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第三章
常用的细胞化学染色方法
一、概述 定义：细胞化学染色是细胞学和化学相结合而 形成的一门科学。它以细胞形态学为基础， 结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种 化学物质作定性、定位、半定量分析的方法。 基本要求：原位显示细胞成分与结构
二、细胞化学染色的基本步骤
固定
成色 复染
常用化学法固定，如甲醛、甲醇、乙 醇、丙酮等。
【染色反应】
细胞浆内有灰 黑色或棕黑色 弥漫性或颗粒 状沉淀为阳性。
【正常血细胞染色反应】
在中性PH时用α醋酸萘酚作底物，正常成熟
单 核 细 胞 及 白 血 病 性 原 、 幼 单 均 呈 α-NAE （强）阳性，其他血细胞呈阴性或弱阳性， 所以α-NAE又称为“单核细胞酯酶”，是单 核细胞的标记酶，可被NaF抑制。
常用于白血病、贫血等血液系统疾病的诊断
和鉴别诊断。
小结
临床常用的细胞化学染色有：过氧化物
酶染色、中性粒细胞碱性磷酸酶染色、 酯酶染色、糖原染色、铁染色。
第四章 骨髓活检
（一）与骨穿相比有以下优点： 1. 能较全面了解、真实衡量造血组织增生程度。 2. 当骨髓干抽、血稀时，诊断困难，需要辅以骨 髓活检才能诊断。 3. 可观察重要的骨髓组织学变化，如骨髓纤维化、 骨髓坏死、骨髓肿瘤、淀粉样变。
【正常血细胞染色反应】
•单核细胞系：各阶段均可呈阳性
•粒细胞系：各阶段细胞呈阴性，少部分弱阳 性 •巨核细胞：阳性 •淋巴细胞：各阶段呈阴性，少数可呈弱阳性 •幼红细胞：多为阴性，少数可呈弱阳性反应
仅单核细胞的阳性反应可被NaF抑制。
【临床意义】
1．鉴别急白类型：
•急性单核细胞白血病：白血病细胞呈强阳性 此反应可被NaF抑制 •急性粒细胞白血病：可呈弱阳性反应， 不被NaF抑制 •急性粒单核细胞白血病：具有以上两型白血病染 色反应特征 •急性淋巴细胞白血病：可呈阳性，不被NNaF抑制
报告方式：
细胞内铁：阳性率X%，以X型为主，积分X分。
细胞外铁结果判断
2、细胞外铁检查及分级标准
低倍镜找骨髓小粒，油镜判断。
细胞外铁结果判断
–“+”：少数铁粒或偶见铁小珠。铁小珠即大于 嗜酸性粒细胞颗粒的普鲁士蓝色物。 –“2+”：较多铁粒，间有铁小珠。 –“3+”：许多铁粒，铁小珠，或少数铁小块 –“4+”：密布铁粒，铁小珠，并有许多小块成 堆。 –“－”：无铁粒。 铁粒幼细胞：幼红细胞浆含6个以上铁颗粒，环 绕核周围
【临床意义】
2．红血病、红白血病： 异常幼红细胞呈阳
性，阳性反应不被NaF抑制。
（四）过碘酸-雪夫反应 （periodic acid-Schiff reaction， PAS）（糖原染色）
【原 理】
含 乙 二 醇 基 （ -CHOH-CHOH- ） 的 糖 类 （含糖原、粘多糖、糖蛋白、糖酯等）被过 碘酸（氧化剂）氧化，生成二醛基(CHOCHO)，与雪夫试剂反应，使雪夫试剂中无 色品红变为紫红色沉淀，定位于含有多糖类 的胞浆中。
4、非缺铁性贫血
•如溶贫、巨幼贫、再障、地贫、白血病，内/外铁正 常/升高。 •长期慢性感染引起的贫血、继发性贫血：内铁可减 低，外铁不少。
四种常见类型白血病的细胞化学染色结果 M3
POX染色 NAS-DCE α-NAE染色 α-NAE染色+NaF PAS 强阳性 强阳性 强阳性 不抑制 强阳性
急粒
【结果判断及分级】
（++）2分：全部胞浆呈均匀棕黑色 或出现较粗的黑色颗粒，不超过胞浆 的1/2。
（+）1分：胞浆呈均匀浅灰色，无颗 粒或有少量棕黑色颗粒，但不超过胞 浆的1/4。
（－）0分：胞浆呈淡红色
【正常血细胞染色反应】
在细胞化学检查中，碱性磷酸酶多用来显
示中性粒细胞胞浆中有无此酶存在，所以 又称中性粒细胞磷酸酶，是中性粒细胞的 标记酶，以晚幼、成熟粒含量最高。
【临床意义】
1、红细胞系统疾病中的应用
红血病或红白血病、骨髓增生异常综合征，幼红可呈阳性。 某些红系良性疾病，如缺铁贫、地贫、铁粒幼细胞性贫血，幼 红可呈阳性。 巨幼贫、溶贫、再障时幼红呈阴性。
有助于巨幼贫与红白血病、再障与骨髓增生异常综合 征鉴别。
【临床意义】
2、三种白血病鉴别
急淋：白血病细胞阳性率增高，阳性物呈粗颗粒状或大块状。 急单：白血病细胞可呈阳性，阳性物小而多，弥散分布，胞 浆边缘处颗粒较粗大。 急粒：白血病原始粒细胞呈阴性或弱阳性，阳性物均匀分布、 细颗粒状或均匀红色。 恶性淋巴瘤：阳性率高、阳性强，呈块状或粗颗粒状。
（七）铁染色
骨髓中的含铁血黄素（细胞外铁），以及中、 晚幼红细胞胞浆中的铁蛋白聚合物（细胞内 铁）经普鲁士蓝反应形成蓝色的亚铁氰化铁 沉淀，定位于含铁部位。 铁染色中的细胞外铁反映骨髓中铁的储存量， 细胞内铁反映骨髓中可利用铁的量。
【原
方法：普鲁士蓝反应
4Fe3+ + 3K4[Fe(CN)6] （亚铁氰化钾）
【原 理】
POX
方法：二氨基联苯胺法
H2O2 H2O+[O]
二氨基联苯胺
-2H
金黄色沉淀
【染色反应】
阳性反应为蓝 黑色颗粒,分布 细胞的胞浆中。
【结果判断】
强阳性：颗粒粗大，密布于 整个胞浆 阳性：颗粒略粗，分布较密集
弱阳性：颗粒小，分布稀疏 阴性：无颗粒
【正常血细胞染色反应】
粒系：原粒Ⅰ型阴性，Ⅱ型阳性；早幼粒以下 均呈阳性，随着细胞成熟度阳性反应程度逐渐 加强。 嗜酸性分叶核粒细胞：阳性，颗粒更粗大。 嗜碱性分叶核粒细胞：阴性。
氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色
(naphythol AS-D chloroacetate esterase, AS-D NCE)
[原理]
氯乙酸AS-D萘酚AS-D NCE AS-D奈酚
重氮盐 有色沉淀↓
（坚固紫酱）
AS-D NCE几乎仅出现在粒细胞，其特异性高， 又称“粒细胞酯酶”、“特异性酯酶”。
【染色反应】
【染色反应】
阳性反应为红 色沉淀，定位 于胞浆中
【正常血细胞染色反应】
粒系：原粒（-），随着粒系细胞的逐步成 熟，阳性反应的程度逐渐增强，出现弥漫性 红色胞浆和红色颗粒。 单核系：原单（-），幼单及成熟单（+）， 颗粒少、小，弥散，细砂状。 正常幼红：阴性 巨核细胞、血小板：阳性 淋巴细胞：阴性/阳性，阳性粗颗粒块状
单核系：原单阴性，幼单及成熟单弱阳性，阳性 颗粒少，细小，大小不均，弥漫分布不均。
幼红、淋巴细胞、浆细胞、巨核细胞：阴性
【临床意义】
1、帮助鉴别急白类型 首选
1） 急白类型鉴别
急性淋巴细胞白血病其阳性率<3%。
急粒阳性。
【临床意义】
3）急性早幼粒细胞白血病（强阳）与急性单
核细胞白血病的鉴别。 4）急性单核细胞白血病与组织细胞白血病或 恶组鉴别：急单时幼单和单核细胞呈弱阳性， 异常组织细胞阴性。
参考值：
正常人“+”-“2+”
报告方式：
细胞外铁：X+
【临床意义】
诊断缺铁性贫血
外铁明显减低或消失，内铁减低。
诊断铁粒幼细胞性贫血
铁粒幼细胞增多，出现较多环形铁粒幼 红细胞，铁粒粗大；外铁2+-3+。
【临床意义】
3、骨髓增生异常综合征中的应用 •伴环形铁粒幼红细胞增多的难治性贫血，其环形铁 粒幼红细胞大于15%，细胞外铁也常增加。
【临 床 意 义】
有助于慢粒和类白的鉴别和进一步明确慢性粒 细胞白血病的诊断。
慢性粒细胞白血病和慢性中性粒细胞白血病的 鉴别：前者慢性期时积分明显降低，后者明显 增加。 初步鉴别感染类型：细菌性感染时明显增加， 病毒性感染时常无明显变化。
【临 床 意 义】
PNH和再生障碍性贫血（AA）的鉴别：前者 积分减低，后者积分增高。 急白类型的初步鉴别：急粒时积分减低，急淋 时积分一般增高。 其他：恶性淋巴瘤与恶性组织细胞病；恶性组 织细胞病与反应性组织细胞增多症；真性红细 胞增多症与继发性红细胞增多症；原发性血小 板增多症与继发性血小板增多症。
阳性或阴性 阴性或阳性 阴性或阳性 不抑制
急单
阴性或弱阳性 阴性或弱阳性 阳性或强阳性 抑制
急淋
阴性 阴性 阴性或阳性 不抑制 阳性，呈粗颗 粒状
阳性，呈均匀 阳性，呈细颗粒 红色 状
小结
细胞化学染色以细胞形态学为基础，结合运
用化学反应的原理对血细胞内的各种化学物 质作定性、定位、wenku.baidu.com定量分析的方法。
–Ⅲ型（3分）：胞浆内含6-10个铁小粒，或1-4个粗 大铁粒。 –Ⅳ型（4分）：胞浆内含11个以上铁小粒，或5个以 上粗大颗粒。
–环形铁粒幼细胞指细胞内有铁粒的幼红细胞所含铁 粒>6个（含6个），围绕核周1/2以上及环核排布者
–细胞内铁：阴性
参考值：
正常人以Ⅰ型为主，少量Ⅱ型，无Ⅲ、Ⅳ型、环 形铁粒幼细胞。
β甘油磷酸钠 NAP 甘油+磷酸钠 硝酸钙 磷酸钙 硝酸钴磷酸钴 硫化铵 硫化钴↓
偶氮偶联法为ICSH推荐，方法简单、快速、 稳定、反应步骤少；缺点是试剂不易得，较贵。
【染色反应】
阳性反应为灰黑 色沉淀。
【结果判断及分级】
（++++）4分：全部胞浆充满粗大棕 黑色颗粒而呈深黑色，黑色沉淀甚 至掩盖于胞核上。 （+++）3分：胞浆中已基本充满棕 黑色颗粒，但颗粒之间有空隙。
（二）适应证： 1、骨髓穿刺多次失败。 2、全血细胞减少者。 3、某些贫血、原因不明的发热、肝、脾、淋巴 结肿大者，骨髓涂片检查不能确定者。 4、对白血病疗效的观察有指导价值。
特别适应 ①多次骨穿取材失效、干抽时 ②血象骨髓象与临床诊断不完全符合
阳性反应为蓝 色颗粒，定位 于胞浆中
【临床意义】
主要用于辅助鉴别急性白血病细胞类型。 急性粒细胞白血病：原粒阳性或阴性 急性早幼粒细胞白血病：白血病强阳性 急性单核细胞白血病：原单及幼单几乎为阴性 急性粒单细胞白血病：粒系呈阳性，单核系几乎呈 阴性 急性淋巴细胞白血病：白血病细胞呈阴性反应
理】
Fe4[Fe(CN)6] +12K+
【染色结果】
阳性反应为蓝 绿色颗粒。
【细胞内铁结果判断】
1、细胞内铁检查及分型标准
改用油镜，计数100个中、晚幼红细胞，并分型。
低倍镜下选择涂片体部较薄，细胞分布均匀的部位，
细胞内铁结果判断
–Ⅰ型（1分）：胞浆内含1-2个铁小粒。
–Ⅱ型（2分）：胞浆内含3-5个铁小粒。
水解短链脂肪酸的酶称非特异性酯酶NSE。
【分布】
特异性酯酶分布较局限，主要存在于中
性粒细胞和肥大细胞浆中。
非特异性酯酶分布较广，以单核、淋巴
系最丰富，粒系亦有。
单核系的酯酶易被氟化钠所抑制，粒系的 则不能，借此可将粒、单区分。
[一]特异性酯酶染色 (specific esterase,SE)
【临床意义】
3、其他：
高雪氏细胞和尼曼-匹克细胞：前者强阳性，后者 弱阳性，且空泡处为阴性。
不典型巨核细胞与R-S细胞：前者强阳性，后者 弱阳/阴性。
（五）中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （neutrophilic alkaline phosphatase,NAP）
【原
理】
方法：钙-钴法（置换反应）
形成有色沉淀，显示出被检测的化学物 质。反应种类：偶氮偶联、联苯胺、普 鲁士蓝、雪夫试剂、钙钴沉淀 核复染：苏木素、甲基绿、中性红、 核固红、沙黄 浆复染：伊红、亮绿
三
、
临
床
应
用
1、辅助判断急性白血病的细胞类型。 2、辅助血液系统疾病的诊断和鉴诊。 3、观察疾病疗效和预后。 4、发病机制的探讨。
（一）过氧化物酶染色（peroxidase,POX）
【临床意义】
2、成熟中性粒细胞POX活性变化 活性增高：再障、感染、急淋、慢淋 活性减低：急粒、慢粒、急单、骨髓增生异 常综合征（MDS）、放射病、退化性中性粒 细胞。
苏丹黑染色
SB 与POX基本一致。可用陈旧涂片染色。
（三）酯酶染色
酯酶：能够水解有机或无机酸醇酯的酶。 水解长链脂肪酸的酶称特异性酯酶SE。
[二]非特异性酯酶染色 (non-specific esterase,NSE)
α -醋酸萘酚酯酶染色法 （α -NAE） [原理]
α-醋酸萘酚 α-NAE萘酚
重氮盐 有色沉淀↓
（坚固蓝B）
氟化钠抑制试验:制备两份相同基质液，其中一份 按1.5mg/10ml加入NaF，另一份不加作对照，同样 方法作NAE染色，两者比较结果，阳性细胞减少 >50%时计为NaF抑制阳性。
常用的细胞化学染色方法
一、概述 定义：细胞化学染色是细胞学和化学相结合而 形成的一门科学。它以细胞形态学为基础， 结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种 化学物质作定性、定位、半定量分析的方法。 基本要求：原位显示细胞成分与结构
二、细胞化学染色的基本步骤
固定
成色 复染
常用化学法固定，如甲醛、甲醇、乙 醇、丙酮等。
【染色反应】
细胞浆内有灰 黑色或棕黑色 弥漫性或颗粒 状沉淀为阳性。
【正常血细胞染色反应】
在中性PH时用α醋酸萘酚作底物，正常成熟
单 核 细 胞 及 白 血 病 性 原 、 幼 单 均 呈 α-NAE （强）阳性，其他血细胞呈阴性或弱阳性， 所以α-NAE又称为“单核细胞酯酶”，是单 核细胞的标记酶，可被NaF抑制。
常用于白血病、贫血等血液系统疾病的诊断
和鉴别诊断。
小结
临床常用的细胞化学染色有：过氧化物
酶染色、中性粒细胞碱性磷酸酶染色、 酯酶染色、糖原染色、铁染色。
第四章 骨髓活检
（一）与骨穿相比有以下优点： 1. 能较全面了解、真实衡量造血组织增生程度。 2. 当骨髓干抽、血稀时，诊断困难，需要辅以骨 髓活检才能诊断。 3. 可观察重要的骨髓组织学变化，如骨髓纤维化、 骨髓坏死、骨髓肿瘤、淀粉样变。
【正常血细胞染色反应】
•单核细胞系：各阶段均可呈阳性
•粒细胞系：各阶段细胞呈阴性，少部分弱阳 性 •巨核细胞：阳性 •淋巴细胞：各阶段呈阴性，少数可呈弱阳性 •幼红细胞：多为阴性，少数可呈弱阳性反应
仅单核细胞的阳性反应可被NaF抑制。
【临床意义】
1．鉴别急白类型：
•急性单核细胞白血病：白血病细胞呈强阳性 此反应可被NaF抑制 •急性粒细胞白血病：可呈弱阳性反应， 不被NaF抑制 •急性粒单核细胞白血病：具有以上两型白血病染 色反应特征 •急性淋巴细胞白血病：可呈阳性，不被NNaF抑制
报告方式：
细胞内铁：阳性率X%，以X型为主，积分X分。
细胞外铁结果判断
2、细胞外铁检查及分级标准
低倍镜找骨髓小粒，油镜判断。
细胞外铁结果判断
–“+”：少数铁粒或偶见铁小珠。铁小珠即大于 嗜酸性粒细胞颗粒的普鲁士蓝色物。 –“2+”：较多铁粒，间有铁小珠。 –“3+”：许多铁粒，铁小珠，或少数铁小块 –“4+”：密布铁粒，铁小珠，并有许多小块成 堆。 –“－”：无铁粒。 铁粒幼细胞：幼红细胞浆含6个以上铁颗粒，环 绕核周围
【临床意义】
2．红血病、红白血病： 异常幼红细胞呈阳
性，阳性反应不被NaF抑制。
（四）过碘酸-雪夫反应 （periodic acid-Schiff reaction， PAS）（糖原染色）
【原 理】
含 乙 二 醇 基 （ -CHOH-CHOH- ） 的 糖 类 （含糖原、粘多糖、糖蛋白、糖酯等）被过 碘酸（氧化剂）氧化，生成二醛基(CHOCHO)，与雪夫试剂反应，使雪夫试剂中无 色品红变为紫红色沉淀，定位于含有多糖类 的胞浆中。
4、非缺铁性贫血
•如溶贫、巨幼贫、再障、地贫、白血病，内/外铁正 常/升高。 •长期慢性感染引起的贫血、继发性贫血：内铁可减 低，外铁不少。
四种常见类型白血病的细胞化学染色结果 M3
POX染色 NAS-DCE α-NAE染色 α-NAE染色+NaF PAS 强阳性 强阳性 强阳性 不抑制 强阳性
急粒
【结果判断及分级】
（++）2分：全部胞浆呈均匀棕黑色 或出现较粗的黑色颗粒，不超过胞浆 的1/2。
（+）1分：胞浆呈均匀浅灰色，无颗 粒或有少量棕黑色颗粒，但不超过胞 浆的1/4。
（－）0分：胞浆呈淡红色
【正常血细胞染色反应】
在细胞化学检查中，碱性磷酸酶多用来显
示中性粒细胞胞浆中有无此酶存在，所以 又称中性粒细胞磷酸酶，是中性粒细胞的 标记酶，以晚幼、成熟粒含量最高。
【临床意义】
1、红细胞系统疾病中的应用
红血病或红白血病、骨髓增生异常综合征，幼红可呈阳性。 某些红系良性疾病，如缺铁贫、地贫、铁粒幼细胞性贫血，幼 红可呈阳性。 巨幼贫、溶贫、再障时幼红呈阴性。
有助于巨幼贫与红白血病、再障与骨髓增生异常综合 征鉴别。
【临床意义】
2、三种白血病鉴别
急淋：白血病细胞阳性率增高，阳性物呈粗颗粒状或大块状。 急单：白血病细胞可呈阳性，阳性物小而多，弥散分布，胞 浆边缘处颗粒较粗大。 急粒：白血病原始粒细胞呈阴性或弱阳性，阳性物均匀分布、 细颗粒状或均匀红色。 恶性淋巴瘤：阳性率高、阳性强，呈块状或粗颗粒状。
（七）铁染色
骨髓中的含铁血黄素（细胞外铁），以及中、 晚幼红细胞胞浆中的铁蛋白聚合物（细胞内 铁）经普鲁士蓝反应形成蓝色的亚铁氰化铁 沉淀，定位于含铁部位。 铁染色中的细胞外铁反映骨髓中铁的储存量， 细胞内铁反映骨髓中可利用铁的量。
【原
方法：普鲁士蓝反应
4Fe3+ + 3K4[Fe(CN)6] （亚铁氰化钾）
【原 理】
POX
方法：二氨基联苯胺法
H2O2 H2O+[O]
二氨基联苯胺
-2H
金黄色沉淀
【染色反应】
阳性反应为蓝 黑色颗粒,分布 细胞的胞浆中。
【结果判断】
强阳性：颗粒粗大，密布于 整个胞浆 阳性：颗粒略粗，分布较密集
弱阳性：颗粒小，分布稀疏 阴性：无颗粒
【正常血细胞染色反应】
粒系：原粒Ⅰ型阴性，Ⅱ型阳性；早幼粒以下 均呈阳性，随着细胞成熟度阳性反应程度逐渐 加强。 嗜酸性分叶核粒细胞：阳性，颗粒更粗大。 嗜碱性分叶核粒细胞：阴性。
氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色
(naphythol AS-D chloroacetate esterase, AS-D NCE)
[原理]
氯乙酸AS-D萘酚AS-D NCE AS-D奈酚
重氮盐 有色沉淀↓
（坚固紫酱）
AS-D NCE几乎仅出现在粒细胞，其特异性高， 又称“粒细胞酯酶”、“特异性酯酶”。
【染色反应】
【染色反应】
阳性反应为红 色沉淀，定位 于胞浆中
【正常血细胞染色反应】
粒系：原粒（-），随着粒系细胞的逐步成 熟，阳性反应的程度逐渐增强，出现弥漫性 红色胞浆和红色颗粒。 单核系：原单（-），幼单及成熟单（+）， 颗粒少、小，弥散，细砂状。 正常幼红：阴性 巨核细胞、血小板：阳性 淋巴细胞：阴性/阳性，阳性粗颗粒块状
单核系：原单阴性，幼单及成熟单弱阳性，阳性 颗粒少，细小，大小不均，弥漫分布不均。
幼红、淋巴细胞、浆细胞、巨核细胞：阴性
【临床意义】
1、帮助鉴别急白类型 首选
1） 急白类型鉴别
急性淋巴细胞白血病其阳性率<3%。
急粒阳性。
【临床意义】
3）急性早幼粒细胞白血病（强阳）与急性单
核细胞白血病的鉴别。 4）急性单核细胞白血病与组织细胞白血病或 恶组鉴别：急单时幼单和单核细胞呈弱阳性， 异常组织细胞阴性。
参考值：
正常人“+”-“2+”
报告方式：
细胞外铁：X+
【临床意义】
诊断缺铁性贫血
外铁明显减低或消失，内铁减低。
诊断铁粒幼细胞性贫血
铁粒幼细胞增多，出现较多环形铁粒幼 红细胞，铁粒粗大；外铁2+-3+。
【临床意义】
3、骨髓增生异常综合征中的应用 •伴环形铁粒幼红细胞增多的难治性贫血，其环形铁 粒幼红细胞大于15%，细胞外铁也常增加。
【临 床 意 义】
有助于慢粒和类白的鉴别和进一步明确慢性粒 细胞白血病的诊断。
慢性粒细胞白血病和慢性中性粒细胞白血病的 鉴别：前者慢性期时积分明显降低，后者明显 增加。 初步鉴别感染类型：细菌性感染时明显增加， 病毒性感染时常无明显变化。
【临 床 意 义】
PNH和再生障碍性贫血（AA）的鉴别：前者 积分减低，后者积分增高。 急白类型的初步鉴别：急粒时积分减低，急淋 时积分一般增高。 其他：恶性淋巴瘤与恶性组织细胞病；恶性组 织细胞病与反应性组织细胞增多症；真性红细 胞增多症与继发性红细胞增多症；原发性血小 板增多症与继发性血小板增多症。
阳性或阴性 阴性或阳性 阴性或阳性 不抑制
急单
阴性或弱阳性 阴性或弱阳性 阳性或强阳性 抑制
急淋
阴性 阴性 阴性或阳性 不抑制 阳性，呈粗颗 粒状
阳性，呈均匀 阳性，呈细颗粒 红色 状
小结
细胞化学染色以细胞形态学为基础，结合运
用化学反应的原理对血细胞内的各种化学物 质作定性、定位、wenku.baidu.com定量分析的方法。
–Ⅲ型（3分）：胞浆内含6-10个铁小粒，或1-4个粗 大铁粒。 –Ⅳ型（4分）：胞浆内含11个以上铁小粒，或5个以 上粗大颗粒。
–环形铁粒幼细胞指细胞内有铁粒的幼红细胞所含铁 粒>6个（含6个），围绕核周1/2以上及环核排布者
–细胞内铁：阴性
参考值：
正常人以Ⅰ型为主，少量Ⅱ型，无Ⅲ、Ⅳ型、环 形铁粒幼细胞。
β甘油磷酸钠 NAP 甘油+磷酸钠 硝酸钙 磷酸钙 硝酸钴磷酸钴 硫化铵 硫化钴↓
偶氮偶联法为ICSH推荐，方法简单、快速、 稳定、反应步骤少；缺点是试剂不易得，较贵。
【染色反应】
阳性反应为灰黑 色沉淀。
【结果判断及分级】
（++++）4分：全部胞浆充满粗大棕 黑色颗粒而呈深黑色，黑色沉淀甚 至掩盖于胞核上。 （+++）3分：胞浆中已基本充满棕 黑色颗粒，但颗粒之间有空隙。
（二）适应证： 1、骨髓穿刺多次失败。 2、全血细胞减少者。 3、某些贫血、原因不明的发热、肝、脾、淋巴 结肿大者，骨髓涂片检查不能确定者。 4、对白血病疗效的观察有指导价值。
特别适应 ①多次骨穿取材失效、干抽时 ②血象骨髓象与临床诊断不完全符合
阳性反应为蓝 色颗粒，定位 于胞浆中
【临床意义】
主要用于辅助鉴别急性白血病细胞类型。 急性粒细胞白血病：原粒阳性或阴性 急性早幼粒细胞白血病：白血病强阳性 急性单核细胞白血病：原单及幼单几乎为阴性 急性粒单细胞白血病：粒系呈阳性，单核系几乎呈 阴性 急性淋巴细胞白血病：白血病细胞呈阴性反应
理】
Fe4[Fe(CN)6] +12K+
【染色结果】
阳性反应为蓝 绿色颗粒。
【细胞内铁结果判断】
1、细胞内铁检查及分型标准
改用油镜，计数100个中、晚幼红细胞，并分型。
低倍镜下选择涂片体部较薄，细胞分布均匀的部位，
细胞内铁结果判断
–Ⅰ型（1分）：胞浆内含1-2个铁小粒。
–Ⅱ型（2分）：胞浆内含3-5个铁小粒。
水解短链脂肪酸的酶称非特异性酯酶NSE。
【分布】
特异性酯酶分布较局限，主要存在于中
性粒细胞和肥大细胞浆中。
非特异性酯酶分布较广，以单核、淋巴
系最丰富，粒系亦有。
单核系的酯酶易被氟化钠所抑制，粒系的 则不能，借此可将粒、单区分。
[一]特异性酯酶染色 (specific esterase,SE)
【临床意义】
3、其他：
高雪氏细胞和尼曼-匹克细胞：前者强阳性，后者 弱阳性，且空泡处为阴性。
不典型巨核细胞与R-S细胞：前者强阳性，后者 弱阳/阴性。
（五）中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （neutrophilic alkaline phosphatase,NAP）
【原
理】
方法：钙-钴法（置换反应）
形成有色沉淀，显示出被检测的化学物 质。反应种类：偶氮偶联、联苯胺、普 鲁士蓝、雪夫试剂、钙钴沉淀 核复染：苏木素、甲基绿、中性红、 核固红、沙黄 浆复染：伊红、亮绿
三
、
临
床
应
用
1、辅助判断急性白血病的细胞类型。 2、辅助血液系统疾病的诊断和鉴诊。 3、观察疾病疗效和预后。 4、发病机制的探讨。
（一）过氧化物酶染色（peroxidase,POX）
【临床意义】
2、成熟中性粒细胞POX活性变化 活性增高：再障、感染、急淋、慢淋 活性减低：急粒、慢粒、急单、骨髓增生异 常综合征（MDS）、放射病、退化性中性粒 细胞。
苏丹黑染色
SB 与POX基本一致。可用陈旧涂片染色。
（三）酯酶染色
酯酶：能够水解有机或无机酸醇酯的酶。 水解长链脂肪酸的酶称特异性酯酶SE。
[二]非特异性酯酶染色 (non-specific esterase,NSE)
α -醋酸萘酚酯酶染色法 （α -NAE） [原理]
α-醋酸萘酚 α-NAE萘酚
重氮盐 有色沉淀↓
（坚固蓝B）
氟化钠抑制试验:制备两份相同基质液，其中一份 按1.5mg/10ml加入NaF，另一份不加作对照，同样 方法作NAE染色，两者比较结果，阳性细胞减少 >50%时计为NaF抑制阳性。