加了多糖的提取率.如用蒸馏水提取虫草菌丝多糖时,得率为0.55%;而用5%NaCl溶液提取时,多糖得率为0.73%.2.2 酸提法 稀酸提取法适用于提取酸溶性多糖,但时间宜短,温度应不超过50℃.经研磨机磨碎后的冬虫夏草菌丝体,脱脂脱色后,用0.05mol/L的醋酸缓冲液(p H=6.0)提取多糖,得率为1.84%[13].虽然随着酸浓度的升高,酸溶性多糖越来越多的溶解析出,但超过一定的酸浓度时多糖反而溶解性下降.如在提取虫草菌丝多糖时,在2%HCI条件下,多糖的提取率最高,达到4.72%.因此,采用酸提法时,应选择适宜浓度的酸,以防止糖苷键断裂.2.3 碱提法 碱提法适于碱溶性多糖的提取,可促使多糖溶出.如在5%NaOH条件下,虫草菌丝多糖的提取率最高达到13.76%,为热水提取的2.63倍.但经碱法提取后的液体需要中和,后处理程序繁琐. 由此可见,不同的离子及其浓度对多糖的提取率影响很大.在一种离子作用下,特定多糖组分优先溶解析出,但多糖组分溶解性大大降低.所以,单一离子很难使全部多糖溶解析出,若使用不同的离子顺序作用于菌丝体,可以使得溶解性差别较大的多糖尽可能多地提取出来.如脱脂后的茯苓菌丝粉末,分别用热水、0.5 mol/LNaOH、88%的甲酸进行分级提取,可提取出6种多糖[14].此外,各项浸提参数如温度、时间、次数、固液比等也是影响多糖浸提率的因素,可根据需要选取最佳工艺参数,以提高多糖提取率.3 分 离 多糖的分离方法很多,主要方法有超滤法、分步沉淀法、金属盐沉淀法、季铵盐沉淀法、纤维素阴离子交换柱层析法、凝胶柱层析法、制备性区域电泳、毛细管电泳、醋酸纤维素膜过滤法、亲和层析法等.3.1 超滤法 在多糖等活性物的提取中由于目的产物浓度较低,一般在5%(质量分数)以下,需要浓缩这一重要工序,目前国内大多采用减压热浓缩方法.该法不仅耗能高,也易引起活性物的变性失活、物系颜色加深等负面影响,增加后续处理的负担.而膜分离技术具有设备简单、可常温操作、无相变及化学变化、选择性高及能耗低等优点.张珏等[15]研究了超滤浓缩醇沉提取发酵灵芝菌丝体多糖,与热浓缩醇沉提取法进行了比较,超滤浓缩法提取的多糖粗提物量比减压浓缩醇沉法的少,还原糖和蛋白含量也低于减压浓缩醇沉法,但多糖得率、多糖含量都比后者高,说明超滤浓缩法提取的多糖杂质少、含量高,可提高提取多糖的纯度和品质,相应减轻了后道多糖纯化的负担,可大大降低生产成本.可见将膜分离技术应用于多糖的分离提取中,具有一定的优势,采用超滤膜技术处理多糖具有收率高、不易破坏多糖的生物活性、能耗低等特点,适于工业化生产.3.2 分步沉淀法 根据不同的多糖在不同浓度的醇或酮中具有溶解度不同的性质,常用有机溶剂甲醇、乙醇、异丙醇及丙酮进行分步沉淀,以充分提取多糖,提高多糖得率.如乙醇分步沉淀法提取多糖时,乙醇的浓度及提取方式对多糖的得率影响很大,有时不同浓度的乙醇可沉淀出不同组分的多糖.一般情况下多糖的分子量越大,被沉淀下来所需的乙醇浓度就越小,以30%、60%和80%的乙醇浓度为例,在低浓度乙醇(30%)时沉淀下来的主要是高分子量的多糖和杂蛋白,在60%乙醇浓度时,沉淀下来的是中等分子量的多糖,杂蛋白相对来说少一些,而在更高浓度下沉淀下来的则是较小分子量的多糖和低聚糖,还有一些蛋白质和多肽,故得率较低,可见分步沉淀不仅能提高粗多糖的总得率,而且还起到一定的纯化作用,这为以后的纯化精制提供了方便.有研究报道,采用乙醇分步沉淀法从香菇发酵液中提取胞外多糖可使粗多糖得率从一次性沉淀的3g/L 提高到3.8g/L.以0.25mol/L LiCl/DMSO 作为溶剂,用丙酮与0.25mol/L LiCl/DMSO 的混合物(V :V 4:1)作为沉淀剂来分离灵芝水不溶性多糖,可分离出5种多糖[16].3.3 凝胶柱层析法 凝胶柱层析法是一种简单、快速的分离技术,但分辨率低、载样量少.常用的凝胶有葡聚糖凝胶和琼脂糖凝胶,以不同浓度的盐溶液和缓冲溶液作为洗脱剂,从而使不同大小的多糖分子得到分离纯化.分离步骤如下:p H =6时,,中性多糖不被吸附;然后用p H 值相同,离子强度不同的缓冲液将酸性强弱不同的酸性多糖分别洗脱下来;p H 大于9时,中性多糖也被吸附.吸附力一般随多糖分子中酸性基团的增加而增加,该法适用于分离各种酸性、中性多糖.4 结 语 多糖提取过程中的各项技术方法都存在一定的局限性,有待进一步改进,在进行真菌多糖提取纯化时,应根据多糖的性质,选用合适的提取纯化方法,不仅要考虑到多糖得率,还要保证不破坏多糖的结构及活性.总之,随着各项技术的不断进步,在不久的将来,食药用真菌多糖制品在医疗、保健、食品等领域中的应用会更为广泛.参考文献:[1] 葛玉,肖红.真菌多糖的研究开发现状[J].食品研究与开发,2005,26(1):23-25.[2] 王斌,连宾.食药用真菌多糖的研究与应用[J].食品与机械,2005,6(21):95-100.[3] A KIHIRO Nakamura ,TARO Takahashi 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aFluvo 2Aquic Soils From Northern AnhuiSHI Ling , DAI Wan 2hong(College of Environment Science ,Anhui Normal University ,Wuhu 241003,China )Abstract :The content and section distributions of total organic carbon (TOC ),dissolved organic carbon (DOC )and microbial biomass carbon (MBC )in various soils (the farmland ,timberland and wasteland )in Northern Anhui are studied.The results show that the content of TOC ,DOC and MBC obtains maximum value at topsoil and will decrease regressively with the deepening of soil layer depth.The ratio at content of DOC and MBC to TOC are 5.23%-13.45%and 3.09%-8.82%respectively.With the great influence of different exploiting manners imposing on organic carbon and active ingredients ,the maximum content of TOC ,DOC ,MBC appears in timbered soil ,then farmland is in the next ,and wasteland takes the lowest.The comparison of ratio at content of DOC to TOC in various soils is timberland >farmland >wasteland whereas it is farmland >timberland >wasteland to MBC.Dynamics of the humic acid and trend of the change in content of total organic carbon tended to be similar.K ey w ords :land use ;total organic carbon (TOC );dissolved organic carbon (DOC );microbial biomass carbon (MBC )3 3 3 3 3 3(上接第579页)[14] QIL IN Huang ,YON G Jin.Structure ,molecular size and antitumor activities of polysaccharides from Poria cocos mycelia produced in fermenter[J].Carbohydrate Polymers ,2007,70:324-333.[15] 张珏,章克昌.灵芝菌丝体多糖的超滤提取及其抗氧化活性的研究[J].化学世界,2006,1:33-35.[16] YANFEI Peng ,L INA Zhang.Solution properties of water -insoluble polysaccharides from the mycelium of G anoderma tsugae [J].Carbohydrate Polymers ,2005,59:351-356.R evie w on the Extraction of Fungi PolysaccharidesYUAN wei 1, PAN Z ong 2qin 2, PAN Pan 2, FEN G Y i 2si 2(1.Bengbu Medical College ,Benbu 233000,China ;2.Hefei University of Technology ,Hefei 230009,China )Abstract :Fungi polysaccharides has been researched widely for its marked bioactivity and hypotoxicity.Research on its extraction is quite active both in our country and abroad ,and some methods have been put into application.The development and present state of research on extraction of fungi polysaccharides has been reviewed in this paper.The various cell 2wall broken methods ,extraction and separation methods and some problems have been analyzed respectively.It provides clues and basis for the futher research on the extracting technology of fungi polysaccharides.K ey w ords :fungi polysaccharides ;cell 2wall broken ;extraction 98531卷第6期 石 玲,戴万宏: 淮北淤土不同利用方式下土壤有机碳组分的变异。
真菌多糖的研究进展
真菌多糖的研究进展摘要：综述了近年来真菌多糖在调节免疫功能、抗肿瘤、降血糖、抗病毒、抗氧化、抗白血病等药理学活性方面的研究进展。
关键词：真菌多糖，药理活性多糖(Polysaccharide)是由单糖之间脱水形成糖苷键,并以糖苷键线性或分枝连接而成的链状聚合物。
一般将多于20个糖基的糖链则称为多糖。
近年来，糖类结构测定和生物活性研究取得了明显的进展，大量实验事实揭示糖类是重要信息分子，参与许多生理和病理过程，有关研究已渗诱到生物学各个领域[1]。
研究表明,中药多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降血糖等多种功能。
1 免疫调节功能1.1对细胞免疫的影响多糖可以增加T、B淋巴细胞的杀伤功能。
张秀娟等[2]报道灵芝多糖对T细胞及其亚群有明显的影响,它可增加混合淋巴细胞培养中T细胞的回收量,在增加Lyt2+和L3T4+细胞回收量的同时,还可增强细胞毒T淋巴细胞(CTL)的杀伤功能。
张伟云[3]等用铜绿假单胞菌分离纯化出胞外多糖（PEP）实验，得出ＰＥＰ对小鼠胸腺淋巴细胞的增殖皆具有显著的促进作用，当浓度为6．25ｍｇ/Ｌ时即有非常显著的促进作用的结论。
可以增加树突状细胞（DC）细胞前体细胞的数量。
DC细胞是目前发现的功能最强的抗原递呈细胞（APC），它能摄取各类抗原,在机体细胞免疫和体液免疫调控中均起着重要作用。
何彦丽等[4]分析得出枸杞多糖、香菇多糖、云芝多糖等多种中药多糖（主要由β-1,3糖苷键为主链的葡聚糖或杂聚糖组成）可增加淋巴细胞培养上清液中的CSF(集落刺激因子)活力，促进骨髓有核细胞数和粒/ 巨噬细胞集落数量的增加(CFU-GM)，而DC细胞与单核、粒细胞、T、NK等细胞有共同的祖细胞，有可能同时增加DC前体细胞数量。
可以提高巨噬细胞（MΦ）的活性。
MΦ是具有多种功能的重要免疫细胞，可通过处理抗原和释放可溶性因子对免疫功能起重要的调节作用。
关于多糖激活MΦ的机制，目前尚未完全清楚，但绝大多数中药多糖都能促进MΦ的吞噬功能。
真菌多糖的研究进展——真菌多糖的结构、提纯和应用
真菌多糖的研究进展——真菌多糖的结构、提纯和应用白岚
【期刊名称】《河北林果研究》
【年(卷),期】2009(24)4
【摘要】真菌多糖是从真菌的子实体、菌丝体和真菌发酵液中分离出来的一类具有广泛生物活性的大分子碳水化合物.现代医学与药理学研究表明,多糖具有提高免疫力、抗肿瘤、延缓衰老、降血糖、降血压、降血脂等生理功效.综述了真菌多糖的化学组成,构效关系,提取与纯化,以及实际应用等现状与展望.
【总页数】4页(P445-448)
【作者】白岚
【作者单位】浙江商业职业技术学院,浙江,杭州,310014
【正文语种】中文
【中图分类】Q939.5
【相关文献】
1.真菌多糖提纯、组分分析及结构初步鉴定 [J], 赵玉萍;纪丽莲;朱晓庆
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第29卷第2期河南工业大学学报(自然科学版)Vol .29,No .22008年4月Journal of Henan University of Technol ogy (Natural Science Editi on )Ap r .2008收稿日期:20080227基金项目:河南工业大学引进人才专项(2007BS023)作者简介:李磊(1985),男,河南平舆人,硕士研究生,研究方向为微生物与生化药学3通讯作者文章编号:16732383(2008)02008706真菌多糖药理作用及其提取、纯化研究进展李 磊,王卫国3(河南工业大学生物工程学院,河南郑州450001)摘要:真菌多糖由于其独特的生理活性及结构,有望成为保健食品与药品行业重点开发的新资源之一.本文综述了近年来国内外关于真菌多糖药理作用的研究现状及其提取与纯化的基本方法与过程,并结合当前实际分析了真菌多糖在医疗保健、动物养殖及其他行业的应用与发展前景.关键词:真菌多糖;药理作用;发酵;提取;纯化中图分类号:TS201.2 文献标识码:B0 前言多糖也称聚糖,是一类广泛存在于动物细胞膜、植物及微生物细胞壁中,由醛糖或酮糖通过糖苷键连接在一起的天然高分子化合物.多糖是自然界中糖类的主要存在形式,根据生物来源的不同,可将其分为植物多糖、动物多糖、微生物多糖,其中微生物多糖(尤其是真菌多糖)是至今研究的较为深入和广泛的一类多糖.真菌多糖系真菌中分离出的由10个以上的单糖以糖苷键连接而成的高分子聚合物,是从真菌子实体、菌丝体或发酵液中分离出的,可以控制细胞分裂、分化,调节细胞生长和衰老的一类活性多糖[1].研究表明,真菌多糖具有非常广泛的生物学活性,如免疫调节、抗肿瘤、降血压、降血脂、降血糖、抗衰老、抗氧化、抗病毒、抗辐射、抗血栓和抗凝血等作用.因此,真菌多糖的药理作用及其提取、纯化技术已成为国内外众多学科领域研究的热点之一,本文就真菌多糖在该方面的相关研究进行了综述.1 真菌多糖的主要药理作用自1958年B rander 报道了酵母细胞壁多糖(Zy mosan )具有抗肿瘤作用以来,人们对真菌多糖产生了浓厚的兴趣,并对真菌多糖的化学结构、生物活性进行了深入细致的研究,取得了丰硕的成果[2-3].目前,对于真菌多糖的药理作用的研究报道主要集中在以下几个方面:1.1 免疫调节作用研究表明,真菌多糖主要是通过对淋巴细胞、巨噬细胞、网状内皮系统等的作用来调节机体的免疫功能.作为生物反应调节剂,它不仅能够激活T 、B 淋巴细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞(NK )等免疫细胞,还能活化补体,促进细胞因子的生成,全面发挥对机体的调节作用[4].Nanba [5]曾研究了灰树花多糖(PGF )D -组分对各种免疫细胞的激活作用,结果发现小鼠i p0.5mg/kg 或ig1.0mg/kg 灰树花D -组分10d 后,自然杀伤细胞(NK )、细胞毒T 细胞、迟敏T 细胞分别增至1.5～2.2倍,白介素-1和超氧负离子的量也得到了提高,白介素-2提高至1.7倍.另外,李海花[6]在实验中发现灰树花多糖在180mg/kg 和120mg/kg 剂量下,可明显增强小鼠吞噬细胞的吞噬功能,增强小鼠的体液免疫能力,并能提高小鼠免疫器官的重量;而Fang 等[7]研究发现金针菇多糖也能增加荷瘤小鼠脾脏重量、NK 细胞活性和淋巴细胞转化刺激指数,恢复和增强小鼠的免疫功能.1.2 抗肿瘤作用实验表明,大多数真菌多糖的抗肿瘤作用是通过增强宿主免疫调节功能来实现的,它可以从根本上提高机体免疫功能,如能激活机体的免疫88 河南工业大学学报(自然科学版)第29卷细胞并促进其增殖与分化,增加效应免疫细胞的数量,从而达到抗肿瘤作用.从自古就有“仙草”之称的灵芝中提取得到的活性成分灵芝多糖(G LP)便很具有这类抗肿瘤真菌多糖的代表性.CHE N J ian2J i等[8]曾利用灵芝多糖40mg/(kg・d)×17d对小鼠肉瘤(S-180)和宫颈癌(U-14)进行实验,结果得到其平均抑瘤率分别为43%和51%,从而说明G LP有很好的抗肿瘤作用.Bao2Mei Shao等[9]研究发现灵芝多糖可通过增强机体免疫力,从而显示出抗肿瘤细胞的活性,它能活化BALB/c鼠的B细胞和巨噬细胞;而L I U Gao2Q iang等[10]则发现灵芝多糖除通过免疫介导作用发挥抗癌作用外,其抗癌的可能机制还包括活化促分裂原活化蛋白(MAP)激酶,以及抑制肿瘤血管新生等.1.3 抗衰老作用真菌多糖主要是通过清除体内自由基、提高抗氧化酶活性而起到抗衰老作用的,其中超氧化物歧化酶(S OD)和谷胱甘肽过氧化物酶(2 PX)是机体内清除有害自由基的重要抗氧化酶,可保护细胞免受损伤,延缓细胞衰老.研究表明,灵芝多糖的抗衰老作用与抗自由基氧化的功能是密切相关的,它能阻止自由基损伤,终止脂质过氧化,保护细胞、延缓衰老[11];而黑木耳多糖能不同程度的增加衰老小鼠血浆中S OD、GSH2PX活性,降低MDA(丙二醛)含量,从而表现出较好的抗衰老作用[12].1.4 降血脂、降血压、降血糖作用真菌多糖能有效增强冠状动脉机能、扩大冠体流量,增强心肌供氧能力,降低血脂,预防动脉硬化,改善血液循环,在降低血压、血脂、血糖等方面有显著作用[13].Kubo等[14]曾进行了灰树花多糖治疗高血脂症大鼠的实验,发现剂量组大鼠血液中胆固醇、甘油三酯和磷脂含量比对照组下降0.3～0.8倍,接近正常对照组水平,肝重和皮脂层降低0.6～0.7倍,血脂与肝脂水平下降,胆固醇排泄增加1.8倍,说明灰树花多糖具有明显的降血脂和增加脂肪代谢的能力;另外,研究发现[15-16],灰树花多糖还可有效降低遗传性高血压小鼠的血压;Kiho等[17]实验观察到银耳多糖能增加葡萄糖激酶、己糖激酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性,降低葡萄糖-6-磷酸酶活性,加速葡萄糖代谢从而降低血糖水平.1.5 其他药理作用及其发展趋势除上述药理作用外,真菌多糖的药理作用还表现在抗病毒作用(灰树花多糖[16]、裂褶菌多糖[18])、抗氧化作用(云芝多糖[19])、抗辐射作用(灵芝多糖[20])、抗血栓和抗凝血作用(灵芝多糖[8])等.同时,现有研究结果表明,单一真菌多糖有走向复合真菌多糖的发展趋势.将某些真菌多糖按照一定的比例混合制成复合真菌多糖,在等剂量的情况下可明显提高其在某些方面的药理作用,佐证了不同来源的同一药理作用的多糖有效成分间的相互配伍、相互协同的重要性.唐省三等[21]利用复合真菌多糖(猴头菇、香菇、茯苓真菌多糖)研究对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响,发现复合多糖各组可明显升高S-180肉瘤小鼠腹腔巨噬细胞的活性.Lonseny T.等[22]通过研究也发现复合真菌多糖(香菇多糖∶灵芝多糖∶灰树花多糖=0.5∶0.5)S-42.2%和.,NK细胞和巨噬细.2 真菌多糖的提取与纯化2.1 真菌多糖提取纯化的一般工艺流程真菌多糖的来源一般主要有3种途径:从天然真菌子实体中提取;从人工培养的真菌子实体中提取;从发酵培养的菌丝体和发酵液中提取.其一般工艺流程如下图所示:图1 真菌多糖提取纯化的一般工艺流程2.2 真菌多糖的发酵真菌多糖的发酵生产一般有固态发酵和液态第2期李 磊等:真菌多糖药理作用及其提取、纯化研究进展89发酵两种,工业上常采用液态发酵(表面发酵和深层发酵),即采用液体培养基的发酵技术.与固态发酵相比,液态深层发酵有很多优点[23]:液体悬浮状态是很多微生物的最适生长环境;在液体中,菌体及营养物、产物(包括热量)易于扩散,使发酵可在均质或拟均质条件下进行;液体输送方便,可进行工业化连续生产,便于机械化操作和自动化控制;产品质量稳定,易于提取、精制等.在生产上,真菌多糖的液态发酵一般要经过斜面菌种培养、摇床培养、种子罐扩大培养、发酵罐培养等工艺流程;并且根据其工艺可将其培养基分为孢子培养基、种子培养基和发酵培养基,以便在菌丝体生长的不同阶段为其提供良好的营养.汪维云等[24]采用液体发酵法对灰树花菌丝体进行培养:试管菌种经过活化,接入300mL三角瓶(培养基装量100mL)在来复式摇床中培养,转速为180r/m in,培养温度为25℃;摇瓶培养48 h,待形成菌丝球并均匀分散在培养液中时转入种子罐(装料量50L)中培养,培养温度为25℃,通气量1.4∶1(V/V),培养36h,再转入发酵罐(装料量500L)中培养72h.曾晓希等[25]通过研究发现,灵芝多糖液体发酵的最佳碳源、氮源和生长因子分别是葡萄糖、酵母膏和维生素B1,最适温度、起始pH值和摇床转速分别为28℃、515和160r/m in.2.3 真菌多糖的提取真菌多糖存在于真菌的菌丝体和子实体中,菌丝体在进行液态发酵时,可形成胞外多糖或胞内多糖.对于胞外多糖直接对发酵液进行后处理即可;而对于胞内多糖,还要根据多糖的不同性质采用适当的方法对菌丝体进行浸提.大多数真菌多糖可溶于冷水,在热水中呈黏液,遇乙醇能沉淀,故传统的浸提方法多为热水提取法(适用于水溶性多糖),然后用乙醇等低级醇进行沉淀;另外还有稀酸提取法(适用于酸溶性多糖)与稀碱提取法(适用于碱溶性多糖).但是,热水浸提法较费时且效率低,而酸碱提取法又较易破坏多糖的空间结构及活性,故目前多采用酶法[26]及方兴未艾的超声波提取法[27-28]等.刘宁等[26]采用混合酶解法提取香菇多糖,并与传统水浴提取法进行分析比较,结果发现前者的最高提取率为12.90%,比后者高出6.26%,而在时间上仅用了后者的1/3,其产品在进行紫外吸收检测时,发现产品杂质含量少,比后者更接近标准品;Tabata等[27]在应用超声波提取法提取姬松茸多糖时,也发现其浸提率要明显高于传统的热水浸提法.另外,胡斌杰等[28]通过实验确定了传统热水提取法提取灵芝多糖的最佳工艺条件为:料液比为1∶20,提取温度为90℃,提取时间2 h,粒度为80目;而超声波法的最佳工艺条件为:料液比为1∶15,提取温度为60℃,超声时间25 m in,粒度为60目,且多糖提取率较传统热水提取法提高30%以上.由此可见,新方法与传统方法相比具有省时、条件温和、操作简便、提取率高、杂质含量少等优点.2.4 真菌多糖的纯化由上述方法得到的真菌多糖均为多糖粗提物,要得到纯化多糖甚至单一多糖还要经过一系列的纯化步骤.2.4.1 真菌多糖粗提物的除杂多糖粗提物中常含有杂蛋白、色素、低聚糖及一些小分子化合物等杂质,真菌多糖纯化的过程中应首先将其除去.2.4.1.1 去蛋白质经典的去蛋白质方法是Sevag法[29]:即用氯仿、正丁醇或正戊醇按5∶1混合后,加到样品水溶液中振摇,离心法除去形成凝胶状的蛋白质,反复多次至蛋白质除尽为止.该方法在实验室中最为常用,但是,其不足之处在于它的工艺流程较长、多糖损失多且有机溶剂消耗量大.朱美静等[30]实验发现三氯乙酸(TCA)法对猴头多糖脱蛋白的效果较好,且多糖损失较少;而谢红旗等[31]采用阴离子交换树脂对香菇多糖中蛋白质进行分离也取得了较好的效果.2.4.1.2 去色素有些真菌子实体或菌丝体中含有大量色素,这就给真菌多糖提取液的纯化带来很大困难,不仅对分光光度计的准确度有很大影响,而且还严重影响成品的品质.色素的去除常采用吸附法(纤维素、硅藻土、高岭土、活性炭等)、氧化法(H2O2)、离子交换法(DEAE2纤维素离子交换柱或Duolite A27)、金属络合物法(费林试剂)等.2.4.1.3 其他杂质的去除去除蛋白质和色素后的多糖液还含有较多其他杂质,可通过柱层析等方法进一步除去;而对于低聚糖、氨基酸等小分子化合物,可采用半透膜逆向流水透析法将其除去.2.4.2 真菌多糖的分离精制经除杂后得到的多糖液一般是由不同相对分子质量大小或不同成分的多糖混合物所组成,欲90 河南工业大学学报(自然科学版)第29卷得到单一多糖就要对多糖液进行分级分离.常用于分级分离的方法主要有乙醇分级沉淀法、季铵盐沉淀法、纤维素阴离子交换柱层析、凝胶柱层析、膜分离法等[32].李小定等[33]取纯化后的灰树花多糖(PGF) 20mg上DEAE2Sephadex A225柱,分别用水、2 mol/L尿素和2mol/L尿素+0.2mol/LNaCl阶段洗脱,分步收集洗脱液,用硫酸苯酚法检测多糖,合并多糖高峰部分,浓缩后透析,冻干,得4个多糖级分.王蕾等[34]将水提醇沉后得到的蛹虫草多糖(CPS)经Sephadex G2100柱色谱层析,分步收集后,采用苯酚-硫酸法进行检测,结果分离得到CPS1、CPS2、CPS3三种多糖.2.4.3 真菌多糖的纯度鉴定多糖的纯度鉴定一般可采用纸层析法、比旋度法、凝胶柱层析法、高压电泳法、超离心分析法、高效液相色谱法和光谱扫描法等[35].“多糖纯度”不能用通常化合物的纯度标准来衡量,的纯度标准是建立多项指标,每一项指标测定一种不同的特性[36].一般要有3种以上方法测定的结果,才能对某一多糖的均一性做出结论.李小定等人[33]分别采用了纸层析、Sephadex G2200凝胶柱层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法对经纯化得到的4种灰树花多糖级分进行纯度鉴定,结果显示4种多糖级分经纸层析鉴定均为单一斑点,经Sephadex G2200凝胶柱层析法鉴定均为单一对称峰,经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示为单一谱带,表明4种级分为均一多糖.缪建等[37]则分别采用旋光度法、Sephar ose4B柱层析、红外光谱等方法对香菇多糖的两组分Len12A、Len22A进行了纯度鉴定,最终确定其为均一多糖组分.3 真菌多糖的应用与展望作为一种重要的生物效应调节剂,真菌多糖具有非常重要而广泛的药理作用,尤其在抗肿瘤、免疫调节、延缓衰老等方面,人们已越来越重视其在医疗保健行业的开发.目前,真菌多糖已被开发成许多产品,如香菇多糖注射液、羧甲基茯苓多糖注射液、猪苓多糖片、猴头冲剂、云芝泰康冲剂等,显示了广阔的发展前景;在临床上,真菌多糖现已被广泛应用于免疫缺陷性疾病、自身免疫疾病和肿瘤等疾病的治疗;并且随着生物药剂学及微胶囊、纳米粒等制药新技术的发展,真菌多糖新剂型药物的研究与开发已引起人们的广泛关注.另外,研究表明真菌多糖还可被开发成一种全新的绿色饲料添加剂[38]:在动物养殖中,抗菌、抗病毒一直是困扰养殖行业的一大问题,由于真菌多糖具有高效、无毒、提高免疫力、抗菌抗病毒、无残留等特点,符合绿色饲料及绿色养殖的要求,因此开展真菌多糖应用于饲料添加剂的产品研究是非常有意义和具有市场潜力的.总之,随着分子生物学、医学、多糖制药工艺学、现代分析技术的发展以及对真菌多糖构效关系的进一步研究,可以预料真菌多糖今后将在许多行业以及人们的日常生活中起着越来越重要的作用.参考文献:[1] 朱建华,杨晓泉.真菌多糖研究进展———结构、特征及制备方法[J].中国食品添加剂,6):7580.]Mao P H,J in X,et al.Study onfr om edible and medicai fun2 gus[J].Che m&B i oengineering,2004(1):1416.[3] Q in J Z,Chen M,Chen H,et al.Pr os pectand current studies on edible and phar maceu2tical fungi polysaccharides[J].Edible Fungiof China,2004,23(2):610.[4] 欧阳天贽,李小定,荣建华.真菌多糖抗肿瘤及免疫调节作用研究进展[J].天然产物研究与开发,2006,18:524528.[5] Nanba H.Maitake mushr oom2i m mune thera2py t o p revent fr om cancer gr owth 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