实验四 尿标本的微生物学检验PPT课件

• 标本采集方法常有五种：导尿法、中段尿
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1）导尿法：采取导尿管导尿，是一种较好的
无菌采集法，可直接插导管采集尿液标本
或滞留导管集尿。直接导尿先让尿流弃
15ml，滞留导管集尿先用70%酒精消毒导管
口再用针筒抽取，取尿量为10～15ml，直
接导尿有将尿道细菌进入膀胱的危险，尽
量避免此方法。
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四、结果观察：
1、细菌计数
1）结果记录：
2）结果计算：
每ml尿液细菌数=菌落平均数×稀释倍数
3）结果判断标准：
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目前认为由革兰氏阴性杆菌引起的菌尿，
其菌数均可达到＞105/ml，而球菌所引起的
菌尿，其菌数达到104/ml，即可作为尿路感
染的标准（因不同细菌繁殖速度快慢不一，
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• 实验器材：
1、标本：1#、2#、3#模拟尿液标本。 2、培养基：BA、Mac、普通营养琼脂、KIA、
蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、枸橼酸盐斜 面、尿素、苯丙氨酸斜面、硝酸盐蛋白胨 水。 3、试剂：9.9ml无菌生理盐水、革兰染液、 2019/氧11/26化酶试剂、3%H O . 、靛基质试剂、甲基 11
红色
pH<6.0黄色，pH>8.6显
4、含有硫代硫酸钠
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只分解葡萄糖
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结果判断 .
分解葡萄糖和乳糖 产生气体
产生H2S
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• 结果表示：
不产酸－，产酸＋，产酸产气⊕
产酸A,产碱K
斜面/底层 H2S ＋/⊕ －
斜面/底层 H2S 产气 A/ A － ＋
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• 通常取晨起第一次尿送检。
• 由于治疗所用药物多数均通过尿液排泄，因 此，无论用何种方法采集尿液都宜在用药前 进行。
• 尿液标本的采取和培养最大的问题是污染杂 菌，故应严格进行无菌操作
• 尿液标本中不得加防腐剂，否则会影响检出
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• 常见病原菌：
医院内引起UTI的病原菌70%为革兰氏阴
和弧菌属等也是氧化酶阳性。
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• 麦康凯平板（Mac）：
是一种肠道杆菌专用的弱选择性培养基。 培养基成分中除基础成分外，主要含有 0.5%胆盐、1%乳糖、中性红指示剂。
胆盐：一方面对沙门氏菌有刺激生长作用， 另一方面对革兰氏阳性菌及大肠埃希氏菌 有抑制作用。
1%乳糖：作为一种指示糖。
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3）肾盂尿采集法：由泌尿科医生在膀胱镜下 分别采集左右侧输尿管的尿液，并做好标 记，以防左右侧错位，尿液采集量不少于 1ml。
4）膀胱穿刺采集法：在病人耻骨上膀胱区用
碘酒、酒精消毒（要求病人不排尿充盈膀
胱）以无菌针筒做膀胱穿刺，抽取尿液后
针筒插入橡皮塞送检。此法主要用于厌氧
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原理：
变色范围4.4～6.2
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方法及结果：
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性杆菌，其中以肠杆菌科和假单胞菌属的
细菌为主；革兰氏阳性菌约占20%，其中以
葡萄球菌和肠球菌为多见。由于抗菌素的
广泛应用，近年来真菌性UTI增多，约占
10%。
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• 检验程序：
尿标本
直接涂片染色
分离培养 细菌计数
（特殊细菌检查离心沉淀）
定量培养
直接计数
BA、中国蓝或麦康凯平板（常规培养）
35 ℃ 18～24h
直接药敏试验
观察菌落形态、涂片染色镜检
血清学鉴定 生化鉴定 确定病原菌
药敏试验
发报告
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• 检验程序：
革兰阴性杆菌
氧化酶（Oxi）
-
+
肠杆菌科细菌
非发酵菌
氧化酶阴性非发酵菌：不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌。 氧化酶阳性其他革兰阴性菌：巴斯德菌、气单胞菌、邻单胞菌
• 实验方法：
一、分离培养
用无菌方法将1#、2#、3#模拟尿液标本分 别划线接种于BA、Mac上，置35℃培养18— 24小时。
二、直接涂片染色
取上述1#、2#、3#标本分别作涂片、革兰
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0.1ml 尿液
9.9ml NS 1:100稀释标本0.1ml
总稀释倍数1:1000
氧化酶又称细胞色素氧化酶，是细胞
色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。氧化酶试
验中，酶并不直接与试剂（1%盐酸四甲基
对苯二胺或1%盐酸二甲基对苯二胺）起反
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• 意义： 本试验应用广泛，如奈瑟菌属、假单胞
菌属、莫拉菌属呈阳性，肠杆菌科细菌呈 阴性。 2、触酶试验：
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实验四
尿标本的微生物学检验
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• 实验目的： • 掌握尿液标本的采集与处理、常见病原菌
及一般微生物学检验程序和细菌计数方法。 • 掌握大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌的微
生物学鉴定方法和生物学性状。
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• 尿标本的采集与处理：
• 正常人的尿液通常是无菌的，但在外尿道 除有正常菌群外，尚有其他一些病原菌和 条件致病菌，可通过多种途径引起尿路感 染（urinary tract infection, UTI ）。如：葡 萄球菌、链球菌、肠球菌、大肠埃希氏菌、 变形杆菌等。
－/⊕ ＋
K/ A ＋ ＋
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2、吲哚（靛基质）试验:
原理：
色氨酸
色氨酸酶
吲哚
＋
对二甲基氨基苯 甲醛
吲哚、丙酮酸 和氨
玫瑰吲哚
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方法: 结果:
应用：用于肠杆菌科细菌的鉴定。
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3、甲基红试验（MR试验） 4、VP试验
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在同一时间内细菌繁殖数应该是：革兰氏
阴性杆菌＞葡萄球菌＞肠球菌）。为此，
作菌尿计数时，必须与涂片染色结果结合，
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2、菌落形BA： 态描述：（BA、 Mac： Mac分别描述）
1#标本：
2#标本：
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五、鉴别试验:
1、氧化酶（Oxidase）试验：
• 原理：
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六、生化鉴定： 将1#、2#、3#标本分别接种于KIA、 、蛋
白胨水、葡萄糖蛋白胨水、枸橼酸盐斜面、 尿素、苯丙氨酸斜面、硝酸盐蛋白胨水中， 置35℃培养18～24小时。
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1、KIA（克氏双糖铁）试验： • 原理
1、营养非常丰富
2、葡萄糖：乳糖＝1：10
3、指示剂为酚红：变色范围6.0～8.6，