蒽酮硫酸法测多糖 - 360文档中心

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量之南宫帮珍创作一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。

该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定。

二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。

当日配制使用；葡萄糖尺度液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。

三. 操纵步调葡萄糖尺度曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列分歧浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号0 1 2 3 4 5 6 尺度葡萄糖溶液/mL 0 0.4 0.6 0.8蒸馏水/mL在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。

在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。

以尺度葡萄糖含量(g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制尺度曲线。

样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。

在625nm波长下迅速测定各管吸光值。

根据葡萄糖含量的尺度曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。

四. 注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不单可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包含淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

多糖含量的测定方法

多糖含量的测定方法有多种，以下列举其中几种常用的方法： 1. 酚硫酸法：将样品与酚硫酸反应生成稳定的紫色化合物，通过测定紫色化合物的吸光度来确定多糖含量。

2. 蒽酮-硫酸法：样品经热水溶解后，乙醇沉淀，除去其他可溶性糖及杂质的干扰，用热水溶解沉淀物并稀释定容。

此法操作简便，测定速度快，可用于多糖的实时快速测定和定性分析。

3. 刚果红显色法：在一定条件下，刚果红显色剂能与乙酰甘露聚糖生成有色复合物，而不与麦芽糖糊精、蔗糖和葡萄糖等发生明显的显色反应。

由此可以建立定量分析芦荟多糖含量的刚果红显色分光光度法。

此外，还有其他方法如色谱法、光谱法等也可以用于多糖含量的测定。

具体使用哪种方法需要根据实验目的、样品性质和实验条件等因素进行选择。

硫酸蒽酮法测定风柜斗草粗多糖含量

靠，可用于风柜斗草粗多糖含量测定。
关键词：风柜斗草；多糖提取；含量测定；硫酸葸酮法
中图分类号：０６５７．３１文献标识码：Ａ文章编号：１００９－８１４３（２０１７）０６－００５２－０４
Ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９－８１４３．２０１７．０６．１２
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＥｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｒｏｍＳａｒｃｏｐｙｒａｍｉｓＮｅｐａｌｅｎｓｉｓＷａｌｌｂｙｗａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ —ａｌｃｏｈｏｌｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｎｇ．Ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄａｎｄａｎａｌｙｚｅｄｂｙｖｉｓｉｂｌｅｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ，Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅ — ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎｓａｒｃｏｐｙｒａｍｉｓｎｅｐａｌｅｎｓｉｓｗａｌｌｂｙａｎｔｈｒｏｎｅ — ｓｕｌｆｕｉｒｃａｃｉｄｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
操作步骤
葡萄糖标准曲线的制作
取6支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2个重复：
管号0 1 2 3 4 5
标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水/mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热10min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却10min。

在652nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

样品的测定
将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。

在652nm波长下迅速测定各管吸光值。

根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。

Cri-J。

蒽酮——硫酸比色法测定枇杷叶中可溶性多糖的含量

蒽酮——硫酸比色法测定枇杷叶中可溶性多糖的含量摘要：目的：建立枇杷叶中可溶性多糖的含量测定方法。

方法：采用蒽酮—硫酸比色法。

结果：显示624nm处有最大吸收峰，线性关系较好(r=0.9999)，平均回收率为99.58%(n=5，RSD=2.85%)，枇杷叶可溶性多糖的含量为8%以上。

结论：该方法快速准确、重现性好，可为枇杷叶中水溶液多糖的检测提供参考方法。

关键词：枇杷叶多糖；蒽酮—硫酸比色法；含量测定枇杷叶为蔷薇科(Rosaceae)植物枇杷(Eriobotrya japonica Thunb Lindl)的干燥叶，在我国已有2200多年的栽培历史。

目前已报道枇杷叶中熊果酸和齐墩果酸的含量测定方法，但是采用蒽酮比色法测定枇杷叶中水溶性多糖含量方法的研究报道较少[1]。

本试验探讨了枇杷叶中水溶性多糖的含量测定方法，旨在为今后产业化利用枇杷资源的含量检测提供参考。

1 材料试验用枇杷叶采自成都中医药大学峨嵋学院植物种植园，由王书林教授鉴定为蔷薇科(Rosaceae)植物枇杷(Eriobotrya japonica Thunb Lindl)的干燥叶。

1.1 试药无水葡萄糖(AR)、枇杷叶、蒽酮(AR)、硫酸(AR)、无水乙醇。

1.2 主要仪器设备UV2450紫外-可见分光光度计、R-201旋转蒸发仪、101-2A电热恒温鼓风干燥箱、W201C数控恒温水浴锅、SHB-Ⅲ循环水真空泵、2G 10-2.4A离心机。

2 方法2.1 样品溶液的制备将枇杷叶洗涤后于60℃干燥，粉碎备用。

精密称取约10g，加水150mL，在80℃回流提取3h[1]，趁热过滤，重复提取一次，合并上述滤液，离心，上清液减压浓缩至约25mL，精密吸取浓缩液10mL，加乙醇调含醇量至含乙醇量为85%，密闭置4℃冰箱中静置过夜。

回收乙醇，沉淀用水适量超声溶解，摇匀定容至50mL，精密吸取上述定容液0.5mL用水定容至100mL作为待测液。

2.2 标准液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖100.00mg，加蒸馏水100mL，配置成浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液备用。

硫酸蒽酮法测定多糖含量的10条注意事项

硫酸蒽酮法测定多糖含量的10条注意事项：
1. 蒽酮不稳定，需要避光操作，保存也需避光保存。

2. 80%硫酸通常指体积分数。

3. 在配制80%硫酸的过程中，必须将硫酸缓慢沿容器壁加入到水中，并用比玻璃棒不断搅拌。

4. 蒽酮不是很好溶解，仔细观察硫酸蒽酮溶液是否澄清，如果没有，可以超声或加热使其溶解，溶解后为淡黄色澄清溶液。

5. 水浴温度为100℃，需要拿温度计量。

6. 冰浴最好量温度，每次保持一致。

7. 硫酸蒽酮不要加入过慢，否则会形成沉淀，以内局部硫酸被稀释，蒽酮会析出，呈乳白色。

加入后应及时涡旋或者其他方式混匀。

8. 冰浴不要太着急，让试管先适应一下温度的变化，否则可能会裂开，水会进入到试管中。

9. 试管要具塞，否则硫酸可能吸收空气中的水，而且便于混匀。

10. 糖的浓度设定要合适，使吸光度值落在0.2-0.8之间。

*有问题可联系我，一起探讨科学实验。

动物多糖--总糖的测定

1.硫酸蒽酮法（1）样品处理：称取0.1g样品（动物），以E/S比为1/25的比例，加入0.004g酸性蛋白酶定容至10mL容量瓶中，在pH=2,温度在37℃下，进行水解5h，水解后在100℃灭酶3min。

将经酶处理过的样品用5mL注射器经0.45um针孔滤膜过滤，收集滤液，并取1mL 滤液定容至50mL容量瓶中待用。

（2）紫外分光检测：准确称取0.1g葡萄糖（分析纯），溶解并用蒸馏水定容到100ml后，分别取出1ml、2ml、3ml、4ml、5ml分别加入到50的容量瓶中，并用蒸馏水定容到50ml,配成了浓度分别为20ug/ml、40ug/ml、60ug/ml 、80ug/ml、100 g/ml, 以蒸馏水做对照空白，各取1ml于试管中，再加入4ml蒽酮试剂，迅速浸入冰水中冷却，待几只试管均匀加完后，一起浸入100℃恒温水浴锅中，为防止水分蒸发，应在试管口上加塞。

自温度重新升至100℃起计时，准确保温10min后取出，用流动水冷却。

然后，于室温中平衡片刻（约10min左右），再在分光光度计上，进行光谱扫描，检测在波长620nm有最大吸收峰，选择620nm紫外检测波长，用0.5cm厚度的比色杯进行比色。

其标准曲线制作如表1.1 所示：表1.1 葡萄糖标准曲线结果标样号浓度（ug/ml）吸光度(ABS)1 20.000 0.067282 40.000 0.257233 60.000 0.438604 80.000 0.589235 100.000 0.74802多糖含量（%）=（样品浓度×稀释倍数×样品体积）/式样称重量×100%。

2．苯酚-硫酸法（1）标准曲线的制备: 准确称量干燥至恒重的葡萄糖标准品0.020g,置于体积500mL的容量瓶中定容并摇匀,得到葡萄糖的标准溶液。

以2.0mL蒸馏水作为空白样,依次取0.4mL, 0.6mL, 0.8mL, l.0mL, 1.2mL,1.4mL, 1.6mL,1.8mL 葡萄糖标准溶液,用蒸馏水补足至2.0mL,在每个样品中按顺序加入浓度为6%的苯酚溶液l.0mL,98%的浓硫酸5.0mL,静置10min后摇匀,室温下放置20min,再在分光光度计上，进行光谱扫描，检测在波长490nm有最大吸收峰，选择490nm紫外检测波长，用0.5cm厚度的比色杯进行比色，测得吸光值。

粗多糖检测方法

粗多糖（以葡萄糖计）的测定方法
1．主要仪器
分光光度计；水浴锅；分析天平等
2．试剂
蒽酮：分析纯；浓硫酸：分析纯；水为去离子水或蒸馏水。

蒽酮硫酸溶液：精密称取蒽酮0.1g ，加80%的硫酸溶液100ml 使溶解，摇匀。

3．对照品溶液的制备
取葡萄糖对照品适量，于105℃干燥至恒重，精密称定，加水制成每1ml 含0.1mg 的溶液，即得。

4．标准曲线的制备
分别精密量取对照品溶液0.2ml 、0.4ml 、0.6ml 、0.8ml 、1.0ml 、1.2ml ，置10ml 具塞试管中，加水至2.0ml ，精密加入硫酸蒽酮溶液6ml ，摇匀，置沸水浴中加热15分钟，取出，放入冰水浴中冷却15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在625nm 波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

5．供试品溶液的制备
精密量取本品1ml ，置于50ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液2ml 至20ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

6．测定法
精密量取供试品溶液2ml ，置10ml 具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml ”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量（mg ），计算，即得。

7．结果计算
1000
1001⨯⨯⨯=V V m X 式中 X ——样品中粗多糖含量（以葡萄糖计）（g/100ml ）
m ——供试品溶液中含葡萄糖的重量（mg ）
V ——样品稀释倍数
V 1——比色时所取的样品溶液体积（ml ）。

粗多糖检测方法(蒽酮比色法)

粗多糖检测方法（蒽酮比色法）：1 主要仪器（1）离心机（4000r/min）。

（2）离心瓶容量100ml或具盖10ml离心管。

（3）分光光度计。

（4）水浴锅。

2 试剂实验用水为双蒸水；所用试剂为分析纯级。

（1）葡萄糖标准液：准确称取1.0000g经过98～100℃干燥至恒重的分析纯葡萄糖，加水溶解后以水稀释至1000ml，此溶液1ml含1mg葡萄糖，用前稀释10倍（0.1mg/ml），现用现配。

（2）0.2%蒽酮硫酸溶液：称取0.2g蒽酮置于烧杯中，缓慢加入100ml浓硫酸（分析纯），溶解后呈黄色透明溶液，现用现配。

3 测定步骤（1）样品处理：准确称取样品1～2g按上法用乙醇沉淀多糖，然后用热水分次溶解沉淀并稀释定容至100～250ml（使样液含糖量在0.02～0.05mg/ml间）。

过滤，弃去初滤液即为待测液。

（2）标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准液（0.1mg/ml）0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于10ml具塞比色管中，加水至1.0ml，加入蒽酮试剂5ml充分混匀，在沸水浴中加热10min，取出在流水中冷却20min 后，在620nm波长下，以试剂空白调零，测定各管的吸收值绘制标准曲线。

（3）样品测定：准确吸取样品待测液10ml（含糖20～80μg）按标准曲线绘制步骤于620nm波长下测定吸光度值并求出样品含糖量。

4 结果计算：m1X= ———————× F × n × 100%m×1000式中X—样品中粗多糖含量（以葡萄糖计）（%）；m1—由标准曲线查得样品液含糖质量（mg）；m—样品质量（g）；n —稀释倍数；F—换算因子。

换算因子的测定：准确称取被测物质的纯品20mg置100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，吸取0.2～0.4ml于10ml具塞比色管中，加水至1.0ml按上法测定。

从标准曲线中查出供试液中相当于标准葡萄糖的质量（mg）。

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量讲课稿

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。

该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定。

二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。

当日配制使用；葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。

三. 操作步骤葡萄糖标准曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号0 1 2 3 4 5 6标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。

在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。

在625nm波长下迅速测定各管吸光值。

根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。

四. 注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量之青柳念文创作一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色.该物质在620 nm处有最大吸收，在150µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比.该法有很高的活络度，糖含量在30 µg左右就可以停止测定.二. 试剂器材蒽酮试剂：紧密称取蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀.当日配制使用；葡萄糖尺度液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后紧密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等.三. 操纵步调葡萄糖尺度曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据紧密配制一系列分歧浓度的葡萄糖溶液，每一个浓度做2-3个重复：管号0 1 2 3 4 5 6 尺度葡萄糖溶液/mL 0 0.4 0.6 0.8蒸馏水/mL在每支试管中当即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min.取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min.在625nm波长下以第1管为空缺，迅速测定其余各管吸光值.以尺度葡萄糖含量(g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制尺度曲线.样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，切确吸取2mL置于干燥干净试管中，在每支试管中当即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min.取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每一个浓度做2-3个重复.在625nm波长下迅速测定各管吸光值.根据葡萄糖含量的尺度曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量.四. 注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不单可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包含淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量.在没有需要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多费事，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差.分歧的糖类与蒽酮试剂的显色深度分歧，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因分歧糖类的比例分歧造成误差，但测定单一糖类时则可防止此种误差.。

硫酸蒽酮法测定多糖国标

硫酸蒽酮法测定多糖国标
多糖测定方法有很多种，其中硫酸蒽酮法是一种常用的测定多糖含量的方法。

其国家标准为GB/T 10789-2008。

主要步骤如下：
步骤1：制备多糖样品溶液。

取一定量的多糖样品，精确称重
并用水溶解，制备成一定浓度的多糖样品溶液。

步骤2：取样。

取一定量的多糖样品溶液，精确称重。

步骤3：加入硫酸溶液。

将步骤2中取的多糖样品溶液缓慢滴
加到稀硫酸中，并充分混合。

步骤4：加入蒽酮溶液。

将蒽酮溶液加入到步骤3中所得混合
液中，并再次充分混合。

步骤5：黑暗反应。

将混合液置于黑暗处，控制反应时间。

步骤6：停止反应。

加入大量的乙醇停止反应。

步骤7：移液分析。

将反应液移至比色皿中，用紫外分光光度
计测定吸收值并计算多糖含量。

注：在以上步骤中，硫酸和蒽酮的使用要非常小心，避免接触皮肤或眼睛。

同时，反应过程中要注意操作的规范性和安全性。

苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法测定香菇多糖含量比较

苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法测定香菇多糖含量比较一、本文概述香菇多糖作为一种重要的生物活性物质，近年来在食品、医药等领域的应用日益广泛。

准确测定香菇多糖的含量对于其质量控制和应用研究具有重要意义。

目前，苯酚硫酸法和蒽酮硫酸法是常用的两种测定香菇多糖含量的方法。

本文旨在对这两种方法进行比较研究，探讨它们的优缺点和适用范围，为香菇多糖的测定提供更为准确、可靠的方法依据。

本文将简要介绍苯酚硫酸法和蒽酮硫酸法的基本原理和操作步骤。

随后，通过实验对比两种方法在测定香菇多糖含量时的准确性、稳定性和重复性，评估它们的优劣。

还将探讨影响两种方法测定结果的因素，如样品处理、反应条件等，并提出相应的改进措施。

本文的研究结果将为香菇多糖的含量测定提供更为全面、深入的理论依据，有助于推动香菇多糖在食品、医药等领域的应用发展。

也为其他多糖类物质的含量测定提供参考和借鉴。

二、苯酚硫酸法测定香菇多糖含量苯酚硫酸法是一种常用的测定多糖含量的方法，因其操作简便、灵敏度高而广泛应用于食品、医药等领域。

该方法基于多糖在浓硫酸的作用下，能脱水生成糠醛或其衍生物，这些衍生物与苯酚能发生显色反应，生成的有色化合物在特定波长下具有最大吸收，从而可通过比色法测定多糖的含量。

在测定香菇多糖含量的过程中，我们首先需要制备香菇多糖的提取液。

将香菇干燥、粉碎后，用适宜的溶剂（如热水、稀碱等）进行提取，得到多糖的粗提物。

然后，将粗提物进行纯化，去除其中的杂质，得到较为纯净的多糖。

接下来，按照苯酚硫酸法的操作步骤，将多糖溶液与苯酚-硫酸试剂混合，并在沸水浴中加热一定时间，使多糖完全脱水生成糠醛衍生物。

然后，将反应液冷却至室温，用分光光度计在特定波长下测定其吸光度值。

为了得到准确的测定结果，我们需要绘制标准曲线。

选取一系列不同浓度的标准多糖溶液，按照上述方法进行处理，测定其吸光度值，并绘制出标准曲线。

通过比较样品溶液的吸光度值与标准曲线，即可计算出香菇多糖的含量。

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量之杨若古兰创作一. 实验道理糖类在较高温度下可被浓硫酸感化而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，构成糠醛的衍生物呈蓝绿色.该物资在620 nm处有最大接收，在150 µg/mL 范围内，其色彩的深浅与可溶性糖含量成反比.该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg摆布就能进行测定.二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀.当日配制使用；葡萄糖尺度液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等.三. 操纵步调葡萄糖尺度曲线的建造取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列分歧浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个反复：管号0 1 2 3 4 5 6 尺度葡萄糖溶液/mL 0 0.4 0.6 0.8蒸馏水/mL在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一路置于沸水浴中加热15min.取出，敏捷浸于冰水浴中冷却15min.在625nm波长下以第1管为空白，敏捷测定其余各管吸光值.以尺度葡萄糖含量(g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制尺度曲线.样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确汲取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一路置于沸水浴中加热15min.取出，敏捷浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个反复.在625nm波长下敏捷测定各管吸光值.根据葡萄糖含量的尺度曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量.四. 留意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不单可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包含淀粉、纤维素等（由于反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量.在没有须要过细划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去很多麻烦，是以，有特殊的利用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应留意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会由于细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而添加了测定误差.分歧的糖类与蒽酮试剂的显色深度分歧，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因分歧糖类的比例分歧形成误差，但测定单一糖类时则可防止此种误差.。

大枣多糖的提取与测定

大枣多糖的提取与测定一、硫酸-蒽酮法1）仪器与试剂：分光光度计、水浴锅、20ml刻度试管、吸管、100ml容量瓶、10ml具塞试管、圆底烧瓶。

蒽酮，无水葡萄糖，浓硫酸（比重1.84），无水乙醇，蒸馏水2）操作方法①对照品溶液的制备：精密称取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品200mg，置100ml 容量瓶中，稀释至刻度，摇匀(2.0mg/ml)。

精密吸取10ml，置另一100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(0.2mg/ml)。

②多糖提取工艺：大枣→粉碎→称重→水浸提→上清液→乙醇沉淀→复溶→去除蛋白质→纯多糖。

I 多糖提取工艺条件确定确定浸提温度、时间、水料比和pH为影响因素，每个因素选三个水平，每组以10g原料计，作L9（34）正交试验。

如表1表1 多糖提取条件水平温度（A）/℃时间（B）/h 加水倍数（C）pH（D）1 70 1 10 42 80 2 20 63 90 3 30 8结果表明：影响浸提率因素顺序为：加水倍数>酸度>温度>浸提时间。

最佳参数为：大枣：水(g：mL)=l：20，90℃浸提2h，酸度pH=8。

在既工艺条件下浸提率为3．5％。

II 浸提级数的确定在最佳的提取条件下对原料连续浸提3次。

其结果为，第1次浸提后浸提率为3．5％，第2次浸提后浸提率为2.68％，第2次浸提后浸提率为1．16％。

考虑到后期醇析工序的经济性，采用2级浸提为宜。

III 醇析条件的选择取一定体积的经提取、分离、抽滤后的上清液，分多组少量多次的加入不同量的乙醇于清液中，使乙醇终体积分数分别为75％、80％、85％。

沉淀24h后离心，取其上清液测其多糖的含量。

结果表明，乙醇体积分数升高，醇析量增多，但乙醇终体积分数超过75％后，醇析量增大比例不甚明显，且上清液中多糖含量降低不大，考虑到经济因索，故选择醇析浓度为75％。

③蒽酮试液的制备：称取蒽酮0.2g，加100ml硫酸溶解即得。

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

创作编号：GB8878185555334563BT9125XW创作者：凤呜大王*蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。

该物质在620 nm 处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定。

二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。

当日配制使用；葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。

三. 操作步骤葡萄糖标准曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号0 1 2 3 4 5 6 标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。

在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。

在625nm波长下迅速测定各管吸光值。

根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。

蒽酮硫酸法测多糖优选稿

蒽酮硫酸法测多糖内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量?一.实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。

该物质在620nm处有最大吸收，在150μg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

该法有很高的灵敏度，糖含量在30μg左右就能进行测定。

二.试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100mL使溶解，摇匀。

当日配制使用；葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。

三.操作步骤样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。

在625nm波长下迅速测定各管吸光值。

根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。

四.注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。

不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。

硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖

硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。

（一）苯酚法测定可溶性糖【实验原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。

苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。

苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。

【实验仪器及试剂】1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。

2．试剂：（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。

（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。

（3）浓硫酸（比重1.84）。

（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。

加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。

（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。

【实验步骤】1．标准曲线的制作：取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5－20s。

加入5 mL浓硫酸，摇匀。

比色液总体积为8 mL，在恒温下放置30min。

显色。

然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。

2．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min （提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。