植物磷含量的测定钼锑抗比色法
植物磷含量的测定钼锑抗比色法
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女人创业励志语推荐1. 一个有信念者所开发出的力量，大于99个只有兴趣者。
土壤中有效磷的快速测定方法
份全过程空白溶液ꎬ 由公式 ＬＤ ＝ ＫＳ 求出检出限ꎬ 见
现ꎬ 稀释倍数在 ２ 倍时精密度较高ꎬ 且与标准值最接
系数ꎬ 取 ３ꎬ 求得酸性土壤检出限为 ０ １８ｍｇｋｇ ꎻ 中
钠浸提时ꎬ 盐分过高ꎬ 需进行稀释倍数试验ꎬ 结果发
近ꎬ 当稀释倍数过大 时ꎬ 由 于 溶 液 中 磷 含 量 相 对 较
５ ３１
４ ７１
０ １３
１ ３１
９ ７１
０ ３５
２ ６２
５ ３４
３
３
３
３
３
３
３
３
３
３
３
３
３
３
３
３
８ １５
８ １８
８ ５８
８ ５０
８ １８
７ ５０
３ 方法检出限
在仪器最佳工作条件下ꎬ 按方法步骤分别测定 １２
Ａｌ － Ｐ 起水解作用而浸出 [１１] ꎮ 因石灰性土壤用碳酸氢
－１
释 ４ 倍时为 ０ ２１ｍｇｋｇ ꎬ 稀释 ８ 倍时为 ０ ３０ｍｇｋｇ ꎮ
－１
－１
４ 方法精密度和准确度
分别取 １２ 份 ＡＳＡ － ４ａ、 ＡＳＡ － ７ 与 ＡＳＡ － ９、 ＡＳＡ －
※农业科学
农业与技术 ２０２１ꎬＶｏｌ ４１ꎬＮｏ １３ ３ ５
※农业科学
农业与技术 ２０２１ꎬＶｏｌ ４１ꎬＮｏ １３ ３ ３
土壤中有效磷的快速测定方法
韩张雄 李敏 端爱玲 杨树俊
( 江苏省地质工程勘察院ꎬ 江苏 南京 ２１００１２)
１０、 ＮＡＳ － ４ 样品分中性、 石灰性、 酸性ꎬ 利用本方法
石灰性土壤中有效磷的精密度 ( ＲＳＤ) <５ ０％ꎬ 相对
碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法测定土壤有效磷的注意事项
碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法测定土壤有效磷的注意事项碳酸氢钠浸提－钼锑抗比色法测定土壤有效磷的注意事项摘要介绍了碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法测定石灰性和中性土壤有效磷的注意事项，以供参考。
关键词Olsen法；测定；土壤有效磷；注意事项国家农业标准中，采用碳酸氢钠浸提－钼锑抗比色法（Olsen法）测定石灰性土壤中（中性及酸性土可参照使用）的有效磷含量（其中操作规程以下简称规程），其中校准曲线或回归方程较易做出或求出，因此也较容易测定。
但是，要提高其测定准确性，减轻劳动量还需要注意以下几点。
（1）所用的试剂要按规程要求准确配制。
一是选用质量合格的仪器、药品、试剂、纯水，要求测定者首先对要使用的仪器进行校准，在试剂的配制中注意观察药品、试剂、纯水的颜色，发现异常要查找原因；二是精确称取或量取；三是按规程要求的步骤顺序配制，调节酸碱度。
但需要说明的是：①该规程要求的钼锑抗显色剂，称取的抗坏血酸（C6H8O6左旋，旋光度+21°－22°）0.5g溶于100mL钼锑贮备液中测定的结果，土壤有效磷含量要低于称取1.5g抗坏血酸溶于100mL钼锑贮备液中测定的结果。
②配制磷标准贮备液的KH2PO4 要选用优级纯的，而且要经过105℃烘干2h，并冷却后再称取配制。
（2）所需试剂要按规程要求保存与使用。
钼锑贮备液要盛放于棕色瓶中，避光存放；钼锑抗显色剂要现用现配。
（3）所用的器械要反复冲洗干净，有的还要干燥。
测定中所用的（刻度、胖肚）吸管、塑料瓶、瓶盖、漏斗、三角瓶、容量瓶、瓶塞、比色皿要反复冲洗干净，塑料瓶、瓶盖、漏斗、三角瓶需烘干后再用。
（4）要严格土液比、温度、振荡频率及振荡时间。
由于这4个方面对浸提出的磷含量有至关重要影响，因此一定要严格控制。
①要严格土液比。
即风干土样准确称取2.50g （电子天平先预热30min，再校准后使用），加入的碳酸氢钠浸提剂准确量取50.00mL。
②要严格浸提温度。
植株全磷含量测定钼锑抗比色法
植株全磷含量测定钼锑抗比色法
植株全磷含量测定是一种常用的分析方法，钼锑抗比色法是其中一种常用的测定方法。
该方法基于钼酸钠在酸性条件下与磷酸盐形成复合物，被还原的钼酸钠被锑砷汞反应还原为蓝色化合物，通过比色法测定其吸光度来计算样品中磷的含量。
该方法的具体步骤如下：
1. 样品制备：将植株样品取适量，经过研磨、筛选等处理后，按照规定的方法进行矿酸或硝酸-过氧化氢消化。
2. 样品处理：取消化后的样品，加入硝酸、氯化钾等试剂，使磷酸盐转化为磷酸根离子。
3. 钼锑试剂的制备：将钼酸钠、醋酸和硫酸混合，加入氯化锑钠，制备钼锑试剂。
4. 反应：将处理后的样品加入钼锑试剂中，经过适当时间的反应后，被还原的钼酸钠被锑砷汞反应还原为蓝色化合物。
5. 吸光度测定：将反应产物在特定波长下进行比色测定，根据标准
曲线计算样品中磷的含量。
该方法的优点是简单、快速、精确，适用于大面积的植物磷素含量测定。
但是该方法也存在一些限制，例如样品中的其他化合物可能会影响测定结果，需要进行干扰消除等处理。
土壤全磷的测定-氢氧化钠熔融—钼锑抗比色法
土壤全磷的测定氢氧化钠熔融—钼锑抗比色法1、方法提要土壤样品与氢氧化钠熔融，使土壤中含磷矿物及有机磷化合物全部转化为可溶性的正磷酸盐，用水和稀硫酸溶解熔块，在规定条件下样品溶液中的磷酸根与钼锑抗显色剂反应，生成磷钼蓝，其颜色的深浅与磷的含量成正比，通过分光光度法定量测定。
2、适用范围本方法适用于各类土壤全磷含量的测定。
3、主要仪器设备3.1分光光度计；3.2高温电炉：升温至1200℃，温度可调；3.3镍(或银)坩埚：容量≥30mL；3.4具塞三角瓶：50mL。
4、试剂4.1氢氧化钠；4.2无水乙醇；4.3碳酸钠[ρ(Na2CO3)=100g·L-1]溶液：称取10.0g无水碳酸钠溶于水，稀释至100mL；4.4 5%硫酸溶液：吸取5mL浓硫酸缓缓加入90mL水中，冷却后加水至100mL；4.5硫酸溶液[c(12H2SO4)=3mol·L-1]：量取168mL浓硫酸缓缓加入到盛有约800mL水的大烧杯中，不断搅拌，冷却后，稀释至1L；4.6二硝基酚指示剂：称取0.2g2，6-二硝基酚溶于100mL水中；4.7酒石酸锑钾溶液[ρ(K(SbO)C4H4O6·12H2O)=5g·L-1]：称取酒石酸锑钾0.5g溶于100mL水中；4.8硫酸钼锑贮备液：量取126mL浓硫酸，缓缓加入到400mL水中，不断搅拌，冷却。
另称取钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·4H2O]10.0g溶于温度约60℃的300mL 水中，冷却。
然后将硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中。
再加入5 g·L-1酒石酸锑钾溶液100mL，冷却后，加水稀释至1L，摇匀，贮于棕色瓶中；4.9钼锑抗显色剂：称取1.5g抗坏血酸(左旋，旋光度+21~22°)溶于100mL 钼锑贮备液中。
此溶液有效期不长，须随配随用；4.10磷标准贮备液[ρ(P)=100μg·mL-1]：准确称取经105℃下烘干2h的磷酸二氢钾(优级纯)0.4390g，用水溶解后，加入5mL浓硫酸，然后加水定容至1L。
总磷的测定钼锑抗分光光度法
２．标准曲线的绘制 将冷却后的校准系列＋蒸馏水至50mL+1mL抗坏血酸+2mL钼酸盐充分混 匀,放置15min显色后，用10mm比色皿，于700nm处，以零浓度溶液为参比， 测量吸光度绘制以磷含量（µg）对吸光度的校准曲线。
A
.
. .
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ug
Sino-Dutch Demonstration Researcher and Training Centre for Water Treatment
Sino-Dutch Demonstration Researcher and Training Centre for Water Treatment
实验原理
水中磷的测定，通常按其存在的形式不同，分别
测定总磷、溶解性正磷酸盐和可溶性总磷酸盐，下 图为测定水中各种磷的流程图
消解 水样 用0.45μm过滤 消解 可溶性正磷酸盐 可溶性总磷酸盐 总磷
721分光 光度计
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３、水样的测定
将冷却后的水样＋蒸馏水至50mL+1mL抗坏血酸 混匀+2mL钼酸盐充分混匀，放置15min显色。用10mm 比色皿，于700nm波长处，以零浓度溶液为参比，测 量吸光度。从校准曲线上查出含磷量。
五、注意事项
１、如试样中浊度或色度影响测量吸光度时，需做补偿校正 ２、室温低于13℃时，可在20～30℃水浴中，显色15min ３、操作所用的玻璃器皿，可用1+5的盐酸浸泡2h，或用不含 磷酸盐的洗涤剂刷洗 ４、比色皿用后应以稀硝酸或铬酸洗液浸泡片刻，以除去吸 附的磷钼蓝显色物
总磷的测定(钼锑抗分光光度法)【新】
总磷的测定(钼锑抗分光光度法)【新】一、实验原理总磷是指水样中的无机磷和有机磷的总和。
钼锑抗分光光度法根据磷酸根离子与钼酸根离子和锑酸根离子在酸性环境下生成黄色复合物且特征吸收峰在690nm左右，利用分光光度计在此波长处进行吸光度的测定，从而测定水样中的总磷含量。
二、实验步骤1.试样准备：取一定量的水样，如饮用水、自来水、河水等，用过滤纸过滤掉悬浮颗粒直至澄清；2.取样：取所需的水样进行测定，并记录测定的样品编号、样品名称及取样时间等信息，并标明测定条件；3.样品预处理：（1）①如果水样中有余氯，加入少量的亚硫酸钠或碘化钾溶液去除余氯；②加入1ml 的稀硝酸，防止存在的磷酸根受还原而使结果偏低。
（2）氢氧化钠溶液（6mol/L）和氟化钠（70g/L）的混合溶液：取一定量的氢氧化钠和氟化钠混合溶液（比例约为1:10），加入到已预处理的水样中，使其呈现明显的碱性反应，即pH值控制在10.5-11.0之间。
4.配制钼锑试剂：取5g的钼酸铵和0.5g的锑酸钠加入到2L的硫酸中（浓度为0.3mol/L），摇匀，得到浓度为0.005mol/L的钼锑试剂。
5.光度测定：将经过预处理的水样分别加入分析室的比色皿中，加入相应的钼锑试剂，然后加入适量的硫酸稀释，充分混匀后孵育5min左右，利用分光光度计在690nm处读取吸光度值。
6.计算试样中总磷的含量：利用预先绘制的标准曲线，查找吸光度值对应的总磷含量。
三、实验注意事项1.水样应取中间部位，避免表面污染、底部沉积物或悬浮物对结果产生干扰。
2.水样需要预处理，如去除余氯、加入稀硝酸等，以确保结果的准确性。
3.钼锑试剂的配制要求精确，避免出现含杂质或浓度过高过低等情况，影响结果准确性。
4.光度测定时要注意避免外界光线的干扰，同时保持试剂反应时间、温度、pH等因素的一致。
5.标准曲线的绘制要进行多次实验和重复测定，以获得较准确的测定结果。
6.实验过程中需遵守实验室安全规范，注意实验室对应的安全措施，如佩戴防护眼镜、手套等。
土壤有效磷钼锑抗比色法
土壤有效磷钼锑抗比色法
这种分析方法的优点之一是具有较高的灵敏度和准确性，能够
准确测定土壤中微量的有效磷含量，对于科研和土壤肥力评价具有
重要意义。
另外，这种方法操作简便，成本较低，适用于大批量土
壤样品的分析，因此在土壤肥力评价和农业生产中得到了广泛应用。
然而，钼锑抗比色法也存在一些局限性，比如在高盐度土壤或
含有有机物较多的土壤中可能会出现干扰，影响测定结果的准确性。
因此，在实际应用中需要综合考虑土壤样品的特性，选择合适的分
析方法。
总的来说，土壤有效磷钼锑抗比色法是一种常用的测定土壤有
效磷含量的分析方法，具有高灵敏度和准确性，但在实际应用中需
要注意方法的局限性并综合考虑土壤样品的特性。
总磷的测定(钼锑抗分光光度法)解读
六、思考题
１、过硫酸钾消解的作用？ ２、用分光光度计测吸光度时，如果比色皿中有气 泡对结果有什么影响？
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总磷的测定
（钼锑抗分光光度法 ）
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实验目的
１、了解磷（总磷、溶解性正磷酸盐和溶解性总磷） 的测定方法
２、掌握分光光度计的使用、标准曲线的绘制及计 算方法
A
AX
mX
m
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数据处理
C(PO43-,mg/L)= mx / V mx— 由校准曲线查得的磷含量（ug） V — 水样体积（mL）
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蓝色络合物（磷钼蓝）
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１、预处理
实验步骤
（１）水样
取适量的进水和出水于50mL具塞比色管＋蒸馏水于25mL 标线＋4mLK2S2O8加塞后管口包一小块双层纱布并用线扎紧， 置于高压蒸汽消毒器中消解
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土壤有效磷测定方法
①紫外可见分光光度计；②恒温振荡机或往返式振荡机；③带盖塑料瓶；④酸度计；⑤具塞；⑥比色管25mL;⑦150mL试剂三角瓶。
3相关试剂的制定
3.1 无磷活性炭粉
将活性炭粉先用1:1盐酸浸泡24h，然后移至平板，抽气过滤，用水淋洗4-5次，再用浸提剂浸泡24h，在平板漏斗上抽气过滤，用水洗尽碳酸氢钠，并至无磷为止，烘干备用。
土壤有效磷测定方法
氮、磷、钾、钙等大量元素，是植物生长发育不可缺少的，虽然作物对这些元素需要的量相差很大，但是它们对作物生长发育起的作用同等重要，而且不可相互代替。过多地使用某种营养元素，不仅会对作物产生毒害，还会妨碍作物对其它营养元素的吸收，引起缺素症。例如磷过多会降低钙、锌、硼的有效性。土壤有效磷的测定，不仅可了解近期磷素供应水平状况，而且是植物合理施肥的依据之一。因此，推广测土配方施肥，大力宣传植物所需营养元素的重要性及测定土壤营养元素的含量迫在眉睫。现就土壤有效磷的测定方法介绍如下：
4.2标准曲线的绘制
分别吸取5ug/mL磷标准溶液0mL，0.50mL，lmL，1.50mL，2mL，2.50mL，3.00mL于25ml比色管中，加入浸提剂10mL，显色剂5mLJ慢慢摇动使C02逸出再以水稀释至刻度，充分摇动，逐尽C02，定容，既为含磷0.00，0.10,0.20,0.30,0.40，0.50，0.60ug/mL磷的标准系列溶液。在室温高于20%处放置30min后，进行比色，测量吸光度值和浓度值，绘制标准曲线或建立回归方程。
1 方法原理及适用范围
碳酸氢钠提取采取钼锑抗比色法。石灰性土壤中的有效磷，多以磷酸一钙和磷酸二钙状态存在，可用pH值8.50，浓度0.05mol/L的碳酸氢钠提取到溶液中。磷酸一钙可直接溶于碳酸氢钠水溶液中，而磷酸二钙与碳酸氢钠反应成为磷酸钠而溶解，钙则成为碳酸钙的沉淀而析出。其反应式为：
土壤全磷、速效磷、速效钾含量,植物组织全磷、全氮含量快速测试方法
离心替代过滤，酶标仪替代分光光度计的土壤全磷测试方法1.用万分之一天平，称取1g左右的风干土，记录下重量。
2.加入8ml浓硫酸，放置过夜后加入10滴高氯酸，消煮至白色。
3.在50ml消煮管中定容，可以先加水1/3，混匀后再加水至刻度线附近，放置过夜后再加水至刻度线，摇匀。
4.吸取1ml消煮液到1.5ml离心管中，10000rpm，离心1分钟。
5.吸取50ul上清液+750ul H2O+100ul NaOH(4mol/L,16g NaOH定容到100ml)+100ul钼锑抗试剂到1.5ml离心管中。
6.摇匀后，14000rcf离心一分钟，室温高于15℃情况下，30min后，吸取300ul至酶标板比色备注：5.中吸取的上清液的量可根据显色状况调整，相应地NaOH的量也要做出调整，保证比色体系体积为1ml，氢离子浓度为0.55mol/L左右，每个样品做三个重复，重复间允许误差<0.005%即50mg/kg。
磷酸二氢钾工作曲线制做方法1.先将100mg/L(0.4394g KH2PO4(烘干2小时)先加水300ml，再加5ml浓硫酸，再定容到1L)的磷标贮液(磷酸二氢钾溶液)稀释20倍，比如吸取5ml定容到100ml2.配制3.摇匀后，10000rpm离心一分钟，室温高于15℃情况下，30min后，吸取300ul至酶标板比色备注：利用散点图绘制曲线，添加趋势线和r值，r^2要大于0.999。
利用forecast.line函数计算比色液磷含量钼锑抗配制方法1.浓硫酸153ml加入500ml左右H2O(用1L的烧杯)，用磁力搅拌器搅匀2. 1L烧杯中加入10g 钼酸铵,用磁力搅拌器融化3. 0.5g酒石酸锑钾加入100ml左右H2O(用100ml的烧杯)，用磁力搅拌器溶化4. 步骤3所得溶液倒入1L烧杯，在磁力搅拌器上混合均匀，定容到1L备注：避光储存，使用时每10ml 加入0.15g抗坏血酸二硝基酚溶液：0.2g 二硝基酚溶于100ml水中离心替代过滤，酶标仪替代分光光度计的土壤有效磷(碳酸氢钠浸提)测定方法1. 42g碳酸氢钠定容到1L，用4mol/L NaOH溶液(4mol/L,16g NaOH定容到100ml)调节pH至8.5，得到浸提剂2. 1.00g风干土加入50ml塑料管中，再加入0.1g活性炭粉，再加入20ml碳酸氢钠溶液，20~25℃，180rpm，震荡30min3.吸取1ml浸提液到1.5ml离心管中，10000rpm，离心1分钟4.吸取200ul上清液+700ul H2O+100ul钼锑抗试剂到1.5ml离心管中5.摇匀后，14000rcf，离心一分钟，室温高于15℃情况下，30min后，吸取300ul至酶标板比色备注：吸取的上清液体积可以根据显色情况调整，保证比色体系1ml，每个样品做三个重复植物组织全磷含量快速测定1.将烘干后的植物组织样品磨碎，再将样品粉末继续烘干至恒重。
碳酸氢钠浸提——钼锑抗比色法(Olsen法)
碳酸氢钠浸提——钼锑抗比色法（Olsen法）1.方法提要碳酸氢钠溶液除可提取水溶性磷外，也可以抑制Ca2+的活性，使一定量活性较大的Ca-P 盐类中的磷被浸出，也可时一定量活性Fe-P和Al-P盐类中的磷通过水解作用而浸出。
由于浸出液中Ca、Fe、Al浓度较低，不会产生磷的再沉淀。
浸提液中的磷可用钼锑抗比色法定量测定。
土壤浸出的磷量与土液比、温度、振荡时间及方式有关。
本法严格规定土液比为1：20，浸提溶液温度为25℃±1℃，振荡提取时间为30min。
2.适用范围本方法适用于石灰性土壤有效磷含量的测定；中性土壤及水稻土也可参照使用。
3.主要仪器设备分光光度计或紫外——可见分光光度计；恒温（控温25℃±1℃）往复式或旋转式振荡机，或放置在恒温室的普通振荡机，满足180 r·min-1 ± 20 r·min-1的振荡频率或达到相同效果；塑料瓶；无磷滤纸。
4.试剂(1)氢氧化钠溶液NaOH=100g·L-1：称取10g氢氧化钠溶于100ml水中。
(2)碳酸氢钠浸提剂NaHCO3=0.50mol·L-1,pH=8.5称取42.0g碳酸氢钠溶于约950ml水中，用100g·L-1氢氧化钠溶液调节pH至8.5，用水稀释至1L。
贮存于聚乙烯瓶或玻璃瓶中备用。
如贮存时间超过20d，使用时必须重新校pH。
(3) 钼锑抗试剂的配制A试剂：①钼酸铵溶液: 溶解12.0g分析纯钼酸铵于250ml的无离子水中；②酒石酸氧锑钾溶液：溶解0.291g分析纯酒石酸氧锑钾于100ml无离子水中；③把上述两种已溶解的试剂加到1000ml 5.76N H2SO4中（注：160ml的浓硫酸/每升），混匀并定容2000ml.即得试剂A. 此试剂放在不透明的塑料瓶中可以存放至少4个月。
B试剂：钼锑抗显色剂：溶解1.32g分析纯抗坏血酸于上述250ml试剂A中，混匀即可。
总磷的测定钼锑抗分光光度法
消解
水样
总磷
用0.45μm过滤 可溶性正磷酸盐
消解 可溶性总磷酸盐
2021/2/4
3
１、消解的目的：将其他形式的磷转化为正磷酸盐
不溶性（呈胶体、颗粒状）
有机磷
可溶性
磷 +K2S2O8消解
无机磷
P3O105--
P2O74--
PO32PO43HPO42H2PO4-
PO43-
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２．钼锑抗分光光度法的原理
2021/2/4
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1.什么是传统机械按键设计？
传统的机械按键设计是需要手动按压按键触动PCBA上的开关按键来实现功 能的一种设计方式。
传统机械按键结构层图：
按键
PCBA
开关键
传统机械按键设计要点：
1.合理的选择按键的类型，尽量选择 平头类的按键，以防按键下陷。
2.开关按键和塑胶按键设计间隙建议 留0.05~0.1mm，以防按键死键。 3.要考虑成型工艺，合理计算累积公 差，以防按键手感不良。
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数据处理
C(PO43-,mg/L)= mx / V
mx— 由校准曲线查得的磷含量（ug） V — 水样体积（mL）
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五、注意事项
１、如试样中浊度或色度影响测量吸光度时，需做补偿校正
２、室温低于13℃时，可在20～30℃水浴中，显色15min
３、操作所用的玻璃器皿，可用1+5的盐酸浸泡2h，或用不含 磷酸盐的洗涤剂刷洗
A
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ug
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2021/2/4
721分光 光度计
有效磷测定过程中常见的问题及解决方法
有效磷测定过程中常见的问题及解决方法摘要：近年来，由于生态环境遭到破坏，土壤中养分含量分布不均，土壤污染问题亟需解决。
土壤中有效磷的含量作为土壤中一项重要的基本指标，越来越被人们所重视。
土壤中有效磷测定的常用方法是根据土壤的酸碱性用不同的浸提剂提取后，用钼锑抗比色法测定，操作繁琐，耗费时间，试剂量大，影响因素较多。
本文就有效磷测定步骤及测定时所遇到的问题，做了以下探讨和总结。
关键词：有效磷；含量；浸提。
1前言磷是自然界中极为重要的一种大量元素。
土壤中磷含量过低会造成植物生长缓慢，磷含量过剩会造成植物对微量元素的吸收减少，导致作物减产，甚至会随地表径流以及矿物质的淋滤向下迁移造成水体磷含量超标。
磷作为易被植物作物吸收利用的养分，土壤中磷含量会随着种植制度以及作物的影响不断发生变化。
因此其含量的相对稳定水平可间接反映出土壤供磷能力的强弱，同时也可以将这个范围作为土壤是否需要施磷肥的重要参考依据。
土壤中的有效态的磷是指在特定的环境条件下，使用浸提液可将其浸提出来，并通过特定的测试方法，计算出土壤中有效磷的含量。
土壤中有效磷并不是具有一定具体形态的磷元素，对于酸性土壤（pH＜6.5），宜采用氟化铵盐酸浸提法；对于碱性土壤（pH≥6.5），宜采用碳酸氢钠浸提法[1]。
因为检测方式不同会导致在同一土壤样品中得到的含量也会不同。
因此，土壤中有效磷的含量只有通过相同的实验条件才能测出较为稳定的相对结果。
2试验设备和试剂2.1试验设备：土壤粉碎机；恒温水浴振荡器；多波长紫外可见分光光度计；超声波清洗器等；2.2实验试剂：氢氧化钠；浓硫酸；碳酸氢钠，钼酸铵；L（+）抗坏血酸；酒石酸锑钾；磷酸二氢钾；二硝基酚等。
试剂应按照规定的方式配制和保存。
3样品制备将土壤样品置于风干盘中，平铺为二至三厘米厚度的薄层，挑出其中的碎石、砂砾和动植物残体等杂物。
待样品完全风干后，用四分法将其充分粉碎混合均匀，并过10目的标准筛，最后装入聚乙烯自封袋中以待备用。
磷的测定(钼锑抗分光光度法_)
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ug
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721分光 光度计
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实验原理
钼锑抗分光光度法的原理
植物样品经消煮使各种形态的磷转变成磷酸 盐。在一定酸度下,待测液中的正磷酸与钼酸铵 和酒石酸锑钾生成一种三元杂多酸,后者在室温 下能迅速被抗坏血酸还原为蓝色络合物,可用吸 光光度法测定。
数据处理
Wp =
×1000
式中: Wp ——植物磷的质量分数,g/kg; c——从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质 量浓度, mg/L; V1——消煮液定容体积, ml; V2——吸取测定的消煮液体积, ml; V3——显色液体积, ml; m——称样量,g;
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六、思考题
１、用分光光度计测吸光度时，如果比色皿中有气 泡对结果有什么影响？
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五、注意事项
１、室温低于13℃时，可在20～30℃水浴中，显色15min 2、操作所用的玻璃器皿，可用1+5的盐酸浸泡2h，或用不含 磷酸盐的洗涤剂刷洗 3、比色皿用后应以稀硝酸或铬酸洗液浸泡片刻，以除去吸附 的磷钼蓝显色物
硫酸-高氯酸-钼锑抗比色法测定土壤全磷的注意事项
硫酸-高氯酸-钼锑抗比色法测定土壤全磷的注意事项摘要针对应用硫酸-高氯酸-钼锑抗比色法测定土壤全磷过程中影响测定值的因素进行了阐述,包括样重、消煮时间、定溶浓度、显色时间与温度等,并说明了测定过程中各环节应注意的事项,以供参考。
关键词硫酸-高氯酸-钼锑抗比色法;测定;土壤全磷;影响因素;注意事项从2007年起至今,门源县农业技术推广中心依托农业部实施的《测土配方施肥补贴》项目,采集全县不同地区不同土质,并就氮、磷、钾、有机质、酸碱度等指标进行了分析测定。
土壤中含磷化合物绝大部分是难溶性的,能被水或弱酸溶解的数量很少,很难被作物吸收利用,因此门源地区农作物经常出现缺磷症状。
通过对土壤含磷量的测定,可以了解土壤中磷的丰缺状况,为合理施用磷肥提供科学依据。
全磷的测定方法有硫酸—高氯酸—钼锑抗比色法、硫酸—高氯酸—钼抗比色法等多种,其中前者是最常用的一种,该方法具有操作简单、对酸度要求不太严格的特点,适应于一般化验室分析。
1影响硫酸—高氯酸—钼锑抗比色法全磷测定值的因素一是样重。
样重过大,如0.220 1g,用吸光值计算P2O5在土壤中的含量时数值会偏小,使得平行样出现不平行情况。
样重过小,则数值偏大。
二是消煮时间。
消煮时间一般要求45~60min。
若消煮时间过短,小于45min,煮出的溶液颜色和溶液粘度均达不到要求,溶液颜色呈现为灰白色。
溶液粘度小,还会影响调整酸度时的颜色变化,引起加入的氢氧化钠溶液的量过多或过少,影响结果计算的准确性。
消煮时间大于60min,会造成溶液焦糊。
三是定容浓度。
定容时超过容量瓶刻度线,造成溶液浓度过稀,定容显色后溶液呈现的微蓝色过淡,在分光光度计中读出的吸光值与同等样品相比,数值偏小。
四是显色时间。
显色时间达到30min,显色完全。
显色时间达不到30min,会使显色不完全,测出的吸光值偏小;显色时间过长,待测液颜色过浓,测出的吸光值偏大,或使分光光度计不读值。
五是显色温度。
(完整word版)钼锑抗比色法测定土壤全磷
(完整word版)钼锑抗比色法测定土壤全磷钼锑抗比色法测定土壤全磷1、称取通过0。
149mm孔径筛的风干土样0.25g，小心放入镍坩埚底部，切勿黏在壁上。
加入无水乙醇3～4滴，润湿样品，在样品上平铺2.0g氢氧化钠。
将坩埚放入高温电炉,升温。
当温度升至400℃左右时切断电源，暂停15分钟。
然后继续升温至720℃，并保持15分钟，取出稍冷。
2、在坩埚中加入80℃的水10ml，待熔块溶解后无损转入100ml容量瓶中,同时用3mol/L的硫酸溶液l0ml和水多次洗坩埚，洗涤液也一并移入容量瓶。
冷却，定容。
用无磷滤纸干过滤或离心澄清.同时做两个空白试验。
3、吸取待测样品溶液5~10mL于50mL容量瓶中，用水稀释至约30mL。
加入2～3滴二硝基酚指示剂，并用100g/L的碳酸钠溶液或5％硫酸溶液调节溶液至刚呈微黄色。
加入5.00mL钼锑抗显色剂，摇匀，加水定容.在室温20℃以上条件下，放置30分钟后待测。
4、分别吸取5ug/mL的磷标准溶液0、1。
00、2。
00、3。
00、4.00、5。
00、6.00ml于50ml容量瓶中，同时加入与显色测定所用的样品溶液等体积的空白试液，用水稀释至约30ml，同样品测定调节酸度,显色，定容。
用水稀释至约30ml，加入5.00ml钼锑抗显色剂，定容，即得含磷量分别为0。
0、0.1、0.2、0。
3、0.4、0.5、0.6ug/mL的系列溶液.于20℃以上温度放置30分钟后，以磷含量为零的系列溶液调节仪器零点，于波长700nm处,在分光光度计上用1cm光径比色皿进行比色测定。
记录下样品浓度数值。
5、把样品浓度数值代入公式，计算土壤样品的全磷含量（g/kg），计算结果保留小数点后两位。
磷的测定(钼锑抗分光光度法_)汇总
721分光 光度计
数据处理
Wp=
×1000
式中: Wp ——植物磷的质量分数,g/kg; c——从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质
量浓度, mg/L; V1——消煮液定容体积, ml; V2——吸取测定的消煮液体积, ml; V3——显色液体积, ml; m——称样量,g;
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植物磷的测定
（钼锑抗分光光度法 ）
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实验目的
１、了解磷测定方法 ２、掌握分光光度计的使用、标准曲线的绘制及计
算方法 3、熟悉钼锑抗分光光度法测定磷的原理和过程
H+
PO43- + 钼酸盐 + 抗坏血酸
蓝色络合物（磷钼蓝）
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实验步骤
１、预处理
（１）样品消煮 HNO3-HClO4消煮法
（２）植物磷的测定
1~2滴指示剂
消煮液2~5ml
20ml水
NaOH至 刚呈黄色
1滴 H2SO4 褪色
5ml钼锑抗 显色剂
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30min显色，700nm 测OD值
土壤有效磷的测定-碳酸氢钠提取—钼锑抗比色法(olsen法)
土壤有效磷的测定A 碳酸氢钠提取—钼锑抗比色法(olsen 法)1、方法提要碳酸氢钠溶液除可提取水溶性磷外，也可以抑制Ca2+的活性，使一定量活性较大的Ca-P 盐类中的磷被浸出，也可使一定量活性Fe-P 和Al-P 盐类中的磷通过水解作用而浸出。
由于浸出液中Ca 、Fe 、Al 浓度较低，不会产生磷的再沉淀。
浸提液中的磷可用钼锑抗比色法定量测定。
土壤浸出的磷量与土液比、液温、振荡时间及方式有关。
本法严格规定土液比为1：20，浸提液温度为25℃±1℃，振荡提取时间为30min 。
2、适用范围本方法适用于石灰性土壤有效磷含量的测定；中性土壤及水稻土也可参照使用。
3、主要仪器设备3.1分光光度计或紫外—可见分光光度计；3.2恒温(25℃±1℃)往复式或旋转式振荡机，或普通振荡机及恒温室，满足180r/min ±20r/min 的振荡频率或达到相同效果；3.3塑料瓶，200mL ；3.4无磷滤纸。
4、试剂4.1无磷活性碳粉：如所用活性含磷，应先用1：1盐酸溶液浸泡24h ，然后移至平板漏斗抽气过滤，用水淋洗到无Cl -为止(约4~5次)，再用碳酸氢钠浸提剂浸泡24h ，在平板漏斗上抽气过滤，用水洗尽碳酸氢钠，并至无磷为止，烘干备用；4.2氢氧化钠溶液[ρ(NaOH)=100g ·L -1]：称取10g 氢氧化钠溶于100mL 水中；4.3碳酸氢钠浸提剂[ρ(NaHCO 3)=0.5mol ·L -1，PH=8.5]称取42.0g 碳酸氢钠(NaHCO 3)溶于约950mL 水中，用100g ·L -1氢氧化钠溶液调节PH 至8.5(用酸度计测定)，用水稀释至1L 。
贮存于聚乙烯瓶或玻璃瓶中备用。
如贮存期超过20d ，使用时须重新校正PH ；4.4酒石酸锑钾溶液[ρ(K(SbO)C 4H 4O 6·12H 2O)=3g ·L -1]：称取0.3酒石酸锑钾溶于水中，稀释至100mL ；4.5钼锑贮备液：称取10.0g 钼酸铵[(NH 4)6Mo 7O 24·4H 2O]溶于300mL 约60℃水中，冷却。
土壤全磷、速效磷、速效钾含量,植物组织全磷、全氮含量快速测试方法
⼟壤全磷、速效磷、速效钾含量,植物组织全磷、全氮含量快速测试⽅法离⼼替代过滤，酶标仪替代分光光度计的⼟壤全磷测试⽅法1.⽤万分之⼀天平，称取1g左右的风⼲⼟，记录下重量。
2.加⼊8ml浓硫酸，放置过夜后加⼊10滴⾼氯酸，消煮⾄⽩⾊。
3.在50ml消煮管中定容，可以先加⽔1/3，混匀后再加⽔⾄刻度线附近，放置过夜后再加⽔⾄刻度线，摇匀。
4.吸取1ml消煮液到1.5ml离⼼管中，10000rpm，离⼼1分钟。
5.吸取50ul上清液+750ul H2O+100ul NaOH(4mol/L,16g NaOH定容到100ml)+100ul钼锑抗试剂到1.5ml离⼼管中。
6.摇匀后，14000rcf离⼼⼀分钟，室温⾼于15℃情况下，30min后，吸取300ul⾄酶标板⽐⾊备注：5.中吸取的上清液的量可根据显⾊状况调整，相应地NaOH的量也要做出调整，保证⽐⾊体系体积为1ml，氢离⼦浓度为0.55mol/L左右，每个样品做三个重复，重复间允许误差<0.005%即50mg/kg。
磷酸⼆氢钾⼯作曲线制做⽅法1.先将100mg/L(0.4394g KH2PO4(烘⼲2⼩时)先加⽔300ml，再加5ml浓硫酸，再定容到1L)的磷标贮液(磷酸⼆氢钾溶液)稀释20倍，⽐如吸取5ml定容到100ml2.配制3.摇匀后，10000rpm离⼼⼀分钟，室温⾼于15℃情况下，30min后，吸取300ul⾄酶标板⽐⾊备注：利⽤散点图绘制曲线，添加趋势线和r值，r^2要⼤于0.999。
利⽤forecast.line函数计算⽐⾊液磷含量钼锑抗配制⽅法1.浓硫酸153ml加⼊500ml左右H2O(⽤1L的烧杯)，⽤磁⼒搅拌器搅匀2. 1L烧杯中加⼊10g 钼酸铵,⽤磁⼒搅拌器融化3. 0.5g酒⽯酸锑钾加⼊100ml左右H2O(⽤100ml的烧杯)，⽤磁⼒搅拌器溶化4. 步骤3所得溶液倒⼊1L烧杯，在磁⼒搅拌器上混合均匀，定容到1L备注：避光储存，使⽤时每10ml 加⼊0.15g抗坏⾎酸⼆硝基酚溶液：0.2g ⼆硝基酚溶于100ml⽔中离⼼替代过滤，酶标仪替代分光光度计的⼟壤有效磷(碳酸氢钠浸提)测定⽅法1. 42g碳酸氢钠定容到1L，⽤4mol/L NaOH溶液(4mol/L,16g NaOH定容到100ml)调节pH⾄8.5，得到浸提剂2. 1.00g风⼲⼟加⼊50ml塑料管中，再加⼊0.1g活性炭粉，再加⼊20ml碳酸氢钠溶液，20~25℃，180rpm，震荡30min3.吸取1ml浸提液到1.5ml离⼼管中，10000rpm，离⼼1分钟4.吸取200ul上清液+700ul H2O+100ul钼锑抗试剂到1.5ml离⼼管中5.摇匀后，14000rcf，离⼼⼀分钟，室温⾼于15℃情况下，30min后，吸取300ul⾄酶标板⽐⾊备注：吸取的上清液体积可以根据显⾊情况调整，保证⽐⾊体系1ml，每个样品做三个重复植物组织全磷含量快速测定1.将烘⼲后的植物组织样品磨碎，再将样品粉末继续烘⼲⾄恒重。
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植物磷含量的测定钼锑
抗比色法
Document serial number【KK89K-LLS98YT-SS8CB-SSUT-SST108】
植物磷含量的测定（钼锑抗比色法）
一、实验目的?
1．掌握钼锑抗比色法测定磷的方法。
2．练习实际测量以及定容的操作。
3．练习分光光度计的使用。
二、实验原理?
植物样品经消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。
在一定酸度下,待测液中的正磷酸与钼酸铵和酒石酸锑钾生成一种三元杂多酸,后者在室温下能迅速被抗坏血酸还原为蓝色络合物,可用吸光光度法测定。
三、实验试剂
（1）2mol/LNaOH溶液
（2）0.2%二硝基酚指示剂?
（3）0.5mol/L?H2SO4硫酸溶液:28mL浓H2SO4加水稀释至1L。
（4）钼锑贮存溶液：量取153ml浓硫酸(分析纯，密度1.84g/ml)，缓缓加入到400ml蒸馏水中，不断搅拌，冷却。
另称取经磨细的钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·H2O，分析纯]10g溶于温度约60℃300ml水中，冷却。
然后将硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中。
再加入0.5％酒石酸锑钾[KSbOC4H4O6·1/2H2O，分析纯]溶液100ml，冷却后，加水稀释至1000ml，摇匀，贮于棕色试剂瓶中，此贮备液含钼酸铵1％，硫酸2.75mol/L。
（5）钼锑抗显色剂：称取1.50g抗坏血酸溶于100ml钼锑贮存溶液中，此溶液有效期不长，宜随配随用。
（6）5mg/L磷标准溶液：0.4394g在50℃烘干的磷酸二氢钾(KH2PO4。
分析纯)，100ml水，加
5ml浓硫酸(防腐)，用水定容到1L，浓度为100mg/L磷(P)，此溶液可以长期保存。
吸取上述溶液10ml于200ml容量瓶中，加水至标度，浓度为5mg/L磷(P)标准溶液，此溶液不宜久存。
四、实验步骤
1、吸取定容过滤或澄清后的消煮液2.00～5.00ml(V2,含P5～30ug)于50ml容量瓶中,
用水稀释至约20ml,加1～2滴二硝基酚指示剂,滴加2mol/L?NaOH溶液中和至刚呈黄色,再加入1滴0.5mol/L?H2SO4溶液,使溶液的黄色刚刚褪去呈淡黄色,然后加入钼锑抗显色剂5.00ml,摇匀,
用水定容(V3)。
在室温高于15℃的条件下放置30min后,用1cm光径比色槽在波长700nm处测定吸光度,以空白溶液为参比调节仪器零点。
2、校准曲线或直线回归方程:
准确吸取ρ(P)=5mg/L标准工作溶液0,1,2,4,6,8ml,分别放入50mL容量瓶中,加水至20ml,同上步骤显色并定容,即得0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8mg/LP标准系列溶液,与待测液同时测定,读取吸光度,然后绘制校准曲线或直线回归方程。
五、结果计算
W
p =
6
10
m
(V1/V2)
V3
c
⨯
⨯
⨯
×1000
式中:W
p
——植物磷的质量分数,g/kg;
c——从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质量浓度,mg/L;
V1——消煮液定容体积,ml;
V2——吸取测定的消煮液体积,ml;
V3——显色液体积,ml;
m——称样量,g;
六、注意事项
1、室温低于15℃时，可在30～40℃水浴中，显色30min。
2、植物磷含量0.5g/kg为低量，1.0~2.0g/kg为中量，大于2.0g/kg为高量。