两种黑色素瘤B16细胞肺转移小鼠模型的构建和比较_李佳悦
?基础论著? 两种黑色素瘤B16细胞肺转移小鼠模型的
构建和比较
李佳悦朱欣凯王萍钮利喜
【摘要】 目的 采用尾静脉接种法建立C57BL/6小鼠和KM小鼠两种黑色素瘤B16细胞肺转移
动物模型，观察小鼠肺部成瘤过程，并对两种模型进行比较。制作肿瘤切片，通过HE染色分析两种
肿瘤模型的组织病理学特征。方法培养B16黑色素瘤细胞至对数生长期时收集细胞，用生理盐水
调整浓度为5×106/ml备用。将备好的B16细胞通过尾静脉接种小鼠，每只注射0.2 ml。接种后，两种
小鼠每隔一定时间随机各取一只小鼠处死，解剖取肺，观察成瘤情况，计数肺表面的瘤结节数，测
量瘤结节大小。以出现瘤结节开始计时，记录小鼠荷瘤时间。形成稳定的肿瘤模型后，制作肿瘤组
织切片，HE染色进行病理学观察分析。结果B16细胞尾静脉接种C57BL/6小鼠和KM小鼠，均能形
成肺转移模型，但两种小鼠成瘤情况差异较大。KM小鼠的荷瘤时间比C57BL/6小鼠荷瘤时间长。HE
染色结果显示黑色素瘤B16细胞在两种小鼠的肺组织中均形成巢团状的转移瘤，且两种模型肺转移
瘤均多分布在支气管周围。结论通过对C57BL/6小鼠和KM小鼠两种黑色素瘤B16细胞肺转移小鼠
模型的成瘤特点的分析比较，可以看出KM小鼠更适合用于研究新的肺肿瘤治疗药物，为研究黑色素
瘤的发生发展提供依据。
【关键词】 B16细胞；肺转移小鼠模型；尾静脉
Establishment and comparison of two kinds of lung metastasis mouse models Li Jiayue, Zhu Xinkai,
Wang Ping, Niu Lixi. Institute of Biotechnology, Shanxi University, Taiyuan 030006, China
Corresponding author: Niu Lixi, Email: nlx@https://www.360docs.net/doc/308343578.html,
【Abstract】 Objective To observe the tumorigenic process, two pulmonary metastatic models
of melanoma B16 cells were established and compared using C57BL/6 and KM mice, respectively.
Methods Tail intravenous injection of 1×106 melanoma B16 cells/mouse resulted in macroscopic disease
by 4-9 days and a randomly selected mouse was sacrificed in a certain interval to survey the morphologic
characteristics of melanoma. The number of tumor nodules in the lung surface was counted and the size of
tumor nodules was measured. The tumor-burdened time of mice was recorded and the tumor sections were
made for pathological observation and analysis. Results HE staining showed that each mouse in the B16
cell injection groups had nest-shape metastatic foci distributed around the bronchi in the lung, but the
tumor-burdened time was significantly different which was longer in KM mice than in C57BL/6 mice.
Conclusion By comparing the characteristics of two pulmonary metastatic models of C57BL/6 mice and
KM mice, we can concluded that the B16 melanoma models in KM mice were ideal tumor models which
were suitable for researching the new drugs in lung cancer treatment. Our research would provide evidence
for the occurrence and development of melanoma.
【Key words】 B16 cells; Pulmonary metastatic mouse model; Tail vein
肺肿瘤又叫支气管肺癌（lung carcinoma）是常见的恶性肿瘤之一，近年来肺癌的发病率和死亡
DOI:10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2015.19.022
基金项目：山西省青年基金资助项目（2011021035-5）
作者单位：030006 太原，山西大学生物技术研究所
通讯作者：钮利喜，Email: nlx@https://www.360docs.net/doc/308343578.html, 率都有明显增高的趋势，已成为人类因癌症死亡的主要原因[1-2]。但其发病机制目前尚未完全阐明，目前治疗方法以化疗和放疗为主，治疗带来的不良反应给患者造成极大的痛苦，治疗效果亦不尽人意。新的有效的肺肿瘤治疗的方法一直在探索中。肿瘤模型是研究恶性肿瘤病因、发展过程和探索肿瘤治
疗方法，进行各种体内实验研究的基础[3]。所以建立合适的肿瘤模型是探索新的有效的肺肿瘤治疗方法的前提[4]。在各类动物中，由于小鼠已有明确定型的各种遗传品系，对肿瘤有易感性以及成本较低，因而在肿瘤研究方面较为常用。本实验通过尾静脉注射小鼠黑色素瘤细胞B16，构建C57BL/6小鼠和KM小鼠两种B16细胞肺转移动物模型。B16细胞是来源于C57BL/6小鼠皮肤的自发性肿瘤[5]，此瘤株主要发生肺转移[6]。B16细胞在小鼠体内的生长及转移特性与人黑色素瘤非常相似，为理想的黑色素瘤动物模型，已广泛地用于研究黑色素瘤发生发展、转移和药物筛选等研究[7]。有关各种小鼠的B16细胞肺转移动物模型的建立已有文献报道，但这些文献中每次取肺记录肿瘤生长情况的间隔时间较长，或者接种后7～8 d才开始记录肿瘤生长情况。详细记录某种小鼠B16细胞肺转移动物模型成瘤过程的报道很少，本文记录了C57BL/6小鼠和KM小鼠两种黑色素瘤B16细胞肺转移小鼠模型的成瘤过程，为研究黑色素瘤发生发展提供依据，为研究新的肿瘤治疗药物实验，选择恰当的药物处理时间点提供一定的参考。另外本文分析比较了两种小鼠模型的成瘤特点，为肺肿瘤模型的选择提供实验依据。
材料和方法
一、实验材料
1. 实验动物：6～7周龄C57BL/6小鼠16只，雌雄各半；6～7周龄KM小鼠16只，雌雄各半，均购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号：SCXK（京）2007-0001。室温（22±2）℃，光照12 h循环1次，进食和饮水自由进行[8]。
2. 细胞：小鼠B16细胞购自上海细胞库。细胞复苏后，用含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养基，加青链霉素（青霉素100 U/ml，链霉素100 μg/ml），置于37 ℃、5% CO2及饱和水蒸气的混合气体孵箱中培养[9]，每1～2 d换液，每3 d传代一次，传代用0.25%胰酶消化。台盼蓝拒染法确定活细胞数，每次实验细胞活力在95%以上。
3. 实验仪器：超净工作台（苏州市创洁净化设备有限公司）；HF240 CO2培养箱（力康生物医疗科技控股有限公司）。
二、实验方法
1. 动物模型的建立：取对数生长期的细胞，用0.25%胰酶消化后，培养基重悬收集细胞，用无菌生理盐水清洗一次，离心，再用适量生理盐水悬起，用计数板计数，调整细胞密度为5×106/ml备用。
C57BL/6小鼠6只，KM小鼠6只，雌雄各半。用75%乙醇消毒小鼠尾部皮肤，取上述B16细胞悬液接种于小鼠尾静脉，每只各接种0.2 ml[10-12]，即每只小鼠接种1×106个B16细胞。接种后每隔一定时间两组小鼠各随机取一只，用脊椎断裂法处死，观察其肺部成瘤情况。
2. 观察指标：观察接种B16细胞后两种小鼠体重及生活习性的改变等情况。观察解剖后小鼠肺的颜色、形态。记录瘤结节出现时间，瘤结节的数目，测量瘤结节的大小。
3. 两种小鼠荷瘤生存时间比较：C57BL/6和KM小鼠各10只，用上述方法接种B16细胞。饲养小鼠直至其自然死亡。以出现瘤结节开始计时，记录小鼠荷瘤时间。
4. 取材、固定、HE染色：切取形成稳定肿瘤模型后的肺组织，10%中性甲醛固定，石蜡组织包埋、切片和HE染色。进行病理学观察分析及拍片。
结 果
一、肺转移肿瘤模型的建立
1. C57BL/6小鼠肺转移模型：接种B16细胞后，C7BL/6小鼠体重无明显变化，生活习性未见改变。接种第2天引颈处死1只，解剖后小鼠肺表面光滑呈粉红色，未见黑色素瘤出现。接种第4天，小鼠肺表面出现轻微的皱缩，颜色略泛黄，肺各叶有淡黑色瘤结节出现，瘤结节直径在0.2～0.4 mm。左叶靠上处出现约
2.5 mm的线状黑色素瘤。接种第7天，肺部整体颜色泛白，肺组织发干，肺左叶出现轻微的裂痕，肺各叶淡黑色的瘤结节数目增多。接种第10天，肺部颜色泛白略带黑色，肺部出现皱缩，肺表面褶皱成块状，肺左叶上部的边缘开始向内卷曲。但瘤结节数目几乎没有增加。瘤结节的大小也没有明显的增加。瘤结节颜色依然呈淡黑色。接种第13天，瘤结节呈黑色，清晰可见，瘤结节数目及瘤结节的直径显著增加。接种第16天，肺体积膨大，肺边缘向内卷曲，瘤结节数目增多，直径显著增加，各瘤结节大小差异较大，直径约0.3～3 mm，肺的颜色近乎黑色（图1 A）。
2. KM小鼠肺转移模型：接种B16细胞后，KM 雄鼠体重无明显变化，生活习性未见改变。KM雌
鼠在接种B16细胞后的体重开始下降，活动减少，第4天时体型明显比雄鼠消瘦。从第5天开始逐渐好转，到第12天时恢复正常。接种第3天引颈处死1只，解剖后小鼠肺部表面光滑呈粉红色，未见黑色瘤结节出现。左叶和心后叶各有数个约1.2 mm的小红点。接种第6天，小鼠肺部表面出现皱缩，颜色泛黄，左叶和右上叶各出现一个直径约1.5 mm的小红点，未见有黑色瘤结节出现。接种第9天，解剖后小鼠肺部干裂皱缩，肺边缘向内卷曲，各个肺叶都有数个隐约可见直径约0.3 mm的淡黑色瘤结节出现。接种第12天，瘤结节呈黑色，清晰可见，较第9天，瘤结节数目增多，直径显著增大。接种第15天，肺部边缘发白，肺表面出现密集的小突起，瘤结节数目增多，直径较第12天无明显变化。各瘤结节的大小相当，瘤结节分布均匀。接种第18天，瘤结节直径显著增加，瘤结节数目有所增加，各瘤结节大小差异较大，分布不均匀，局部瘤结节连接成线或密集成片。肺左叶上凸起直径约5 mm的黑色肿瘤（图1 B）。
二、两种模型成瘤特点的比较
两种小鼠在接种B16黑色素瘤细胞以后肺部颜色都逐渐开始泛白发黄，肺部边缘都开始向内卷曲，肺组织干裂皱缩。
接种肿瘤细胞以后，C57BL/6小鼠在第4天就有瘤结节出现，而KM小鼠在第9天才发现肺部有瘤结节出现；瘤结节出现后，C57BL/6小鼠从瘤结节出现的第4～7天之间瘤结节的数目增加了3倍，从第7天到第10天之间瘤结节的数目几乎保持恒定，在第10天到第16天之间瘤结节的数目爆发式增加，而KM小鼠肺部瘤结节的数目一直以稳定的趋势增加（图2）；C57BL/6小鼠，从第4天到第10天期间，瘤结节隐约可见，颜色呈淡黑色。到第13天时瘤结节才清晰可见，但形态不规整。KM小鼠，瘤结节颜色呈黑色，清晰可见，形状接近圆形。与KM小鼠相比C57BL/6小鼠肺部各瘤结节直径差异较大（表1，2）。
表1 C57BL/6小鼠接种B16细胞后肺部瘤结节大小
随时间的变化（mm，x s
±）
接种B16细胞后时间直径
4 d 0.35±0.092
7 d 0.38±0.100
10 d 0.38±0.102
三、两种模型荷瘤生存时间比较
C57BL/6小鼠在荷瘤第12天出现死亡，荷瘤第
表2 KM小鼠接种B16细胞后肺部瘤结节大小
随时间的变化（mm，x s
±）
接种B16细胞后时间直径
9 d 0.30±0.067
12 d 0.77±0.107
15 d 0.78±0.103
18 d 1.92±0.121
15天10只小鼠全部死亡。KM小鼠在荷瘤第22天出现死亡，荷瘤第25天10只小鼠全部死亡（图3）。
四、两种肿瘤模型的组织病理学特征
镜下见C57BL/6和KM小鼠肺转移模型组织切片，B16肺转移瘤细胞均呈巢团状排列，细胞呈圆形、椭圆形或不规则形，胞核深染，核质比较大，异型明显，两种模型肺转移瘤均多分布在支气管周围（图4）。
讨论
目前肿瘤治疗所应用的大多数药物，都是经动物移植性肿瘤实验而被发现的，它是筛选抗肿瘤新药中最常用的模型。该方法通过接种一定量瘤细胞或无细胞滤液（病毒性肿瘤）后，可以使一群动物带有相同的肿瘤，生长速率一致，个体差异较小，接种存活率近100%。对宿主的影响也类似，对药物的敏感性基本一致，易于客观判断疗效。C57BL/6小鼠为黑色近交系动物，其B16黑色素瘤模型成瘤率高，但其本身为黑色小鼠，给黑色素瘤的观察和接种等带来不便，给实验带来一定的影响。KM小鼠为白色远交群小鼠，广泛用于药理学、毒理学等领域研究以及药品、生物制品的生产与检定。我们的研究表明，B16细胞株在C57BL/6小鼠和KM小鼠均能建立稳定的肿瘤模型，但成瘤特点差异较大。
实验结果表明，C57BL/6小鼠从肺部出现清晰可见的瘤结节到肺部溃烂死亡只有5 d左右的时间，所以在用该动物模型研究新的肿瘤药物时，应考虑在出现清晰可见的瘤结节前就对小鼠用药，若在出现清晰可见的瘤结节时才用药，则可能会由于小鼠荷瘤时间太短，药物还未生效小鼠就死亡了。KM 小鼠在形成稳定的肿瘤模型后肿瘤生长较为缓慢，生长速度较为恒定，荷瘤时间较长。C57BL/6小鼠和KM小鼠尾静脉注射B16细胞都只在肺部成瘤未见向其他脏器转移的迹象。C57BL/6小鼠和KM两种小鼠都能够建立黑色素瘤B16细胞肺转移动物模型，但KM小鼠荷瘤时间更长，更适合用于作为肺转移瘤小鼠模型来研究新的肺肿瘤治疗药物。
参 考 文 献
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（收稿日期：2015-02-10）
（本文编辑：戚红丹）
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黑色素瘤多发转移不可怕 合适的方案可延长生命
黑色素瘤是来源于黑色素细胞的一类恶性肿瘤，常见于皮肤，亦见于黏膜、眼脉络膜等部位。在我国发病率比较低，但是黑色素瘤恶性程度比较高，容易出现远处转移和扩散，不仅给患者带来痛苦，还会增加治疗的难度，此时选择一个合适的治疗方案是比较重要的。 黑色素瘤这种疾病早期只有卫星灶、溃疡、反复不愈、区域淋巴结转移和移行转移。晚期黑色素瘤根据不同的转移部位症状不一，容易转移的部位为肺、肝、骨、脑。眼和直肠来源的黑色素瘤容易发生肝转移。转移性黑色素瘤患者可能出现一系列非特异性症状，包括食欲减退、恶心、呕吐及乏力等。此外，黑色素瘤转移至机体各个不同部位可出现相应不同症状，例如骨转移可能出现骨痛、肺转移可能出现咳嗽、咯血等。 黑色素瘤出现多发转移病情多已经发展到了晚期，此时很多患者和家属都比较害怕，认为出现了转移，治疗也没有什么意义，从而放弃治疗，其实专家介绍，黑色素瘤多发转移虽然比较难治，但是并不是被判了死刑，选择合适的治疗方案是可以减少痛苦，延长生命的，建议患者不要丧失治疗的信心。 黑色素瘤多发转移一般手术治疗不适合，而放疗属于局部治疗，无法杀伤游离在外的癌细胞，临床上多采用全身性的化疗和中医药进行治疗，化疗是利用不同的化疗药物对全身的癌细胞进行杀伤，可起到杀灭癌细胞，缩小肿瘤，控制病情的目的，但是化疗本身是一种以毒攻毒的治疗方法，患者会出现恶心、呕吐、腹泻、乏力、食欲不振、白细胞减少和血小板下降等症状，长期效果较差，易复发，对于年龄偏大，体质较差，有恶病质的患者应该慎用。 黑色素瘤多发转移也可单独采用中医药治疗，中医治疗黑色素瘤多发转移，具有很强的整体观念，多种方法联合作战，内服与外敷相结合，病变部位与经络穴位用药相结合，治疗与康复同时进行，攻毒与扶正并重，全方位、多通道，立体作战的策略，可全面控制病情，改善症状，延长病人的生命。 临床上，在众多的中医疗法中，汲取中医药精髓的“三联平衡疗法”获得了较好的口碑，应用广泛。注重从患者整体入手，采用天然中草药，通过对不同病人，病因病机的辩证治疗，起到“培元固本”“化痰散结”“排毒减毒”的功效，从而减轻病人痛苦，延长病人生命的效果。 可见黑色素瘤多发转移并不是无法治疗，建议患者根据情况选择合适的治疗方案，此外也要保持良好的心态，做好饮食方面的调理工作，给予合理的饮食搭配，提高病人的免疫力，让病人更好的接受治疗。
黑色素瘤什么时候发生转移
黑色素瘤可出现在皮肤的表面，也可以生长在人的胃和眼睛内部，主要诱因是受到太阳光的照射，黑色素瘤是一种恶性程度比较高，预后比较差的肿瘤，而转移是黑色素瘤发展恶化的标识，给患者带来很大的痛苦，也给治疗带来一定的难度，那么黑色素瘤什么时候发生转移呢？ 具体什么时候转移，每个患者的病情、患者的体质等都是不一样的，所以什么时候转移很难确定，但是黑色素瘤存在很多的特征，转移早是恶性黑色素瘤的重要特性，其转移途径主要是直接蔓延、血行转移以及淋巴转移，这也是肿瘤转移的普遍途径。直接蔓延可导致肿瘤的局部侵犯，而血行转移和淋巴结转移则可导致远处转移，这也是日常生活中大家熟知的转移。黑色素瘤出现转移，患者一定要及时治疗，这样才能最大限度的延长患者的生命。 黑色素瘤患者出现扩散、转移，表明病情已经进入中晚期，患者的治疗目的在于尽量延长生命，提高生活质量。临床上，不少黑色素瘤中晚期患者一味追求消灭肿瘤，企图达到完全康复的目的，但往往事与愿违。由于中晚期黑色素瘤患者的机体状态较差，而手术、放化疗在杀伤癌细胞的过程中也会损伤患者机体，使机体免疫力更加低，从而为癌细胞的生长创造环境。临床上，不少黑色素瘤中晚期患者因过度治疗而加速了死亡，因此，中晚期黑色素瘤患者的治疗多选择中医药治疗。 中医治疗黑色素瘤具有很强的整体观念，辩证论治，纯天然中草药治疗，内服加外用，不伤正气，攻补兼施，无论早期还是中晚期病患都可以使用，包括术后、放化疗期间，甚至一些危重的病患，只要能进流食，都可以应用。临床上，汲取中医精华的三联平衡疗法具有不错的患者口碑，治疗效果不仅得到了患者及家属的认可，更是誉享国际，得到了国内外诸多知名肿瘤专家的称赞。该疗法是由袁氏中医世家第八代传人，拥有三十余载临床抗癌实战经验的袁希福教授创立的中医药疗法。 黑色素瘤扩散后除了积极的治疗外，患者的心理状态对于延长生存时间也是很重要的，保持一个良好的心理状态，才能在患病之后积极的配合医生的诊治。在患病后如果只知自怨自艾，不知道积极的接受治疗，这样不仅不利于疾病的治疗，还有可能加重病情。
建立小鼠肿瘤模型的研究进展
建立小鼠肿瘤模型的研究进展 摘要：建立一种理想的肿瘤动物模型对研究肿瘤的发病、治疗和预防有重大的意义。其中小鼠肿瘤模型具有生长周期快、易获得、易操作等优点被基础实验研究所广泛采用，如何选择和建立一个合适的小鼠肿瘤模型对肿瘤的整个研究有着举足轻重的作用。 关键字：肿瘤，动物模型，小鼠 肿瘤，是一种严重威胁人类健康的多发病和常见病。对肿瘤的研究一般都是在人类疾病动物模型的基础上展开的。建立一个完全反映人类疾病的动物模型比较困难，但可依据不同的实验目的选择相应的动物实验模型。 1.实验动物的选择 可用作肿瘤模型的动物有很多，小鼠肿瘤模型作为其中一种常用模型主要因为有以下几个优点。（1）易获得，常用的肿瘤模型小鼠通常采用SPF级小鼠，SPF级小鼠一般医学院校及研究所都能买到。（2）生长周期短，一般小鼠肿瘤模型两周左右就能长大，能大大缩短实验周期。（3）易操作，小鼠的动物实验操作一般简便，因此可适当增加组内样本数量，使实验数据更具说服力。 2.理想的建立肿瘤模型应具备的条件 （1）肿瘤生长的过程应与人类肿瘤生长过程相似，做到尽可能复制出与人类肿瘤相同的模型。 （2）制作模型的方法简单易行。 （3）动物模型的重复性要好，要能满足实验的多次重复试验结果稳定性好。 （4）采用的建模方法对实验人员和环境无危害或危害较小。 3.肿瘤来源的选择 现在世界上保有近500种的动物移植瘤，但常用于筛药的不到40种，多数为小鼠肿瘤，其次是大鼠和仓鼠移植瘤，包括小鼠L1210淋巴白血病，P1534淋巴白血病，艾氏腹水瘤，Friehd病毒白血病，肉瘤180，白血病P388，Lewis肺癌，腺癌755，白血病615，Walker-256，吉田肉瘤，肉瘤45，Liol淋巴瘤，Dunning 白血病，Ｗagner癌肉瘤，白血病L5170Y，P1798淋巴肉瘤，LPC-1浆细胞瘤，淋巴瘤8，B16或Cloadman黑色素瘤，Ridaway骨肉瘤，Gardner 淋巴肉瘤，肉瘤37，P315白血病，Mur hy-sturm淋巴肉瘤，Jensen肉瘤，Geurin氏癌，仓鼠十二指肠腺癌和人体肉瘤HSL第1代杂交鼠移植。它们对抗癌药作用的敏感性大致可分
动物实验方法总结：组织研磨管的使用方法 临床样本或动物取材注意事项 动物模型
组织研磨管的使用方法 1.作用：只适用于蛋白提取、RNA提取、基因组DNA提取时的组 织裂解，不做他用； 2.组织研磨管：容量为1.5ml, 里面已经提前放置了研磨珠（有时也 不放置），研磨液（Trizol或RIPA裂解液，有时也不放置）一般在取回后才加入，如果已经加入了研磨液，请离心后才拧开管盖，以免研磨液溢出，对皮肤造成伤害，所以操作时，要小心注意！ 3.组织：把收取的组织分切，用生理盐水或PBS缓冲液把分切的组 织上的血液漂洗干净，然后用医用纱布或滤纸把组织表面的水分吸干，然后放入研磨管（组织体积大小为1颗绿豆至2颗黄豆，根据实际情况决定）中，然后把放入的组织尽量剪碎； 4.存放：上述过程应尽量在最短的时间内操作完毕，立即用液氮冻 结，然后置于液氮或-80℃保存； 5.操作事项：操作时间尽可能短，做好一个，立马放置一个；
实验方法总结（3）：动物模型部分 1、研究肿瘤细胞增殖 (2) 2、研究肿瘤细胞转移 (3) 2.1. 体外(浸润模型) (3) 2.2. 体内(转移模型) (3) 3、研究肿瘤细胞耐药 (5) 3.1. 耐药细胞株的建立 (5) 3.2. 裸鼠移植瘤耐药模型的建立 (6) 从肿瘤起源分，肿瘤动物模型的分类如下： 从研究目的来分，可以从增殖、转移、耐药三个角度来分析： 1、研究肿瘤细胞增殖 细胞准备：GeneA敲减慢病毒感染细胞扩增至需要的细胞量。分为：空白对照组、阴性对照组、实验组。 取Balb/c裸鼠，雄性，6周龄，每组10只，适应一周后进行肿瘤细胞注射。
XXX细胞消化离心后制成单细胞悬液，计数后取适量的细胞用PBS悬浮，在Balb/c裸鼠侧腹部皮下接种。每只接种2×106个细胞，注射体积为100 μL。此后，每隔5天测量注射部位肿瘤的体积。30天后裸鼠小鼠腹腔注射80 mg/kg 戊巴比妥钠，小鼠麻醉后置蓝色背景布上拍照（侧卧位，接种部位朝上），小鼠颈椎脱臼处死，取出肿瘤称重，将肿瘤置蓝色背景布上拍照，肿瘤一分为二，一份4%多聚甲醛固定，待后续病理分析，一份-80℃冻存。 2、研究肿瘤细胞转移 肿瘤转移的模型包括两大类：体外(浸润模型)和体内(转移模型)。体外(浸润模型)：了解肿瘤细胞对周围相连组织的侵润性。体内模型主要研究肿瘤细胞的转移性即肿瘤细胞在远端组织形成病灶的能力。 2.1. 体外(浸润模型) 例：浸润型脑胶质瘤动物模型的建立 方法：取若干只Balb/c免疫缺陷裸鼠，将分离和鉴定并转染携带绿色荧光蛋白的脑胶质瘤干细胞立体定向法行小鼠颅内接种，每组10只。小鼠麻醉后头部正中切口，剥离骨膜后钻孔(坐标是冠状缝后0.5 cm，矢状缝右侧2.5 cm) 。取2 μL胶质瘤干细胞以1×104 cells /只小鼠的剂量，经微量注射器缓慢注射入鼠脑纹状体内(深度是2.5 ～3 mm) 。在确定的时间点处死一部分动物进行荧光( 立体荧光显微镜下) 病理证实和比较，同时检查脑胶质瘤干细胞的体内生长特征以及干细胞标志物等。 2.2. 体内(转移模型)
黑色素瘤会转移到哪里,如何治疗
黑色素瘤是皮肤癌的一种，其恶性程度高、预后很差，因而其发病率虽然仅占皮肤癌的10%，但死亡率却占皮肤癌的80%，日常生活中一定要引起警惕。转移是黑色素瘤比较常见的，对患者的生命健康造成重大威胁，那么黑色素瘤会转移到哪里呢？下面一起来看一下。 黑色素瘤常见的转移方式： 1)皮肤粘膜上直接出现黑色素瘤卫星结节。 2)肿瘤细胞的淋巴系统转移，支气管旁，肺门、纵膈淋巴结;胸外是锁骨上、腋下和上腹部淋巴结为转移常见方向。 3)肿瘤细胞随着淋巴转移出现在患者身体局部，局部的肿瘤细胞进一步扩散会伴随血液出现转移，血液转移是最严重的远处转移现象，黑色素瘤患者临床死亡率绝大部分是因为患者出现了血液转移。 4)医源性转移，手术过程中微小肿瘤细胞局部扩散，继而生长。 黑色素瘤出现了转移往往治疗难度增加，此时选择合适的治疗方案是延长患者生存期的重要保障，选择合适的治疗方案，积极的治疗，依然可以减少患者的痛苦，延长患者的生命，甚至有些患者实现长期带瘤生存，因此患者和家属一定要积极治疗疾病。 黑色素瘤出现转移手术切除的远期疗效尚不令人满意，其主要原因之一是术后复发和转移。因此黑色素瘤出现转移一般是不建议手术治疗，放化疗虽然能杀灭癌细胞，控制病情的发展，短期内效果显著，但是由于具有很大的副作用，导致治疗不能顺利进行，因此在放化疗的时候常会配合中医药进行治疗能起到增效减毒的作用。 黑色素瘤出现转移中医治疗也是不可少的，特别是对于年龄偏大，体质较差、病情严重的患者，更适合采用温和的中医治疗。中医治疗根据每个患者体质有别，年龄不同，并发症不同，表现并不完全一样，在治疗时，对症下药，既有固定不变的主方，又有灵活加减不断变化的药物，不仅能改善患者的并发症，提高患者的生活水平，还能有效延长患者的生存时间，甚至实现长期的带瘤生存。 临床上，在诸多的中医药疗法中，汲取中医药精髓的“三联平衡疗法”受到很多患者和家属的好评。该疗法既攻邪不伤正、扶正不恋邪，又能辩证施治，还具有不手术、不放化疗、不住院、无痛苦、无风险、无毒副反应，花费少等特点。通过天然中草药，对病人机体内环境的调节，可以有效实现减轻病人痛苦，提高生活质量，延长病人生命的效果。 黑色素瘤会转移到哪里？只要不放弃治疗，即使是转移了还可以治疗，而中药调理很适合于晚期包括转移的患者，因为这是一种保守治疗的方法，很大程度上减轻了患者的痛苦，中医是标本兼治的，治疗的效果也是比较稳定的，因此选择正确的治疗方法，为治疗争取时间，才能早日康复。
实验方法总结：动物模型部分
实验方法总结：动物模型部分 1、研究肿瘤细胞增殖 (1) 2、研究肿瘤细胞转移 (2) 2.1. 体外(浸润模型) (2) 2.2. 体内(转移模型) (2) 3、研究肿瘤细胞耐药 (4) 3.1. 耐药细胞株的建立 (4) 3.2. 裸鼠移植瘤耐药模型的建立 (5) 从肿瘤起源分，肿瘤动物模型的分类如下： 从研究目的来分，可以从增殖、转移、耐药三个角度来分析： 1、研究肿瘤细胞增殖 细胞准备：GeneA敲减慢病毒感染细胞扩增至需要的细胞量。分为：空白对照组、阴性对照组、实验组。 取Balb/c裸鼠，雄性，6周龄，每组10只，适应一周后进行肿瘤细胞注射。
XXX细胞消化离心后制成单细胞悬液，计数后取适量的细胞用PBS悬浮，在Balb/c裸鼠侧腹部皮下接种。每只接种2×106个细胞，注射体积为100 μL。此后，每隔5天测量注射部位肿瘤的体积。30天后裸鼠小鼠腹腔注射80 mg/kg 戊巴比妥钠，小鼠麻醉后置蓝色背景布上拍照（侧卧位，接种部位朝上），小鼠颈椎脱臼处死，取出肿瘤称重，将肿瘤置蓝色背景布上拍照，肿瘤一分为二，一份4%多聚甲醛固定，待后续病理分析，一份-80℃冻存。 2、研究肿瘤细胞转移 肿瘤转移的模型包括两大类：体外(浸润模型)和体内(转移模型)。体外(浸润模型)：了解肿瘤细胞对周围相连组织的侵润性。体内模型主要研究肿瘤细胞的转移性即肿瘤细胞在远端组织形成病灶的能力。 2.1. 体外(浸润模型) 例：浸润型脑胶质瘤动物模型的建立 方法：取若干只Balb/c免疫缺陷裸鼠，将分离和鉴定并转染携带绿色荧光蛋白的脑胶质瘤干细胞立体定向法行小鼠颅内接种，每组10只。小鼠麻醉后头部正中切口，剥离骨膜后钻孔(坐标是冠状缝后0.5 cm，矢状缝右侧2.5 cm) 。取2 μL胶质瘤干细胞以1×104 cells /只小鼠的剂量，经微量注射器缓慢注射入鼠脑纹状体内(深度是2.5 ～3 mm) 。在确定的时间点处死一部分动物进行荧光( 立体荧光显微镜下) 病理证实和比较，同时检查脑胶质瘤干细胞的体内生长特征以及干细胞标志物等。 2.2. 体内(转移模型)
指甲黑色素瘤早期症状黑色条纹
黑色素瘤一般指恶性黑素瘤，是一种能产生黑色素的高度恶性肿瘤。大多见于30岁以上成年人，发生于皮肤、粘膜和内脏器官。黑色素瘤的预后多数较差，晚期可有淋巴道及血液转移。是由皮肤和其他器官黑素细胞产生的肿瘤。虽其发病率低，但其恶性度高，转移发生早，死亡率高，因此早期诊断、早期治疗很重要。下面就给大家介绍一下指甲黑色素瘤的早期症状，帮助患者更好治疗疾病。 指甲黑色素瘤早期症状 指甲下黑线或黑褐色病变突然增大，尤其在45岁以上者;甲下损伤治疗经久不愈者;指(趾)外伤后持续存在甲下损害症状者;病情发展迅速，局部溃烂严重者。当患者发现以上几种情况时，应及时切取甲下组织行病理学检查，这样就可以及早明确诊断。 指甲黑色素瘤真正要担心的是只有一个指甲出现黑色条纹，此时可能是良性黑色素瘤、指甲下出血或恶性黑色素瘤，或反复局部外伤、摩擦刺激甚至是甲癣的结果。由此可见，指甲黑色素瘤患者要时刻注意自己的身体健康，当发现以上现象时一定要及时到正规的皮肤病医院进行检查治疗，以免引起慢性肾衰竭，进而威胁到患者朋友们的生命健康。 指甲黑色素瘤一旦诊断，患者一定要及时治疗，临床上治疗黑色素瘤的方法主要有手术、放化疗和中医治疗等。手术是黑色素瘤的首选治疗方法，尤其是早期患者。通过手术对癌肿的切除可快速、有效控制病情发展，提高患者的5年生存率。由于黑色素瘤对放化疗不敏感，放化疗多作为手术治疗的辅助治疗方法或晚期患者的姑息治疗方法，通过对机体内癌细胞的杀伤控制病情扩散、转移，在一定程度上延长患者的生存期。但需要注意的是，手术不仅会对机体造成较大创伤，而且还无法完全切除病灶，术后会伴随多种并发症，甚至出现复发、转移。而放化疗由于在杀伤癌细胞过程中也会损伤正常细胞，从而造成严重的毒副作用，需要患者特别警惕。 中医治疗是我国传统医学治疗方法，中医治疗的最大优势在于标本兼治，治疗过程中不仅能够杀伤机体内癌细胞，控制病情发展，而且还能够调理机体，增强机体的免疫力和抵抗力，对促进患者康复，降低其复发、转移几率有重要作用。如中医中口碑较好的三联平衡疗法，既可以单独作用于患者，而且还能够辅助其他治疗方法，如辅助手术、放化疗可达到增效排毒功效，促进患者早日实现康复或长期带瘤生存。 以上就是关于指甲黑色素瘤早期症状的介绍，希望对广大患者有帮助，总之患者一旦发现以上症状，及时的到正规的医院做检查，做到早发现早治疗，减少黑色素瘤对人们的伤害。
两种黑色素瘤B16细胞肺转移小鼠模型的构建和比较_李佳悦
?基础论著? 两种黑色素瘤B16细胞肺转移小鼠模型的 构建和比较 李佳悦朱欣凯王萍钮利喜 【摘要】 目的 采用尾静脉接种法建立C57BL/6小鼠和KM小鼠两种黑色素瘤B16细胞肺转移 动物模型，观察小鼠肺部成瘤过程，并对两种模型进行比较。制作肿瘤切片，通过HE染色分析两种 肿瘤模型的组织病理学特征。方法培养B16黑色素瘤细胞至对数生长期时收集细胞，用生理盐水 调整浓度为5×106/ml备用。将备好的B16细胞通过尾静脉接种小鼠，每只注射0.2 ml。接种后，两种 小鼠每隔一定时间随机各取一只小鼠处死，解剖取肺，观察成瘤情况，计数肺表面的瘤结节数，测 量瘤结节大小。以出现瘤结节开始计时，记录小鼠荷瘤时间。形成稳定的肿瘤模型后，制作肿瘤组 织切片，HE染色进行病理学观察分析。结果B16细胞尾静脉接种C57BL/6小鼠和KM小鼠，均能形 成肺转移模型，但两种小鼠成瘤情况差异较大。KM小鼠的荷瘤时间比C57BL/6小鼠荷瘤时间长。HE 染色结果显示黑色素瘤B16细胞在两种小鼠的肺组织中均形成巢团状的转移瘤，且两种模型肺转移 瘤均多分布在支气管周围。结论通过对C57BL/6小鼠和KM小鼠两种黑色素瘤B16细胞肺转移小鼠 模型的成瘤特点的分析比较，可以看出KM小鼠更适合用于研究新的肺肿瘤治疗药物，为研究黑色素 瘤的发生发展提供依据。 【关键词】 B16细胞；肺转移小鼠模型；尾静脉 Establishment and comparison of two kinds of lung metastasis mouse models Li Jiayue, Zhu Xinkai, Wang Ping, Niu Lixi. Institute of Biotechnology, Shanxi University, Taiyuan 030006, China Corresponding author: Niu Lixi, Email: nlx@https://www.360docs.net/doc/308343578.html, 【Abstract】 Objective To observe the tumorigenic process, two pulmonary metastatic models of melanoma B16 cells were established and compared using C57BL/6 and KM mice, respectively. Methods Tail intravenous injection of 1×106 melanoma B16 cells/mouse resulted in macroscopic disease by 4-9 days and a randomly selected mouse was sacrificed in a certain interval to survey the morphologic characteristics of melanoma. The number of tumor nodules in the lung surface was counted and the size of tumor nodules was measured. The tumor-burdened time of mice was recorded and the tumor sections were made for pathological observation and analysis. Results HE staining showed that each mouse in the B16 cell injection groups had nest-shape metastatic foci distributed around the bronchi in the lung, but the tumor-burdened time was significantly different which was longer in KM mice than in C57BL/6 mice. Conclusion By comparing the characteristics of two pulmonary metastatic models of C57BL/6 mice and KM mice, we can concluded that the B16 melanoma models in KM mice were ideal tumor models which were suitable for researching the new drugs in lung cancer treatment. Our research would provide evidence for the occurrence and development of melanoma. 【Key words】 B16 cells; Pulmonary metastatic mouse model; Tail vein 肺肿瘤又叫支气管肺癌（lung carcinoma）是常见的恶性肿瘤之一，近年来肺癌的发病率和死亡 DOI:10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2015.19.022 基金项目：山西省青年基金资助项目（2011021035-5） 作者单位：030006 太原，山西大学生物技术研究所 通讯作者：钮利喜，Email: nlx@https://www.360docs.net/doc/308343578.html, 率都有明显增高的趋势，已成为人类因癌症死亡的主要原因[1-2]。但其发病机制目前尚未完全阐明，目前治疗方法以化疗和放疗为主，治疗带来的不良反应给患者造成极大的痛苦，治疗效果亦不尽人意。新的有效的肺肿瘤治疗的方法一直在探索中。肿瘤模型是研究恶性肿瘤病因、发展过程和探索肿瘤治
黑色素瘤脑转移有什么典型症状
黑色素瘤，又称恶性黑色素瘤，是来源于黑色素细胞的一类恶性肿瘤，常见于皮肤，亦见于黏膜、眼脉络膜等部位。是皮肤肿瘤中恶性程度最高的瘤种，容易出现远处转移。特别是发展到了晚期出现脑转移，危及患者的生命安全，很多患者和家属想了解一下黑色素瘤出现脑转移会有哪些症状，下面一起来看一下。 黑色素瘤的早期特征包括：现有皮肤色素痣的形态或颜色改变、皮肤表面出现隆起物、色素痣瘙痒、局部出现破溃出血、指（趾）甲开裂等。早期皮肤黑色素瘤进一步发展可出现卫星灶、溃疡、反复不愈、区域淋巴结转移和移行转移。晚期黑色素瘤根据不同的转移部位症状不一，容易转移的部位为肺、肝、骨、脑。而脑转移是晚期黑色素瘤常见的转移部位，下面一起来看一下黑色素瘤脑转移的典型症状有哪些。 1、颅内压增高症状表现为头痛，呈进行性加重，伴恶心、呕吐。 2、蛛网膜下腔出血或肿瘤卒中症状当肿瘤侵及血管时，可发生肿瘤内脑实质内或蛛网膜下腔出血。临床上可出现突发性意识障碍、呕吐，甚至发生脑疝。 3、神经系统损害定位症状肿瘤发生于脑实质内或侵入脑室内可发生偏瘫、失语、偏盲、癫痫、精神症状等。发生于脊髓可出现相应脊髓节段感觉、运动障碍。 4、其他肿瘤位于颅底可侵及多组脑神经，出现多组脑神经损害。肿瘤代谢产物对软脑膜或蛛网膜的刺激可产生蛛网膜炎或脑膜炎症状。蛛网膜炎性反应及肿瘤细胞在蛛网膜下腔扩散、聚集可引起脑积水，继而出现颅内压增高症状。 另外，由于颅内黑色素瘤生长快、病程短，常易误诊为蛛网膜炎、脑血管病、颅内胶质瘤及癫痫等。临床上凡病程短，颅内压增高症状发展快，CT及MRI检查明显占位效应，体表或内脏有黑色素瘤手术史，应想到颅内黑色素瘤的可能性。术中发现肿瘤区域的硬脑膜、脑组织或肿瘤呈黑色病变，为诊断颅内黑色素瘤的可靠依据。但术前很难达到定性诊断。 袁希福院长介绍，黑色素瘤由于病情发展较快，当出现早期症状的时候一定要注意，同时生活中也要养成良好的习惯，积极段炼身体，减少疾病的发生。
肺癌动物模型
原发性支气管肺癌动物模型 【摘要】制作动物模型的根本目的是要对人类疾病进行预防和治疗, 因此应选择那些结构、功能、代谢和人类相似的动物进行研究。目前, 研究肺癌的病因多采用吸入方法, 研究肺转移癌多采用外科种植, 而研究原发性支气管肺癌以支气管灌注法为佳。 【关键词】肺癌，支气管肺癌，动物模型 肺癌是最为常见的恶性肿瘤之一, 一般认为80%～90%的癌症与环境因素有关, 与肺癌发病相关的因素有吸烟、大气污染、职业接触、室内空气污染等。为减少肺癌对人类的威胁, 最经济的预防措施就是对肺癌高危险人群进行筛查或监测, 发现某些个体出现早期肺癌指征, 及时对其进行预防或治疗。因此, 研究支气管肺癌的发生发展过程及其机制, 寻找机体形成实体性肿瘤过程中的早期变化指标就成为预防肺癌的重要课题。本课题采用化学诱癌的方法建立了大鼠的肺癌模型[1]。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 离心机, 722 型分光光度计, 3-甲基胆蒽, 二乙基亚硝胺, 碘化油注射液, 氨苄青霉素钠, 链霉素, 硫喷妥钠, N-乙酰神经氨酸, 间苯二酚。显色剂: 2%的间苯二酚溶液10 ml+78 ml12 mol /L 的浓HCl +1.5 ml 0.1 mol /L 的FeCl3 溶液,加蒸馏水至100 ml, 放置4 h 后使用, 4 ℃冰箱可贮存1 周。Schiff 试剂, 盐酸, 偏重亚硫酸钠。 1.2 实验动物 清洁级Wistar 大鼠, 71 只, 雌雄各半, 体重180～220 g, 由中国医学科学院实验医学中心提供。随机分成3 组( 诱癌组, 溶剂对照组, 正常对照组, 每组动物数分别为31、20、20 只) 。 1.3 动物肺癌模型的建立 1.3.1 诱癌剂配制在70～80 ℃水浴中将MCA 溶于碘化油注射液中, 配成浓度为100 mg/ml 的混悬液, 在此混悬液中再加入 10 %(V/V)DEN[2]。 1.3.2 动物染毒诱癌组: 大鼠肌注硫喷妥钠( 1 2.5mg/kg 体重) 作为基础麻醉, 同时肌注氨苄青霉素2 万单位及链霉素2 万单位以预防感染, 再用乙醚麻醉后,一次向左肺叶支气管注入0.1ml 诱癌剂( 含MCA10mg,DEN 0.01 ml) 。溶剂对照组: 处理同上, 只注入碘化油注射液。正常对照组: 不做任何处理。 1.3.3 染毒效果检查对大鼠进行染毒后2 d 对大鼠拍摄正位X 线胸片。在X 线片上显示肺叶内有清晰、致密的团状药物阴影者, 证明
小鼠肿瘤模型
小鼠肿瘤模型 肿瘤模型我们一般常用的就是小鼠模型和人肿瘤裸小鼠移植瘤模型。其中用得最多的是皮下模型，另外还有腹水（或者尾静脉注射）以及原位模型，其他的模型很少用，就不提他们了。 小鼠模型分三大类：第一类是以S180、EAC、H22等为代表的，他们的宿主小鼠多选用KM，可产生腹水，也可在皮下成瘤。多以腹水传代，实验时抽取腹水，经过一定稀释后皮下接种构建模型，接踵后第二天开始给药，给药7到10天，接种10天后结束试验，剥取肿瘤称瘤重。 1. 关于构建瘤种 可以用体外细胞株培养后，用PBS悬浮至1~3×106/0.1ml/mouse，i.p接种即可，最好用6号左右的针头，就是常用的2ml一次性注射的针头。 2. 关于腹水传代 观察到第一代的种鼠肚子较大后（一般约8~9天左右），可以传代，传代时取1ml 注射器，用2ml注射器的针头，种鼠腹部消毒后直接将针头插入抽取腹水即可，注意不要把针头插得很深，尽量浅一点，还可以把老鼠拎起来，利用重力，让腹水集中在某处便于抽取，一般抽个0.5ml就可以了，不用离心，直接用PBS3~6倍稀释后，接种到新的老鼠腹腔，腹水颜色为白色或者略有发黄都是正常的，但是血性腹水说明不好，需要注意调整，第二代以后，尽量6~7天的时候传代，不要等的时间太久，否则腹水容易血性。三代后可用于试验。 3. 关于接种进行试验 这个时候抽取的腹水需要量比较多，一般需要处死种鼠后，小心地用消毒眼科剪刀镊子剥开腹部皮肤，注意不要弄破肌肉，然后，用镊子（最好是哪种前面有倒勾的镊子，学名好像是唇型镊）拎起腹部的肌肉，用剪刀剪开一个小口，然后用玻璃滴管或者去掉针头的注射器吸取腹水。然后进过一定的稀释后，接种到小鼠的腋下。关于稀释量，各个实验室的情况都不一样，最好摸索一下，开始的时候可以适当的计数，但是要用台盼兰染色后计活细胞数。接种部位在小鼠腋下，但是不要深入到腋窝里面，会给以后的操作带来麻烦。接种时的进针处离接种处远一点，让针头在皮下多走一段，不容易污染。有的人接种的时候喜欢针头向上用力，紧贴着表皮往里走，然后注射的时候感觉阻力较大，打出来的皮丘又紧又圆，这样的接种，会使肿瘤与皮肤严重粘连，不利于最后肿瘤的剥取。也不要紧靠肌肉，肿瘤会与肌肉严重粘连。应该在两者之间，进针的感觉轻松自如，针头很自由，虽然打出来的肿瘤不会很圆很漂亮，但是相对好剥取一些。 4. 关于观测指标 主要是按时称体重，试验结束后剥取肿瘤称瘤重。因为出瘤已经是接种后的第6天左右了，第10天就结束时间，瘤体积的数据意义就不大。小鼠肿瘤很难剥，这是没有办法的，只能耐心，没有太好的办法，剥多了以后，手上会掌握一些巧力，有一些帮助，但是我们还是很头痛小鼠肿瘤试验结束。肿瘤组织周围经常会有一些血窦的形成，弄破后会有血和黄色的液体流出，正常的，但是剥瘤子的时候不要把它弄破，会严重影响瘤重。按照SFDA的规定，平均瘤重小于1g，或
癌痛动物模型及病理机制研究进展_童晔玲
中国肿瘤２００７年第１６卷第５期 癌痛动物模型及病理机制研究进展 童晔玲，何国浓，严继贵，俞丽霞，王泽时 （浙江中医药大学，浙江杭州３１００５３） 摘要：近年来不断出现的癌痛动物模型为癌症机制的研究提供了有效的工具。癌痛有其 独特的病理机制，与外周敏化、 中枢敏化、骨溶解和肿瘤对外周神经的直接作用等有关。全文综述癌痛动物模型及癌痛机制的研究进展。关键词：癌痛；动物模型；机制中图分类号：Ｒ７３０．５文献标识码：Ａ文章编号：１００４－０２４２（２００７）０５－０３３８－０２ ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｎＡｎｉｍａｌＭｏｄｅｌａｎｄＰａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌＭｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＣａｎｃｅｒＰａｉｎ ＴＯＮＧＹｅ－ｌｉｎｇ，ＨＥＧｕｏ－ｎｏｎｇ，ＹＡＮＪｉ－ｇｕｉ，ｅｔａｌ． 癌痛属慢性疼痛的范畴，与炎症痛、神经病理性痛相比，有其独特而复杂的机制，癌痛动物模型的出现，为癌痛机制的研究提供了合适的动物模型，这将对癌痛机制的深入探讨、寻找缓解癌痛新方法、筛选有效的镇痛药物提供极为有效的途径。本文就近几年出现的癌痛动物模型及癌痛病理机制的研究概况作一综述。 １ 癌痛的动物模型研究 由于乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、肺癌等常发生骨转移，肿瘤骨侵袭和扩散造成骨癌痛，是癌症诱发疼痛的主要原因，所以目前关于癌痛模型的研究集中于肿瘤骨转移模型。 １９９９年美国的Ｓｃｈｉｗｅｉ等［１］首次报道了小鼠股骨癌痛模型。将溶骨性的ＮＣＴＣ２４７２纤维肉瘤细胞种植于同源Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ小鼠股骨远端的骨髓腔内，种植后第５ｄ出现骨质破坏，破骨细胞数目增多，种植后１４ｄ，行为学上出现自发痛和触诱发痛，疼痛程度与骨质破坏程度成正比，神经递质也有改变，且可以被骨保护素（ＯＰＧ）所逆转。 ２００１年Ｗａｃｎｉｋ等［２］建立了小鼠跟骨癌痛模型，将ＮＣＴＣ２４７２细胞植入小鼠跟骨，种植后第３ｄ肿瘤细胞与骨粘连，第６ｄ出现骨质溶解，同时出现机械性痛觉增敏和冷刺激痛觉增敏，一直持续１６ｄ，注射吗啡（ＥＤ５０９．０ｍｇ／ｋｇ）可以缓解机械性痛觉增敏现象。他们还建立了小鼠肱骨癌痛模型，方法及各项指标与跟骨癌痛模型类似［３］。 ２００２年英国学者Ｍｅｄｈｕｒｓｔ等建立了大鼠胫骨癌痛模型。该模型是在同源ＳＤ大鼠的胫骨骨髓腔 内注射３×１０３ＭＲＭＴ－１大鼠乳腺癌细胞，种植后１０ｄ～ １４ｄ，Ｘ线片上显示胫骨骨质显著破坏，第２０ｄ骨矿物含量和密度下降，组织学切片抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察发现破骨细胞数量显著增多。动物在术后第１２ｄ～１４ｄ出现触诱发痛和痛觉过敏，１ｍｇ／ｋｇ～３ｍｇ／ｋｇ吗啡有效［４，５］。 目前，国内也已成功复制出大鼠胫骨癌痛模型。谭煌英等［６］按照Ｍｅｄｈｕｒｓｔ的方法对骨癌痛模型进行了复制，并从疼痛行为学、放射学、组织学多方面进行研究，结果与文献报道基本一致，是国内研究癌痛模型的起点。董航等［７］在此基础上有所创新，运用ＭＡＤＢ－１０６大鼠乳腺癌细胞注入ＳＤ大鼠胫骨骨髓腔，机械痛和辐射热痛刺激的缩爪阈值在术后各时间点相比差异显著；术后８ｄＸ射线显示注射部位松质骨出现放射性缺损病灶，第１４天松质骨放射病灶增多，骨皮质缺失，第２２ｄ出现严重的骨破坏；术后８ｄ大鼠后肢苏木精—伊红染色见骨髓腔有异型细胞，骨小梁未见广泛破坏；术后１４ｄ可见肿瘤细胞充填骨髓腔，引起骨小梁广泛破坏；术后２２ｄ可见肿瘤细胞穿破骨皮质，侵及周围肌肉及软组织。 上述的这些骨癌痛模型中，应用乳腺癌细胞建立的大鼠胫骨癌痛模型可视为临床常见的乳腺癌骨转移模型，手术操作较简便，评价方法成熟，具有研究意义。 ２ 癌痛的发生机制 ２．１ 初级感觉神经元兴奋性异常增加（外周敏化）初级感觉神经元位于脊髓背角神经节（ＤＲＧ），分布着感受不同刺激的多种受体，可将各种伤害性刺激转化为电化学信号传导至中枢神经系统。在持续的外周刺激下，ＤＲＧ神经元发生可塑性变化，外 收稿日期：２００６－０８－２９；修回日期：２００６－１０－１０通讯作者：王泽时、俞丽霞基金项目：国家“九五”攻关项目（９６－９０６－１０－０１（０２）） ３３８
恶性黑色素瘤
恶性黑色素瘤 一、 流行病学恶性黑色素瘤是一种来源于黑色素细胞的高度恶性肿瘤。该病起病隐袭、高度恶性、预后很差，临床上也比较少见，约占皮肤恶性肿瘤的1%左右。恶性黑色素瘤可见于任何年龄，较多见于中年和老年，女性稍多于男性。该病多发生于白色人种，尤其是有日晒史的人群，美国的年发病率约为10-15/10万，澳大利亚的昆士兰邦的年发病率高达16／10万，而我国的发病率较低，约为0.4-0.5/10万。但是近年来，不论国内或国外，恶性黑色素瘤的发病率均在不断上升。同样，死亡率也在不断增加，澳大利亚、新西兰的恶性黑色素瘤死亡率最高（5－6/10万），中国和日本较低（约0.2/10万）。 二、 临床表现 （一）发生部位 恶性黑色素瘤可发生于身体的任何部位，最常见于女性的四肢和男性的躯干，多发生于皮肤和邻近皮肤的粘膜，故而也常称皮肤恶性黑色素瘤。亦可见于眼球的色素膜、脑膜的脉络膜丛、以及消化道粘膜等皮肤以外的部位。皮肤黑色素瘤起源于与黑色素细胞有关的皮损，起初通常为棕色或蓝黑色小点，呈浸润性生长，生长迅速，质韧无毛，大小不等，迅速破溃，沿淋巴管可见细线状色素沉着，围绕原发灶可出现多发的隆起型卫星结节。 （二）皮肤恶性黑色素瘤分型： 1．表浅播散型黑色素瘤（SSM）：占所有皮肤恶性黑色素瘤的70%，早期为扁平状，至垂直生长期时皮损进一步增大，周边呈锯齿状。 2．结节型黑色素瘤（NM）：占所有皮肤恶性黑色素瘤的15-30%，侵袭性较强，颜色较深，多为蓝黑色，类似血泡或血管瘤，也有红色、灰色、紫色，甚至无色。 3．雀斑型黑色素瘤（LMM）：较少见，约占所有皮肤恶性黑色素瘤的4-10%，几乎均局限于头颈部，多为棕黄色皮损，周边纤细迂曲，呈锯齿状，较少出现转移。 4．肢端雀斑型黑色素瘤（ALM）：仅占所有皮肤恶性黑色素瘤的2-8%，病变特征性出现于手掌、足底或甲床下，呈棕黄色或褐色，可突然出现颜色改变。多发生于老年人，发病较快，侵袭性强，容易出现转移。除了皮肤以外，约有10%的恶性黑色素瘤发生于皮肤以外的部位，其中常见的部位包括眼球的色素膜、脑膜的脉络膜丛、以及消化道粘膜等。其中色素膜黑色素瘤是眼内最常见的恶性肿瘤，根据发生的部位可以分为虹膜、睫状体和脉络膜黑色素瘤，一般生长缓慢、恶性程度较低、预后优于皮肤黑色素瘤。消化道粘膜黑色素瘤发生率不高，主要发生于肛门区，临床无特异性症状，淋巴结常受累，预后较差，还可发生于口腔粘膜或食管粘膜。淋巴结是恶性黑色素瘤最常见的转移部位，主要表现为区域淋巴结转移，远处转移常见的部位包括皮肤及软组织、肺、肝脏等。 三、诊断与鉴别诊断 皮肤黑色素瘤可发生于皮肤的任何部位，多见于白皙或光亮的皮肤，尤其有日光暴露史的人群。与含色素的皮损密切相关，当皮损出现以下变化时，常提示早期皮肤恶性黑色素瘤的可能：①颜色改变，尤其以蓝黑色、灰色、棕色和杂色最为重要；②表面不规则隆起、粗糙、脱屑和渗液等；③周边参差不齐，呈锯齿状；④皮损迅速增大、持续瘙痒、结痂或出现卫星
肿瘤动物模型的构建——白血病篇知识讲解
肿瘤动物模型的构建——白血病篇
肿瘤动物模型的构建——白血病篇 导读白血病（Leukemia）是一种常见的恶性血液疾病，俗称血癌。据统计，白血病是儿童恶性肿瘤的头号原因，在儿童及35岁以下成人中发病率位居第一[1]。同时也是十大恶性肿瘤之一。目前，白血病具体的发病原因至今尚未研究透彻，因此建立合适的白血病动物模型，对于白血病发病机制及药物研发具有重要意义。 本期为大家综述了白血病的基本情况及小鼠模型的分类、建立方法和应用。 第一章：白血病基本常识白血病是常见液体瘤 白血病是常见的液体瘤，与结肠癌、肝癌等实体瘤不同的是，它是造血干细胞的异常分化和过度增殖导致，因此肿瘤细胞会遍布全身，会侵犯身体的每个脏器，造成全身衰竭。 造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，具有长期自我更新和分化成各类成熟血细胞的能力。如下图为造血干细胞可分类形成各种血细胞，如红细胞、血小板和白细胞： 造血干细胞分化成各类血细胞（图片来自https://www.360docs.net/doc/308343578.html,网站）白血病致病因素有哪些呢？ 现阶段认为白血病的发病因素：化学因素、电离辐射、药物、毒物、病毒、遗传因素等有关。
白血病主要分为四类 根据白血病细胞的成熟程度和自然病程，白血病可分为急性和慢性两大类，临床上，白血病共分为四大类：急性髓系白血病（AML）、急性淋巴细胞白血病（ALL）、慢性髓系白血病（CML）和慢性淋巴细胞白血病（CLL）。儿童白血病90%以上是急性的，其中急性白血病中70%～80%是ALL。 第二章：实验研究所用白血病模型首先，来了解一下常用的细胞株白血病中常用的小鼠品系 用于建立白血病小鼠模型的小鼠可分为近交系和突变系。根据不同类型和目的选择不同的小鼠品系，具体如下图所示： 最后说说常用的动物模型，主要分为三类： 一、异种移植模型 异种移植模型是最常用的淋巴瘤动物模型。根据实验目的选择相应的小鼠品系和细胞株后，通常细胞的接种方式为皮下注射、腹腔注射和尾静脉注射。 皮下注射和腹腔注射操作简单，很快在接种部位形成肿瘤或腹腔内形成多发性肿瘤，适合筛选针对白血病的药物。但该类模型与白血病临床病人实际情况差距较大。异种移植型白血病模型异种移植示意图[2]
乳腺癌小鼠模型的研究进展
乳腺癌小鼠模型的研究进展 摘要】乳腺癌动物模型是研究人类乳腺癌生物学行为以及寻求治疗方法的重要 工具。本文在总结近年来最新研究成果的基础上系统的阐述了乳腺癌研究中常见 的小鼠模型，有助于研究者全面的了解其最新的研究进展情况，为乳腺癌的发病、机制、治疗、预防研究提供帮助。 【关键词】乳腺癌；小鼠模型；基因工程型；中医乳腺癌模型 【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）24-0010-02 乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤，严重危害女性健康。小鼠与其它实验 动物（如果蝇、线虫或大鼠）相比有较多的优势，尤其是其基因组中许多癌基因、肿瘤抑制基因已被发现并定位，使其成为生物医学研究中最常用的哺乳类实验动物。现将目前乳腺癌小鼠模型的研究进展进行综述。 1.自发性乳腺癌模型 自发性肿瘤动物模型是指未经任何有意的人工处理而自发产生肿瘤。目前已 报道的品系有C3H系、A系、CBA/J系、TA2系等，其中C3H小鼠自发性乳腺癌 发病率高，6～10个月龄雌鼠的肿瘤自然发生率可高达100%，是最常用的自发性乳腺癌模型[1]。该模型发病条件比较自然，有利于研究乳腺癌的发病机制。但由 于很难获得大量发病时间相同的荷瘤小鼠，不利于药效评价。 2.诱发型乳腺癌模型 目前对诱发型乳腺癌小鼠模型的研究并不多。Lanan等对BALB/C小鼠持续使 用醋酸甲基孕酮诱导一年后，成瘤率为79%[2]。张亚平[3]用二甲基苯蒽灌胃 C57BL/6小鼠诱导产生乳腺癌。该模型可模拟外界环境因素所致的人类肿瘤发病 的特点和过程，在预防医学的病因学研究及综合化疗后的效果评价中发挥一定的 作用。但由于小鼠个体差异及诱导剂等多因素导致肿瘤发生的部位与时间不同， 成瘤率不高，不利于药物筛选。 3.移植型乳腺癌模型 根据移植物来源不同分为同种移植和异种移植。同种移植所用小鼠为免疫功 能正常的小鼠，所用乳腺癌细胞或组织有严格的种系特异性，常用的细胞株有来 源于BALB/C小鼠的4T1和TM40以及C127[4]。异种移植模型是指将人类肿瘤细 胞系（如MDA-MB-231、MCF-7、MDA-MB-435、BT-474等）移植于免疫缺陷的小 鼠体内，目前常用的免疫缺陷小鼠有裸鼠、SCID小鼠、NOD/SCID小鼠、NOG小鼠。相比于同种移植，异种移植肿瘤能模拟人乳腺癌成瘤后过程。移植模型建立 所需时间短，成本低，成瘤率高，且所带肿瘤生长速度大致相同，是目前抗癌药 物筛选和药效学研究常用的方法。然而小鼠乳腺癌与人类乳腺癌仍存在一定的差异，其不是自然发病，不能用于病因学、癌前病变和癌变的研究。 4.基因工程型乳腺癌模型 运用分子生物学技术敲除某些肿瘤抑制因子和易感基因或插入某些癌基因建 立的乳腺癌小鼠模型。目前建立的基因工程小鼠有MMTV-PyMT[5]，MMTV- Neu[6]，MMTV-Wnt-1[7]，WAP-Ras[8]，MMTV-PyMT和CD44-[9]；MMTV- huHER2[10]；P53基因敲除鼠和Cdkn2a基因敲除鼠等[11]。其中研究较多的是MMTV-Wnt-1转基因小鼠[12]。基因工程小鼠为环境因素与遗传背景相互作用的 研究提供了很好的模型，其肿瘤生长和进展快速，可方便的获得肿瘤发展的整个 过程，但不适于早期肿瘤预防的研究。而且模型建立过程较长、费用较高，影响
黑色素瘤的原因
黑色素瘤的原因 文章目录*一、黑色素瘤的简介*二、黑色素瘤的原因*三、黑色素瘤的危害*四、黑色素瘤的高发人群*五、黑色素瘤的预防方法黑色素瘤的简介黑色素瘤的征象包括:现有皮肤色素痣的形态或颜色改变、皮肤表面出现隆起物、色素痣瘙痒、局部出现破溃出血、指(趾)甲开裂等 黑色素瘤的原因1、紫外线照射 黑色素瘤的确切病因不清楚,有人认为紫外线照射与其发生有关。白人发病率高于黑人,其原因与白人的黑色素细胞易受紫外线伤害而恶变有关。 2、结构不良痣 恶性黑色素瘤可由表皮基底层内的黑色素细胞发生而来,亦可由原先存在的黑痣基础上恶变而来,一种被称为结构不良痣(DN)的患者易发生恶变,其主要特征为痣呈杂色,即在粉红色的基础上同时伴有红色、棕褐色或黑色,其直径〉5mm,边界不光整。 3、遗传 有家族史的人群中其发病概率比无者高1.7倍。 黑色素瘤的危害1、皮肤黑色素瘤的危害程度高,生长迅速,预后大多很差,因此早期诊断和及时正确治疗十分重要。治疗上
强调早期发现和局部扩大切除。但皮肤黑色素瘤临床表现复杂, 容易误诊,尤其是无色素型黑色素瘤。若未能早期诊断, 黑色素 瘤的病变呈侵袭性发展,早期黑色素瘤患者可出现淋巴转移,晚 期发生血行转移。黑色素瘤的病变位于肢端者,常需行截指(趾) 或截肢术。 2、黑色素瘤是皮肤癌中最危险的一种,黑色素瘤多见于老年人,尤以女性为多。可一开始黑色素瘤即为恶性,但约25%~40%由皮肤色素痣恶变而来。色素加深、体积增大、疼痛、瘙痒、破溃、发炎、出血、周围出现等都是黑色素瘤的恶变的征象。 黑色素瘤的高发人群从人种来看,白种人发病率最高,患此 病的白种人以每年2%—5%的速度递增,50岁以上发病率增高。黑色人种罕见,有色人种发病率也较低。男性与女性的发病机率均等。 常见发病部位为指甲下,手掌及足跖部,四肢及躯干表皮也 常有发现,深部器官如阴道,直肠、食道内发现黑色素瘤也有报道。 为了尽早发现病变,要经常进行皮肤检查,特别是父母子女 中曾有发病史及身上有超过100个黑痣和具有发育不全痣的人。当黑痣有以下情形时应引起高度重视:形状不对称,边界明显不 规则,隆起,色泽不匀,颜色变化大,出现如黑、棕、蓝色或进行性发白等,直径5毫米,无毛,并出现痒、痛,流水、流血等。