定义从受精到植入子宫内膜的整个过程中,一个或几个环节
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(二)卵子捐赠
为无卵巢或卵巢不能产生有受孕 能力的卵子的妇女提供妊娠机会。 程序:从供者卵巢获得卵子,受者丈 夫提供精子,体外受精,产生胚胎, 在移植到受者子宫。
(三)胚胎赠送(Donation of embryos)
这些胚胎移植到受者的子宫后, 出生的孩子与受者夫妇无任何生物 遗传学关系,相当于胚胎时期过继。 冷冻胚胎赠送的成功率明显低于新 鲜胚胎。
7、影响人工授精成功率的因素
1)冷冻储存的精子必须具备良好的冷冻生存率。 2)需连续4天人工授精,-1,0 ,+1, +2 , 1ml/天。 3)选择人工授精最佳时间。 4)进行人工授精的妇女小于40岁(最好小于35岁) 5)居住地的远近。 6)精神状态。 7)对流产的影响。(15~23%)
8、未来人类精子库能提供的服务
定义:
从受精到植入子宫内膜的整个过 程中,一个或几个环节经过人为 方法,产生新一代的生殖技术。 现阶段主要包括人工授精和体外 发生—胚胎移植。
一、人工授精
1、定义:是指搜集丈夫或自愿献精者的精液,
由 医务工作者注入女性生殖管道达到受孕目 的的一种技术。
2、发展史:1890年美国Dulemson R L首先应
(二)发展史:1890年,Walter Heape 在外科 医生Samual buckley 帮助下,把安哥拉白毛雌 兔的两个4-卵裂球胚胎移植到另一种有色短毛 兔(已与同种雄兔交尾)的子宫内,子代6只幼 兔中有2只是白色长毛兔,1947年M.C.Chang将 兔受精卵保存在50C-100C水平,一周,移植后 均生出正常幼兔。1954年M.C.Chang取加州白 兔的2-卵裂球胚,盛于-100C下玻管血清里,装 在真空烧瓶内,航寄到伦敦剑桥农学院,80小 时后移植到黑兔子宫内,生出加州白兔。1959 年兔受卵体外受精-胚胎移植获得成功。
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(三)人类体外授精的流程: 1、预测排卵(自然月经周期)BBT、宫颈粘液 检查、B超监测、激素测定(排卵试纸)。 2、诱导排卵 (1)CC&hMG方案 (2)LHRH-a&FSH 应预防OHSS 3、取卵(1)腹腔镜(2)B超导向 4、卵母细胞体外孵育。 5、体外授精。
6、受精标准监测(PN)。
3)临界温度范围(致死温度范围): 从 -50C~-300C,尤其是-50C~-150C,精子常 被杀死,精液由液相 固体相 ,伴冰晶 形成及由此产生的急剧温度变化,造成精子死 亡。添加冷冻保护剂后,以5~70C/mm的冷冻 速度通过此阶段。 4)温度波动: 在温度低于临界范围时,由于冰晶的生长和 相互作用,产生温度变化,称迁移性再结冰, 从-300C~-1960C,用 20C/mm速度通过此阶段。
3、基本原理
在一定的低温条件下,以足够 的时间作用于生物组织细胞,引 起细胞的降温、凝固,非损伤性 结冰,使生物细胞内分子运动减 慢、停止,使细胞代谢降低处于 休眠状态,从而达到储存细胞的 目的。
4、影响人类精液冷冻储存的因素
1)温度休克: 指细胞不是由于直接的冷却作用,而是由于温 度急剧变化造成的损害,人精子对冷冻休克有很 强的抵抗能力,在冷冻过程中,可以10C/mm的 降温速度通过温度休克阶段。 2)结冰时的热效应: 在通过+50C~-50C阶段时,由于精浆形成冰晶 而释放热量,温度会突然升高,应快速通过此阶 段。
(2)形态学评估:一级 卵裂球等大,均质透明,无碎片。 二级 卵裂球不等大,均质,无碎片。 三级 卵裂球等大,均质,有少许碎片。
二级 卵裂球不等大,均质,无碎片。 三级 卵裂球等大,均质,有少许碎片。
四级 卵裂球不等大,变黑,颗粒不均。
一~三级适用于移植。
(五)人胚移植Embryo transfer
5、储存和应用方式
1)最早的冷冻方法是用干冰作制冷剂和储存剂 近几年都用液氮蒸气作制冷剂和储存剂。 2)解冻速度快速复温1000C/mm,取出直接370C 水中即可。 3)冷冻保护剂 为减轻冷冻和复温过程中的损伤, 获得理想的冷冻生存率,必须在溶液中添加具 有保护作用的物质,即冷冻保护剂,需具备2个 基本条件①对冷冻的细胞无毒性,②具有高水 溶性。其保护作用主要是减少冰晶的形成,同 时稀释了细胞外液溶质的浓度。分两类:
(四)人胚体外发生
1、胚前期发育: 在体外,经相差显微镜检 查,证明已受精的卵子,转移到卵裂培养基 (生长培养基,GM)中,受精卵进行卵裂, 先后发育成桑椹胚和胚泡,此期称胚前期。 2、胚胎质量形态学评估: (1)卵裂速度和时间关系:在生长基中 培养 24小时后,39~42h,16.7%2-细胞期, 55.6%3~4-细胞期,27.%6~8-细胞期。
1)人类精子的冷冻储存——生殖保险服务。 2)建立亚洲最大的精子库,向所有需方销售服务。 3)AID服务。 4)为AID夫妇所生子女提供优生、遗传咨询服务。 5)夫精或供精的IUI服务。 6)弱精、畸精和不明原因不育精子的体外处理 。 7)不育精液的系统检查。 8)不孕不育夫妇的内分泌学检查服务。 9)不孕不育夫妇的微生物学的检查服务。 10)男性不育症的中西药物的治疗服务。 11)X、Y精子分离服务。
6.IUI:宫腔内人工授精—宫颈原因不孕症,精 子活力低,免疫性不孕症,原因不明性不孕症, 丈夫精子不能到达子宫腔内者. 7.人工授精并发症: ①出血。 ②腹痛。 ③感染。 ④休克。 ⑤多胎。 ⑥卵巢过激综合症。⑦卵巢肿瘤。 ⑧先兆子痫。
二、冷冻精子库
1.发展史 1776年Spallanzani 在00C以下对 精子生存的影响进行了研究, 1866年Montezazza 提出建立精子 库,1938年Jahnel在-790C 40天复 温后发现精子可存活,当时用甘 油作保护剂。1981年湖南医科大 学卢广琇建立了精子库,并制定 了一套适合我国国情AID方法和 制度,现在全国共有20多个精子 库,每年数千AID出生的婴儿。
4、适应症: ①AIH:丈夫或妻子生殖器及性功能异常不 能正常性生活者 ;或丈夫精液精子少, 收集后浓缩以提高授精能力。 ②AID:丈夫无精子,或患显性染色体病, 或夫妻双方含同一常染色体隐性杂合病, 男方Rh+,女方Rh –。
5.授精方式: ①由导管直接注入宫颈周围。 ②将导管插入宫颈管。 ③宫颈盖上塑料帽,将精液注入,留置24h。
用,上个世纪三十年代剧增,据统计现阶段 美国30,000/年人工授精的婴儿诞生。我国 1983年湖南医科大学冷冻精液人工受精成功。
3、方式:
(1)AIH: Artificial insemination husband.
(2) AID: Artificial insemination donor.
1978年7月25日才诞生了第一个试管婴儿 (Louise Brown),这是Edwards&Steptoe的杰作。 有力地促进了这门科学的发展。1981年这项研究 迅速扩展到英国、澳大利亚、美国、法国、德国、 瑞典、奥地利、瑞士、丹麦加拿大等。1983年中 国台湾报道了一例试管婴儿,1988年3月北京医 科大学诞生了试管婴儿,同年6月,湖南医科大 学诞生了供胚胎移植的试管婴儿,90年代,试管 婴儿在中国蓬勃发展/现已达国际水平。到目前 为止,我国除了人类体外受精-胚胎移植外,还 有配子输卵管移植,合子输卵管移植,输卵管胚 胎移植,冷冻胚胎移植,卵子和胚胎赠送,显微 授精,胚胎植入前遗传学诊断等。
据统计,美国已有100家冷冻 精子库,在法国还建立了国家精 子库研究中心。 我国湖南医科大学于1988年 被卫生部授予国家精子库技术指 导中心,现在建立了精子库数据 库计算机管理系统,对精子库实 行了计算机现代化管理,AID和 AIH已成为治疗不育症的有效方法 之一。
2、建立精子库的目的
1)提供“生殖保险”促进计划生育,冷冻 条件下,精液可储存5年、10年或更长时 间而保持受精能力。 2)为人类优生开辟新的途径。 3)给不育症家庭带来福音。 4)开展生殖生理学和低温生物学研究。
用第三者提供的精子、卵子、 胚胎或子宫以保证不育的个人或 夫妇成为父母。供者可以是已知 的,也可以是匿名的。最有争议 的,最容易引起纠纷的生殖方式 是代理妊娠。
(一)代理妊娠(Surrogate geotators)
1、第一种代理:妊娠代理者接受的胚胎来自于 另一对不孕夫妇,与孩子无任何亲缘和血统关 系。 2、第二种代理:也称传统的代孕。妻子无排卵 能力,代孕者用不孕夫妇男性的精子进行人工 授精出生的孩子归这对夫妇,必须办理适当的 法律手续,正式收养孩子。美国有关法律:按 照“出售身体的法律”,签订合同代孕者可获 得一定的报酬。
1、移植时机: (1)胚龄 2-细胞期到胚泡均可,现阶段2-8细胞期。 (2)子宫内膜处于分泌期(可用药物调节)。 2、移植过程:胚胎在微滴培养基中,经导管输入 宫底附近。 3、移植后监测:
①测血中 β –hCG :是判断胚胎优劣和发育好坏的有效指标。 ②测17 β-雌二醇也是一个良好的指标。
四、第三者参与的生殖
三、体外发生与胚胎移植
(一)定义 1、体外发生: (Ectogenesis)用人工的方法,让精 子和卵子在体外受精和发育,这种生殖方法称体 外发生。 2、试管婴儿:(In vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET)精子卵子体外受精并进行早,期胚胎发 育,到胚泡期,再移植到子宫内,发育到出生, 称体外发生-胚胎移植,即试管婴儿。
①能渗透到细胞内的保护剂——甘 油最低浓度7-10%,能得到60-90% 冷冻后生存率(Mann,1964);二甲亚 砜对人精较差。
②不能渗透到细胞内的保护剂—— 蔗糖、卵黄,还须加青霉素、链霉 素。
6 、精液质量与冷冻前的放置时间
容积2-6ml,密度≥60×106ml,活动力 ﹥50%,且a级占绝大多数,精子正常状 态70%以上,①取精1小时或动力﹥50%, ②取精4小时精子活动力衰减﹤15%,③ 取精4小时直线运动程度无明显降低。
(四)非手术回收供方幼胚移植术
供者、受者经月经同步激素治疗,用受者丈 夫的精液人工授精,在供者排卵4-5天用特殊 的导管注入灌洗液冲洗宫腔并回收液体取 受精卵,然后再将胚胎移植到受者子宫, 这类胚胎赠送,精子来自父方,卵子由第三 者提供,受孕者只担当孕育和哺育的责任。
五、人类生殖工程展望
1、卵母细胞体外培养 2、胚胎分割 3、转胞浆治疗 4、胚泡期以后体外发生