碱性蛋白质活性电泳胶配置
SDS-PAGE电泳试剂配制
SDS-PAGE电泳试剂配制SDSPAGE 电泳试剂配制在生物化学和分子生物学的研究领域中，SDSPAGE 电泳是一种常用的技术手段，用于分离和分析蛋白质。
而要成功进行 SDSPAGE 电泳实验，准确配制各种试剂是至关重要的一步。
接下来，让我们详细了解一下 SDSPAGE 电泳试剂的配制方法。
首先，我们来谈谈分离胶缓冲液的配制。
分离胶缓冲液通常使用TrisHCl 缓冲液，其 pH 值一般在 88 左右。
配制时，我们需要称取一定量的 Tris 碱，然后加入适量的浓盐酸进行调节 pH 值。
这个过程需要用到 pH 计来精确测量，以确保 pH 值的准确性。
一般来说，每升分离胶缓冲液中，Tris 的用量约为 1815g，而浓盐酸的用量则需要根据实际测量的 pH 值进行调整。
接下来是浓缩胶缓冲液的配制。
浓缩胶缓冲液的 pH 值通常为 68，同样使用 TrisHCl 缓冲液。
配制方法与分离胶缓冲液类似，但 Tris 的用量和浓盐酸的用量有所不同。
每升浓缩胶缓冲液中，Tris 的用量约为 606g，浓盐酸的用量也需要根据实际 pH 值测量结果进行微调。
然后是 30%丙烯酰胺溶液的配制。
这是 SDSPAGE 电泳中的关键试剂之一。
丙烯酰胺是一种有毒物质，在配制过程中需要特别小心。
我们将丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺按照 29:1 的比例混合。
称取 29g 丙烯酰胺和 1g 甲叉双丙烯酰胺，加入适量的去离子水，搅拌溶解后，定容至 100ml。
需要注意的是，丙烯酰胺具有神经毒性，操作时应戴手套在通风橱中进行。
SDS 溶液的配制也不能马虎。
SDS 即十二烷基硫酸钠，是一种阴离子去污剂。
称取 10g SDS，加入适量的去离子水，加热搅拌溶解后，定容至 100ml。
10%过硫酸铵溶液是引发丙烯酰胺聚合的重要试剂。
称取 1g 过硫酸铵，加入 10ml 去离子水，现配现用。
因为过硫酸铵溶液不稳定，容易分解，所以不宜长时间保存。
电泳缓冲液也是必不可少的。
蛋白电泳缓冲液配方_概述及解释说明
蛋白电泳缓冲液配方概述及解释说明1. 引言1.1 概述蛋白电泳是一种常用的生物化学实验技术，广泛应用于蛋白质分离、测定和分析。
在进行蛋白电泳实验时，缓冲液的配方对实验结果至关重要。
良好的缓冲液能够提供适宜的环境条件，确保蛋白质在电场中稳定迁移，并且能够维持准确的酸碱度。
1.2 文章结构本文将从以下几个方面对蛋白电泳缓冲液配方进行综述和解释说明。
首先，我们会介绍蛋白电泳的基本原理，为后续讨论铺垫基础。
然后，我们会详细探讨缓冲液在蛋白电泳中的作用，以及常用蛋白电泳缓冲液配方的概述。
接着，我们会解释一些关键要点，如离子组成和pH值选择的重要性以及缓冲剂种类与浓度选择的影响。
最后，在文章结尾，我们会总结全文内容并得出相应结论。
1.3 目的本文旨在向读者介绍蛋白电泳缓冲液配方的相关知识，并解释其重要性和影响因素。
通过阅读本文，读者将能够了解蛋白电泳缓冲液的基本原理、作用以及常用配方，进而提高实验设计的准确性和结果的可靠性。
此外，我们还将针对蛋白电泳缓冲液制备过程中可能遇到的问题，提供解答和操作注意事项。
希望本文能够为读者在蛋白电泳实验中提供有益的参考和指导。
2. 蛋白电泳缓冲液配方2.1 蛋白电泳的基本原理在介绍蛋白电泳缓冲液配方之前，我们需要了解蛋白电泳的基本原理。
蛋白电泳是一种将蛋白质分离和定量分析的常用方法。
它利用蛋白质在电场中的迁移速率差异来实现分离和分类。
2.2 缓冲液在蛋白电泳中的作用缓冲液在蛋白电泳中起到至关重要的作用。
首先，它提供适当的pH环境以维持蛋白质具有最佳稳定性和活性。
其次，缓冲液通过控制离子强度和组成来调节电场强度和导电性，从而影响蛋白质的迁移速率和分离效果。
此外，缓冲液还可以保持试样溶液的稳定性，并阻止试样中其他化学反应发生。
2.3 常用蛋白电泳缓冲液配方概述下面概述几种常用的蛋白电泳缓冲液配方：- Tris缓冲液：Tris（又称三氨基甲烷）是一种常用的缓冲剂，能够稳定蛋白质的pH值。
电泳相关buffer配置
电泳相关buffer配置SDS-PAGE 分离胶配方：SDS-PAGE 浓缩胶配方：5×Running buffer（SDS-PAGE）配制方法：125mM Tris1.25M 甘氨酸0.5％（w/v）SDS十二烷基磺酸钠5×SDS-PAGE Loading Buffer配制方法：250mM Tris-HCl（pH6.8）10%（W/V） SDS0.5%（W/V）溴酚兰50%（V/V）甘油100mM DTT 二硫苏糖醇2×SDS-PAGE Loading Buffer配制方法100mM Tris-HCl（pH6.8）5% SDS20%甘油40mM DTT 二硫苏糖醇0.2% 溴酚兰SDS-PAGE染色液配制方法：25%乙醇，0.15%考马斯亮蓝R-250，10%醋酸, 剩余加水。
SDS-PAGE脱色液配制方法：25%乙醇，10%醋酸，剩余加水。
30%丙烯酰胺配置方法配方[1]丙烯酰胺(Acr)[2]290g甲叉双丙烯酰胺(Bic)[3]10g超纯水至1000ml配置步骤●取所需体积的DDW于水浴锅或沸水中预热（水温不低于37℃）●称取所需的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺，加入预热的DDW定容至所需体积，玻璃棒搅拌使其完全溶解●将上述溶液用定性滤纸过滤，滤后可分装入瓶，4℃保存注意事项丙烯酰胺为有毒化学物，配置时应小心操作，进行必要的防护。
操作时应穿专用实验服，佩戴两层口罩及手套；称量时小心操作，避免试剂粉末飞溅；操作桌面铺报纸，尽量避免丙烯酰胺接触实验室常用仪器；配置器皿为专用器皿，不得混用；接触过丙烯酰胺的手套等物品应及时清理，不得污染实验室其他设施。
过滤时应勤换滤纸，否则可导致过滤速度缓慢。
溶液配制完成后，应标记溶液名称（组成）、配制日期、配制人、贮存条件等必要信息。
配置好的丙烯酰胺可于4℃长期保存，使用时恢复至室温且无沉淀，若出现沉淀应及时更换。
注：[1]试剂位于213天平下方试剂柜中，试剂剩余不多时应及时告知唐老师购买[2]丙烯酰胺(Acrylamide)[3] 甲叉双丙烯酰胺，又称亚甲基双丙烯酰胺(Bis-acrylamide)。
蛋白胶制胶【2024版】
表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液表 2 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳5%积层胶所用溶液溶液成分不同体积（ml ）凝胶液中各成分所需体积（ml ）1234568105%水0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.8 30%丙烯酰胺溶液0.170.330.50.670.8311.31.7可编辑修改精选全文完整版溶液成分不同体积（ml ）凝胶液中各成分所需体积（ml ）5 10 15 20 25 30 40 50 6% 水2.6 5.3 7.9 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5 30%丙烯酰胺溶液 1 2 3 4 5 6 8 10 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.8 5 6.3 7.5 10 12.5 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.004 0.008 0.012 0.016 0.02 0.024 0.032 0.04 8% 水2.3 4.6 6.9 9.3 11.5 13.9 18.5 23.2 30%丙烯酰胺溶液 1.3 2.7 4 5.3 6.7 8 10.7 13.3 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.8 5 6.3 7.5 10 12.5 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.003 0.006 0.009 0.012 0.015 0.018 0.024 0.03 10% 水1.9 4 5.9 7.9 9.9 11.9 15.9 19.8 30%丙烯酰胺溶液 1.7 3.3 5 6.7 8.3 10 13.3 16.7 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.32.53.8 5 6.3 7.5 10 12.5 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02 12% 水1.6 3.3 4.9 6.6 8.2 9.9 13.2 16.5 30%丙烯酰胺溶液 2 4 6 8 10 12 16 20 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.32.53.8 5 6.3 7.5 10 12.5 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02 15% 水1.12.33.44.65.76.9 9.2 11.5 30%丙烯酰胺溶液 2.5 57.5 10 12.5 15 20 25 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.8 5 6.3 7.5 10 12.5 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.021.0mol/L Tris (pH6.8)0.130.250.380.50.630.750 1.2510% SDS0.010.020.030.040.050.060.080.110%过硫酸氨0.010.020.030.040.050.060.080.1TEMED0.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0080.01SDS-PAGE凝胶电泳时的注意事项1．玻璃板一定要清洗干净，否则在染色时会有不必要的凝胶背景。
凝胶电泳配胶配方
8%Gel5ml10ml15ml20ml30%Acr 1.3 2.7 4.0 5.3 1.5M Tris-HCl (8.8) 1.3 2.5 3.8 5.010%SDS0.050.10.150.2 10%APS0.050.10.150.2 TEMED0.0030.0060.0090.1210%Gel5ml10ml15ml20ml30%Acr 1.7 3.3 5.0 6.7 1.5M Tris-HCl (8.8) 1.3 2.5 3.8 5.010%SDS0.050.10.150.20 10%APS0.050.10.150.20 TEMED0.0020.0040.0060.00812%Gel5ml10ml15ml20ml30%Acr 2.0 4.0 6.08.0 1.5M Tris-HCl (8.8) 1.3 2.5 3.8 5.010%SDS0.050.10.150.20 10%APS0.050.10.150.2015%Gel5ml10ml15ml20ml30%Acr 2.5 5.07.510.0 1.5M Tris-HCl (8.8) 1.3 2.5 3.8 5.010%SDS0.050.10.150.20 10%APS0.050.10.150.20 TEMED0.0020.0040.0060.00830%Acr0.670.83 1.0 1.4 1.5M Tris-HCl (6.8)0.50.630.75 1.010%SDS0.040.050.060.08 10%APS0.040.050.060.08 TEMED0.0040.0050.0060.008SDS-PAGE标准化流程实验前准备：（1）30%丙烯酰胺溶液：2.9g丙烯酰胺+0.1g甲叉双丙烯酰胺，溶于5mLddH2O，定容至10mL。
4℃避光保存。
（2）10%SDS（十二烷基磺酸钠）：1gSDS，加6mLddH2O，加热至溶解，定容至10mL。
蛋白sds-page凝胶配方及制胶
蛋白sds-page凝胶配方及制胶
SDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis）是一种常用的蛋白质电泳技术，用于分离和定量蛋白质。
以下是制作SDS-PAGE凝胶的基本配方和制胶步骤：
配方：
1. 1%丙烯酰胺（Acrylamide）溶液：将3.7g丙烯酰胺和60μl N,N'-亚甲基双丙烯酰胺溶解在0.5ml双蒸水中，搅拌均匀。
2. 2.5%BT(Bis-Tris）溶液：将0.1g BT和0.25ml TBE(三酸乙酸盐电泳缓冲液)混合均匀。
3. 10%过硫酸铵（AMS）溶液：将10μl AMS溶解在1ml双蒸水中。
4. 5xTBE电泳缓冲液。
制胶步骤：
1. 将电冰板预热至30℃。
2. 将1%丙烯酰胺溶液和2.5%BT溶液混合，100V恒压电泳10-15分钟，直至胶液凝固。
3. 将胶板取出，放入考马士亮蓝R-250中染色约2小时，然后用自来水冲洗至背景无色。
4. 将胶板再次放入考马士亮蓝R-250中染色约2小时，然后用自来水冲洗至背景无色。
5. 将胶板放入考马士固蓝R-250中染色约2小时，然后用自来水冲洗至背景无色。
6. 将胶板干燥后，即可用于蛋白质电泳。
碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液(10×)
北京雷根生物技术有限公司
碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液(10×)
简介：
碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液(10×)是一种10倍浓缩的碱性DNA 电泳缓冲液，由
NaOH 、EDTA 等组成，呈强碱性。
使用时稀释至1×使用，主要用于碱性琼脂糖凝胶电泳。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 用去离子水稀释碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液(10×)至1×。
2、 用1×碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液制备用于碱性琼脂糖凝胶。
3、 加样品于琼脂糖加样孔，电泳。
注意事项：
1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12个月有效。
相关：
编号 名称 NA0070 Storage 碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液(10×) 500ml RT 使用说明书 1份 编号 名称
DH0006 苏木素伊红(HE)染色液
NA0030 Tris-乙酸电泳缓冲液(50×TAE)
NH0043 SSC 缓冲液(20×,pH7.0)
NR0040 RNase A(10mg/ml)
OR0001 pH 标准缓冲溶液(pH=4.00)
PW0040 Western blot 一抗稀释液
TC1243 甘油三脂(TG)检测试剂盒(GPO-PAP 单试剂比色法)。
蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法
蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法30%（W/V）Acrylamide 40%（W/V）Acrylamide 10%（W/V）过硫酸铵■组份浓度 30%（W/V）Acrylamide■配制量 1 L■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
Acrylamide 290 gBIS 10 g2. 向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至1 L，用0.45 μm滤器滤去杂质。
4. 于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙烯酰胺具有神经毒性，可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套。
聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。
■组份浓度 40%（W/V）Acrylamide■配制量 1 L■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
Acrylamide 380 gBIS 20 g2. 向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至1 L，用0.45 μm滤器滤去杂质。
4. 于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙烯酰胺具有神经毒性，可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套。
聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。
■组份浓度 10%（W/V）过硫酸铵■配制量 10 ml■配制方法 1. 称取1 g过硫酸铵。
2. 加入10 ml的去离子水后搅拌溶解。
3. 贮存于4℃。
注意：10%过硫酸铵溶液在4℃保存时可使用2周左右，超过期限会失去催化作用。
5×Tris-Glycine Buffer (SDS-PAGE电泳缓冲液)5×SDS-PAGE Loading Buffer考马斯亮蓝R-250染色液■组份浓度 0.125 M Tris，1.25 M Glycine，0.5%（W/V）SDS■配制量 1 L■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
Tris 15.1 gGlycine 94 gSDS 5.0 g2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解。
SDS-PAGE电泳试剂配制
SDS-PAGE电泳试剂配制SDSPAGE 电泳试剂配制SDSPAGE 电泳（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离和分析技术。
在进行 SDSPAGE 电泳实验时，准确配制各种试剂是获得可靠实验结果的关键。
下面，让我们详细了解一下SDSPAGE 电泳试剂的配制方法。
首先，我们来看看分离胶缓冲液的配制。
分离胶缓冲液一般是 15M TrisHCl（pH 88）。
要配制 100ml 的这种缓冲液，我们需要称取 1817g Tris 碱，加入约 80ml 去离子水，用浓盐酸调节 pH 值至 88。
这一步需要耐心和细心，因为 pH 值的准确性对电泳结果影响很大。
调节好 pH 后，将溶液定容至 100ml。
接下来是浓缩胶缓冲液，通常是 10M TrisHCl（pH 68）。
同样配制100ml，称取 1211g Tris 碱，加入约 80ml 去离子水，用浓盐酸调 pH 至68，最后定容至 100ml。
然后是 30%丙烯酰胺溶液。
这是 SDSPAGE 电泳中非常重要的试剂。
配制 100ml 该溶液，需要称取 29g 丙烯酰胺和1g N,N’亚甲双丙烯酰胺，用去离子水溶解后定容至 100ml。
丙烯酰胺是有毒物质，在配制和使用过程中要特别小心，避免接触皮肤和吸入粉末。
SDS 溶液的配制也不容忽视。
一般是 10%（w/v）的 SDS 溶液。
称取 10g SDS，加入适量去离子水搅拌溶解，然后定容至 100ml。
还有 10%过硫酸铵溶液。
称取 1g 过硫酸铵，加入 10ml 去离子水，现配现用。
过硫酸铵溶液容易失效，所以每次使用前都要新鲜配制。
TEMED（四甲基乙二胺）在凝胶聚合过程中起到催化作用。
由于它挥发性强，使用时要注意迅速加入。
电泳缓冲液也是必不可少的。
一般使用的是 Tris甘氨酸缓冲液。
配制 1L 缓冲液，需要称取 303g Tris 碱、1877g 甘氨酸和 1g SDS，用去离子水溶解后定容至 1L。
SCGE碱性电泳试剂配制
SCGE碱性电泳试剂配制
无钙、镁磷酸缓冲液PBS：NaCl 8.0g，KH2PO4 0.2g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，双蒸H2O 800ml 置于干净的1L 烧杯中，搅拌至完全溶解，再用双蒸H2O 定容至1L，滴加1M的HCl调pH至7.4。
低熔点琼脂糖（37℃，0.6%）用PBS配制：0.06gLMA溶于10ml PBS（pH7.4）中，加热至沸腾。
正常熔点琼脂糖（60℃，1%）用PBS配制：0.1gNMA溶于10ml PBS（pH7.4）中，加热至沸腾。
电泳缓冲液（临用时配制）：
碱性：EDTANa2 0.372g，NaOH 12g，蒸馏水800ml置于干净的1L烧杯中，搅拌至完全溶解，再用蒸馏水定容至1L，滴加10M的NaOH 调节pH至13，置于4℃冰箱。
裂解液储备液：NaCl 146.1g，EDTANa2 37.6g，Tris 1.2g，十二烷基肌氨酸钠10g，NaOH 20g，蒸馏水800ml置于干净的1L烧杯中，充分搅拌均匀后，再用蒸馏水定容至1L，用1M HCl调节pH至10，室温保存。
裂解液应用液（临时时配制）：取180ml储备液，加入20ml DMSO和2ml Triton X-100,充分均匀，冷藏60min使用
中和液：Tris 24.22g，蒸馏水300ml置于干净的1L烧杯中，然后加入浓HCl约13.5ml，充分搅拌均匀后，再用蒸馏水定容至500ml，调pH至7.4
染色液：EB 20μg/ml。
SDS-PAGE电泳试剂配制
SDS-PAGE电泳试剂配制SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离技术，可以将蛋白质按照其分子量大小分离出来。
在这个过程中，需要使用一系列试剂来形成凝胶、还原并变性蛋白质样品、以及进行电泳。
下面我们将介绍SDS-PAGE电泳试剂的配制方法。
聚丙烯酰胺凝胶电泳胶液配制1. 蒸馏水将蒸馏水取2L，通过0.22μm的滤膜过滤3遍来除杂质，备用。
2. 均聚化溶液将40%（w/v）丙烯酰胺10mL，在干燥器中烘干2小时，然后加入蒸馏水固定容积至50mL。
将10%（w/v）N, N’-二甲基亚硫脲5mL加入均聚化溶液中，搅拌30分钟至完全溶解。
3. 凝胶制备将均聚化溶液加入10%（w/v）的三甲基丙烯酰氨基甲基纤维素，搅拌5分钟后加入0.1%TEMED等待至少1小时凝胶化。
4. 等电聚焦凝胶制备将均聚化溶液加入3.33%（w/v）等电聚焦剂，根据需要调节pH值，搅拌5分钟后加入氨基甲酸1mL，搅拌2分钟至完全溶解。
加入TEMED及APS，混合倒入制好的除尘洞中，并插入梳子。
至少1小时后移除梳子，使凝胶完全凝固。
蛋白样品处理试剂配制1. SDS缓冲液将10%SDS 1.25mL加入pH6.8的磷酸盐缓冲液（1M），加入蒸馏水固定容积至100mL，搅拌10分钟至SDS完全溶解，备用。
2. β-巯基乙醇将β-巯基乙醇400μL加入1mL磷酸盐缓冲液（1M），备用。
3. 样品缓冲液将10%SDS 100μL，β-巯基乙醇50μL加入磷酸盐缓冲液1mL中，加入蒸馏水固定容积至10mL，轻轻搅拌即可。
4. 热变性载入缓冲液将4倍浓度的样品缓冲液加入β-巯基乙醇，于100℃水浴中加热5分钟。
冷却至室温，即可使用。
电泳相关试剂配制1. 电泳缓冲液将磷酸盐缓冲液1L加入SDS 10g进行混合后，加入蒸馏水将其固定至2L，备用。
2. Anode buffer将磷酸盐缓冲液1L加入SDS 5g进行混合后，加入蒸馏水将其固定至2L，备用。
蛋白胶配方
（1）10%AP（W/V）：:过硫酸铵（AP，引发剂）0.1g，加蒸馏水至1.0mL，最好临时配制。
（2）电泳样品缓冲液：SDS 0.4g，巯基乙醇 1.0ml，甘油 2.0ml，0.5mol/L Tris-HCl (pH6.8) 2.0 ml，0.1%（W/V）溴酚蓝 0.5ml，ddH2O 2.5ml。
（3）30.8%凝胶贮存液：称Acr 30g及Bis 0.8g，溶于蒸馏水中，最后定容至100ml，过滤后置于棕色试剂瓶中，4°C贮存。
(4) 凝胶缓冲液分离胶缓冲液：1.5mol/L pH 8.8 Tris-HCl。
称取18.15gTris，用60ml重蒸水溶解，再用1mol/L的HCl调节至pH8.8，定容至100ml，4°C保存。
浓缩胶缓冲液：0.5mol/L pH6.8 Tris-HCl。
称取6g Tris，用60ml重蒸水溶解，再用1mol/L的HCl调节至pH6.8, 定容至100ml，4°C保存。
（5）10%SDS：将10g SDS溶于80ml蒸馏水中并轻缓搅拌（室温低时需水浴加入溶解）。
（6）电极缓冲液（内含0.1%SDS，0.05mol/L Tris-0.384mol/L 甘氨酸缓冲液，pH8.3）：称Tris 3.03g，甘氨酸14.41g，SDS 1g，加蒸馏水使其溶解后定容至1000ml。
(7) 固定液：取50%甲醇455ml。
冰乙酸45ml混匀。
（8）染色液：称考马斯亮蓝R250 0.125g，加上述固定液250ml，过滤后使用。
（9）脱色液：冰乙酸10ml，甲醇75ml，蒸馏水75ml。
（10）95%乙醇。
(11)配胶贮备胶(12.5%) 分离胶 (10%) 浓缩胶(4%)ddH2O 3.4ml 4.2ml 3.1mlBuffer 2.5ml 2.5ml 1.25mlAcr+Bis（30.8%）4ml 3.2ml 0.7ml10%SDS 100ul 100ul 50ulTEMED 6ul 6ul 4ulAP 100ul 100ul 50ul(12)western两种转膜液配方。
蛋白质电泳相关试剂及缓冲液
﹡组分浓度100mM Tris－HCl（pH 6.8）
4％（W/V）SDS
0.2％（W/V）溴酚基乙醇
﹡配制量5ml
﹡配制方法：
1．称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中
1MTris－HCl（pH 6.8）0.5ml
蛋白质电泳相关试剂及缓冲液
30％（W/V）丙烯酰胺溶液
﹡组分浓度30％（W/V）Acrylamide
﹡配制量100ml
﹡配制方法：
1．称取下列试剂，置于250ml烧杯中。
Acrylamide29g
BIS1g
2．向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45μm滤膜过滤除杂。
3．置于棕色瓶中4℃保存。
（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。配制时应戴手套操作）
10％（W/V）过硫酸铵
﹡组分浓度10％（W/V）过硫酸铵
﹡配制量10ml
﹡配制方法：
1．称取1g过硫酸铵。
2．加入10ml的去离子水后搅拌溶解，贮存于4℃。
（注意：10％过硫酸铵溶液在4℃保存能使用两周左右，过期会失去催化效果）
SDS0.2g
溴酚蓝10mg
甘油1ml
2．加入去离子水溶解定容至5ml。
3．小份分装，0.5ml一管，室温保存。
4．使用前将25μl的β－巯基乙醇加入混匀。
5X SDS－PAGE Loading Buffer
﹡组分浓度250mM Tris－HCl（pH 6.8）
10％（W/V）SDS
0.5％（W/V）溴酚蓝
5X Tris－Glycine Buffer
﹡组分浓度0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5％（W/V）SDS
蛋白质电泳试剂配制
1 蛋白质电泳试剂配制1）2M Tris-HCl(pH=8.8) 100ml称24.2gTris-base 加50ml ddH2O,加浓HCl至pH=8.8（约4ml），加ddH2O 定容至100ml。
2）1M Tris-HCl(pH=6.8) 100ml称12.1gTris-base 加50ml ddH2O,加浓HCl至pH=6.8（约8ml），加ddH2O 定容至100ml。
3）10%（W/V）SDS 100ml称SDS10g，加ddH2O定容至100ml。
4）50%（V/V）甘油100ml量取50ml100%甘油，加ddH2O定容至100ml。
5）4×分离胶缓冲液100ml（B液）75ml 2M Tris-HCl(pH=8.8) 1.5M4ml 10%SDS 0.4%21ml ddH2O4℃保存6）4×堆积胶缓冲液100ml（C液）50ml 1M Tris-HCl(pH=6.8) 0.5M4ml 10%SDS 0.4%46ml ddH2O4℃保存7) 丙烯酰胺储存液100ml（A液）30%（W/V）丙烯酰胺29.2g0.8% 甲叉双丙烯酰胺0.8g加ddH2O40ml缓慢搅拌至粉末完全溶解，定容至100ml，过滤，4℃保存。
8）5×样品缓冲液10ml600ul 1M Tris-HCl(pH=6.8) 60mM（5×）12mM（1×）5ml 50%甘油25% （5×）5%（1×）2ml 10%SDS 2%（5×）0.4%（1×）500ul(0.775g) 2-巯基乙醇（DTT）14.4 mM（5×） 2.88mM（1×）1ml(0.1g) 10%溴酚兰900ul ddH2O4℃保存9）10%过硫酸铵（APS）10mL称1g ddH2O溶解，400uL每管分装于-20℃保存。
10）10×电泳缓冲液Tris-base 30g 25 mM （1×）甘氨酸188g 192 mM（1×）SDS 10g 0.1% （1×）加ddH2O至1L，pH=8.3左右，室温长期保存。
SDS蛋白电泳相关试剂配方
高低分化胃癌组织的双向凝胶电泳分析Protocol ................................................................... - 2 - 1实验材料........................................................................................................................... - 2 -1.1标本采集................................................................................................................ - 2 -1.2主要试剂：............................................................................................................ - 2 -1.3主要仪器设备及软件：........................................................................................ - 3 -2实验方法........................................................................................................................... - 3 -2.1标本采集................................................................................................................ - 3 -2.2主要溶液配制........................................................................................................ - 3 -2.3蛋白质样品制备.................................................................................................... - 7 -2.4Bradford法蛋白质定量 ......................................................................................... - 8 -2.5SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 ......................................................................... - 9 -2.6等浓度混合低分化腺癌组（Pp）高分化腺癌组（Wp） ................................ - 10 -2.7双向凝胶电泳（IEF+SDS-PAGE）................................................................... - 10 -2.7.1第一向是等电聚焦电泳（isoclectric focusing，IEF）.................................. - 10 -2.7.2第二向SDS-PAGE电泳.................................................................................. - 11 -2.8图像分析.............................................................................................................. - 13 -2.9差异蛋白点的切取.............................................................................................. - 13 -高低分化胃癌组织的双向凝胶电泳分析Protocol1实验材料1.1标本采集3例人高分化胃腺癌及3例人低分化胃腺癌组织取自兰大一院胃癌手术切除标本（2009年4月-10月），并经病理检查确诊（WHO分型），所取组织没有出血和坏死。
凝胶电泳缓冲液的配制
2．测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。
混合床树脂不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。
3．常用的电泳缓冲液缓冲液使用液浓贮存液（每升）Tris-乙酸（TAE）1×：0.04mol/L Tris-乙酸50×：242g Tris碱0.001mol/L EDTA 57.1ml冰乙酸100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-磷酸（TPE）1×:0.09mol/L Tris-磷酸10×:10g Tris碱0.002mol/L EDTA 15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-硼酸（TBE）a0.5×0.045mol/L Tris-硼酸5×：54g Tris碱0.001mol/L EDTA 27.5硼酸20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 碱性缓冲液b1×:50mmol/L Na OH 1×:5ml 10mol/L NaOH1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) Tris-甘氨酸c1×:25mmol/L Tris5×:15.1g Tris250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）0.1% SDS 50ml 10% SDS(电泳级)说明：①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。
蛋白质电泳相关试剂缓冲液的配制方法
蛋白质电泳相关试剂缓冲液的配制方法一、电泳缓冲液配制1、Tris-HCl缓冲液Tris-HCl(缩写为Tris-HCl)缓冲液由于特性稳定，被广泛用于蛋白质电泳的缓冲液中。
Tris-HCl缓冲液的常用配制方法：将三氯氢氧化钠(Tris)和盐酸(HCl)用distilled water精制后，加入一定比例的Tris和HCl，按照如下的配比配制：Tris：HCl(25mM:1M)具体操作步骤如下：A、将Tris和HCl加到适量的distilled water中，并搅拌均匀，直至完全溶解为止；B、再另外精制distilled water，添加到配制好的缓冲液中，搅拌均匀；C、最后检查实验液的pH值，确保PH值为7.2～7.4，如果需要，可以适当增加Tris或HCl的比例重新配制；D、最后将Tris-HCl缓冲液装入实验容器中，待用。
2、SDS-缓冲液碳酸氢盐-尿素-树脂素电泳(Carboxyhydrate-urea-resin electrophoresis, SDS-)是一种广泛用于蛋白质定性分析的电泳方法，其所用的缓冲液主要包括Tris-glycine-SDS（TGS）和Tris-acetate-SDS （TAS）两种。
A、TGS缓冲液Tris-glycine-SDS(TGS)缓冲液是SDS-常用的缓冲液，其配制方法如下：将三氯氢氧化钠(Tris)，甘氨酸(Glycine)以及十二烷基三硫化铵(Sodium dodecyl sulfate，缩写为SDS)加入适量的distilled water 中，按照如下的比例配制：Tris：Glycine：SDS（25mM:192mM:0.1%）具体操作步骤如下：A、将Tris和Glycine加到distilled water中，并搅拌均匀。
蛋白电泳梯度胶-概述说明以及解释
蛋白电泳梯度胶-概述说明以及解释1.引言1.1 概述蛋白电泳是一种常用的实验技术，用于分离和分析蛋白质混合物。
蛋白电泳梯度胶是蛋白电泳中常用的胶体介质，它通过控制胶的成分和结构，能够提供不同浓度的梯度，从而实现对蛋白质的高效分离。
蛋白电泳梯度胶的制备方法主要包括两种，一种是梯度洗脱法，另一种是梯度聚合法。
梯度洗脱法是通过在胶中添加成分不同的溶液，在电泳过程中逐渐改变胶的成分浓度来实现梯度效应。
梯度聚合法则是通过在胶中同时聚合两种不同浓度的单体，通过混合单体的比例来得到梯度胶。
蛋白电泳梯度胶具有广泛的应用领域。
首先，在蛋白质分离中，梯度胶可以提供更高的分辨率和更好的色谱性能，从而实现更好的蛋白质分离效果。
其次，在研究蛋白质的组成和结构方面，梯度胶可以用于蛋白质的分级分离，从而得到不同分子量的蛋白质组分，方便进行后续的分析。
此外，蛋白电泳梯度胶还可以应用于蛋白质相互作用的研究，例如蛋白质的相互结合和复合物的形成等。
总之，蛋白电泳梯度胶作为一种重要的分离技术，在蛋白质研究领域具有广泛的应用前景。
本文将从蛋白电泳原理、制备方法和应用领域等方面对蛋白电泳梯度胶进行深入探讨，以期能够为相关研究提供一定的参考和启示。
1.2 文章结构文章结构是指文章中不同部分的组织和排列顺序，它是确保文章逻辑清晰、层次分明的关键要素。
本文的结构主要包括引言、正文和结论三个部分。
引言部分主要包括概述、文章结构和目的三个方面的内容。
首先，文章会对蛋白电泳梯度胶进行概述，介绍其基本概念、原理和应用领域。
然后，文章会详细说明本文的结构安排，包括各个章节的主题和内容。
最后，文章会明确说明本文的目的，即通过对蛋白电泳梯度胶的介绍和分析，探讨其在科研领域中的应用前景和发展趋势。
正文部分主要包括蛋白电泳的原理、蛋白电泳梯度胶的制备方法和蛋白电泳梯度胶的应用领域三个方面的内容。
首先，文章会详细介绍蛋白电泳的原理，包括电泳梯度胶在蛋白质分离中的作用、蛋白质电泳迁移的原理等。
电泳试剂配制
SDS-PAGE电泳试剂1) 30%储备胶溶液：丙烯酰胺（Acr）29.0g，亚甲基双丙烯酰（Bis）1.0g，混O，37O C溶解,定容至100 mL,棕色瓶存于4O C；匀后加ddH22) 1.5M Tris-HCl(pH ：Tris 18.17g加ddH2O溶解,浓盐酸调pH至,定容至100mL；3) 1M Tris-HCl(pH ：Tris 12.11g加ddH2O溶解,浓盐酸调pH至,定容至100 mL；4) 4分离胶缓冲液：溶于1.5M Tris-HCl(pH ，定容至100mL；5) 4浓缩胶缓冲液：溶于1M Tris-HCl(pH ，定容至100mL；6) 10电泳缓冲液(pH ：Tris 3.029g，甘氨酸14.415g，SDS 1g加ddH2O溶解,定容至100mL；7) 10%过硫酸铵（Aps,现配）：1g AP加ddH2O至10mL；8) 2SDS电泳上样缓冲液：1M Tris-HCl(pH ，-巯基乙醇，SDS 0.6g，甘油 mL，%O ；溴酚兰 mL，ddH29) 考马斯亮兰染色液：考马斯亮兰R2501.25g，甲醇225 mL，冰醋酸50 mL，ddH2O 225mL；10) 脱色液: 甲醇、冰醋酸、ddH2O以2∶1∶7配制而成；11) 分离胶%): ddH2O 4mL，30%储备胶5 mL， 4分离胶缓冲液3mL, 10% Aps (现配)，TEMED(N,N,N’,N’-四甲基乙二胺)10μL；12) 浓缩胶（5％）：ddH2O ，30%储备胶，4浓缩胶缓冲液， 10%Aps 50μL，TEMED 5μL。
Tricine（三羟甲基氨基甘氨酸）- SDS - PAGE蛋白质电泳1 Tricine - SDS - PAGE蛋白质电泳溶液准备1）正极缓冲液(10 ×)：14g Tris 溶于400mL 重蒸水,用1. 0M HCl 调至pH8. 9 ,定容至500mL。
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碱性蛋白质活性胶的配置
Shmily2012逍遥居士
各种蛋白质分子由于所含的碱性氨基酸和酸性氨基酸的数目不同，因而有各自的等电点。
凡碱性氨基酸含量较多的蛋白质，等电点就偏碱性，如组蛋白、精蛋白等。
反之，凡酸性氨基酸含量较多的蛋白质，等电点就偏酸性，人体体液中许多蛋白质的等电点在pH5.0左右，所以在体液中以负离子形式存在。
从某种意义上来讲，碱性蛋白质也就是其等电点大于7.0，在碱性范围内。
所以，碱性蛋白质活性胶电泳，我们应该用酸性缓冲液的活性胶，因为在酸性缓冲液下，碱性蛋白质带正电荷，从电泳槽的阳极向阴极移动。
分离碱性蛋白时候，要利用低pH凝胶系统，分离酸性蛋白时候，要利用高pH凝胶系统。
酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统，蛋白会带负电荷，蛋白会相阳极移动；而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行，蛋白带正电荷，这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳。
碱性蛋白质活性胶即酸性缓冲液的活性胶---低pH的缓冲液系统。
配方如下：
β-Ala NH2CH2CH2COOH=89.09
甲基绿Methyl Green分子式：C27H35Cl4N3Zn分子量：608.78
酸性非变性电泳工作液配制：
40%胶贮液(Acr:Bis=29：1）
4×分离胶Buf(pH4.3,0.24M KOH-HAc)：1.346g KOH,以HAc调pH至4.3，Milli-Q 定容至100ml。
4×堆积胶Buf(pH6.8,0.24M KOH-HAc)：1.346g KOH,以HAc调pH至6.8，Milli-Q 定容至100ml。
5×电泳Buf（pH4.4,β-Ala-H Ac）：35.64gβ-Ala，以HAc调pH至4.4，dH2O定容至1L。
即0.4M的丙氨酸缓冲液，1×buffer的为0.08M。
2×甲基绿上样Buffer：1ml1×（pH4.4,β-Ala-HAc）电泳缓冲液，3ml甘油，1ml0.4g/L 甲基绿，5ml dH2O；-20℃贮存。
即：2×甲基绿上样buffer：1ml1×（pH4.4，β-Ala-HCl）电泳缓冲液，3ml甘油，0.4mg甲基绿，6mlH2O；-20℃保存。
10％APS
0.25％考马斯亮蓝染色液：Coomassie blue R-2502.5g，甲醇450ml，HAc100ml,dH2O
450ml
考马斯亮蓝脱色液：100ml甲醇，100冰醋酸，800ml dH2O
电泳胶的配制及电泳条件（酸性电泳注意要反转电极，即上槽电极为正，下槽电极为负）：
酸性非变性胶17%分离胶(10ml)4%堆积胶(5ml)
40%胶贮液(40%T,3.3%C） 4.25ml0.5ml
4×分离胶Buf(pH4.3,0.24M KOH-HAc) 2.5ml
4×堆积胶Buf(pH6.8,0.24M KOH-HAc) 1.25ml
水 3.15ml 3.15ml
10％APS75ul75ul
TEMED25ul25ul
5×电泳Buf（pH4.4,β-Ala-HAc）200ml稀释到1L
各缓冲液的终浓度：
分离胶：0.06M KOH，0.376M Ac，pH4.3（7.7%T，2.67%C）；
堆积胶：0.06M KOH，0.063M Ac，pH6.8（3.125%T，2.5%C）；
电泳缓冲液：0.14M2-丙氨酸，0.35M Ac，pH4.5？浓度可能影响不大。
将正负电极倒置，用甲基绿（0.002%）为示踪剂
电泳条件：反转电极，100V恒压约15min，指示剂进入浓缩胶；改换160V恒压，当指示剂移动到胶板底部时，停止电泳，整个过程约60min。
染色和脱色：取出胶板于0.25％考马斯亮蓝染色液中染色约30min，倾出染色液，加入考马斯亮蓝脱色液，缓慢摇动，注意更换脱色液，直至胶板干净清晰背景。