细胞生物学实验教材-『新乡医学院』资料精

图 2-1 人口腔上皮细胞
（二） 血细胞涂片标本的制备与观察 1.制片 ⑴用小吸管吸取已抗凝和稀释的人血、小鼠血或蟾蜍血滴一小滴至载玻片的右端，另 取一张边缘光滑的载玻片，让其一边接触血滴，使之与玻片之间成 30°～45°角，迅速向 前推移，使玻片上留下薄而均匀的血膜（图 2-2）。通常推片与玻片间的角度愈大，血膜愈 厚；斜角愈小，速度愈快，则涂片愈薄。血滴的大小对血膜厚薄也有影响，血滴越大，则血 膜越厚。推片时速度要一致，否则血膜呈波浪形，厚薄不匀。 ⑵将血涂片放置在空气中自然晾干，也可手持涂片在空气中晃动以加速其干燥。 ⑶染色：在玻片上血膜薄而均匀的区域滴上几滴瑞氏染液或先用玻璃蜡笔在血膜较薄区 画一圆圈，再往圈中滴加染液，这样可防染液向四周扩散）。染色 1 分钟后往染液中加入等 量的蒸馏水稀释染液，继续染 2～3 分钟。此时，液面上可浮现一层金黄色的金属样物质。 ⑷用自来水轻轻冲去玻片上的染液，晾干后即可。 ⑸以同样的方法再制备一张鸡血涂片。
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片放在两手指夹着的布间，然后均匀地前后移动擦净载玻片的两面。盖玻片小而薄，擦时必 须小心，把一张盖片放在左手两手指夹着的布间，并轻轻捏住，右手指夹持盖片的边缘向一 个方向转动进行擦拭，用力需轻而均匀。 （一）人口腔粘膜上皮细胞标本的制备与观察 1.粘膜细胞涂片标本的制备：方法 1:吸取一滴碘液滴在一张洁净的载玻片中央，用一 根灭菌的牙签伸入自己的口腔内壁刮取粘膜上皮细胞，然后将它涂在载玻片上的染液中并来 回搅动使细胞散开；方法 2:刮取粘膜上皮细胞，按一定方向涂在洁净上的载玻电上，加一 滴甲苯胺蓝溶液染色 1 分钟左右后小心加盖盖玻片（尽量避免产生气泡）用滤纸吸去盖玻 片周围的液体。 2.观察：将自制的口腔上皮细胞标本片置于显微镜下观察，先用低倍镜寻找较分散的、 轮廓清晰的上皮细胞，由于该细胞体积较小、着色较淡，观察寻找时应稍降低视野中的亮度 以便于较快找到目标。用甲苯胺蓝染色的上皮细胞呈淡蓝色，用碘液染色的呈黄色。成群或 分散分布，形态大多呈扁平椭圆状（图 2-1）。选择轮廓清晰的细胞移至视野中央，转高倍 镜观察。 高倍镜下可见人的口腔粘膜细胞外有一层薄薄的细胞膜，扁圆形的细胞核呈深黄色(碘 染色)或深蓝色（甲苯胺蓝染色），位于细胞中央，细胞质染成浅黄色或浅蓝色。在核中有时 可见一致密的结构，即为核仁。
实验一 细胞的形态结构与显微测量
【实验目的】 1.掌握人体及动物等真核细胞的基本形态结构。 2.掌握临时玻片标本的制备方法。 3.进一步掌握光学显微镜的使用方法。 4.掌握显微测量的基本方法。
【实验原理】 细胞是生物体的结构和功能的基本单位。构成人体或其他高等生物体的细胞种类繁多、 形态各异，而且这些细胞的形态与其功能往往相适应，如具有收缩功能的肌细胞呈条形或长 梭形；运输O2和CO2的红细胞(RBC)为双凹圆盘状，便于在血管中流动；具有感受刺激、传导 冲动功能的神经细胞一般附有长短不一的树枝状突起；精子细胞具有一根长长的鞭毛，故很 善于运动；巨噬细胞（macrophage）呈不规则形状，能伸出伪足，吞噬和消灭外源的病原微 生物。 细胞的体积差别很大，一般来讲，真核细胞的体积要大于原核细胞，高等动物的卵细胞 大于体细胞（卵细胞含有较多的营养物质──卵黄）。对于大多数人体及动物的细胞来说， 其体积一般在 20～30μm 之间，必须借助于光学显微镜才能被观察到。由于细胞体积微小， 而且含有较大比例的水，故大多是无色透明的，如果不经染色处理，在显微镜下难以看清细 胞的结构。因此，要观察某种细胞时，通常先进行染色处理。在普通光镜下，一般可见人体 及动物细胞的基本结构分为细胞膜、细胞质和细胞核等 3 个部分。 细胞中分布有多种具有一定结构与功能的细胞器，它们有的体积较大，如线粒体和高尔 基复合体，可通过不同的染色方法将其在光镜下分别显示出来，这些在光镜下常可见的结构 通常称为细胞的显微结构。 【器材与试剂】 1.器具：显微镜、载玻片、盖玻片、蜡盘、牙签、纱布、药棉、吸水纸、擦镜纸、剪刀、 小尖摄、解剖针、玻璃缸、显微测微尺。 2.材料：小白鼠、青蛙、蟾蜍、人口腔上皮细胞、洋葱、鸡血液、人血液、小鼠精子、 兔或猪脊髓、蛙肾小管切片、猫卵巢切片、猫小肠切片、兔或大鼠肝脏切片。 3.试剂：1％碘液、1％甲苯胺蓝、瑞特染液，Ringer 液，显微镜油，乙醚酒精，二甲 苯。 4.试剂的配制： ⑴1％碘液：称取 1g 碘片和 2g 碘化钾溶于 100ml 的 80％乙醇或蒸馏水中即可。 ⑵1％甲苯胺蓝：称取 1g 甲苯胺蓝染料加蒸馏水 100ml溶解即可。 ⑶瑞特染液：称取 0.1g 瑞特染料（Wright's stain）粉放入研钵中研细，从 60ml 甲醇中取少许加入研钵中反复研磨，最后加入全部甲醇混匀，装入棕色瓶中保存备用。 【内容与方法】 一、细胞标本的制备及细胞基本形态结构的观察 所有需观察的细胞都应放置到无色透明的载玻片上制备成临时或永久玻片标本后才适 于在光镜下观察，在很多情况下，在细胞或组织上还需加盖一张薄而小的玻片──盖玻片， 以起到保护标本的作用。 制备玻片标本所用载玻片和盖坡片要进行清洁，其步骤如下：载玻片先用洗衣粉水刷洗， 清水冲洗后，经洗液浸泡 24 小时以上，再用流水充分冲洗，最后烤干备用。对于临时制片 所用的载玻片和盖玻片若要求不高也可用揩擦的办法来清洁，即取一张载玻片，用左手拇指 和食指夹持载玻片的两端，右手的拇指和食指夹着一块形态结构与显微测量……………………………………1 实验二 DNA 和 RNA 的显示……………………………………………… 6 实验三 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的显示……………………………7 实验四 细胞内酸性磷酸酶的显示………………………………………9 实验五 线粒体和高尔基复合体的光镜观察……………………………11 实验六 细胞生理活动的观察……………………………………………13 实验七 有丝分裂标本的制备和观察……………………………………14 实验八 减数分裂标本的制备与观察……………………………………16 实验九 细胞组分的分级分离……………………………………………19 实验十 细胞培养技术……………………………………………………22 实验十一 细胞培养的冻存与复苏技术……………………………………38