肝糖原的提取鉴定与定量肝糖原的提取与鉴定
肝糖原的提取与鉴定实验报告
肝糖原的提取与鉴定实验报告实验六肝糖原的提取实验六肝糖原的提取、鉴定与定量(生物化学实验操作考核卷)姓名，学号，专业，级班组，月日目的要求:1. 掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2. 了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3. 正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4. 熟练运用溶液混匀的各种方法(视具体情况，采用合适的混匀方法)。
5. 正确掌握溶液转移的操作。
6. 正确操作使用分光光度计。
实验原理:(一)肝糖原的提取、鉴定糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95,乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。
CuSO4十2NaOH ? Na2 SO4+Cu(OH)2?2Cu(OH)2十C6H12O6 ? 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O2CuOH ? Cu2O?(红色)+H2OCu(OH)CuO?(黑色)+H2O(二)肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm处有最大吸收。
糖含量在(10?100)?g范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法(直接比较法)即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。
实验材料:(一)仪器1. 普通离心机，室温?100?恒温水浴箱(×2)，722型分光光度计，精度为10mg级电子天平(×1)2. 剪刀(×1)，镊子(×1)，研钵(×1)3. 试管架(×1)，10mL离心管(×2)，(100×15)mm试管(×6)4. 刻度吸量管(2mL×1，5 mL×2)，1000μL微量可调取液器(×1)5. 100mL容量瓶(×1)6. 白瓷反应板(×1)(二)实验样品和试剂1. 鸡肝。
肝糖原的提取、鉴定与定量-实验报告材料-第四实验室
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级： 2015级护理本科组别：第四实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期2016-12-20 实验地点第四实验室合作者指导教师评分教师签名批改日期一、实验目的1、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和须知事项，掌握其操作方法。
2、了解离心管和分光光度计使用的原理并掌握操作步骤。
3、熟悉吸量管、可调式微量移液器的操作步骤。
4、熟悉溶液的转移操作；熟练运用溶液混匀的各种方法〔视具体情况，采用适宜的混匀方法〕。
5、了解呈色反响。
二、实验原理(一) 肝糖原的提取与鉴定采用研磨匀浆使细胞破碎，用低浓度的三氯醋酸使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶从而使其沉淀，而糖原仍稳定保持在上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分别离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故用95%乙醇溶液将糖原沉淀，再用热水溶解。
(1)糖原螺旋链吸附碘分子：糖原水溶液呈乳样光泽，其长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子，呈现出红棕色。
(2)呈色反响——利用葡萄糖的复原性：①CuSO4+2NaOH = NaSO4 + Cu(OH)2↓②2Cu(OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH + 氧化型葡萄糖+ H2O③2CuOH = Cu2O↓(红色) + H2O④Cu(OH)2 = CuO↓〔黑色〕+ H2O〔二〕肝糖原定量测定糖原的水解产物葡萄糖可以在浓硫酸的作用下生成糠醛衍生物-5-羟甲基呋喃甲醛，其可以和蒽酮生成蓝色的化合物，该物质在620nm处有最大吸收。
糖含量在10μg～100μg，溶液颜色的深浅与可溶性糖的含量成正比，利用此反响与同样处理的葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
三、材料与方法：〔一〕肝糖原的提取与鉴定1.实验材料：〔1〕样品：鸡肝〔2〕试剂：5%三氯乙酸溶液、95％乙醇溶液、蒸馏水、浓盐酸、50%氢氧〔3〕仪器和器材：剪刀、天平、镊子、圆纸片、研钵、试管、离心机、刻2.实验流程 鸡肝约1.5 g ，剪碎3.实验步骤〔二〕肝糖原定量测定1.实验材料：〔1〕样品：鸡肝〔2〕试剂：30%氢氧化钾溶液、蒸馏水、标准葡萄糖溶液、蒽酮显色剂〔3〕仪器和器材：剪刀、天平、镊子、圆纸片、试管、刻度吸量管〔移液3.实验步骤见下表混匀，沸水浴10分钟，冷却c。
079-肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告
生物化学实验报告姓名：符含敏学号： 3140090079专业年级： 2014级预防医学组别：第三实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期2015-1-8 实验地点第三实验室合作者杨锐指导老师朱利娜评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的：提取鸡肝中的肝糖原进行肝糖原的定性以及定量实验二、实验原理：1.低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，使糖原能很好地保存在上清液中，95%的乙醇能将滤液中的糖原沉淀。
2.糖原溶液遇碘呈红棕色，糖原水解成的葡萄糖与班氏试剂水浴加热可变黑色。
3.糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸可使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物，它再与蒽酮试剂脱水缩合生成蓝色的化合物。
4.糖含量在10-100μg，溶液颜色深浅与可溶性糖含量成正比。
三．实验材料：1.鸡肝乙醇 5%三氯醋酸 50%NaOH 12mol/LHCl 碘试剂班氏试剂普通离心机室温至100℃恒温箱可见光分光光度计天平剪刀镊子研钵试管架10ml离心管刻度吸量管白瓷反应板2. 30%KOH 标准葡萄糖溶液 90%浓硫酸蒽酮显色剂四．实验步骤：1.肝糖原的提取与鉴定：鸡肝约1.5 g，剪碎＋5%CClCOOH 1 ml3研磨至乳状＋5%CClCOOH 3 ml3研磨成肝匀浆3分钟（4000 r / min）3 ml）＋3ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟5分钟（4000 r / min）＋蒸镏水1 ml沸水浴2分钟，溶解沉淀糖原溶液1ml＋浓HCl 5滴加碘试剂沸水浴糖原溶液2滴滴呈色对比＋班氏试剂4滴沸水浴2分钟，观察变化2.肝糖原的定量测定：鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml （用吸量管)沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液取3支试管，按下表操作:试剂（ml）空白管标准管样品管标准葡萄糖溶液— 1.0 —糖原提取液—— 1.00.2%蒽酮溶液2.5 2.5 2.5（用吸量管）混匀，沸水浴10分钟，冷却c。
肝糖原的提取、鉴定与定量-实验报告-第四实验室【参考借鉴】
生物化学实验报告
姓名：
学号：
专业年级： 2015级护理本科
组别：第四实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量
实验日期2016-12-20 实验地点第四实验室
合作者指导老师
评分教师签名批改日期
一、实验目的
1、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
2、了解离心管和分光光度计使用的原理并掌握操作步骤。
3、熟悉吸量管、可调式微量移液器的操作步骤。
4、熟悉溶液的转移操作；熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
5、了解呈色反应。
二、实验原理
(一) 肝糖原的提取与鉴定
1.糖原的分离
采用研磨匀浆使细胞破碎，用低浓度的三氯醋酸使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶从而使其沉淀，而糖原仍稳定保持在上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开。
肝糖原的提取、鉴定与定量
生物化学实验报告姓名：汪煜灵学号： 3130010071 专业年级： 2013级临床医学组别：第2实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定、分离实验日期2014-12-25 实验地点第2实验室合作者陈海玲指导老师朱利娜评分教师签名批改日期一、实验目的1、掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4、熟练运用溶液混匀的各种方法。
5、正确掌握溶液转移的操作。
6、正确操作使用分光光度计。
二、实验原理●肝糖原的提取糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。
●糖原的鉴定糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。
CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4 + Cu(OH)22Cu(OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O2CuOH = H20 + Cu2O (红色)Cu(OH)2 ==== H2O + CuO (黑色)●肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm处有最大吸收。
糖含量在10—100mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量的标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，而保留肝糖原。
肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1．掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2．了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3．正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。
4．熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
5．正确掌握溶液转移的操作。
6．正确操作使用分光光度计。
二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞内,采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀,再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中, 依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可判定肝组织中糖原的存在。
2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛,此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)g范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色,通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前,肝组织先臵于浓碱中加热,以破坏其它成分,而保留肝糖原。
三、材料与方法：以流程图示意1、材料(1)样品:鸡肝(2)试剂:95%乙醇、5%(W/V)三氯乙酸、浓盐酸、12.5mol/L(50%)NaOH溶液、碘试剂、班氏试剂、5.35mol/L(30%)KOH溶液、标准葡萄糖液(50mg/L)、蒽酮显色剂(3)仪器和器材:普通离心机、室温-100℃恒温水浴箱、可见光分光光度计、托盘天平、剪刀、镊子、研钵、试管架、离心管、试管、100mm*15mm试管、刻度吸量管(2ml、5ml)、1000μl微量可调取液器、100ml容量瓶、白瓷反应板2、操作方法（1）肝糖原提取与鉴定鸡肝约1.5 g，剪碎COOH 1 ml＋5%CCl3研磨至乳状COOH 3 ml＋5%CCl3研磨成肝匀浆全部转入离心管中，离心3分钟（4000 r / min）沉淀（弃去）上清（取约3 ml）＋3ml （等量）95%乙醇，混匀，静置10分钟离心5分钟（4000 r / min）上清（弃去）沉淀＋蒸镏水1 ml沸水浴2分钟，溶解沉淀白瓷板孔穴中糖原溶液1ml＋浓HCl 250μl加碘试剂2滴加碘试剂2滴沸水浴15分钟，冷却糖原溶液2滴呈色对比糖原水解液2滴糖原水解液＋班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化（2）肝糖原定量实验鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液糖原的测定取3支试管，按下表操作。
肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告9页
肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告9页实验目的：1.了解肝糖原的结构与性质；3.熟悉超声波提取技术的应用。
实验原理：肝糖原是一种糖原，在肝脏中以甲基α-D-葡萄糖嘌呤核苷（SAM）为原料，经过糖原合成酶的催化作用合成而成。
它是一种高分子多糖，由葡萄糖基通过1-4键连接而成，具有极强的极性，难溶于非极性溶剂。
肝糖原的提取：取新鲜肝组织80g，冰冻于低温冰箱-20℃冰冻保存，取出后立即加入10倍体积的冷盐酸（0.1mol/L），用手柄式破碎器将组织均匀破碎，加入适量的冷盐酸，使其均匀分布，浸泡在冰箱中30min，取出用移液器吸取上清液。
用纱布过滤残渣，滤好的液体置于4℃冰箱中，制备组织液。
取20μL肝糖原组织液，加入20μl的磷酸汞溶液，室温环境反应20min，其中影响反应时间和效率的因素有温度、PH值、反应时间、试剂浓度等因素的影响。
反应结束后，加入一定量的氢氧化钠，与水分解反应，生成红褐色的水银，其数量与肝糖原含量成正比例关系。
经过计算，得到肝糖原的含量。
实验步骤：1. 超声波法提取肝糖原：在超声波处理器中，取15g搅拌均匀的肝组织，加入草酸（0.1mol/L）溶液100mL中，混合均匀；2. 将二氧化硫加入混合液中，浸泡3分钟；3. 将混合液通过过滤纸过滤，收集上清液，其即肝糖原溶液；4. 测定肝糖原浓度：取30μL的肝糖原溶液，加入1.5mL的琼脂糖溶液，室温下反应2小时，以紫外分光光度法（UV-6500）在260nm处测定吸光度，计算肝糖原浓度。
实验结果：1.超声波提取的肝糖原溶液中肝糖原的浓度为6.67mg/L；2.实验中所测定的肝糖原含量为3.76mg/g。
结论：1.超声波提取技术适用于肝糖原的提取，可显著提高提取效率；2.磷酸汞法可用于肝糖原的含量测定，该方法操作简单，结果准确。
实验中还发现，肝糖原含量随年龄增长趋势下降，这与肝脏代谢功能的下降有关。
参考文献：1.老师名字，丁丁等。
生物化学实验教程[M]。
-肝糖原的提取、鉴定与定量
生物化学实验报告姓名：范嘉俊学号： 3140070081专业年级： 2014级中西医临床五年制组别：第四实验室生物化学与分子生物学实验教学中心1.实验原理（1）肝糖原提取与鉴定①提取：1.糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，释放出糖原。
2. 5%三氯醋酸溶液能使用糖原与蛋白质分离，糖原保存于上清液，而蛋白质沉淀。
3.糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
②鉴定：糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖。
利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。
（2）肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糖醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。
（1）实验样品：鸡肝。
（2）主要试剂：肝糖原的提取与鉴定：95%乙醇，0.31mol/L(5%)三氯醋酸溶液，0.15mol/LNaCl溶液，浓盐酸，NaOH溶液，碘试剂。
肝糖原定量测定：30%KOH溶液，0.5mg/ml的葡萄糖溶液，蒸馏水，蒽酮显色剂。
（3）主要仪器与器材：可见光分光光度计，恒温水浴箱，试管架，三支支试管，加样枪，加样枪架，普通离心机，研钵，刻度吸量管，白瓷反应器，100ml容量瓶。
3.实验步骤（1）实验流程①肝糖原的提取与鉴定注意事项：①在提取肝糖原中，向上清液中加入乙醇后，要充分混匀（可以用玻璃棒搅拌）。
②糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基的多少有关。
肝糖原分支中葡萄糖残基在20个以下，吸附碘后呈现红棕色。
肝糖原的提取,鉴定与定量实验报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级： 2018级临床卓越创新班组别：第一实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取，鉴定与定量实验日期2019-12-18 实验地点第一实验室合作者指导老师评分XX 教师签名李某某批改日期2013-06-03一、实验目的1.掌握组织样品的制备方法，了解注意事项。
2．了解肝糖原的提取，糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握操作方法。
3.正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4.熟练运用溶液混匀的多种方法5.学会溶液转移的操作6.正确使用分光光度计7.掌握离心机的正确操作步骤二、实验原理1.肝糖原的提取和鉴定：1）糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
2）糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
3）糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
4）糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在；2. 肝糖原的定量：1）糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm处有最大吸收。
2）糖含量在10-100μg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法(直接比较法)即可计算出样品中糖原的含量。
3）糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。
三、材料与方法：以流程图示意1.实验材料试验样品和试剂仪器鸡肝，95%乙醇溶液，5%三氯醋酸溶液，浓盐酸，氢氧化钠溶液，碘试剂，班氏试剂，氢30%氧化钾溶液，标准葡萄糖液，蒽酮，蒸馏水恒温水浴箱，分光光度计，电子秤，离心机；剪刀，镊子，试管架，试管*3，刻度吸量管，加样枪，100ml容量瓶，白瓷反应板2.实验步骤1）肝糖原提取与鉴定2）肝糖原定量推论，并得出结论。
-肝糖原的提取、鉴定与定量
生物化学实验报告姓名：范嘉俊学号： **********专业年级： 2014级中西医临床五年制组别：第四实验室生物化学与分子生物学实验教学中心1.实验原理（1）肝糖原提取与鉴定①提取：1.糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，释放出糖原。
2. 5%三氯醋酸溶液能使用糖原与蛋白质分离，糖原保存于上清液，而蛋白质沉淀。
3.糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
②鉴定：糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖。
利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。
（2）肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糖醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。
（1）实验样品：鸡肝。
（2）主要试剂：肝糖原的提取与鉴定：95%乙醇，0.31mol/L(5%)三氯醋酸溶液，0.15mol/LNaCl溶液，浓盐酸，NaOH溶液，碘试剂。
肝糖原定量测定：30%KOH溶液，0.5mg/ml的葡萄糖溶液，蒸馏水，蒽酮显色剂。
（3）主要仪器与器材：可见光分光光度计，恒温水浴箱，试管架，三支支试管，加样枪，加样枪架，普通离心机，研钵，刻度吸量管，白瓷反应器，100ml容量瓶。
3.实验步骤（1）实验流程①肝糖原的提取与鉴定注意事项：①在提取肝糖原中，向上清液中加入乙醇后，要充分混匀（可以用玻璃棒搅拌）。
②糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基的多少有关。
肝糖原分支中葡萄糖残基在20个以下，吸附碘后呈现红棕色。
肝糖原的提取、鉴定与定量
2Cu(OH)2+ C6H12O6 ═ 2CuOH+氧化型葡萄糖+H2O
2CuOH ═ Cu2O↓(红色)+H2O
△
4
Cu(OH)2 ═ CuO↓(黑色)+H2O
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实验原理
（三）肝糖原的定量
糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖
进一步脱水生成糠醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合
此试剂不稳定，以当日配制为宜，冰箱保存可用4~5天。
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操作步骤
（一）肝糖原的提取
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操作步骤
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操作步骤
注意事项
1 肝糖原提取一步，向上清液中加人等量的95％乙醇后，务必注意 混匀。由于上清液为水溶液，比重大于95％乙醇，溶液分成两层。 加之上清液已4mL多，加上等量乙醇，总量接近9mL，混匀操作比 较困难，最好用倾倒混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。
应液呈黑色浑浊，观察不到应有的结果。
11
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操作步骤
（二）肝糖原定量测定
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操作步骤
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9. 5.35mol/L(30％)KOH溶液：称取KOH 30g，加蒸馏水溶解至100 mL。
11. 标准葡萄糖液(50mg/L)：称取已干燥恒重的无水葡萄糖25mg，加蒸 馏水溶解至500 mL。
12. 17mol/L(90％)H2SO4：量取蒸馏水30mL，加浓H2SO4500 mL。
13. 蒽酮显色剂：称取蒽酮0.20g，用17mol/L H2SO4溶解至100 mL。
5. 正确掌握溶液转移的操作。
生物化学(27.2)--肝糖原的提取、鉴定与定量
பைடு நூலகம்
实验原理
（二）肝糖原的鉴定 糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间
引力吸附碘分子后呈现红棕色。 糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡
萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。 CuSO4+2NaOH ═ Na2 SO4+Cu(OH)2↓ 2Cu(OH)2+ C6H12O6 ═ 2CuOH+ 氧化型葡萄糖 +H2O 2CuOH△═ Cu2O↓( 红色 )+H2O Cu(OH)2 ═ CuO↓( 黑色 )+H2O
实验材料
（一）仪器 1. 普通离心机，室温 ~100℃ 恒温水浴箱， 722 型分光光度计，精
度为 10mg 级电子天平 2. 剪刀，镊子，研钵 3. 试管架， 10mL 离心管， 100×15mm 试管 4. 刻度吸量管（ 2mL 、 5 mL ）， 1000μL 微量可调取液器 5. 100mL 容量瓶 6. 白瓷反应板
9. 5.35mol/L(30 ％ )KOH 溶液：称取 KOH 30g ，加蒸馏水溶解至 1 00 mL 。
11. 标准葡萄糖液 (50mg/L) ：称取已干燥恒重的无水葡萄糖 25mg ，加蒸馏水溶解至 500 mL 。
12. 17mol/L(90 ％ )H2SO4 ：量取蒸馏水 30mL ，加浓 H2SO4500 mL 。
13. 蒽酮显色剂：称取蒽酮 0.20g ，用 17mol/L H2SO4 溶解至 100 mL 。此试剂不稳定，以当日配制为宜，冰箱保存可用 4~5 天。
操作步骤
（一）肝糖原的提取、鉴 定
肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的1、掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4、熟练运用溶液混匀的各种方法。
5、正确掌握溶液转移的操作。
6、正确操作使用分光光度计。
二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。
CuSO4十2NaOH = Na2SO4+Cu(OH)2↓2Cu(OH)2十C6H12O6 = 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O2CuOH = Cu2O↓(红色)+H2OCu(OH)2= CuO↓(黑色)+H2O2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)g范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先臵于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。
肝糖原的提取与鉴定
制备肝糖原溶液：弃上清液，于试管中加入蒸馏
水5 mL，80 ℃水浴加温，用玻棒棒边加热边搅拌 ， 使之充分溶解即为肝糖原溶液。
四 操作步骤
三 实验原理
析出肝糖原：糖原不溶于乙醇而溶于热水，乙醇通过 降低介电常数和脱水作用使肝糖原从上清液中析出， 因此，上清液中的肝糖原可借加入的乙醇而沉淀。
溶解肝糖原：将沉淀的糖原溶于热水后，出现具有乳 样光泽的肝糖原溶液。
一部分做碘的颜色反应，糖原遇碘呈红棕色，这 是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋依靠分子间引力吸附 碘分子后呈现的颜色。
四 操作步骤
制备肝匀浆 取动物肝脏，迅速以吸水纸吸去
附着的血液后，精确称重 (记录重 量,>=0.5g)。
将肝脏放入研钵内，加 5%三氯醋 酸溶液2 mL，研磨肝脏呈糊状匀浆。
四 操作步骤
提取肝糖原
1）分离肝糖原：将研钵中的肝匀浆置于试管内，并再 用2 mL 5%三氯醋酸溶液洗涤研钵中残留的匀浆后， 再引流至相应的试管中，静置 5 min， 3000 rpm / min，离心5 min，弃沉淀。将上清液置于新试管中。
五 注意事项
肝糖原溶液与显色液混合时产生大量的热， 影响显色反应。
在测定同一批标本时选用型号一致的试管，口径 大的试管便于快速混合。
显色剂要逐管加入，快速混合，不可成批加入。
反应中所用试管和比色杯应保持清洁干燥。 防止浓硫酸吸水影响检测结果。
Thank you!
标准葡萄
-
1.0
-
糖溶液
2）取大试管 3支，编
八肝糖原的提取鉴定与定量
2Cu(OH) + C H O ═ 2CuOH+氧化型葡萄糖+H O 蒽酮显色剂：称取蒽酮0.
1标5准mo葡l/萄L N糖a液Cl(溶50液m：g/称L)：取称8. 取已干2燥恒重的6 无水1葡2 萄糖625mg，加蒸馏水溶解至500 mL。
2
2CuOH ═ Cu O↓(红色)+H O 刻度吸量管（2mL×1，5 mL×2），1000μL微量可调取液器（×1）
碘试剂：碘l00mg和K1 200mg溶于50mL蒸馏水中。
糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。这是糖原中 利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。
熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后 3 糖原水解液中葡萄糖的鉴定一步，加班氏试剂不能过量，否则反应液呈黑色浑浊，观察不到应有的结果。
实验材料
（一）仪器 1. 普通离心机，室温~100℃恒温水浴箱（×2），722型分光光度计，
精度为10mg级电子天平（×1） 2. 剪刀（×1），镊子（×1），研钵（×1） 3. 试管架（×1），10mL离心管（×2），（100×15）mm试管（×6） 4. 刻度吸量管（2mL×1，5 mL×2），1000μL微量可调取液器（×1） 5. 100mL容量瓶（×1） 6. 白瓷反应板（×1）
1 肝糖原提取一步，向上清液中加人等量的95％乙醇后，务必注意混匀。
呈现的颜色。糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应 5mol/L(50％)NaOH：称取NaOH 50g，用蒸馏水溶解至100mL。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。 淀粉中分枝链较长，故呈蓝色，而肝糖原分枝中的葡萄糖残基在20个以下（通常8 12个葡萄糖残基），吸附碘后呈现红棕色。
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肝糖原的提取鉴定与定量肝糖原的提取与鉴定生物化学实验报告
姓名：
学号： 3130010071
专业年级： xx级临床医学
组别：第2实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称肝糖原的提取、鉴定、分离实验日期 xx-12-25 合作者评分
陈海玲
签名
实验地点
第2实验室
指导老师朱利娜
批改日期
一、实验目的
1、掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4、熟练运用溶液混匀的各种方法。
5、正确掌握溶液转移的操作。
6、正确操作使用分光光度计。
二、实验原理
●肝糖原的提取
糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。
●糖原的鉴定
糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。
CuSO 4 + 2NaOH = Na2SO 4 + Cu(OH)2Cu(OH)2 + C6H 12O 6 = 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O
2CuOH = H20 + Cu2红色) Cu(OH)2 ==== H2黑色) ●肝糖原的定量
糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在10—100mg 范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量的标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，而保留肝糖原。
三、实验
●仪器：
1、普通离心机，室温-100℃恒温水浴箱（x2），722型分光光度计，精度为 10mg 级电子天平
2、剪刀、镊子、研钵
3、试管架，离心管，试管
4、刻度吸量管（2ml ,5ml），1000μl 微量可调取液器
5、100ml 容量瓶
6、白瓷反应板●试剂：
鸡肝、95%乙醇、0.31mol/L(5%)三氯醋酸溶液、0.15mol/L NaCl 溶液、浓HCl 、 12.5mol/L(50%)NaOH、碘试剂、班氏试剂、30%KOH 溶液、标准葡萄糖液（50mg/L）蒽酮显色剂
四、实验步骤
●肝糖原的提取
鸡肝约1.5g ，剪碎
+5%CClCOOH 1ml
3
研磨至乳状
+5%CCl3COOH 3ml 研磨成肝匀浆
全部转入离心管中，离心3min （4000r/min）
取上清液
+5ml 95%乙醇，混匀，静置10min 离心5min （ 4000r/min）
取沉淀 +蒸馏水2ml
沸水浴2min ，溶解沉淀
+浓HCl 0.2ml
15min ，冷却
糖原溶液0.1ml
呈色对比
+班氏试剂0.2ml(4d)
混匀
沸水浴，观察变化●注意事项：
1、提取肝糖原时，向上清液中加入等量的95%乙醇后，必须混匀。
由于上清液为水溶液，比重大于95%乙醇，溶液分成两层。
加之上清液已4ml 多，加上等量
乙醇，总量接近9ml ，混匀操作比较困难，最好用倾倒混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。
2、糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基数的多少有关。
葡萄糖残基在20个以下的会使碘呈现红色，20-30个之间使碘呈现紫色，60个以上的会使碘呈现蓝色。
淀粉中分支链较长，故
呈蓝色，而肝糖原分枝中的葡萄糖残基在20个以下（通常8-12个葡萄糖残基），吸附碘后呈现红棕色。
3、糖原水解液中葡萄糖时，加班氏试剂不能过量，否则反应液呈黑色浑浊，不到应有的结果。
肝糖原定量测定
鸡肝 0.15 g
+30% KOH 1.5ml 沸水浴15min
冷却，全部转入100ml 容量瓶中
加水至标线，仔细混匀，获得糖原提取液
取3支干净的试管，按下表操作：
试剂（ml ）空白管蒸馏水
标准葡萄糖溶液糖原提取液 0.2%蒽酮溶液
1.0 ————
2.5
标准管—— 1.0 —— 2.5
样品管———— 1.0 2.5
混匀，沸水浴10min ，冷却。
在722型或721型分光光度计620nm 波长处，用空
白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A ）. 计算：
肝糖原（g/100g肝组织）=
100A 测定100
X 0.05 X X X 1.11 A 标准肝组织重（g ）1000
五、实验现象与结果讨论
●糖原水解液加班氏试剂沸水浴后无明显变化。
●糖原溶液加碘试剂后呈红棕色，但与碘试剂原来颜色区别不大。
●鸡肝加碱沸水浴后分层，上层为红棕色，下层无色。
●加入蒽酮溶液并且水浴过后的空白管、标准管、样品管（由左至右）对比
●将空白管在620nm 处的A 值设定为0，测得标准管、样品管的A 值如下：
1 2 3 平均值
空白管 0 0 0 0
标准管 0.610 0.612 0.616 0.613
样品管 0.085 0.085 0.091 0.087
肝糖原（g/100g肝组织）=
100A 测定100
X 0.05 X X X 1.11 A 标准肝组织重（g ）1000
≈0.525
从肝糖原的定量试验中可知鸡肝样品中含有糖原，但在定性实验中结果不明显，可判断实验所采用的鸡肝样品含糖原量比较少，造成鸡肝糖原量少的原因可能是用于实验的鸡处于饥饿状态，糖原分解以维持血糖稳定，因此使肝中剩余的糖原量少于非饥饿状态下的鸡的肝糖原含量。
内容仅供参考。