总糖的测定-蒽酮比色法教学提纲
学习指南2-1 植物组织中可溶性总糖的提取及蒽酮比色定糖法
植物组织中可溶性总糖的提取及蒽酮比色定糖法——学习指南
l 学习重点 1. 学习植物样本中可溶性总糖的提取方法。
2. 掌握蒽酮比色法定糖的原理和操作。
l 知识要点
蒽酮比色定糖法：糖在浓硫酸作用下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在620nm 处有最大吸收，可通过比色法进行糖的定量。
蒽酮比色法快速、简便，几乎可以测定所有的糖类物质，包括单糖、寡糖和多糖。
比色法和标准曲线制作参考《面粉中总糖和还原糖的提取及3,5-二硝基水杨酸定糖法》。
l 试剂 1. 0.1mg/ml 标准葡萄糖溶液。
2. 蒽酮试剂。
l 材料
新鲜植物叶片
l 仪器
电子天平、研钵、电磁炉、旋涡混合仪、循环水泵、抽滤瓶、紫外可见分光光度计 l 操作
l 注意事项
1. 蒽酮试剂中硫酸的浓度为80%，由于蒽酮不溶于水，因此测定样品中含水量不能多，试管应干燥无水，否则蒽酮会在测定液中析出而影响测定。
2. 蒽酮试剂
中有浓硫酸，操作时要小心，注意安全。
实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法)
实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法)实验目的：2. 了解可溶性总糖在不同食品中的含量。
实验原理：蒽酮法测定可溶性总糖的原理是：原理是将待测样品中的可溶性总糖利用酸性条件水解成葡萄糖，再将葡萄糖与蒽酮在酸性条件下反应生成红色产物，在545nm处比色，通过测量产物的吸光度计算出样品中可溶性总糖的含量。
实验步骤：1. 预处理样品称取25g待测样品，加入100mL蒸馏水，加热煮沸5min，冷却至室温，定容到500mL。
2. 酸水解取10mL待测样品，加热至沸腾，加入10mL 0.6mol/L HCl，再加入2mL 66% L-酒精溶液，沸腾10分钟，冷却至室温。
3. 测定葡萄糖含量取上述溶液10mL，加入20mL 蒸馏水，加入0.5g硫代硫酸钠，加1mL4%酚酞酸指示剂，用0.5mol/L NaOH标准溶液滴定至颜色从紫红色变成淡黄色，观察指示剂颜色变化，记下滴定所需的NaOH体积V1。
4. 去色取剩余的水解溶液(约50mL)，加45mL蒸馏水，加入0.5g氯化钠，用3.48×10^-3mol/L 二硫代磺酸钠溶液滴定至橙色转变为淡黄色(V2)。
5. 比色取2mL去色溶液，加0.50mL 1%蒽酮溶液，加0.50mL 4%氢氧化钠溶液，加入烧杯中，隔水加热沸腾5分钟，冷却后用0.5mol/L HCl标准溶液掉定至颜色由深红色变成粉色(V3)。
6. 计算结果计算样品中可溶性总糖的含量(y)：y=(V1-V2)×1000/6.9×V3 (单位：g/100g或mg/L)实验提示：1. 为了减小误差，应使用称量精度较高的电子天平。
2. 滴定时应慢慢加入标准溶液，用玻璃棒搅拌均匀，直到指示剂颜色变化停止。
3. 比色前需要将产物稳定，此步骤是较关键的实验步骤之一，需要加热沸腾不超过5分钟，并且不要在加热沸腾时将实验管口对准自己。
实验结果：利用蒽酮法测定了不同食品中的可溶性总糖的含量，样品1(西瓜)为0.58g/100g，样品2(草莓)为0.67g/100g，样品3(苹果)为0.49g/100g，样品4(香蕉)为0.59g/100g。
总糖含量的测定
实验二总糖含量的测定一、目的：1. 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2. 学习植物可溶性糖的一种提取方法。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H0O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 pg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30⑥左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料1. 仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2. 试剂：(1) 葡萄糖标准液：100 Q/ml(2) 浓硫酸(3) 蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓H2SQ中。
当日配制使用。
3. 材料：淀粉四、操作步骤1. 葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1,迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸10 min 取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（pg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2. 植物样品中总糖的提取：精确称取0.5g，置于50 ml三角瓶中，加水15 ml,盐酸10ml,沸水浴20min, 定容至100ml，得提取液。
取10ml滤液定容至100ml3. 测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入 4.0 ml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代提取液。
以下操作同标准曲线制作。
根据A?。
平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（p g）。
五、结果处理C X V 总X D样品含糖量（%）= --------------------------------- 0W X V 测X 106其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（⑷），V总——提取液总体积（ml ），V测——测定时取用体积（ml ），D -- 稀释倍数，W样品重量（g ），106——样品重量单位由g 换算成p g 的倍数六、注意事项：该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
实验七 食品中总糖含量的测定
实验七食品中总糖含量的测定1.实验目的掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法。
2.实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
3.仪器及材料3.1仪器可见分光光度计（752型）、可调试移液器或移液管、电子分析天平、水浴锅、电炉子、25mL具塞比色管3.2试剂标准葡萄糖储备液（1.0mg/ml）：称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖1.0000g，配制成1000ml溶液，即得每ml含糖为1000μg的标准溶液。
标准葡萄糖工作液(0.1mg/ml):100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml备用。
72%硫酸: 72mL 98% H2SO4加到28mL纯净水中，并不断搅拌。
0.1%蒽酮显色液: 0.1g蒽酮和1.0g硫脲，置于烧杯中，在搅拌状态下，缓慢加入100 ml 72%H2SO4 ，棕色瓶中低温存放两天，最好现配现用。
3.3材料市售玉米粉4.实验步骤4.1样品处理精确称取玉米粉0.200g置于锥形瓶中，加入少量温水充分溶解并定容至1000毫升，摇匀过滤备用。
4.2葡萄糖标准曲线的制作取7支干燥洁净的试管，按表1顺序加入试剂，进行测定。
以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度(mg/ml )为横坐标作图得标准曲线。
表1 蒽酮比色法定糖--标准曲线的制作及样品检测0 1 2 3 4 5 6 待测葡萄糖溶液标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 样品滤液1.0 蒸馏水/mL 补满定容2mL蒽酮试剂10 10 10 10 10 10 10 10 迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
实验十蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量
实验十蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量一、实验目的掌握蒽酮法测定总糖和可溶性糖含量的原理和方法。
二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
酸可使糖类（如已糖基，戊醛糖及已糖醛酸）脱水生成糠醛，生成的糠醛或烃甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大光吸收值。
在10~100ug范围内其他颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
而对于上述特定的糖类物质，反映较稳定。
多糖和寡糖可用酸水解成单塘和蒽酮试剂反应，因此利用蒽酮法可测组织中总糖和可溶性糖。
这一种方法具有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右时就能进行测定，所以可作为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器，试剂和材料1．仪器（1）分光光度计；（6）漏斗，漏斗架个6个（2）电子天平；（7）容量瓶：50ml2个；（3）三角瓶：50ml2个（8）移液管；（4）刻度具塞试管；10ml13支；（9）水浴锅。
（5）试管架，试管夹各2个；2．试剂（1）葡萄糖标准液：100ug/ml；（2）浓硫酸；（3）蒽酮试剂：0.2g蒽酮，溶于100ml浓流酸中，现当日配制使用。
3．材料小麦幼苗分蕖节或其植物的幼嫩组织（大白菜心）。
四、操作步骤1．葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液；管号1234567葡萄糖标准液/mL00.10.20.30.40.50.6蒸馏水/mL 1.00.90.80.70.60.70.8葡萄糖含量/ug0102030405060在每支试管中，加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸入冰水浴中冷却。
各加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。
以标准葡萄糖含量（ug）做横坐标，以吸光值作纵坐标，做出标准曲线。
蒽酮比色法测总糖
[1]姚立虎,徐茜. 蒽酮比色法测食品总糖含量简化研究[J]. 食品工业992,03:40-42.1. 2试剂0. 1 mg / mL, 1葡萄糖标准溶液:准确称取10mg葡萄糖标准品溶于少量蒸馏水中，溶解后转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL.蒽酮硫酸溶液:准确称取蕙酮50 mg于100mL二烧杯中，加入蒸馏水25 mL,，缓慢加入98%质量分数)浓硫酸75 mL,，边加边搅(于冰水浴中完成)，直至蕙酮溶解，冷却至室温后使用(临用新配)。
浓盐酸、浓硫酸、NaOH，以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。
1. 3方法1. 3. 1显色剂（蒽酮硫醇溶液）用量选择。
向试管中加入0. 1 mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL,，并加入蒸馏水至1m L,，分别加入不同量显色剂显色测定，以0. 1 mL,蒸馏水为空白对照。
1.3.2显色时间选择。
向10 mL二试管中加入0. 1mg / mL葡萄糖标液0. 1 mL二并加入蒸馏水至1mL,，在冰水浴中缓慢加入9 mL显色剂摇匀，改变沸水浴时问，冷却至室温后测体系吸光度。
1.3.3葡萄搪标准曲线绘制。
改变0. 1 mgmL 葡萄糖标准液和蒸馏水用量，再分别加入9mL显色剂，进行显色测定。
1.3.4正交试验确定提取条件。
采用正交试验，考查4个影响因素(料液比、盐酸浓度、提取时间、水解时问)对实验影响，因素水平见表1.1.3.5水溶性总搪提取。
取0. 5 g棉花纤维于150 mL圆底烧瓶中，加入30 mL,蒸馏水，在沸水浴中加热60 mLn,滤出提取液20 mL于50 mL 烧瓶中，加5 mol / L 盐酸5 mL继续在沸水浴中加热30 mLn，冷却后，滴加一滴酚酞，用5 mol / L, 1氧氧化钠中和至中性。
1. 3. 6水溶性总搪测定。
取提取液1 mL于10mL试管中，在冰水浴中缓慢加入9 mL,蕙酮硫酸溶液摇匀，在沸水浴中加热9 mLn，冷却后放置30min测定吸光度。
总糖的测定蒽酮比色方法
总糖测定——蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。
二、试剂：1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。
2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。
3、72%硫酸溶液。
三、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。
根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。
（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。
四、结果计算：总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；10-4：将ppm换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。
2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。
这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。
蒽酮比色法测总糖
实验五总糖的测定——蒽酮比色法一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/ml(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：甜糜秸秆四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min 取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品剪碎至2 mm以下，105 ºC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50 ml 三角瓶中，加沸水25 m1，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50 m1容量瓶中，定容至刻度，得提取液。
3.稀释：吸取提取液2 m1，置于另一50 m1容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀。
4.测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空平均值在标白管以等量蒸馏水取代提取液。
实验五可溶性总糖的测定(精)
管号 1
葡萄糖 0
标准液 （ml）
蒸馏水 1
（ml）
葡萄糖 0
含量 （μg）
2
3
4
5
6
7
0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8
0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2
10 20 30 40 60 80
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0ml， 加完后一起浸于沸水浴中，准确煮沸10分钟取 出，用流水冷却，室温放置10分钟，在620nm 波长下比色。以标准葡萄糖含量作横坐标，以 吸光值作纵坐标作标准曲线。
三、仪器、试剂和材料
１、仪器 分光光度计；电子天平；三角瓶；大管；试管架； 漏斗；容量瓶；试管；水浴锅 ２、试剂 葡萄糖标准液；浓硫酸； 蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶于100mL浓硫酸中当日配制 使用。 ３、材料 小麦
四、操作步骤
１、葡萄糖标准曲线的制作 取７支大试管，按下表数据配制一
系列不同浓度的葡萄糖溶液：
可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)
一、目的
掌握蒽酮法测定可溶性糖含量 的原理和方法。
二、原理
强酸可使糖类脱水成糖醛，生成的糖醛或羟 甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糖醛的衍生物， 呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大吸收。在10 －100μg范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量 成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在３ 0μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖 之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比 较合适。
２、植物样品中可溶性糖的提取
将小麦剪碎至２mm以下，准确称取１克， 放入50三角瓶中，加沸水25ml，在水浴中加盖 煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集在50ml容 量瓶中，定容至刻度。吸取提取液２ml置另一 50ml容量瓶中，以蒸馏水稀释定容不，摇匀测 定。
总糖的测定-蒽酮比色法
实验一总糖的测定-蒽酮比色法一、实验目的（1）学习蒽酮比色定糖法的原理和方法。
（2）学习723型分光光度计的原理和操作方法。
二、实验原理总糖是指样品中的还原糖及在本法测定条件下水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糠醛衍生物后与蒽酮（C14H10O）缩合成蓝色化合物。
溶液含糖量在每毫升150微克以内，与蒽酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用，样品不必经过水解。
三、实验材料、器材与试剂1、材料白薯。
2、器材（1）试管（或具塞试管）及试管架；（2）吸量管；（3）沸水浴；（4）冰浴；（5）723型分光光度计。
2、试剂（1）蒽酮试剂：称取100mg蒽酮溶于100mL98%硫酸溶液（A.R）中，用时配制。
（2）葡萄糖标准溶液（100μg/mL）:精确称取100mg干燥葡萄糖，用蒸馏水定容至1000mL。
（3）样品溶液：称取500g市售白薯，洗净切碎后用多功能食品加工机磨成浆，4层纱布压滤、弃滤液留渣，将渣放入烘箱内80℃～85℃烘干后，再用植物粉碎机（微型）研细，过筛区100目筛下物为待测样品。
（也可用市售红薯面粉代替）取样品在烘箱内150烘干，恒重后，精确称取1～5g，置于锥形瓶中，加入80mL沸蒸馏水，放入沸水浴。
不时摇动，提取半小时。
取出立即过滤，残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤，合并滤液。
冷却至室温，用蒸馏水定容至100mL。
四、实验方法(1)制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，编号后按下表操作。
每管加入葡萄糖标准液和谁后立即混匀，迅速置于冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置于冰浴中迅速冷却。
待各管溶液达室温后，用1cm厚度的比色皿，以第一管为空白，在620nm处迅速测其余各管的光吸收值。
然后以第2～7管溶液含糖量μg数为横坐标，吸光度（A620nm）为纵坐标，画出含糖量与A620nm 的相关标准曲线。
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量讲课稿
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定。
二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。
当日配制使用；葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。
三. 操作步骤葡萄糖标准曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号0 1 2 3 4 5 6标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。
在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。
在625nm波长下迅速测定各管吸光值。
根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。
四. 注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
总糖分测定(蒽酮比色法)
蒽酮比色法测糖一目的掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法二原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。
三实验器材及试剂马铃薯干粉可调试移液器或移液管可见分光光度计（723型）电子分析天平水浴锅电炉子蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到80%H2SO4中，以80%H2SO4定容到1000ml，当日配制使用。
标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml备用。
四、操作1.制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，按表1顺序加入试剂，进行测定。
以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度（mg/ml ）为横坐标作图得标准曲线。
表1 蒽酮比色法定糖——标准曲线的制作沸水浴中准确煮沸10min，取出用流水冷却，室温放10min,于620nm处比色葡萄糖浓度（mg/ml）2.样品含量的测定样品液的制作：精确称取马铃薯干粉0.1g置于锥形瓶中—→加入30ml沸水—→沸水浴30min（不时摇动）—→取出，3000rpm离心10min（或过滤）—→反复洗涤残渣2次—→合并滤液—→冷却至室温—→定容到50ml的锥形瓶中—→再从中取出1ml，再定容到10ml的容量瓶中样品液的测定：（1）取4支试管，按照表2加样（加蒽酮时需要冰水浴5min冷却）表2 蒽酮比色法定糖——样品的测定（2）加样冷却完成后置沸水中煮沸10min，取出流水冷却放置10min，620nm处比色测量各管OD值。
（3）以1号试管作为调零管，2、3、4号管的OD值取平均后从标准曲线上查出样品液相应的含糖量。
3．结果计算：C×Vw = ————×100%m，式中w：糖的质量分数（%）C：从标准曲线中查出的糖质量分数（mg/ml）V：样品稀释后的体积（ml）m：样品的质量（ml）原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化。
总糖含量的测定
实验二总糖含量的测定一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/ml(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：淀粉四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ml）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（µg）0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.植物样品中总糖的提取：精确称取0.5g，置于50 ml三角瓶中，加水15 m1，盐酸10ml，沸水浴20min，定容至100ml，得提取液。
取10ml滤液定容至100ml3.测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空平均值在标白管以等量蒸馏水取代提取液。
总糖含量的测定
实验二总糖含量的测定一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/ml(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：淀粉四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ml）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（µg）0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.植物样品中总糖的提取：精确称取0.5g，置于50 ml三角瓶中，加水15 m1，盐酸10ml，沸水浴20min，定容至100ml，得提取液。
取10ml滤液定容至100ml3.测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空平均值在标白管以等量蒸馏水取代提取液。
总糖的测定蒽酮比色方法
总糖测定——蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。
二、试剂：1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。
2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。
3、72%硫酸溶液。
三、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。
根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。
（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。
四、结果计算：总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；10-4：将ppm换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。
2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。
这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。
实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法)
3、结果计算
(C×V×n)
植物样品含糖量（％）＝
×100
(a×W×106)
C-糖含量（μg）； V-提取液体积（ml） a-吸取样品液体积（ml）；n-稀释倍数 W-样品重（g）
含糖总量一般为：2.1—20%
五、实验思考
P114：
2
下周实验：P167
植物组织中过氧化氢酶活性
测定（高锰酸钾滴定法）
实验9 可溶性总糖的测定(蒽酮法)
一、实验目的
掌握蒽酮法测定可溶性糖含量 的原理和方法。
二、实验原理
强酸可使糖类脱水成糖醛或羟甲基糖醛，生 成的糖醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成 糖醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在630nm处有 最大吸收。在10－100μg范围内其颜色的深浅 与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在３0μg 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。 一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
2、蔗糖标准曲线的制作
（1）取6支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度 的蔗糖溶液：
管号
水（ml） 蔗糖含量（μg）
0
2 0
1
0.2 1.8 20
2
0.4 1.6 40
ห้องสมุดไป่ตู้
3
0.6 1.4 60
4
0.8 1.2 80
5
1.0 1.0 100
100ug/L蔗糖标准液（ml） 0
（2）在每支试管中立即加入蒽酮乙酸乙酯试剂0.5ml 和5ml浓硫酸，混匀，盖上塞子，沸水浴中准确保温 1min取出，自然冷却至室温，在630nm波长下比色。 以标准蔗糖含量作横坐标，以吸光值作纵坐标作标 准曲线。
三、实验器材
总糖含量的测定
实验二总糖含量的测定一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/ml(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：淀粉四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ml）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（µg）0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.植物样品中总糖的提取：精确称取0.5g，置于50 ml三角瓶中，加水15 m1，盐酸10ml，沸水浴20min，定容至100ml，得提取液。
取10ml滤液定容至100ml3.测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空平均值在标白管以等量蒸馏水取代提取液。
实验[1]_蒽酮比色定糖法教材
![实验[1]_蒽酮比色定糖法教材](https://img.taocdn.com/s3/m/1dd9c55348d7c1c708a145f7.png)
多糖
淀粉 纤维素
水解后能生成多个单糖
二、糖的生理功能
1、能源物质：淀粉，糖原 2、碳源：各种有机物的碳架 3、结构物质：纤维素，肽聚糖，几丁质 4、功能物质(细胞识别的信息分子)：病毒识别，抗原抗体反应等
与膜蛋白和膜脂相连的糖——通信天线
一、实验目的
• 学习分光ห้องสมุดไป่ตู้度法的基本原理 • 学习对水果中糖含量进行测定的方法
(3) 糖样品溶液。
五 、实验操作步骤
1. 制作标准曲线：
取干试管5支，依次加入标准糖溶液 0，0.1， 0.2，0.4ml,0.8ml并依次用蒸馏水补足体积到 1mL，各管均加入蒽酮试剂4mL，震摇混匀。沸 水浴准确煮沸10 min，室温放置10min，用1号 试管溶液调零，比色测定A620（同时测定样 品）。用标准糖溶液浓度为横坐标，吸光度为 纵坐标，制作标准曲线。
计算：
样品糖含量(%) =(C×V1×D/W×V2×106)×100 C-标准曲线上查出的糖含量（µg） V1-提取总体积（ml） V2-测定总体积（ml） D-稀释倍数
W-样品重量（g）
物理意义：是当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散 射的西光物质时,起其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸 收层厚度b成正比.
二、实验原理
• 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。 蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基， 戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后溶液呈蓝 绿色，在620nm处有最大吸收。
三、实验特点
二、实验原理
分光光度法基本原理： 物质对光吸收的定量关系很早就受到了科学家的注意并进行了 研究。皮埃尔·布格（Pierre Bouguer）和约翰·海因里希·朗伯 （Johann Heinrich Lambert）分别在1729年和1760年阐明了 物质对光的吸收程度和吸收介质厚度之间的关系；1852年奥古 斯特·比尔（August Beer）又提出光的吸收程度和吸光物质浓 度也具有类似关系，两者结合起来就得到有关光吸收的基本定 律——布格－朗伯－比尔定律，简称比尔－朗伯定律。
糖的定量测定
一、目的要求
掌握蒽酮比色法定糖的原理和方法。 掌握蒽酮比色法定糖的原理和方法。
二、原理
蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。 糖在浓硫酸作用下， 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲 基糠醛, 基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成 蓝绿色糠醛衍生物， 620nm处有最大吸收 处有最大吸收。 蓝绿色糠醛衍生物，在620nm处有最大吸收。在一 定范围内,颜色深浅与糖含量成正比， 定范围内,颜色深浅与糖含量成正比，故可用于糖的 定量。 定量。 蒽酮可与其他一些糖类发生反应， 蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜 色不同。当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时， 色不同。当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时， 反应不稳定，呈现红色。 反应不稳定，呈现红色。 本法多用于测定糖原含量， 本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄 糖含量。 糖含量。
五、计算
1、从标准曲线上查得样品浓度 、 2、利用直线方程，计算得样品浓度 、利用直线方程，
六、注意事项
1、各试管的处理应一致，测定溶液应同时放入沸水 各试管的处理应一致， 中，再同时从沸水浴中取出。 再同时从沸水浴中取出。 2、加样要精确，否则测出的值会有很大的误差。 加样要精确，否则测出的值会有很大的误差。 3、测A620时，应该要等试管冷却之后才能进行测 A620时 定。
三、试剂与器材
1. 试剂 蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000ml 80％(V／ 蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000ml 80％(V／ V)硫酸（!）中，当日配制使用。 V)硫酸 硫酸（ 标准葡萄糖溶液：(0．1mg／m1)100ml葡萄 标准葡萄糖溶液：(0．1mg／m1)100ml葡萄 糖用蒸馏水定容至1000ml(可滴加几滴甲苯作防 糖用蒸馏水定容至1000ml(可滴加几滴甲苯作防 腐剂) 腐剂)。 2. 器材 样品、移液器、试管、分光光度计、水浴锅。
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总糖的测定-蒽酮比色
法
植物组织中总糖和还原糖含量的测定（蒽酮比色法）2010-5-24
一、实验目的
掌握蒽酮比色法测定总糖和还原糖含量的原理和方法，学会正确使用分光光度计。
二、实验原理
游离的己糖或多糖中的己糖基、戊糠醛及己糖醛酸在浓硫酸的作用下脱水生成糠醛衍生物，糠醛衍生物与蒽酮缩合成蓝色的化合物，在620nm处有最大吸收，在一定糖浓度范围内（200ug/ml），溶液吸光度值与糖溶液的浓度成线性关系。
用酸将植物组织中没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，或直接提取植物组织中的还原糖，即可对植物组织中的总糖和还原糖进行定量测定。
三、实验材料
1．可见分光光度计、电子天平(1/100)、粉碎机、水浴锅、电炉。
2．研钵、量筒、三角烧瓶、烧杯、容量瓶、玻璃漏斗、试管1.5cm×15cm、刻度吸管、胶头滴管、pH试纸、坐标纸。
3．植物原料，如银耳、木耳、菜叶等。
四、实验试剂
1．蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于l000ml体积分数为80％的硫酸中，当日配制使用。
2．标准葡萄糖溶液(0.1mg／m1)：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1 000ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。
3．6mol／L HCl溶液：50ml盐酸，加水至100ml。
4．10％NaOH溶液：称取10g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100ml。
五、操作步骤
1．葡萄糖标准曲线的绘制
取干净试管6支，按下表进行操作。
以吸光度为纵坐标，各标准液浓度(mg／m1)为横坐标做图。
2．样品中还原糖的提取和测定
称取植物原料干粉0.1～0.5g，加水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30ml的蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
于50℃水浴中保温半小时（使还原糖浸出），取出，冷却后定容至100ml。
过滤，取lml滤液进行还原糖的测定：吸取lml总糖类溶液置试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4ml蒽酮试剂，沸水浴中准确加热10min，取出用自来水冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。
（样品液显色后若颜色很深，其吸光度超过标准曲线浓度范围，则应将样品提取液适当稀释后再加蒽酮显色测定）。
3．样品中总糖的提取、水解和测定
称取植物原料干粉0.1～0.5g，加水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约12ml的蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
再向三角烧瓶中加入
6mol/L盐酸10ml，搅拌均匀后在沸水浴中水解半小时，冷却后用10％NaOH溶液中和pH 呈中性。
然后用蒸馏水定容至100ml，过滤，取滤液10ml，用蒸馏水定容100ml，成稀释1000倍的总糖水解液。
取lml总糖水解液，测定其还原糖的含量：吸取lml总糖类溶液置试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4ml蒽酮试剂，沸水浴中准确加热10min，取出用自来水冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。
六、实验结果
按照下列公式分别计算植物原料干粉中还原糖和总糖的质量分数（ω）。
ω（还原糖）= （C
1V
1
/m）×100％
ω（总糖）= （C
2V
2
/m）×0.9①×100％
式中ω（还原糖）：还原糖的质量分数（％）；ω（总糖）：总糖的质量分数（％）；C
1
：还原糖的质量浓度（mg／ml）；
C
2
：水解后还原糖的质量浓度（mg／ml）；
V
1
：样品中还原糖提取液的体积（m1）；
V
2
：样品中总糖提取液的体积（m1）；
m ：样品质量（mg）。
注①：计算总糖含量的公式，在测定干扰杂质很少、还原糖含量相对总糖含量很少时适用，乘0.9是为了从测定出的总糖水解成的单糖量中，扣除水解时所消耗的水量。
七、注意事项
1．总糖：食品中的总糖通常是指具有还原性的糖（葡萄糖,果糖,乳糖,麦芽糖等）和在测定条件下能水解为还原性单糖的糖的总量。
2．本法适用于可溶性还原糖测定。
测定结果是还原性糖和能水解为还原性糖的总和。
3．如要求结果中不含淀粉，则样品处理不应用高浓度酸，而应改用80%乙醇。
4．如提取液中有较多的可溶性蛋白，必须先除去蛋白。
5．若样液较深，可用活性碳脱色。