免疫鸡群的新城疫抗体效价监测
鸡新城疫抗体检测实验报告(一)
鸡新城疫抗体检测实验报告(一)背景介绍•鸡新城疫是一种常见的家禽传染病，严重影响鸡类养殖业。
•抗体检测可以有效判断鸡群是否感染鸡新城疫。
实验目的•确定一种高效准确的鸡新城疫抗体检测方法。
•提供可靠的数据支持，用于预防和控制鸡新城疫的传播。
实验设计•选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。
•分为实验组和对照组，实验组注射疫苗，对照组不注射。
•定期进行血液检测，测量抗体水平。
实验步骤1.收集血样。
2.提取血清。
3.使用特定抗体试剂盒进行检测。
4.测量光密度值，判断鸡新城疫抗体水平。
5.记录实验结果。
实验结果•实验组鸡群的抗体水平明显高于对照组。
•实验组的鸡只无明显临床症状，对疫情具有稳定抵抗力。
•对照组鸡群出现多例感染病例，病死率较高。
结论与建议•鸡新城疫抗体检测方法可准确判断鸡群感染情况，为预防和控制疫情提供重要依据。
•注射疫苗可以提高鸡只的免疫力，减少感染风险。
•鼓励养殖场加强抗体检测工作，及时发现病例并采取相应措施。
致所有鸡农：鸡新城疫是一项严重威胁家禽行业的疾病。
本实验通过抗体检测方法，证明了注射疫苗可以提高鸡群的免疫能力，减少感染的风险。
希望您能严格按照抗体检测规程，提高鸡只的免疫力，保障养殖业的稳定发展。
感谢您的关注与支持！注意：本报告仅为实验结果总结，并非具体实验报告。
具体实验细节和数据可根据实际情况进行增删和修改。
实验方法•选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。
•将实验组的鸡只注射鸡新城疫疫苗。
•对照组的鸡只不注射疫苗。
•按照一定周期，定期采集血液样本。
数据分析•对实验组和对照组的血液样本进行抗体检测。
•实验组的鸡只抗体水平明显升高，且持续稳定。
•对照组的鸡只抗体水平较低，易受感染。
结果讨论•实验结果证明，注射鸡新城疫疫苗可以有效提高鸡只的免疫力。
•抗体检测是一种可靠的方法，可以快速判断鸡群的感染情况。
•实验结果也表明，饲养场的防疫管理和养殖环境对感染鸡新城疫的影响较大。
结论•鸡新城疫抗体检测方法在预防和控制鸡新城疫方面具有重要意义。
鸡新城疫抗体检测实验报告
鸡新城疫抗体检测实验报告引言本实验旨在对鸡新城疫进行抗体检测，以评估鸡群对该病毒的感染情况。
通过收集血清样本并使用特定检测方法，我们能够确定鸡群中抗体的存在与水平。
这对于制定控制措施、监测疫情以及预防疾病的传播至关重要。
实验设计1. 样本采集我们在鸡群中随机选择了100只鸡进行样本采集，确保样本的代表性。
采集的方法包括抽取少量鸡脉血或者采集鸡羽毛根部进行检测。
2. 抗体检测方法我们采用了酶联免疫吸附试验（ELISA）方法进行抗体检测。
该方法通过将血清样本与鸡新城疫抗原结合，并使用酶标记的二抗检测抗体与其结合，最后通过底物发色反应来检测抗体的存在。
3. 阳性对照与阴性对照为了验证实验结果的准确性，我们使用了阳性对照和阴性对照。
阳性对照为已知感染鸡新城疫的鸡样本，而阴性对照为未感染的鸡样本。
实验结果我们对100个样本进行了抗体检测，并将结果进行统计和分析。
以下是实验结果的详细报告：1. 鸡新城疫抗体检测结果我们将鸡新城疫抗体检测结果分为三类：•强阳性：抗体水平高于阈值的样本。
•弱阳性：抗体水平介于阈值和阴性之间的样本。
•阴性：抗体水平低于阈值的样本。
2. 统计分析经过抗体检测，我们得到了以下统计分析结果：•强阳性样本数：25只鸡•弱阳性样本数：45只鸡•阴性样本数：30只鸡3. 结果解读我们的实验结果表明，在100只鸡样本中，25只鸡的抗体水平高于阈值，可以确认为感染了鸡新城疫。
另外，45只鸡的抗体水平介于阈值和阴性之间，可能存在早期感染的迹象。
剩余的30只鸡样本抗体水平低于阈值，说明它们未感染鸡新城疫。
结论与讨论本次实验通过鸡新城疫抗体检测方法对100只鸡样本进行了检测，并得出了实验结果。
结果表明鸡新城疫在该鸡群中流行的程度较高，25%的样本具有强阳性抗体水平。
我们认为，对鸡新城疫进行抗体检测有助于早期发现感染情况，及时采取控制措施以避免疫情的进一步传播。
此外，对鸡新城疫的抗体检测也可以作为鸡群健康监测的重要指标，帮助决策者制定防控策略和掌握疫情动态。
门源县泉湾养鸡场新城疫抗体水平监测
６ ０一
中国动物检 疫 ２ １ 年 第２ ０１ ８卷第 ６期
门源县 泉湾养鸡场 新城疫 抗体水 平监 测
童海 龙
（ 青海省 门源县青石嘴兽 医站 ， 青海 门源
摘
８ ０ ０） １ ３１
要 ： 过抽取 鸡血清作血凝 （ Ａ 实验来进行新城疫检疫 ， 通 Ｈ ） 作血凝抑制 （ Ｉ实验进行 抗体 水平的监 测， 以 了解养鸡场 的 Ｈ） 可
出现 。
被 引格 式 ：
童海 龙． 门源县泉 湾养鸡场 新城疫 抗体水平 监测 ［ ． Ｊ 中国动物 ］ 检疫 ，０ １２ （） ６ ．１ ２ １ ， ８６ ：０６ ．
４ 根据 试验 结果 对该 鸡场 新城 疫 防治 的建 议 ４ １ 由试验 结果可 知新城疫抗ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 效价 ５ｏ２的仅 为 ． １ｇ
的 鸡 只死 亡 的情 况 出现 ， 过 病 理表 现 及 （ ） 验 通 ＨＡ 实 检 疫 ， 发病 鸡 为 新城 疫 感 染 ， 虑 到 该场 已作 过 新 所 考
单 位 的稀释 度 为 １１８ 将 １ ： ， ２ ｍＬ抗 原 加 入 １７ｍＬ生 ２
理 盐水 ， 即为 ４单位 抗 原【 ３ ］ 。 ２ ４ 配制 １ ． ％的红细 胞 悬浮 液
中国动物检 疫 ２ １ 年第２ ０１ ８卷第 ６期
一６ １一
细胞应 该 明显 呈纽 扣状 。 定 血凝 滴度 ： 判 将板 倾斜 ， 观
分 依赖 疫 苗接 种 。今 年 来 的研 究 表 明 ， 要 Ｎ 只 ＤＶ 强
察红细胞有无蹭泪珠状流淌 ， 完全血凝 的最高稀释倍
数 代表 一个 血凝 单位 。 ２５ ２ 血凝 抑制 试验 （ ） ．． ＨＩ 微 量 反 应 板 每 孔 加 入 ０００ｍＬ 理 盐 水 。第 １ ． 生 ５ 孔 加入 ００ ０ｍＬ 品血 清 。将 血清 做 ００ ０ｍＬ 积 ．１ 样 ．１ 体 作倍 比稀 释 。倍 比稀 释至 最后 １ ， 出 ０００ｍＬ 孔 吸 ．１ 液 体弃 去 。弃去 之后 ， 每孔 加 入含 有 ４个单 位 的病 毒 抗
鸡新城疫免疫抗体水平评价试验
入） 。振荡 混匀 ， 在室 温 ２ ０ ～ ２ ５ 。 【 ＝ 下静 置 ４ ０分钟 后 ， 观
②疫苗 重组新城疫灭活疫苗。 ③ 试剂 新 城疫 血凝 抑制 试 验抗 原 ，新 城疫 血
凝 抑 制试 验 阳性血 清 ， １ ％鸡 红 细胞悬 液 ， 阿 氏液 ， ｐ Ｈ
察结 果 。 如果 环境 温度太 低或 者太 高 ， 可置 ２ ５ ℃温箱
数 作 为终点 ，终 点稀 释倍 数 除 以 ４即为 含 ４ Ｈ Ａ Ｕ抗 原稀释 倍数 。所 以 ， ４ Ｈ Ａ Ｕ抗 原稀释倍 数 为 １ ： ６ ４ 。
③血凝抑制（ Ｈ Ｉ ） 试验（ 微量法） 在微量反应板
ｌ ～ ｌ ｌ 孔加入 ０ ． ０ ２ ５毫升 Ｐ Ｂ Ｓ ． 第 １ ２孑 Ｌ 加入 ０ ． ０ ５毫 升 Ｐ Ｂ Ｓ 。 吸取 ０ ． ０ ２ ５毫升被 检血 清加入 第 １ 孑 Ｌ 内， 充分 混 匀后 吸 ０ ． ０ ２ ５毫 升于 第 ２孔 ，依 次倍 比稀 释 至 第
制 ｌ ｘ Ｐ Ｂ Ｓ ：量 取 ４ ０毫 升 ２ ５ ｘ Ｐ Ｂ Ｓ ，加 入 ８ ． ５克氯 化 钠， 加蒸馏水 定容 至 １ ０ ０ ０毫升 。
３ ． 试 验 方 法
性、 败血 性传 染病 。 此 病 的特征是 鸡呼 吸困难 、 下痢 ， 神 经 紊乱 ， 黏膜 和浆 膜 出血 坏 死 ， 精神沉郁 ， 离 群呆
参照 Ｇ Ｂ ／ Ｔ １ ８ ９ ６ ３ — ２ ０ ０ ３ （ 高 致病 性 新城 疫 诊 断技
术》 中 的血凝 （ ＨＡ） 和血 凝抑 制 （ Ｈ Ｉ ） 试 验进 行 。
４ ． 血凝 试验 （ ＨＡ） （ 微 量 法） 测 定
死。 嗉囔 内有 充满 臭味 的稀 薄液 体和 气体 ， 腺 胃黏膜
4.某种鸡场要对鸡群进行新城疫抗体检测,试设计工作方案。
4.某种鸡场要对鸡群进行新城疫抗体检测,试设计工
作方案。
工作方案设计如下：
1.确定样本数量：确定需要检测的鸡群数量，根据鸡场规模和流行病风险评估确定合适的样本数量，以保证检测结果的准确性和代表性。
2.采集样本：按照规定的采样方法和采样器具，对每个样本进行采集。
通常采用血清样本作为检测的基础，可以通过静脉采血或表面皮下注射后采集血清样本。
3.留样处理：对采集到的样本进行编号和记录，并放入标有编号的小瓶中，确保样本的唯一性和追溯性。
4.检测方法选择：根据鸡场的条件和要求，选择适合的新城疫抗体检测方法。
目前常用的检测方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)和补体结合试验等。
5.检测操作：按照所选择的检测方法进行样本检测。
包括试剂的配置、标本的加入、反应的进行、结果的判读和记录等。
6.结果分析和统计：根据检测结果，进行数据的整理和分析，计算出鸡群的阳性率、阴性率和抗体平均滴度等指标。
7.结果报告和解读：编制检测报告，包括每个样本的编号、检测结果和阳性率等信息，并根据结果进行解读，提供鸡群的新城疫抗体情况评估。
8.结果应用：根据检测结果，制定合理的疫情防控措施。
如对阳性样本进行隔离或灭杀，对阴性样本进行免疫等。
9.质量控制：在检测过程中，进行质量控制，包括引入阳性对照和阴性对照，确保检测结果的准确性和可靠性。
10.记录和档案管理：对整个检测过程进行记录和归档，包括样本编号、样本采集时间、检测方法、检测结果等信息，以备后续查阅和追溯。
以上是对某种鸡场进行新城疫抗体检测的工作方案设计。
具体执行时，还需要根据实际情况进行调整和补充。
鸡新城疫免疫效果监测报告
调 查 ．结 果 有 ５ ０ 饲 养 的 ５０ ０只鸡 ３户 ０
看 出２ 羊 的 棘 球 蚴 感 染 率 最 高 ． 次 岁 其 是 １ 羊 和 ５ 羊 的 棘 球 蚴 感 染 率 相 岁 岁
等
４ 讨 论
１１１ 被 检 血 清 ： 全 县 各 乡 （ ） ．． 对 镇 ， 自然 村 、散 养 户 和 交 易 市 场 的 家 禽 按
率 ５０ 、 岁 羊 感 染 率 １ ％ 。这 里 可 以 ．％ ５ ０
法 进行 免疫 抗 体 监测 ． 果 见 表 ｌ 结
２ ２ 临 床 流 行 病 学 调 查 ． 对 ９ 乡 镇 、６ 个 自然 村 、 ９ 个 １４ ２９ ２ 个 散 养 户 饲 养 的 ６ ５ ０ 鸡 群 进 行 了 ０ 羽
鸡新城疫免疫效果监测报告
陆梅仙１ 龙 王 上 施 寿 旺 陈 简洁
岁 羊６ 只 、岁 羊 ６ 只 等 ．于 屠 宰 后 检 ０ ５ ０
查 脏 器 ， 录 肝 脏 ， 脏 上 的包 囊 ， 记 肺 分 析 阳 性 和 阴 性 羊 和 牛
３ 结 果
（． 南省 绿春 县 平 河畜 牧 兽 医站， 南 绿 春 １ 云 云
鸡 新 城 疫 是 由 新 城 疫 病 毒 引 起 鸡
进 行 全 面 系 统 调 查 。包 括 ： 存 笼 数 、 禽
３１ 和 静 县 牛 棘 球 蚴 寄 生 状 况 及 年 ．
龄分布 ． 由表 １ 出 在 全 县 牛 羊 屠 宰 场 得 屠 宰 牛 随 机 抽 样 检 查 １ ５ （ ４１ ５ ， ０ 头 ２ ／０ ） 其 中感 染 牛２ 头 ． 岁 以 下 羊 棘 球 蚴 感 ４ ２
鸡新城疫油乳剂苗免疫后抗体效价检测
５ ． ６ ５ ． ０
５ ． ２ ／ ４ ． ６ ／
批号相 同的Ｎ Ｄ的 Ｉ Ｖ系 活 苗 和 Ｎ Ｄ 油 苗 ，由 本 单 位 药 械 站 提 供。
３ 讨论与小结
对照 组 用Ｉ Ｖ 系 免 疫后 ，Ｈ Ｉ 抗体 上 升 较小 ，１ Ｏ 天 高 峰 时 ，蛋雏 １ ． ３ 接种方法 鸡为５ ． ０ ，肉雏鸡仅为４ ． ６ ，随后迅速下降，肉雏鸡在２ ０ 天 ，蛋雏鸡 在 雏 鸡７—１ ０ 日龄 时 ，用 Ｉ Ｖ 系 活苗 １ ０ 倍 稀 释液 滴 鼻 和点 眼 各 １ 在３ ０ 天左 右 ，ＨＩ 已 降至 ４ ，此 时 需 进 行二 次 免 疫 。这 不 仅 说 明单
中国畜牧兽 医文摘
２ ０ １ ５ 年
３ １ 卷
第３ 期
疫 病 防 控
鸡新城疫油乳剂苗免疫后抗体效价检测
毕志鹃’ 黄增珍’ 马艳辉 陈明生 ’ 尹 崇山
（ １ ． 山东省诸城市 畜牧兽 医管理局， 山东诸城
２ ． 山东省诸城信得药业有 限公司，山东诸城
２ ６ ２ ２ ０ ０ ；
１ ． ２ 疫 苗
品种
只数
０
１ ０ ２ ０ ３ ０ ５ ０
７ ０
９ ０ １ Βιβλιοθήκη ０ １ ５ ０ 伊莎
罗曼 对照
８ ０ ０ ５ ． ３ ５ ． ７ ８ ． ５ ７ ． ９ ７ ． ２ ６ ． ５ ５ ． ８
１ ３ ０ ０ ４ ． ５ ５ ． ２ ７ ． ７ ７ ． ８ ６ ． ９ ６ ． ２ ５ ． ４ １ ０ ０ ４ ． ５ ５ ． Ｏ ４ ． ６ ４ ． ２ ３ ． ２ ／ ／
２ ６ ２ ２ ０ ０ ）
鸡新 城疫 一直 是鸡 的主要传染病 。 目前 ，用Ｉ Ｖ系、Ｉ 系弱毒 降 为 ５ ． ２ ～５ ． ６ ，平 均 ５ ． ４ ． 降 至５ 的时 间为 １ ２ ０—１ ５ ０ ｄ 。对 照组 １ ０ ｄ 达 活疫 苗来 预 防Ｎ Ｄ 的 免疫 程序 ，虽 能达 到一 定 的效 果 ，但 也存 在 接 高 峰 ，为５ ． ０ ，２ ０ ｄ 为４ ． ６ ，３ ０ ｄ 降 至４ ． ２ 。 种 次 数多 、安 全 性差 、不 能控 制非 典 型Ｎ Ｄ 发 生等 缺点 。国外 一些 表１肉雏鸡免疫后不同天数的…抗体值
肉仔鸡新城疫疫苗免疫效果观察
ＨＩ 体 效 价 抗
Ｈ Ｉａ ｔｂ ｄ ｉ ｒ ｎ ｉ ｏ ｙ ｔｔ ｅ Ｃ ｌ ｎ － ０ ｓ ｒ ｉ ｏ ｅ ３ ｔ ａｎ
Ｌ ｏａ ａＳ ｔ株测得 的血 清 抗 体效 价 的差 异 程 度 也 不大 。
城 疫 标 准 株 测 得 的 值 低 ３个 ～ ４ 滴 度 ， 明 新 城 疫 个 说
或全 闭似 昏睡 状 态 ， 尔 有 尖 叫声 。３ 偶 ０日龄 以后 死 但 是用 分 离株 测时 ， 清抗体 水 平效 价 较 低 ， 血 比用 新 仰 呈 观星状 态 ， 叫声 和呜 叫声 增 多 ， 多 数 鸡 有 咳 流 行 毒 株 与 标 准 毒 株 的 抗 原 性 方 面 存 在 一 定 的 差 尖 大
自然分离 血清 ， 然后 将 血清 冻存 于 冰箱 ， 备用 。
１ ２ ２ 鸡 红 细 胞 悬 液 的 制 备 按 常 规 方 法 制 ． ． ．２
２ 结 果
２ １ 血 清 抗 体 检 测 结 果 ．
鸡 群 进 行 了 ４次 免 疫 之 后 ， 血 测 其 血 清 ＨＩ抗 采
心包 积液 之 外 无 明 显 病 变 。２ ７日龄后 出现 神 经 症 的克 隆 株 ， 原 差 异 不 大 ， 以 用 Ｃ ｏ ｅ３ 抗 所 ｌｎ 一Ｏ株 和
状 ， 数 表 现 为 头 颈 向 后 仰 或 是 向 一 侧 扭 转 ， 半 闭 多 眼 亡 率 明 显 上 升 ， 经 症 状 更 为 明 显 ， 部 分 鸡 只 头 后 神 大
作 ， 用 现 配 。 ｊ现 １ ２ ２ ３ 血 凝 抑 制 试 验 （ ） 用 Ｃ ｏ ｅ３ ．． ． ＨＩ ｌｎ一 ０株 、 ａ Ｌ－
西藏林芝某鸡场鸡新城疫抗体水平检测
不 良， 肾脏苍 白肿胀 ， 腺 出血肿 胀 ， 胃、 胃交 界 胰 腺 肌 处 出血 ， 切胫 骨可 见 骨 髓 颜 色 变 淡 发 白。３只 鹅 横 的肝脏 均肿胀 出血 ， 中 １只鹅肝 脏呈 “ 其 青铜 肝” 肝 ， 脏表 面有 出血 和坏死 。
４ 实 验 室 检 验
中 图分 类 号 ：８ ８ ３ ￥ ５．３
文 献 标 识 码 ： Ｂ
文 章 编 号 ：５９６ ０ （ ０ ２０ —０ ００ ０ ２ —０ ５２ １ ） ４０ ５—２
河 南省 新乡 市某种 鹅养 殖基地 ２ １ 年 ３月 初 ， ０１ 从 宁 波引进 朗德 鹅 ２５ ０只 ， 底开始 零 星发病 ， ０ ４月 ５
月 １ 日送 检 ， 时 鹅 群 ７ ４ 此 ０日龄 。
３ 剖 检 变 化
剖检 ３只濒死 病鹅 ， 均可 见血 液稀 薄如水 ， 易 不 凝 固 。皮 下 呈 胶 样 浸 润 ， 肤 、 肉 表 现贫 血 性 苍 皮 肌 白， 有散 在 的小 出血 点 。心脏 动 脉 血 管 内血 液 充盈
孔 中 ； 时 ， 抗 原 、 性 血 清 和 稀 释 液 ３个 对 照 ， 同 设 阳 放微 量 振 荡 器 上 摇 匀 ， 匀 后 置 ３ ℃ 培 养 箱 内 ３ 混 ７ ０ ｍｉ ｎ后 ，每 孔加 入 １ 鸡 红 细 胞 ２ Ｌ。再 放 微 量 ５ 振荡器 上摇 匀 ， ３ ℃培养 箱 内约 ３ ｎ观 察 。 置 ７ ０ｍｉ １ ４ ３ 结 果判 断 ．． 免疫 后 的 ＨＩ 价 ≥ ５ｌｇ 为 阳 效 ｏ
提前 １ ～３ｄ接 种 ， 将 剂 量 加 大 ０ ５ １ 。 当用 并 ．～ 倍
入 一个 大离 心管 中进 行 ３０ ０ｒｍｉ ０ ／ ｎ离心 ５ｍｉ ， ｎ 弃 上 清液 ， 以上操作 重 复 ３至 ４次 。操作 完毕 之后 ， 以 微 量加 样枪 吸取 ５ Ｌ的红 细胞加 入 ４ ５ Ｌ生 理盐 ９ 水 中 ， 分 混匀 ， 充 即制 成 １ 红细 胞悬 浮液 。 １ ４ ２ 抗 体 效 价 的 测 定 方 法 血 凝 抑 制 试 验 ．． （ ） 微量 反应 板 的每一 孔 内加 人生理 盐水 ２ Ｌ， ＨＩ ： ５
实验一鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法
鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法1．本次实验的目的和要求掌握鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。
2．实验内容或原理某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象(HA)。
这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验(HI)。
3．需用的仪器或试剂等动物健康成鸡2-5只，被检鸡15-25只。
器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025mm微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。
药剂（1）浓缩抗原；（2）生理盐水或磷酸缓冲盐水（PBS）；（3）Alsever细胞保存液；（4）红细胞悬液；（5）待检血清4．实验步骤(1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。
(2)诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体效价有4倍以上升高，即有诊断意义。
（3）免疫机体抗体效价的测定：3.鸡新城疫（ND）的HA和HI（1）试验准备①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原，进行试验。
② 0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂)内，迅速混匀。
如当时不用，可直接采血放入红细胞保存液内(保存液2份，血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。
红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000转／分钟，离心5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。
再用离心机3000转／分钟离心5-10分钟，弃上清，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液(0.7毫升红细胞泥加99.3毫升稀释液)。
鸡新城疫病毒的红细胞凝集试验和凝集抑制试验操作方法
鸡新城疫病毒的红细胞凝集试验和凝集抑制试验操作方法摘要：NDV是引起新城疫的病原体，新城疫又叫亚洲鸡瘟。
本病具有高度的传染性，发病急，致死率高。
对养禽业发展构成了严重威胁，是世界养禽业最重要的疾病之一。
为有效地控制新城疫病毒，对21日龄的1000雏鸡注射鸡新城疫灭活苗进行免疫，并对其抗体效价进行监测。
红细胞凝集试验和凝集抑制试验是监测鸡新城疫免疫状态的一种简便，快捷，经济的血清学方法。
次试验可作为监测鸡群免疫效果，疫苗使用效果和制定合理免疫程序的依据。
关键词：鸡新城疫抗体效价监测试验为掌握病毒的红细胞凝集试验和凝集抑制试验的操作方法，对21日龄的1000只雏鸡注射了鸡新城疫灭活苗后9天，进行随机抽样检查。
作HI抗体滴度的测定，操作方法如：1.原理:NDV一个很重要的生物学特性就是能吸附于鸡，火鸡，鸭，鹅及某些哺乳动物（人，豚鼠）的红细胞表面，并引起红细胞凝集，而这种血凝现象能被NDV的抗体的抑制。
2.器材：2---5mL注射器、离心管、离心机、试管架、生理盐水、鸡新城疫疫苗弱毒Ⅳ系、1％鸡红细胞悬液。
3.操作步骤：①红细胞悬液的制作（0.7—1﹪）浓度低反应时间越长。
阿氏液：血液=1：1 肝素：血液=1：10取2mL阿氏液加2mL成年鸡血液于离心管中摇匀，放入离心机1500rPm,5min.吸取上清液及上层白细胞后加适量生理盐水混匀离心，重复三次，用生理盐水配成1﹪浓度。
②HA孔号(uL) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12生理盐水50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50}↘}↘}↘}↘}↘}↘}↘}↘}↘}↘}↘50鸡新城疫病毒50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50红细胞50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50振荡器上振荡1—2min. 18℃--22℃作用15min后观察结果。
结果# # # # # # # + ————结果表示病毒液的HA效价为27 ，HI时病毒Ag液50uL内须含4个凝集单位，测病毒Ag液作32倍稀释。
《兽医免疫学》实验课件：实验九(2)新城疫抗体水平评估—综合
二、实验内容
血清样品的采集 抗体效价的测定（HA和HI）实验
HA实验得到NDV效价，配置8U和4U病毒液 ； HI实验得到被检鸡血清的抗体效价。 据HI检测结果，分析鸡群的免疫状态
作业
完成实验报告, 据所得结果说明鸡群的免 Nhomakorabea疫状态，评价疫苗的免疫效果。
附：实验方法
（一）鸡血清分离
(1)右手持注射器，左手将家禽双翼提起，露出翼静脉的采血位 置，把覆盖血管的羽毛拔开，即可见到明显一条较粗的静脉血管； (2)用酒精棉球将采血部位消毒。采血时用左手大拇指夹住覆盖 静脉的羽毛，食指协调大拇指夹住双翼，中指、无名指和手掌轻 轻提起或轻按背部保定鸡只，待其安静方可刺针； (3)针头由翼根部向翅膀方向沿静脉平行刺入血管,见有少量回血 即可采集血液，采血完成后马上用手压迫伤口止血；
以抑制50％鸡红细胞凝集的血清稀释度作为 判定终点； 以抑制50％鸡红细胞凝集（++）的最高血 清稀释倍数作为该血清的血凝抑制价。
➢ ++++为全部血球发生凝集，呈颗粒状薄膜铺于孔底；
➢ +++约有75％血球发生凝集； ➢ ++约有50％血球发生凝集；
➢ +约有25％血球发生凝集；
➢ －不凝集，表现为血球沉于孔底，呈一致密小圆点，与对照孔相同。
结果判定
以红细胞凝集50％的稀释度作为判定终点； 以50％鸡红细胞凝集（++）的最高病毒稀释倍 数
实验二 鸡群新城疫抗体水平检测
某鸡场免疫新城疫疫苗后，免疫效果须进行评 估，请用免疫学技术检测鸡群抗体效价，据测 定结果评估免疫效果。
鸡群对NDV的免疫状态评价标准
实验五 鸡新城疫的实验室诊断及免疫效果的评价
弃50
结果观 察
++++ ++++ ++++
++++
++++ ++++
++++
+++
+
+
-
-
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位
【 结果判定 】
置于振荡器上振荡1分钟，静置后30 min开始观察结果，待 对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集， 沉于孔底，平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝 集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。
2、HI试验：病毒的红细胞凝集现象，可以被特 异性免疫血清所抑制，称HI试验。
1、鸡新城疫的血凝试验(HA)
【材料】
新城疫病毒鸡胚接种尿囊液 1份
0.6％鸡红细胞悬液
1管
生理盐水或PBS
1瓶
96孔微量血凝板
1块
微量加样器
1支
【病毒血凝试验的操作方法】
单位： L
孔号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
取鸡免疫血清或者取高免卵黄抗体。
【病毒血凝抑制试验的操作方法】
单位： L
弃50
以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI效价。
【结果判定】
以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清 最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI 效价。凡被已知新城疫阳性血清抑制血凝者， 该病毒为新城疫病毒。
鸡场抗体监测与报告结果解读
45鸡场抗体监测与报告结果解读冯现明（林州市动物疫病预防控制中心456550）生产安全是养鸡场的首要生产目标，只有生产安全，才可能有养殖效益。
在做好鸡场生物安全的同时，要保证生产安全，必须提高鸡群抗病能力。
提高鸡群抵抗力最重要的途径就是做好免疫工作，而免疫效果的好坏，不能从鸡群表面分辨出来，实验室检测就成了考核群体抵抗力的唯一客观评价标准。
因此，鸡场疫情监测作为评价生产安全的一个客观标准，在养鸡生产中的作用尤为突出。
1抗体监测抗体监测是客观评价鸡群免疫抗体水平，了解鸡群抗病能力的一种实验室技术手段，也是对鸡群抗病力的客观评价标准。
1.1疫情监测的目的1.1.1制定合理免疫程序在蛋鸡产蛋期内，尤其是产蛋高峰期内，为减少免疫应激，要尽量减少免疫次数，又要保持坚强的免疫力，就需要准确把握免疫时间，要知道精确的免疫窗口期就要进行抗体检测；根据抗体水平和抗体值离散度情况确定接种时机，从而制定出合理的免疫程序。
1.1.2辅助诊断疫病鸡群发生疫病，发现明显临床症状时，通过抗体检测，对比抗体值高低和抗体值的离散度，如果抗体值高于发病阈值（不同病种阈值不同）且抗体值离散度较高，即可判定鸡群内有发病鸡只或鸡群发病。
而对于未免疫该病疫苗的鸡群，如果发现抗体阳性即可判定为鸡群内有发病鸡只或鸡群发病。
1.1.3评价免疫效果免疫效果评价是对疫苗产品质量、接种操作、疫苗保存运输等多方面进行验证的综合性考核工作。
通过实验室检测，了解鸡群抗体生成快慢、维持时间长短和抗体高峰值高低，可以对疫苗产品质量有个大概评价。
同时通过对鸡群的监测，还可以了解免疫操作是否规范，疫苗保存运输是否安全可靠。
只有疫苗产品质量良好、操作规范、保存运输条件符合基本要求，才能有一个好的免疫效果。
2监测报告的解读2.1抗体阴性与阳性定义阴性，是指未能检测到特异性的目标抗体或目标抗体值不大于阴性抗体阈值；阳性是指能明确检测到特异性目标抗体且目标抗体值不小于阳性抗体阈值。
新城疫HI抗体监测
（2）HA方法与步骤(μL)
孔号 1 2 3 ……. 10 11 对照
病毒稀释倍数
21
22
25 25 25 25
23
25 25 25 25
……. 210
…….. 25 …….. 25 …….. 25 …….. 25
211
25 25 25 25 25 弃去25 25 25
生理盐水或PBS 25
25 病毒（已知） 生理盐水或PBS 25 1%红细胞悬液 25
D.
3、病毒的红细胞凝集试验（HA）
（1）凝集价的测定
（2）HA方法与步骤 （3）判定结果
（1）凝集价的测定
将已知病毒材料，稀释成不同的稀释倍数，进行 HA 试验，出现血凝现象的各稀释孔中，能使红细胞完全 凝集的病毒的最大稀释倍数者即定为凝集价。又称为 该病毒的血凝滴度。 4单位病毒 即将一个血凝单位的稀释度增加4倍浓度， 例如一个血凝单位为 1:64 ， 4 个血凝单位则为 64/4=16 倍稀释。
新城疫HI抗体监测
王晓泉 刘慧谋
新城疫（newcastle disease,ND）是由新城疫 病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度 接触性传染病。以高热、呼吸困难、下痢、神 经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。具有很高的 发病率和病死率，是危害养禽业的一种主要传 染病。 病鸡是本病的主要传染源，鸡感染后临床症状 出现前24小时，其口、鼻分泌物和粪便就有病 毒排出。病毒存在于病鸡的所有组织器官、体 液、分泌物和排泄物中。
96孔V型微量反应板、微量振荡器、 病毒材料、红细胞悬液、生理盐水或 PBS、微量移液器、注射器、抗凝剂、 离心机、恒温箱等。
四、实验步骤和方法
1. 血清样品的采集、运送和保存 2. 制备鸡红细胞悬液 3. 病毒的红细胞凝集试验（HA） 4. 病毒的红细胞凝集抑制试验（HI）
鸡新城疫(ND)IV系苗免疫鸡群抗体效价的检测
新 城疫 （ Ｄ） Ｎ 是鸡 和火 鸡 的急性 高度接 触性 传染病 ， 属 于 副粘 病毒科 ，腮腺 病毒属 ，在 临床 上表现为 呼吸困难 、 下
痢、 Ｎ机 能紊乱 、 粘膜和浆膜 出血等症状 ， 由于新城 疫引起 的 疾病 首先发现 于印度 尼西亚 的爪 哇和英 国的新城 ， 并分离到 病 原 ， 名为新城 疫 ， Ｏ Ｅ列 为对畜禽危 害最大 的 Ａ类动 故 被 Ｉ 物传 染病之 一 ， 中华人 民共 和国动物 防疫法 》 中华人 在《 和《
试 验 研 究
鸡 新 城 疫 （ Ｉ 系苗 免 疫 ＮＤ） Ｖ 鸡 群 抗体 效 价 的检 测
索南卓玛
（ 海 同德 县畜 牧 兽 医工作 站 ，同德 ８ ２ ０） 青 １ ０ ３
关 键 词 ： Ｄ Ａ 及 ＨＩ 验 ； 体 效价 ； 测 Ｎ Ｈ 试 抗 监
ＤＯ Ｉ ０ ３ ６ ／ ． ： ．９ ９ＪＩ １ ＳＳＮ． ６ － ０ ７．０１ ．３．１ １ ７１ ６ ２ ２ ２０ ０ ３
新 城 疫 病 毒 红细 胞 凝 集 （ Ａ） 验 Ｈ 试 ５ ６ ７ ８ ９ １ ０ ｌ １ １ ２ 对 照
０． ５
滴 度
１２ ：
１４ ：
１８ ：
１ １ ：６
１３ ：２
１６ ：４
１ １８ １２ ６ １５ ７ １ １２ １ ２ ４ ：２ ：５ ：１ ：０ ４ ：０ ８
１． 试 ．２ １
１１ 仪 ．． ３
剂
器
浓缩抗原 、 生理盐水 、ｉ ｖｒ ａｓ ｅ 细胞保 存液 ， ｅ 红
天平 、 离心机 、 恒温箱 、 冰箱 、 微型振荡器 、 微
心 ， 血清析 出后使用 ， 待 每只鸡更换一个 注射器 ， 严禁交叉使
如何对新城疫开展免疫监测
如何对新城疫开展免疫监测近年来，我国家禽规模化、集约化和标准化饲养发展迅速，而传统的农村散养模式所占比例越来越少，这是我国养禽业向现代化健康稳定发展的大趋势。
在集约化养鸡企业的兽医卫生和疾病防控工作中，实验室检测的作用日益突出，有规模的种鸡场或商品鸡场，在科学免疫的同时，都应定期对鸡群进行免疫监测，这是鸡场生产成功的重要保障。
1 病原新城疫（ND）是由禽副流感病毒Ⅰ型新城疫病毒（NDV）引起的一种主要侵害鸡、火鸡、野禽及观赏鸟类的高度接触传染性、致死性疾病。
NDV对鸡的感染率和致死率均颇高，是最重要的一种家禽传染病。
NDV不易变异，只有一个血清型，属于副粘病毒科副粘病毒属的Ⅰ型副粘病毒（PMV-Ⅰ），病毒有囊膜，囊膜有两种纤突，即血凝素和神经氨酸酶，能凝集多种动物的红细胞。
尽管已有不少的实验室方法可用于ND的血清学诊断，例如，病毒中和试验、ELISA试验、琼脂双扩散试验、神经氨酸酶抑制试验等。
但迄今为止，血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）仍不失为一种快速准确的传统实验室手段。
2 实验材料2.1 参考血清实验中的NDV阳性参考血清可用6~9周龄的SPF鸡制造。
腿部肌肉注射0.1ml具感染性的低毒力尿囊液，同时滴鼻0.1ml，两周后重复一次，再过3周以后采血提取阳性血清。
2.2 抗原ND-HI抗原是采用经适当稀释的具有感染性的尿囊液，在实际工作中常用0.1%甲醛灭活的病毒液。
F株已被指定为NDV的国际参考株，但通常多用LaSota株代替比较方便。
根据经验，LaSota血凝抗原HA效价以＞10log2为佳。
目前青岛易邦、中检所和哈兽研均有商品化试剂出售。
2.3 1%红细胞液应自SPF或无抗体鸡采得。
采用翅静脉或心脏采血后放入有抗凝剂的离心管中，混匀后2000r/min，5~10min，吸去上清和白细胞膜，再加稀释液洗涤，如此反复3~4次，将最后一次离心的红细胞泥按1%的稀释度加入稀释液。
3 方法HA和HI试验已推广β-微量法，在96孔反应板上进行。
鸡新城疫的免疫检测程序
教学实习内容一．鸡新城疫的免疫检测目的：系统掌握鸡新城疫的抗体检测技术。
实验材料：新城疫疫苗、待测鸡蛋、生理盐水、5%柠檬酸钠、1%鸡红细胞悬液、胶头滴管、注射器、锥形瓶、15ml离心管、试管、96孔V型板、离心机等1.1%鸡红细胞悬液的制备（1）每组采取3ml左右健康鸡静脉血，迅速注入装有约0.3-0.4ml抗凝剂的离心管内，轻轻颠倒混匀；（2）加入适量生理盐水，混匀，3000rpm*10min，吸弃上清液和红细胞沉淀上层的白细胞层（3）加入适量生理盐水，重悬红细胞，3000rpm*10min，吸弃上清液。
如此，重复3次。
（4）量取红细胞沉淀的体积，用生理盐水配成1%的红细胞悬液，待用。
2.HA试验1%红细胞根据所用NDV液的凝集价，配制4单位病毒液。
3.HI试验（1）待测卵黄样品的制备：用镊子敲破鸡蛋小头，将蛋清倒去，留蛋黄在蛋壳内；吸取0.5ml 生理盐水，放入小试管内；去掉部分蛋壳，用1ml注射器（不带针头）吸取蛋黄0.5ml，加到有生理盐水的试管内，混匀（避免其很多泡）待检。
（2）按照检测血清抗体的方法检测卵黄中的抗体。
被检鸡蛋卵黄1%红细胞（3）判定和记录所检测鸡蛋的卵黄抗体效价。
结果与分析对所测得的结果进行分析，确定该鸡群目前的免疫状态，并对生产提出合理建议或给出科学指导。
分析并指出影响本实验结果的主要因素。
二．传染病的分子生物学检测——PCR检测（以PCV2为例）1.DNA提取：将猪肝脏称重后，按照1:3（W:V）的比例加入PBS，用组织研磨器研磨成组织悬液，反复冻融3次后8000 rpm离心5 min，取上清300 μL提取DNA。
取冻融、离心后的组织悬液/血清300μL，加入300 μL细胞裂解缓冲液和5 μL的蛋白酶K(20 mg/mL)，混匀，置50 ℃消化2 h，每隔30 min，剧烈震荡一次；加入等体积的Tris饱和酚，充分振荡混匀，4 ℃ 12000 rpm 离心10 min；取上层水相转入一新的l.5 mL eppendorf管中，加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）混匀后，4 ℃ 12000 rpm 离心10 min；用酚：氯仿：异戊醇（25:24: l）重复抽提一次；取上层水相转入一新的l.5 mL eppendorf管中，加入2倍体积冰预冷的无水乙醇和1/10体积的3 mol/L醋酸钠（pH 5.2），室温放置30 min 以沉淀基因组DNA；4 ℃ 12000 rpm离心15 min，弃上清；用75%乙醇1 mL 洗涤沉淀，4 ℃ 12 000 rpm 离心10 min后，弃去上清，自然晾干。
鸡感染新城疫的诊断及抗体水平检测
39疾病防治2017年3月9日山西省晋中地区某养鸡场150日龄的蛋鸡发生疾病，此养鸡场存栏鸡8000只，近期部分鸡发生疾病。
整群精神状态差，采食量和饮水量均下降。
场主携带3只发病鸡（2只活鸡，1只死鸡）来笔者研究室进行诊断。
1 临床症状病鸡精神沉郁、垂头缩颈、翅翼下垂、鸡冠、肉髯发紫呈暗红色、呆立、状似昏睡、食欲减少。
主要症状表现在呼吸道，包括咳嗽、张口呼吸、呼吸时偶尔会伴有拉长的怪叫声。
嗉囊内积有液状内容物，倒提时常从口角流出大量酸臭的暗灰色液体。
排黄绿色或黄白色水样稀便，有时混有少量血液。
鸡产蛋下降或停产，蛋壳质量变差。
2 病理变化病变主要集中在消化道，腺胃、小肠和盲肠病变最为明显。
腺胃乳头肿胀、出血或溃疡，尤其是在与食道或腺胃交界处最明显。
十二指肠黏膜及小肠黏膜出血或溃疡，有的可见到“枣核状溃疡灶”，表面有黄色或灰绿色纤维素膜覆盖。
盲肠扁桃体肿大、出血和坏死。
呼吸道以卡他性炎症和气管充血、出血为主。
鼻道、喉、气管中有浆液性或卡他性渗出物。
3 PCR 鉴定从发病鸡的肺脏、肝脏、脾脏等器官取样1g，剪碎混匀后取0.05g 研磨，8000r p m 离心后取上清液，使用新城疫病毒通用型RT-PCR 检测试剂盒检测NDV，取已处理的样品，加入裂解液600μL，充分颠倒混匀，室温静置3～5min。
将液体吸入吸附柱中，13000rpm 离心30s。
弃去收集管中的液体，加入600μL 洗液，13000rpm 离心30s。
重复上一步。
弃去收集管中液体，13000rpm 空柱离心2min，以除去残留的洗涤液。
将吸附柱移入新的1.5mL 离心管中，向柱中央加入洗脱液50μL，室温静置1min，13000rpm 离心30s，离心管中液体即为模板RNA。
反转录条件为：42℃ 45min，94℃ 3min；PCR 反应条件为：94℃30s，55℃ 30s，72℃ 30s，共循环35次，72℃延伸7min。
使用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果，结果见图1。
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≥1:64 者占 37.5%、表明该群鸡免疫失败，应考虑重新进行免疫。该鸡群HI价均≤1:256， 而且HI价分布离散[8]，可判定未发生新城疫病毒感染。
3.3 防治措施
3.3.1 隔离、消毒，严防病毒传入 使用天津必佳动物科技有限公司生产的必佳净消毒剂喷 洒消毒。 3.3.2 紧急疫苗预防 用鸡新城疫多价油苗+Ⅳ系苗组，1 毫升/只[9]，进行紧急预防。 3.3.3 辅助预防 配合天津必佳动物科技有限公司生产的黄芪多糖提高鸡新城疫疫苗的免疫 保护力[10]。
由于雏鸡受母源抗体的影响和免疫器官发育不完善，首免后的抗体效价往往不高，下降 较快，因此使用弱毒苗在首免后 3 周之内应进行二免，时间间隔过长，容易造成免疫断档而 染病。养鸡场因为鸡群健康状况不佳，总想把病治好了再去免疫接种，人为推迟二免时间， 结果因鸡健康状况不佳，抵抗力下降。 3.2.6 鸡群免疫系统功能缺损 3.2.6.1 鸡体的营养状况。农村养鸡的饲料多是自配料，随意性比较大，很容易造成某些营养 物质，如某些必需氨基酸、维生素、微量元素的缺乏或不足，致使鸡体因营养不良而抑制免 疫系统的功能。 3.2.6.2 各种应激因素的影响。如温度、湿度的急剧变化、扩群、换料、饥渴等都能引起机体 免疫系统功能的暂时性抑制，这时进行疫苗免疫接种很容易造成免疫失败。 3.2.6.3 免疫抑制性疾病的干扰。如传染性法氏囊病、传染性支气管炎、马立克氏病等疾病都 将降低免疫应答。 3.2.7 缺乏综合性的防治措施
2.2 待检血清的新城疫病毒血凝抑制(HI)价
由表 2 结果可见，病毒对照均为 100%凝集，待检血清对照均为 100%不凝集，各待测 血清的抗新城疫病毒血清血凝抑制价分别为：1#血清 1:8，2#、3#和 6#血清 1:32，4#血清 1:64，5#血清 1:256，7#血清 1:128；8#血清 1:2。
就表 2 结果进一步分析，该群新城疫疫苗免疫鸡，HI 价≥1:64 者占 37.5%、≤1:32 者占 62.5%，其中≤临界值 1:8 者占 25%，表明该群鸡免疫失败，应考虑重新进行免疫。该鸡群 HI 价均≤1:256，而且 HI 价分布离散，可判定未发生新城疫病毒感染。
3. 讨论
3.1 免疫效果评价
1.2 方法
1.2.1 鸡新城疫红细胞凝集(HA)试验 参照文献[6]，以微量法测试新城疫抗原HA价。
-1-
1.2.1.1 1%鸡红细胞悬液制备：采取健康鸡血用 0.9%生理盐水反复离心洗涤后制成 1%的红 细胞悬液。 1.2.1.2 HA 试验：自左向右于 96 孔 V 型血凝板的每一孔中加生理盐水 25μL；吸取 25μL 的 新城疫病毒滴加到第 1 孔，用微量加样器充分后移取 25μL，加于第 2 孔，依此法从左向右 进行倍比稀释至第 11 孔，从第 11 孔吸 25μL 弃之，第 12 孔不加病毒作为阴性对照；每孔 均加 1%红细胞悬液 25μL，置微型振荡器振荡 2min，置 37℃作用 30min，将血凝板倾斜观 察结果。
结果判定：以 100%凝集（血球呈颗粒性伞状凝集沉于孔底）的最大稀释孔为新城疫病 毒血凝(HA)价，即一个凝集单位，不凝集者红细胞沉于孔底呈点状。第 12 孔为血球对照应 不凝集。 1.2.2 鸡新城疫红细胞凝集抑制(HI)试验 参照文献[6]，以微量法测试待检血清中的新城疫 病毒血凝抑制抗体效价。 1.2.2.1 4 个血凝单位病毒抗原配制：根据已确定的新城疫病毒血凝价，计算 4 个血凝单位病 毒稀释倍数（血凝价/4），以生理盐水配制出 4 单位病毒放入冷藏室待用。 1.2.2.2 待检血清制备：采取 8 只待检鸡血液各 5mL 置入试管中，静置至血液凝集后，以 3000r/min 离心 2min，吸取血清待检。 1.2.2.3 HI 试验：于 96 孔 V 型血凝板上，自第 1 孔~第 10 孔各加生理盐水 25μL，11 和 12 孔分别为 4 单位病毒液和待检血清对照；吸取 25μL 待检血清滴加到第 1 孔，用微量加样器 充分后移取 25μL，加于第 2 孔，依此法从左向右进行倍比稀释至第 10 孔，吸弃 25μL，12 孔加待检血清 25μL；除 12 孔外，每孔中滴加 25μL 4 单位病毒抗原，振荡 2min，置 37℃温 箱作用 30min；每孔均加 1%红细胞悬液 25μL；振荡 2min，置 37℃温箱作用 30min，待 4 单位病毒已凝集红细胞可观察结果。
结果判定：以 100%抑制凝集的血清最大稀释度为该血清的滴度，即血凝抑制(HI)价。 11 孔的病毒对照应为 100%凝集，12 孔待检血清对照应为 100%不凝集。
2. 结果与分析
2.1 新城疫病毒的血凝(HA)价
由表 1 结果可见，该新城疫病毒的凝集价为 1:16，4 个凝集单位病毒抗原稀释倍数为 1:4。
-3-
担心疫苗效力不够，选用 3-4 倍药量饮水，致使部分鸡能饮到超过正常剂量 6-7 倍的疫 苗，这极易引起免疫麻痹或超过机体的免疫耐受力而使鸡发病；同时部分鸡只喝到很少一点 疫苗，免疫力很差。 3.2.4 频繁免疫造成的免疫抑制
近年来，农村养鸡户越来越认识到免疫的重要性，但有时在机体内抗体效价较高且均匀 度很好的情况下，盲目进行弱毒苗的免疫，容易造成抗体水平下降，鸡群容易在抗体下降时 感染新城疫病毒。另一方面，由于抗原的频繁刺激，机体应答反应疲劳，形成免疫抑制。 3.2.5 免疫间隔时间过长
新城疫（Newcastle disease, ND）流行于世界各国，在 150 多个国家和地区都有此病发 生[1]。目前仍然是我国严重危害养禽业的主要疾病之一，本病造成的经济损失十分巨大[2]。 除了大量死亡的直接损失外，还因幸存者生长发育受阻、饲料转化率降低、产蛋率下降、受 精率和孵化率降低以及封锁隔离等措施花费的大量人力和财力，所造成的间接经济损a剂量、 机体免疫机能状况等很多因素的综合影响，使新城疫疫苗预防免疫接种效果不佳，甚至免疫 失败，新城疫发病率仍然很高。再者，由于近十多年来养鸡业的蓬勃发展，国营和专业户的 鸡场数量剧增，星罗棋布，使疫病种类更加复杂化、疫情程度更加严重。为更加有效地防制 鸡新城疫发病，疫苗免疫后鸡群新城疫抗体效价监测，常作为免疫效果评价的重要依据。检 测家禽血清中抗鸡新城疫抗体的方法有多种，包括单向辐射免疫扩散试验、单向辐射溶血试 验、琼脂扩散试验、鸡胚中和试验及蚀斑中和试验、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)以及血凝抑制试验(haemagglutination inhibition assay, HI)等[3～ 5]，但常采用血凝试验(haemagglutination assay, HA)与血凝抑制试验(HI)来定量测定鸡新城疫 抗体[4]。ELISA可以半自动化操作，其技术已普及，并且ELISA与HI有很好的相关性[5]。迄 今为止，鸡红细胞血凝抑制试验仍不失为一种快速准确的试验手段。本次监测采用HI方法， 就宁夏回族自治区中卫市宣和镇三营王某新城疫疫苗已免鸡群的 1000 只 90 日龄育成鸡进行 抽检，并结合客户的叙述及实地考察，做出该新城疫疫苗效果评价，以便有的放矢地预防和 控制该养鸡场的新城疫。
3.2 免疫失败因素：
3.2.1 疫苗效价不高 农户贪图便宜，从个体药店处购买这些效价不高的疫苗用于鸡群免疫，致使免疫效果不
佳。 3.2.2 灭活苗应用不合理
养殖户认为灭活苗诱导产生的抗体水平较高，且维持时间长，因而首免选用新城疫灭活 苗进行肌肉注射，忽视了弱毒苗的免疫，造成免疫效果不佳。 3.2.3 免疫方法不当
致 谢:
衷心感谢吴润教授对此论文的批改，以及对本人的大力支持。
-4-
参考文献
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表 1 新城疫病毒红细胞凝集(HA)试验
管1
2
3 456 7
8ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
9
10
11 12
号
病 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048