百合多糖脱蛋白方法的研究
关于多糖脱蛋白质方法的比较_199
关于多糖脱蛋白质方法的比较关于多糖脱蛋白质方法的比较李志军(青岛农业大学,山东青岛 266109)[摘要]目的:从樟芝中提取分离樟芝多糖,并尝试对其多糖脱蛋白的方法进行选择。
方法:采用Sevage法、NaOH法、TCA法、双氧水法等方法进行脱蛋白,并用苯酚—硫酸法和考马斯亮蓝法以脱蛋白率和总糖损失率为指标进行比较。
结论:通过对数据的计算比较得知酶法与Sevage法联合脱蛋白率最高和总糖损失率最低,分别为81.7%和14.7%,脱蛋白效果较为理想。
[关键词]樟芝多糖;分离;提取;蛋白含量;总糖含量1引言多糖(polysaccharides,PS)又称多聚糖。
其广泛存在于动物,高等植物,微生物及海藻等机体中,是由各种单糖组成的天然高分子化合物。
多糖具有复杂、多方面的生物活性和功能,可作为广谱免疫促进剂,具有免疫调节功能。
随着分子生物学的发展,20世纪60年代后,多糖所具有的各种生理功能逐渐为人们所重视,尤其是增强免疫力的功能被广泛认同,并被广泛应用于肿瘤化疗。
但天然植物中多糖与蛋白质两种高分子成分共存,且两种物质分子量相近,另外多糖常常与蛋白形成糖蛋白复合物,使蛋白质的脱除变得更加困难。
因此,如何尽量多的去除蛋白质而保留多糖的有效成分成为了一个突出的问题,本文以脱蛋白率和多糖损失率为指标,尝试对真菌多糖脱蛋白的方法进行选择。
1.1糖标准曲线的制备(张惟杰,1994)称取干燥至恒重的无水葡萄糖200mg,置1000ml容量瓶中,加水溶解后稀释至刻度制成贮备液,分别吸取贮备液0.2,0.4,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6,1.8,2.0ml加水稀释至4ml,向各管中加入5%苯酚试剂2ml,混匀。
沿管壁加入浓硫酸10ml,静置5min,振摇,置沸水浴中加热15min立即转入冷水浴中冷却至室温。
以蒸馏水为空白,在490nm波长处测定吸光度(丰朝霞,2000),以糖浓度和吸光度为坐标,回归方程为:Y=0.006+0.072X,相关系数:t=0.995。
多糖除蛋白的方法
多糖除蛋白的方法多糖除蛋白是一种常见的实验技术,用于制备纯化的多糖样品。
它适用于许多不同类型的多糖,包括淀粉、聚葡萄糖、海藻酸等。
在本文中,我们将详细介绍多糖除蛋白的方法。
多糖除蛋白的方法有多种,其中最常用的是酶法和重组蛋白亲和层析法。
下面我们将详细介绍这两种方法。
1.酶法:酶法是最常用的除蛋白方法之一。
多糖通常会与蛋白质结合在一起形成复合物,通过酶法可以将这种复合物分解成单独的多糖和蛋白质。
酶法分为两步:预处理和酶处理。
预处理:首先将多糖样品与一定体积的缓冲液(如PBS缓冲液)混合,使其达到适宜的pH值和离子强度,并加入一定量的还原剂(如二硫代乙酸)以破坏多糖的分子间氢键。
然后加入一定浓度的蛋白酶抑制剂(如苯甲酸硼酸盐)以保护多糖不受蛋白酶降解。
酶处理:选择适合的酶对多糖进行处理。
常用的酶有葡萄糖酸酶、淀粉酶等。
将酶加入预处理好的多糖样品中,并在适宜的温度和pH条件下进行酶解反应,通常持续数小时至数天。
酶解反应结束后,将样品进行离心分离,上清液中即可得到纯化的多糖样品。
2.重组蛋白亲和层析法:重组蛋白亲和层析法利用多糖和结合多糖的蛋白质之间的特异性相互作用来分离蛋白质。
这需要使用带有特定亲和标签(如Histidine 标签)的重组蛋白来结合多糖。
以下是该方法的具体步骤:制备多糖亲和柱:在柱子中填充具有亲和标签的重组蛋白(如融合了Histidine标签的亲和素树脂)。
样品处理:将多糖样品与一定浓度的缓冲液混合,并加入适量的离子强度调节剂(如NaCl),使其达到适宜的pH和离子强度。
样品加载:将样品加载到多糖亲和柱中,并进行一定的洗脱步骤以去除非特异结合的蛋白质。
洗脱:使用具有高亲和性的络合剂(如带有希尔斯标签的络合剂)来洗脱绑定的多糖和蛋白质复合物。
这样,多糖和蛋白质将分开,并且纯化的多糖样品将固定在亲和柱上。
重组蛋白亲和层析法是一种有效的多糖除蛋白方法,因为它可以通过特异性相互作用来分离多糖和蛋白质,从而获得高纯度的多糖样品。
百合多糖的提取与纯化研究进展_唐明
农产品加工·创新版2009年第10期收稿日期:2009-09-17作者简介:唐明(1985-),男,湖南人,研究方向:农产品深加工。
E-mail :yefenghan204@ 。
百合多糖的提取与纯化研究进展唐明,秦丹,刘沙(湖南农业大学食品科学技术学院,湖南长沙410128)摘要:我国百合资源丰富,百合多糖具有广泛的保健作用。
介绍了几种百合多糖的提取与纯化方法。
关键词:百合多糖;提取;纯化中图分类号:S644.1文献标志码:AResearch Advance on Extraction and Purification Methods of PolysaccharideTang M ing ,Qin Dan ,Liu Sha(College of Food Science ,Hu'nan Agricultural University ,Changsha ,Hu'nan 410128,China )Abstract :Bulbuslily polysaccharide have comprehensive health function ,there are abundant bulbuslily resources in China.This article mainly describe extraction and purification methods of polysaccharide.Key words :bulbuslily polysaccharide ;extraction ;purification0引言百合(BulbusLily ),又名白百合、家百合、喇叭筒、山百合、药百合等,为百合科植物卷丹(nafolium Thunb )、磨香百合(L.long orum Thunb )、细叶百合(L.pumilum Do.)等的干燥肉质鳞叶,其鳞茎酷似大蒜,其味如山薯,故古时称为“蒜脑薯”[1,2]。
银耳多糖的纯化及其生物活性
银耳多糖的纯化及其生物活性侯彦辉1,2,李喜阁1,2,张凤仪1,2,姜朝鲜1,2,张佳玮1,2(1.天津工业大学材料科学与工程学院,天津300387;2.天津工业大学省部共建分离膜与膜过程国家重点实验室,天津300387)摘要:为了得到纯度更高的银耳多糖(TFPS ),采用AB-8大孔树脂吸附法、酶法、三氯乙酸(TCA )法、D-葡萄糖啄-内脂(GDL )法和聚酰胺法对粗制银耳多糖(CTFPS )进行纯化即脱蛋白处理。
以多糖损失率和蛋白质脱除率为依据选取脱蛋白效果最佳的方法,并通过单因素实验优化银耳多糖脱蛋白工艺条件。
利用红外和SEM 对脱蛋白前后的银耳多糖进行结构分析,并结合抗氧化活性和吸湿保湿性能测试,对脱蛋白前后的银耳多糖进行生物活性对比。
结果表明:AB-8大孔树脂吸附法的脱蛋白效果最佳,最优工艺条件为CTFPS 水溶液质量浓度5mg/mL 、AB-8大孔树脂用量100mg/mL 、吸附时间5h 、吸附温度20益;在此条件下,蛋白质脱除率为82.47%,多糖损失率为18.24%,且银耳多糖脱蛋白纯化后的抗氧化活性和吸湿保湿性能均优于未脱蛋白银耳多糖。
关键词:银耳多糖(TFPS );脱蛋白;结构分析;抗氧化活性中图分类号:TS201.2文献标志码:A 文章编号:员51员原园圆源载(圆园24)园2原园园60原08收稿日期:2022-12-12基金项目:国家自然科学基金资助项目(51873223)通信作者:侯彦辉(1977—),男,博士,副教授,主要研究方向为植物提取、烃催化聚合和有机光电功能材料。
E-mail :*****************Purification and biological activity of Tremella fuciformis polysaccharidesHOU Yanhui 1,2,LI Xige 1,2,ZHANG Fengyi 1,2,JIANG Chaoxian 1,2,ZHANG Jiawei 1,2(1.School of Material Science and Engineering ,Tiangong University ,Tianjin 300387,China ;2.State Key Laboratory of Separation Membranes and Membrane Processes ,Tiangong University ,Tianjin 300387,China )Abstract :In order to obtain a purer Tremella fuciformis polysaccharide (TFPS )袁the crude Tremella fuciformis polysaccha鄄ride (CTFPS )is purified with AB-8macroporous resin method ,enzymatic method ,trichloroacetic acid (TCA )method ,and glucono-delta-lactone (GDL )method ,respectively.Based on the loss rate of polysaccharide and re -moval rate of protein袁the method with the best deproteinization effect was selected from five different depro鄄teinization methods袁and the process conditions for deproteinization of TFPS were optimized through single factor experiments.The structure of TFPS before and after deproteinization was analyzed using IR and SEM.Mean鄄while袁the bioactivity of TFPS before and after deproteinization was compared through the antioxidant activity and moisture absorption and moisturizing property tests.The results showed that adsorption method with AB-8macro鄄porous resin was the best for protein removal袁and the optimal process conditions were aqueous concentration of CTFPS of 5mg/mL袁dosage of AB-8macroporous resin of 100mg/mL袁adsorption time of 5h袁and adsorption temperature of 20益.Under these conditions袁the removal rate of protein was 82.47%and the loss rate of polysaccharide was 18.24%.Moreover袁the antioxidant activity袁moisture-absorbing and moisturizing propertiesof TFPS after deproteinization were stronger than those without deproteinization.Key words :Tremella fuciformis polysaccharide渊TFPS冤曰deproteinization曰structural analysis曰antioxidant activityDOI :10.3969/j.issn.1671-024x.2024.02.010第43卷第2期圆园24年4月Vol.43No.2April 2024天津工业大学学报允韵哉砸晕粤蕴韵云栽陨粤晕GONG 哉晕陨灾耘砸杂陨栽再银耳是担子菌门真菌的子实体,既是一种具有经济价值的食用菌,又是中医学中久负盛名的良药[1]。
多糖除蛋白的方法
多糖除蛋白的方法
以下就是小编给大家盘点的多糖除蛋白的方法,仅供大家参考。
多糖中常含有蛋白质,为了除去多糖中的蛋白质,常采用以下方法:
1.Sevage法:在多糖溶液中加入体积4∶1的氯仿-
正丁醇混合溶液,充分振摇,将游离蛋白质变性成为不溶性物质而沉淀,经离心或分液去除蛋白质。
2.鞣酸法(TA法):多糖在偏酸性环境下与鞣酸结
合形成不溶于水的沉淀,从而与蛋白质分离。
该方法较为温和,但效率较低。
3.三氯醋酸法(TCA法):多糖在三氯醋酸中形成沉
淀,从而与蛋白质分离。
该方法也比较温和,但效率同样较低。
此外,还有其他方法可以用于多糖除蛋白,如透析法、离子交换层析等。
在实际应用中,需要根据具体情况选择合适的方法。
百合多糖的纯化与化学结构鉴定研究
腔柱层析鉴定均为单一组分 , 两种多糖进行气相色谱 和凝腔柱层析分析 , 将这 结果如下 : L1 P 由葡 萄糖 、 甘露糖组成 , 比例为 12 4 , : .6 分子量为 7 9 1 ' 4x 0 L2 P 由葡 萄糖 、 半乳糖 、 甘露糖 、 阿拉伯糖、 半乳糖醛酸组成 , 比例 为 10 7 : . : . : 4 分子量 18 5x14 : .3 2 6 18 0 8 , . 1 0
纯 化方法 。本研究 从百 合水提 液 中分 离纯 化 鉴定 了两 S a 司产 品 i 公 m g
种百合中功能性多糖 , 为百合保健食品的开发研究提
供 了理 论依 据 。
1 仪器 与 材料
兰色葡 聚糖 和 G一 0 为 P amai 司产 品 20 hr c a公
木瓜蛋 白酶 ( 酶活力 6 万单位) 0 为食用级 酶制剂厂产品
维普资讯
l4 02 j 3 . 1 20, . . 5 2
矗 嗣■ 学
※分析检验
百合多糖 的纯化与化学结构鉴定研究
刘成梅
摘 要
付桂明
游海
涂宗财
万茵
江西南太 中德食品工程中心
南昌 30 4 307
本研究从百合水提液 中分离纯 化得到两种多糖 L t :得率分别为鲜百合重 0 5 % 、 5 , P、 , 5 0 2 % 经纸层析和凝
二十世纪六十年代以来 , 对百合保健功能的研究 开 始从单 纯药理 研 究 向保 健功 能成分 的研 究转变 ,国 式为 cz O, z N 并对其抗癌功能作用及机理做了许多 H 研究 “。另有研究表明, 】 从百合中提取的皂甙具有止
咳 、平 喘等 功能 。而作为 百合 中主要功 能成分 之一 的
百合多糖提取及成分分析
百合多糖提取及成分分析作者:张国强杨正平来源:《湖北农业科学》2012年第15期摘要:采用水提醇沉法提取百合(Bulbuslilii)中的多糖成分,Sevage法除蛋白质,凝胶色谱法进行多糖纯化,制备3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉酮(PMP)衍生物进行高效液相色谱分析。
结果表明,百合多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、半乳糖5种单糖组成,其含量分别为4.82%、12.79%、47.02%、13.01%、22.36%。
关键词:百合(Bulbuslilii);多糖;提取;成分分析中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:0439-8114(2012)15-3298-02ExtractionandCompositionAnalysisofPolysaccharidesinBulbusliliiZHANGGuo-qiang,YANGZheng-ping(SchoolofBiotechnologyandFood,AnyangInstituteofTechnology,Anyang455000,Henan,China)Abstract:PolysaccharidewasextractedandisolatedfromBulbusliliibywaterextracting-alcoholprecipitatingmethodandpurifiedbySevagemethodandgelpermeationchromatography.ThecomponentsofthepolysaccharidewereidentifiedandquantifiedbyHPLCofthePMPderivatives.TheresultsshowedthatthemainmonosaccharidescontainedinB. liliipolysaccharidewererhamnose,arabinose,glucose,xyloseandgalactose,withcontentof4.82%,12.79%,47.02%,13.01%and22.36%,respectively.Keywords:Bulbuslilii;polysaccharide;extraction;componentanalysis百合(Bulbuslilii)是百合科百合属多年生草本球根植物[1],其味甘、微苦,具有补益心肺、调理脾胃、清热止痰之功效,对体虚肺弱、慢性支气管炎、肺气肿、肺结核及神经衰弱、失眠、高血压、胃溃疡等有一定疗效[2],是传统的药食同源植物。
龙牙百合多糖的纯化及其分子量的测定
305※工艺技术食品科学2008, Vol. 29, No.11龙牙百合多糖的纯化及其分子量的测定陈小蒙1,2,刘成梅1,2,*,刘 伟1,2(1.南昌大学 食品科学与技术国家重点实验室,江西 南昌 330047;2.南昌大学中德食品工程中心,江西 南昌 330047)摘 要:本研究用DEAE-sepharose Fast Flow 柱从百合水提物中分离纯化得到两种多糖LLP 1、LLP 2,经高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)鉴定LLP 1为单一组分、LLP 2为糖蛋白,将这两种多糖进行气相色谱分析。
结果如下:LLP 1由甘露糖、葡萄糖和阿拉伯糖组成,分子量为11756D ,L L P 2由半乳糖、鼠李糖和阿拉伯糖组成,分子量1038773D 。
关键词:龙牙百合多糖;纯化;分子量;H P G P CPurification and Molecular Weight Determination of Longya lilium PolysaccharideCHEN Xiao-meng 1,2,LIU Cheng-mei 1,2,*,LIU Wei 1,2(1.State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China ;2.Sino-German Food Engineering Center, Nanchang university, Nanchang 330047, China)Abstract: Two polysaccharides (LLP 1 and LLP 2) were isolated from Longya lilium water extract with DEAE-Sepharose Fast Flow column. They are identified as pure polysaccharide and glycoprotein by HPGPC, respectively. The monosaccharide composi-tions of LLP 1 consist of Man, Glu and Ara, and its molecular weight is 11756 D. The monosaccharide compositions of LLP 2 are Gal, Rha and Ara and its molecular weight is 1038773 D.Key words: Longya lilium polysaccharide (LLP);purification ;molecular weight ;HPGPC中图分类号:R284.2;O636.9 文献标识码:A 文章编号:1002-6630(2008)11-0305-03收稿日期:2007-11-30基金项目:教育部“长江学者和创新团队发展计划”项目(IRT0540)作者简介:陈小蒙(1983-),女,硕士研究生,研究方向为天然产物提取分离。
水提法提取百合多糖优选工艺的研究
水提法提取百合多糖优选工艺的研究熊明郁;牛世全【摘要】[目的]优选水提法提取百合多糖的工艺条件.[方法]以新鲜兰州百合为原料,采用水提法提取百合多糖,以浸提时间、固液比、温度以及浸提次数作为因素进行单因素试验,在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验设计优化百合水溶性多糖的提取工艺条件.[结果]试验表明,百合水溶性多糖的最优提取工艺条件为:固液比1∶20 g/ml,温度80℃,浸提时间1 h,浸提2次,此条件下百合粗多糖提取率为0.92%.[结论]研究可为兰州百合的研究与利用提供一定的理论依据.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2014(042)036【总页数】4页(P13047-13049,13065)【关键词】百合多糖;水法提取;正交试验【作者】熊明郁;牛世全【作者单位】西北师范大学生命科学学院,甘肃兰州730000;西北师范大学生命科学学院,甘肃兰州730000【正文语种】中文【中图分类】S644.1兰州百合(Lilium Brownii)是一种多年生鳞茎类草本植物,是百合科百合属川百合的一个变种。
百合原产亚洲东部的温带地区,我国南北26个省、自治区都有它的踪迹。
兰州拥有得天独厚的土壤条件和多年积累的栽培技术,出产的百合色白、个大、味美、营养丰富,成为全国种植百合的佼佼者。
兰州市西果园乡、魏岭乡、黄峪乡以及榆中县兰山乡等都是兰州优质百合的主产区,2008年兰州百合的种植面积已达0.67万hm2,其中兰州市占0.40万hm2,适宜种植的甘南、临夏、定西等地合计种植0.27万hm2。
兰州百合色泽洁白如玉、肉质肥厚香甜,营养价值极高,又是我国唯一的甜百合,有很高的药用、食用、保健和观赏价值,因而备受东南沿海地区为主的消费者的喜爱。
最早在1 700多年前的《神农百草经》中发现关于百合的记载,东汉医圣张仲景明确了百合的清热、宁心、安神之效。
而后,唐朝医学家孙思邈在《千金翼》书中叙述了百合的栽培技术。
多糖类物质脱蛋白方法的概况
多糖类物质脱蛋白方法的概况张民;郭志红;周鸿立【摘要】多糖具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖、降血脂、抗病毒、抗凝血等多种功能,但粗多糖提纯一直存在诸多问题,糖蛋白纯化具有重要意义.本文仅就脱蛋白纯化多糖方法进行综述,目的是为纯化多糖提供前期工作文献支持.【期刊名称】《吉林化工学院学报》【年(卷),期】2013(030)005【总页数】4页(P43-46)【关键词】多糖;脱蛋白;纯化【作者】张民;郭志红;周鸿立【作者单位】吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022;吉林大学化学学院,吉林长春130012;吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022【正文语种】中文【中图分类】R94自20世纪60年代以来,人们陆续发现多糖具有更多的药理作用,不仅可以作为广谱免疫促进剂具有免疫调节和抗衰老功能[1-2],而且可以在抗肿瘤、抗病毒[3]、抗炎、降血糖、降血脂[4-5]、抗辐射[6]等方面起作用.按其来源不同可分为细菌多糖、真菌多糖、藻类地衣多糖、植物多糖和动物多糖等.多糖作为一类重要的天然活性物质[7],最大优点是毒副作用小,来源广泛.但粗多糖中含有一定的蛋白质影,响其品质、其生理活性及其他方面的进一步研究[8].因此,如何脱去蛋白质纯化多糖成为一个突出问题,根据目前研究的现状,本文综述了各种脱蛋白的方法.1 多糖脱蛋白方法研究进展脱蛋白的方法有很多种,可分为:特异性脱蛋白方法和非特异性脱蛋白方法;或靶点脱蛋白方法和非靶点脱蛋白方法等;或按年代综述,五年一个周期,综述进展;也可分为物理法、化学法、生物法.根据目前文章常用的方法,选择了后种分类法,其中物理法包括吸附树脂法、壳聚糖絮凝法、电沉淀法等;化学法包括溶剂法[9-10]、金属络合法、低温冷冻法等[11];生物法包括单酶法、复合酶法、酶法结合溶剂法等[12],并比较其优劣,为脱去粗多糖中的蛋白得到高纯度的多糖提供理论依据.(再精炼点)2 多糖脱蛋白方法对比分析2.1 物理法2.1.1 大孔吸附树脂分离技术大孔吸附树脂分离技术于20世纪70年代末逐步应用到中草药有效成分提取分离的过程中的,它是采用特殊的吸附剂,使吸附性和筛选性相结合,有选择的吸附有效成分,去除无效成分的方法.2008年高美风[13]报道:比较 sevag法,蛋白酶法,乙酸铅法和732树脂法脱除黄芪多糖中的蛋白质的效果,结果表明蛋白酶法和732树脂法都能较好的脱去黄芪多糖中的蛋白质,尤以732树脂静态吸附效果为最佳,多糖得率达88.6%,蛋白质含量降至0.91%,而且732树脂成本低、快速、吸附效果好,样品损失小,便于在黄芪多糖的制备中推广使用.大孔树脂分离蛋白的方法高效、设备简单、操作方便、易于自动化、减少三废、收率高、质量好,浸出液与原成分的种类和相对含量完全一致等优点.该方法保持了原成分是一种适合大工业生产的具有前途的提取方法.目前吸附树脂的品种只有极性和非极性两个类型,不能满足有效成分分离的需要.2.1.2 低温冷冻法利用低温冰冻多糖提取液,使蛋白质变性而脱去.2007年林增祥等[14]人报道:通过冰冻多糖浸提液,可以去除大部分不溶的变性蛋白质和其它不溶的杂质,该方法简单易操作,成本低,不会引入新的化学试剂杂质,避免了在多糖的相关功能性产品开发中有毒物质残留的问题.2.1.3 高效逆流色谱分离技术高效逆流色谱分离技术(High SpeedCounter-Current Chromatography,HSCCC)是一种不用任何固态载体或支撑体的液液分配色谱技术.1994年HSCCC技术的创始人 Yiochiro lto博士发明了pH-局部精炼逆流色谱,使HSCCC的进样量大大增加,能方便快速地分离克数量级的样品,进样量可从毫克数量级到克数量级,进样体积从几毫米升到几百毫升,不仅适用于非极性化合物的分离,也适用于极性化合物的分离,既可用于中药粗提物提取物中各组分的分离和进一步精制.2008年单斌等[15]以荷叶多糖作为研究对象在选定的两相溶剂体系下,采用HSCCC法,研究得到最有条件:温度31 ℃,转速850rpm,流速1.8 mL/min,纯化多糖略带黄色的白色粉末,纯度为85.74%,得率为85.81%.该技术特点是分离效率高、产品纯度高、不存在载体对样品的吸附和污染,尤其适用于制备性提取,是一种简便的分离制备中草药有效成分纯品的新方法2.1.4 膜提取分离技术膜分离技术包括微孔过滤、超滤、纳滤等.原理是以压力为推动力实现溶质与溶剂的分离,具有分离不同分子量分子的功能.相对于传统的脱蛋白方法而言,采用中空纤维膜两级超虑脱去发酵液中的蛋白质,是一种从技术上和经济上都非常有吸引力的方法.它避免了传统方法加入大量有机溶剂沉淀蛋白质的不足,而且利于其它纯化单元的操作.2005年贾秋英等[16]利用中空纤维膜采用两级超滤法,考察了膜表面特性的影响和影响蛋白质截留率的主要因素,确定了最佳工艺条件为pH 为5.5~6.5,乙醇体积分数为15%,蛋白质的截留率为90%.膜分离技术的特点是:有效膜面积大、滤速快、形成表面浓度极化现象的几率小、无相态变化、低温操作不易破坏有效成分、能耗低等.使用膜技术可以在原生物体系环境下实现物质分离,可以高效富积产物、有效去除杂质.2.1.5 等电点沉淀法利用等电点使蛋白质溶解度最小的原理,在低温下析出大量蛋白质.1999年董宏平等[17]利用酒精沉淀和等电点沉淀的方法来脱去提取液中的蛋白质,结果表明等电点沉淀后,水提取液中的蛋白含量比直接用水提取减少了63.0%,酒精沉淀可获得较高的蛋白去除率,对直接提取液和两步提取液中的蛋白去除率分别可达64.8%和75.8%,但酒精使蛋白变性沉淀时也使部分与蛋白结合在一起的多糖沉淀出来后,不能用水重新溶解,从而最后多糖的回收率降低.同时使用酒精沉淀费用较大,故在大量提取时不宜采用此方法而选择等电点沉淀法.2.2 化学法2.2.1 溶剂法化学法包括加入水溶性的溶剂使蛋白质变性成胶状脱去的方法[18].其中溶剂包括盐酸[19-20]、氯化钙[21]等无机溶剂和氯仿、三氯乙酸等有机溶剂.氯化钙法操作简单、试剂廉价,但脱蛋白效果较其他方法差;盐酸法脱蛋白效果相对较好,简单易操作,但由于强酸性会使一部分多糖降解,并降低多糖的活性.虽然Sevag法脱蛋白条件温和,但是很难彻底去除,此法温和但需要重复5次左右才能基本脱去蛋白质,该方法的不足之处是脱蛋白过程中会除去浸提料液中糖蛋白等活性成分,并有有毒化学试剂氯仿的残留,因此所得多糖的应用会受到限制.与Sevag法相比较,TCA法除蛋白效果较好,无须重复多次,节省时间和试剂、多糖损失减少、得率高、还能脱去大量色素,但也有一定的化学试剂的残留,脱除这些残留试剂增加了后序的工作量.而三氟三氯乙烷法虽然效率较高,但因溶剂沸点较低(bp.56℃)易挥发,所以不易大量应用.后三种方法均不适合于糖肽,因为糖肽也会像蛋白质那样沉淀出来[22].传统溶剂法脱蛋白的效果较好,但都存在着许多缺点:有机溶剂用量大、耗时长、水相与有机相的分离困难、容易造成样品损失且有机溶剂具有毒性和腐蚀性.2.2.2 季胺盐沉淀法季胺盐沉淀法[23]:十六烷基二甲基铰澳化物(GTAB)及其碱(CI'A-OH)和十六烷基吡啶(CPC),需控制pH <9,无硼砂存在.季铵盐及其氢氧化物是一类乳化剂,可与酸性糖形成不溶性沉淀,常用于酸性多糖的分离[24].2.2.3 金属络合法利用费林试剂、氯化铜、氢氧化钡和醋酸铅等使蛋白质变性从而将其脱去.2012年陈一等[25]人报道:以灵芝为对象,比较Sevag法、酶法、醋酸铅法3种脱蛋白质的效果.结果表明醋酸铅法脱蛋白效果最好,蛋白脱除率89.4%、碳水化合回收率84.4%,并且可以得到较好的脱色效果.2.2.4 壳聚糖絮凝法壳聚糖絮凝法是利用壳聚糖加入到水提液产生絮凝沉淀,达到澄清药液和分离的一种方法,它具有澄清效率高、有效成分损失少、操作简单、成本低、安全无毒、几无澄清剂残留等优点.2009年王金鹏[26]报道:壳聚糖是一种阳离子高分子絮凝剂,与带负电蛋白质胶体分子接触时产生的电中和作用,使维持蛋白质空间结构的静电力发生改变,蛋白质就产生凝聚沉降.而多糖含有羟基,在水溶液中发生部分解离而带负电,也随着蛋白质一同被沉淀,导致多糖损失严重.另一方面,对于少量与多糖结合很牢固或被多糖包裹的蛋白质,通过酶解作用使糖被释放出来,从而可提高多糖粗产品的得率和蛋白质的脱除率.2.2.5 酒精变性法利用蛋白质被有机溶剂变性沉淀后难溶于水,而多糖被沉淀后可重新溶于水的原理脱蛋白.但是该方法使部分与蛋白结合在一起的多糖沉淀出来后,不能用水重新溶解,从而导致多糖的回收率降低[27].2009 年刘志军等[28]用酒精变性法纯化甜茶的水提物,得出用95%的酒精沉淀时,在36%的粗提取物中有23%的多糖得以纯化,证明是一种除去多糖的有效方式,可以在含有较多的多糖提取物中作为一种简单的纯化工具.2.3 生物法适宜的pH、温度和酶解时间[29],酶法是利用蛋白质水解酶使粗多糖中的蛋白质降解变成多肽等小分子的物质的方法..2.3.1 单酶法酶作为生物试剂具有经济、快速、高效安全、样品损失小等优点,一般根据酶的特点选择2010年王克俊等[30]研究败酱草多糖的脱蛋白工艺研究,酶法脱蛋白效果明显好于Sevag法、三氯乙酸法的多糖损失较多.在木瓜蛋白酶用量4%(W/V)、pH 值6.0、温度55 ℃ 、酶解时间2.5 h的条件下,败酱草多糖的蛋白脱除率为51.65% 、多糖损失率为7.93%.2.3.2 复合酶法相对于传统的方法,蛋白酶法对糖的损失较少,尤其是复合蛋白酶法不仅使多糖的得率提高,而且蛋白质的去除率也是最高的.2007年罗莹等[31]以大枣多糖为对象,比较 Sevag法、酶法 +Sevag法、木瓜蛋白酶法、胰蛋白酶法、复合蛋白酶法5种脱蛋白方法,结果表明以胰蛋白酶和木瓜蛋白酶联合使用的复合酶法效果最佳.在木瓜蛋白酶和胰蛋白酶浓度为5.3%、反应温度为55℃、反应时间为3.3 h的条件下,大枣多糖得率为50.30%、蛋白残留率 0.37%.2.3.3 酶法结合树脂法酶法和树脂法都是较好的脱蛋白质的方法,但是酶的专一性以及目前品种有限的树脂,限制其应用范围.2009年黄艳伟[32]等比较Sevag法、三氯乙酸法、酶法、离子交换树脂法和酶法结合离子交换树脂法脱蛋白等5种方法对剑麻果胶多糖脱蛋白效果的影响,结果表明:酶法与D152弱阳离子交换树脂结合法蛋白脱除率较高,并且多糖损失率较低,最佳条件为蛋白脱除率88.54%,多糖损失率9.25%.3 结论随着分子生物学的发展,人们逐渐认识到多糖及其复合物具有重要的生物活性,它具有控制细胞分裂和分化,调节细胞的生长与衰老等多种复杂的功能[33],但多糖的活性、药性与多糖的纯度有很密切的关系,因此,脱蛋白是有关多糖产品开发的热点.而如何保证较高的多糖保留率和蛋白脱除率,并不影响其生物活性成为脱蛋白考察的焦点.综上所述,每一种脱蛋白的方法都有其优缺点.传统的方法比较成熟,但传统的脱蛋白方法存在繁琐费时、消耗大量有机溶剂、多糖损失率高、易破坏多糖活性的缺点,难以作为工业化纯化手段加以利用[34].对于新兴的方法,如酶法、大孔树脂分离技术、膜分离技术等需要更加深人的研究,以便于寻找更加适合的脱蛋白方法.总之,在科研或生产研究中我们要比较其优缺点,按照实际情况,选择最佳的脱蛋白方法.参考文献:【相关文献】[1] S.Omaradottir,J.Freysdottir,H.Baraett,et al.Effects of lichen heteroglycans on proliferation and IL-10 secretion by rat spleen cells and IL-10 and TNF-alpha secretion by rat peritoneal macrophages in vitro[J].phytomedicine,2005,12(6/7):461-467.[2]彭述辉,曾援.功能性多糖的研究进展[J].安徽农业科技,2010,38(19):10255-10258. 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中药百合的研究与应用
中药百合的研究与应用艾庆燕;康思源;赵豫凤【摘要】百合具有较好的药用价值和保健功能,其主要生物活性物质有多糖、皂甙、类黄酮、生物碱等,本文从百合的化学组成成分、各成分的药理作用及相应的临床应用等方面,结合近年的大量研究进行综述,为百合在药用、方剂、预防保健方面的研究和开发提供理论依据.【期刊名称】《延安大学学报(医学科学版)》【年(卷),期】2016(014)002【总页数】3页(P63-65)【关键词】百合;化学成分;药理作用;临床应用【作者】艾庆燕;康思源;赵豫凤【作者单位】延安大学医学院组胚教研室,陕西延安 716000;延安大学医学院组胚教研室,陕西延安 716000;延安大学医学院组胚教研室,陕西延安 716000【正文语种】中文【中图分类】R282百合(Liliumspp)是多年生宿根草本植物,其食用部分由100多片肉质鳞片抱合,有“百片合成”之意而得名,如卷丹百合、细叶百合等的鳞茎片,具有较好的药用价值和保健功能。
我国是百合属植物的故乡,也是最早对其应用和栽培的国家。
对百合作为中药的应用,我国最早记载于《神农本草经》,其性寒味甘,有滋阴清肺、化痰止咳、宁心安神的功效。
现代研究已证实,百合含有多种化学成分,具有止咳祛痰、抗抑郁、耐缺氧抗疲劳、降低血糖、抑制迟发性过敏性反应、催眠安神、抗癌等功效[1]。
国内对百合的研究主要集中在鉴定品种、分析化学成分、研究药理作用和临床疗效等方面,对其保健功能方面,也开始向研究保健功能因子方向转变,本文结合近几年对百合的研究进行综述,为百合的药理活性、临床应用、保健食品等行业的研究与应用提供依据。
百合中含淀粉、蛋白质、脂肪、多种氨基酸、多种微量元素、多种维生素及膳食纤维等营养素。
现代医学发现,药用百合球茎中含有多种生物活性成分,主要有百合多糖、生物碱、皂甙、类黄酮等。
1.1 多糖多糖是百合的主要功能因子之一。
百合多糖是通过吡喃糖苷键结合半乳糖、D-葡萄糖及D-甘露糖等而构成[2],但因受百合来源、品种及制备方法的不同,各研究者所得出的百合结构也有一些差别。
卷丹和百合化学成分与提取方法研究进展
卷丹和百合化学成分与提取方法研究进展(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)【摘要】介绍了近十年来,卷丹和百合化学成分和提取方法方面的研究进展,主要集中在甾体皂苷、多糖和秋水仙碱;甾体皂苷的提取方法有醇提—大孔树脂吸附法、醇提—正丁醇萃取法;多糖的提取方法有水提醇沉法和复合酶法;秋水仙碱的提取方法有有机溶剂提取法和超临界二氧化碳流体萃取法。
【关键词】卷丹百合成分提取Abstract:This article introduced the research advancement of Lilium lancifolium Thunb. and L.brownii F.E.Brown Var.viridulum Baker chemical compositions and the extraction method in recent ten years, mainly concentrated in the steroid saponin, the polysaccharide and the colchicine, the steroid saponin extraction has ethanol extract- the pocket resin absorption law and ethanol extraction -the normal butyl alcohol extraction method; the polysaccharide extraction has water extract and ethanol to sink, thecompound enzyme law; the colchicine extraction has the organic solvent extraction process and the supercritical carbon dioxide fluid extraction method.Key words:Lilium lancifolium Thunb.; L.brownii F.E.Brown Var.viridulum Baker; Ingredient ; Extraction中药百合来源于植物卷丹Lilium lancifolium Thunb.百合L.brownii F.E.Brown Var.viridulum Baker 和细叶百合L.pumilum DC. 的干燥肉质鳞叶,最早记载于《神农本草经》,细叶百合主要分布于东北,野生为主,市场少见。
百合多糖的提取与纯化
(1)热水提取法热水提取法的原理是利用水作溶剂,在高温下将多糖溶出。
根据文献,用热水提取法对桑黄菌丝体多糖提取的优化方案为:料液比1∶50,温度9O ℃,煮2 次,每次2 h,粗多糖提取率为 3.22%。
该方法具有设备简单、操作方便、适用面广等优点,但也存在操作时间长,对不同成分的浸提速率及分辨率不高,重复过程多,效率较低,能耗高等缺点。
(2)微波辅助法微波提取是利用微波的穿透性能够透入基质内部形成内热源,利用其加热的选择性,能够使细胞内各细胞器升压,细胞壁破裂,使目标成分从细胞中释放出来并溶解于溶剂中。
微波辅助法提取多糖得率最低,但微波能促进反应的高效性和强选择性,具有操作方便、省时、节能等特点,提取含量相对较高,同时微波辅助提取法所得到的产品副产物少,易提纯,微波加热还易使植物细胞壁破裂,能有效提高提取率。
微波功率大,萃取温度高,导致多糖浸提速度加快,提取率增加,但温度过高会影响多糖的活性。
(3)超声波法超声波法提取多糖的得率较高,高超声波法是应用超声波来强化提取多糖,通过空化、振荡等作用,促进细胞周围形成微流,从而提高细胞膜及细胞壁的通透性,是一种物理破碎过程。
超声波是频率高于20 kHz 的机械波,它在媒质中传播时可产生空穴作用,空穴中产生的极大压力造成被破碎物在瞬间破碎,同时超声波产生的振动作用加强了破碎物的扩散及溶解。
因此,在提取细胞内物质的过程中可用超声波进行细胞壁破壁,从而达到充分释放多糖,提高多糖提取量的作用。
超声波提取法具有时间短、效率高等特点,该法较热水提取法简便,因此超声波法仍是值得推广的一种提取方法。
(4)酶法酶法提取多糖得率较低,木瓜蛋白酶是植物性蛋白水解酶,该酶可水解多糖溶液中的大部分游离蛋白质和部分结合蛋白质,使提取液中只含有少量蛋白质,降低了它们与多糖的结合力,有利于多糖的浸出。
此法可浓缩工艺和简化脱蛋白操作,可达到提高提取率、缩短提取时间、减少能耗和有效保存多糖生物活性的目的,但是操作繁琐,时间较长。
百合多糖提取和功能性活性评价
百合多糖提取和功能性活性评价百合(Lilium spp.)是野生花卉之一,广泛种植和栽培于世界各地,被广泛用于食品、医药和化妆品等领域。
百合花中含有许多种类的化学成分,其中多糖是其中一种重要的成分。
百合多糖是由多种单糖组成的复合多糖,具有多种保健和药用价值。
因此,研究百合多糖的提取和功能性活性评价具有重要的意义。
一、百合多糖的提取百合多糖的提取方法有很多种,常用的有水提法、醇提法和酸水提法等。
其中,酸水提法是一种常用的提取方法。
其具体步骤如下:1.将干燥的百合花材料粉碎,并使用适量的水浸泡2-3小时。
2.将浸泡好的百合花材料煮沸,加入适量的醋酸和HCl,使溶液pH值在3-5之间,然后继续沸腾3-4小时。
3.离心,将上清液收集起来。
4.用等量的酒精沉淀百合多糖,再用酒精洗涤2-3次,最后干燥制备。
二、百合多糖的功能性活性评价1.抗氧化活性百合多糖具有抗氧化作用,可以通过清除自由基和抑制氧化反应来预防和治疗氧化应激相关疾病。
可以通过多种方法来评价百合多糖的抗氧化活性,如DPPH自由基清除试验、ABTS自由基清除试验和还原力试验等。
其中DPPH自由基清除试验是最常用的方法之一。
2.免疫调节作用百合多糖具有免疫调节作用,可以增强机体的免疫功能,调节免疫系统的平衡。
可以通过评价其对T淋巴细胞的增殖活性、调节细胞因子的表达等指标来评价其免疫调节作用。
其中,T淋巴细胞增殖活性试验是评价其免疫调节作用的重要方法之一。
3.抗肿瘤作用百合多糖具有抗肿瘤作用,可以抑制肿瘤细胞的生长和扩散,预防和治疗肿瘤。
可以通过评价其对肿瘤细胞的细胞毒作用、抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭等指标来评价其抗肿瘤作用。
其中,细胞毒作用试验是评价其抗肿瘤作用的重要方法之一。
总结百合多糖是一种具有多种保健和药用价值的复合多糖。
其提取方法有多种,酸水提法是其中一种常用的提取方法。
通过评价其抗氧化、免疫调节和抗肿瘤等功能性活性,可以更好地研究其保健和药用价值。
百合科药用植物多糖研究进展
多糖又称多 聚糖 , 是由 1 O个 以上 的单糖 通过糖苷键聚合 而 成的天然 高分 子化合物 , 在 自然界高等植 物 、 藻类 、 细菌类 及动物体 内均有多糖存在。2 O世纪 6 0年代后 , 人们对多糖 的 研究逐 渐深 入 , 大量研究证实 , 多数多糖 不仅具有重要 的药物 活性 , 而且有一部分多糖具有营养保健作用l 1 l 。百合科植物 多 糖存在 于植 物的各器官中 , 以果实 、 种仁( 中草药类多为全 草 ) 多糖 的提取 与测 定研 究较 多 ,对此类多糖药用机理的深入研 究较少 。 1 多 糖 的 提 取分 离纯 化 [ l 植 物多糖 因存在部位不 同有所差异 ,从 种仁 中提取多糖 常需脱脂处理 , 其他部位 的预处理与否各研究报道不 同。目前 有 多种 提取方法 , 如酶法 提取 , 超 声波 提取 , 微 波提 取 、 浸提 等。得到的多糖提取液可直接过滤或离心除去不溶物 , 浓缩后 根 据多糖难 溶于有机溶剂的特性加入一定体积可与水互溶 的 有机溶 剂( 如 乙醇 、 丙酮等 ) , 使多糖沉淀 , 经反复溶解与沉 析 , 干燥后 可得粗多糖。多糖是极性大分子 , 所以, 从植物 中提取 多糖一般采用不 同温度的水 、 稀碱或稀 盐溶液 。由于水 提耗 时 且效率低 , 酸碱提取易破坏多糖 的立体结构及活性 , 故发展 高 效、 维持多糖结构和生物活性 的方法非常重要日 。提取百合 多 糖通 常采用 水提醇沉法。影响热水浸提多糖的因素主要有提 取 时间 、 提取次数 、 溶剂体 积 、 浸提温度等。 粗 多糖 中往往混杂着蛋 白质 、 色素 、 低 聚糖及无机盐等杂 质 ,须 分别 除去 。利 用不 同多糖分 子大小和溶解 度不 同而分 离, 常用季铵盐沉淀法和有机溶剂沉淀法。还可用葡聚糖凝胶 和琼脂糖凝胶 以不 同浓度 的盐溶液 和缓冲溶液作 为脱色剂 , 采 用凝胶柱层 析法使不 同大小 的多糖 分子得到分 离纯化 , 但 该方法 不适 于粘多糖 的分离 。另外 , 还 可用交换剂 D E A E 一 纤 维素 和 E C T E O L A一 纤 维素 , 洗脱剂用不 同浓度碱溶液 、 硼砂溶 液、 盐溶液 , 具有 可吸附杂质 、 纯化多糖 的优点 , 并适用于分离 各种酸性 、 中型多糖和粘多糖 。 纯化是将多糖混合物分离为单一 的多糖组分 ,纯化方法 有有 机溶剂分级 沉淀法 、 季胺盐 沉淀法 、 柱层析 法 、 盐 析法及 制备性 区带 电泳法等。随着纯化技术 的发展 , 近年来还 出现 了 膜分离技术 。 2 含量 测定 多糖 的含量测定可分为两大类 。一类是直接 测定多糖本 身, 如高效液相色谱法和酶法 , 另一类是利用组成 多糖 的单糖 缩合反 应而建立 的方法 , 如苯酚一 硫酸法 、 葱酮一硫 酸法等 。 国内多采用苯酚——硫 酸法测总糖含 量 , 此法简单 、 快速 、 灵 敏度高 、 重现性好 , 且无需多糖纯品和贵重仪器。杨林 莎p 】 采用 此法测得百合中多糖 的平均含量为 1 6 . 6 9 %。 需要强调的是 , 这 种方法所测定的是 总糖 的含量而不是总多糖的含量 。因此 , 首 先应测定样 品中游离 的单糖含量 ,然后将总糖 的含量减去游 离单糖的含量 , 即为总多糖得 率。 3 百合科植物多糖的生物活性 3 . 1 百 合多糖抗 氧化活性 : 百合 是传统药食 兼用佳 品 , 具 有多 种 药理 活性成分 。苗 明三州 研究百合多糖 , 对 D 一 半乳糖致衰老 小 鼠的抗 氧化作用得 出结论 : 与模 型组相 比 , 大、 小剂 量百合 多糖 均能显著提高衰老小 鼠血 中的 S O D( 超氧化物歧化酶 ) 、
百合营养成分
1 百合的营养特性1.1 一般成分百合的可食用部分为生长于地下的球形鳞茎,其由众多鳞片抱和而成,肉质白嫩,含有丰富的营养成分。
不同品种产地的百合,其营养成分不同,但主要成分相差较小。
(傅桂明,刘成梅,宗涂财.百合的保健功能和产品开发进展[J].食品研究与开发,2001,22( 48). )钟海雁等测得卷丹百合干片含水12.1%,粗蛋白11.40%,粗灰分3.9%,淀粉71.9%(钟海雁,李钟海,王纯荣,等.卷丹营养保健粉的研制[J].经济林研究,2002,20(3):37~38)。
已报道的百合鳞茎基本营养成分的测定结果详见表1(李玉帆,明军,王良桂,等. 百合基本营养成分和活性物质研究进展[J]. 中国蔬菜2012(24):7-13)。
表1 百合鳞茎基本营养成分材料水分/% 淀粉/%还原糖/%粗纤维/%VC/mg·kg-1蛋白质/%脂肪/%灰分/%果胶/% FW DW FW FW FW FW FW DWDWDWDW兰州百合64.62--15.57--1.982.6282.6210.11.113.6512.25 67.56-- --69.12--2.35-- 9.170.833.2514.72卷丹68.03--12.88--1.224.37138.2212.021.82.8310.42 68.34-- --64.35--3.85--13.11.254.8512.5百合--12.1--71.9-- -- --11.4--3.9-- 66.52-- --73.56--3.14-- 8.910.793.0210.091.2氨基酸钟海雁等(钟海雁,李钟海,王纯荣,等.卷丹营养保健粉的研制[J].经济林研究,2002,20(3):37~38。
)测定卷丹干片的氨基酸含量,其中天冬氨酸1.05%、苏氨酸0.47%、丝氨酸0.63%、谷氨酸1.34%、甘氨酸0.53%、丙氨酸0.63%、缬氨酸0.60%、蛋氨酸0.15%、异亮氨酸0.44%、亮氨酸0.85%、酪氨酸0.39%、苯丙氨酸0. 49%、赖氨酸0.71%、组氨酸0.22%、精氨酸1.90%。
2010年总目次第31卷
高吸油性木薯微孑 淀粉复合酶法 的制备工艺 L
酶解 法 制 备 的 玉 米 面 粉 的 品 质指 标
…………………… …………………… …………… 潘 颉, 易美华, 钟秋 平(— 5 26 )
… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … …… … … … 庄 云 , 尧 , 立 群 (— 9 马 王 26 )
……… …………… ………… ………… …………… ………… ………… … 王宗君 , 丹葵 (— 0 廖 15 ) … …… ……… …… ……… ……… ……… ……… 于浩 , 阮关娟 , 赵龙 , (— 5 等 15 )
响应 面法优化荷叶黄酮超声提取条件 的研究 超声辅助酶法提取玉米 须多糖
卡拉 胶 和 肌 原 纤 维 蛋 白混合 凝 胶 质 构 特 性 的研 究 千 日红 色 素 的 提 取 工 艺
… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 王 自军 , 宜君 (- 7 廉 14 )
茶树菇多糖抗氧化活性研究
低糖雪莲薯果脯真空渗糖工艺条件 的优化
… …… …… ……… …… …… ……… ………… 吕明生 , 徐兴权 , 王淑 军, (— 2 等 27) … …… …… …… …… …… …… …… 樊金玲 , 武涛 , 朱文 学, (— 5 等 27)
蔗糖含量对牡丹花色贮 藏稳定性 和降解动力学的影响
橙皮果胶 流变学性质的影响因素
冻干蔬菜 的共 晶点 、 共熔点 电阻法测定研究 热风干燥制备马铃薯颗粒全粉试 验研究
……………… ……………………… ……………………… 杨薇, 黄小丽, 姜苗(— 9 13 )
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食品科学
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百合多糖脱蛋白方法的研究明
江西南大中德食品工程中心
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研究中对几种百合多糖脱蛋白方法进行了对比实验,结果显示采用酶法与 ./0/12/ 法联用法效果最好,是一 百合多糖 脱蛋白
种有效的植物多糖中脱蛋白方法。 关键词
多糖 L 称重、 测蛋白质含量 M
厂M +( # 材料与药品
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操作要点: "真空浓缩: U$V 浓缩至原体积的 + W )
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表! 方法 +,-,./, 法 三氯三氟乙烷与 +,-,./, 联用法 酶法与 +,-,./, 联用法
食品科学
不同脱蛋白方法处理水溶性百合多糖的实验结果 多糖得率 0 1 2 !& "3 !& 4’ !& 35
参考文献 ) ! ’ 4 7 3 郑建仙 & 功能性食品 0 二 2 & 中国轻工业出版社 & )*** : 6* D 5*& +G$8HI J KL K,GA$MN ;< O.8I$APM8 OA,: 7L 7Q )*37& K.<R$?;GS J +L ;I;M 7L 3Q )*37& THRHM.Q U& ,G .%& VA, =$%PN.WWA.8;M, X8$: %.:=G,8$:PW,N Y.=$<; WHN& OA,:& ZA.8:& [H%%Q )*67Q !’Q )*77& 宁正祥 & 食品成分分析手册 & 轻工业出版社, )**5& 徐建祥 & 酶法脱蛋白技术用于螺旋藻多糖提取工艺研究 & 食品与发酵工业, )**5 , !4 0 ’ 2 : !4 D !6&
!工艺技术
多糖中蛋白质含量 0 1 2 )3& 6 )6& ! )!& 4
!醇沉:4 倍 *71 乙醇沉淀 "离心分离:’"""8 9 :;< 离心 )7:;< # 加酸:适量蒸馏水溶解,滴加 )1 醋酸溶液至 =>4& 7 $ 加氯仿、正丁醇:加入 ) 9 7 体积氯仿, ) 9 !7 体积正丁醇振荡 !":;< % 加三氯三氟乙烷:加入 ) 倍体积三氯三氟乙 烷,冰水浴中搅拌 )":;< & 酶 水 解 : 加 入 )1 木 瓜 蛋 白 酶 0 ? 9 - 2 在 =>3& 4、3"@ 条件下酶解 ’A ’ 重复上步操作:重复氯仿、正丁醇处理、离 心分离,并操作数次至无胶状物生成 (测蛋白质含量:微量凯氏定氮法 测蛋白质含
重复上步
+ +( +
仪器与材料 仪器与设备 电热恒温水浴槽 L 上海医疗机械五厂 M 离心机 L 上海医用分析仪器厂 M @NO A ! 3PQ#!! 阻尼分析天平 L 上海天平仪器厂 M -#+ A 分光光度计 L 上海第三分析仪器厂 M RS A !$ 真空干燥器 L 上海南汇老港机械厂 M 3T — + —精密电动搅拌器 L 深圳沙头角国华仪器
离心分离
加氯仿、 正丁醇
离心分离
重复上步操作
醇沉
离心分离
真空干燥 L U$V M
测蛋白质含量 M 多糖 L 称重、
#( #
三氯三氟乙烷 I ) J 与 ./0/12/ 联用法
离心分离
百合水提液 真空浓缩 浓缩液 醇沉 沉淀溶于水 加酸 多糖水 溶液 加三氯三氟乙烷 水相 加氯仿、 正丁醇
离心分离
水相
量 ’ ’& ) 结果与讨论 实验结果 百合多糖水提取液,分别用 +,-,./, 法、三氯三 氟乙烷与 +,-,./, 联用法、酶法与 +,-,./, 联用法, 三种方法脱蛋白后的水相对茚三酮反应均呈阳性, 结果表明仍有蛋白质残留。脱蛋白后的水溶性百合 多糖得率及凯氏定氮法测得蛋白质含量结果见表 )。 由实验结果可知,从水溶性多糖损失和蛋白质 去除效果来看,酶法与 +,-,./, 联用法都优于其它两 种方法。分析原因是: ’& ! +,-,./, 法 由于百合水提液中蛋白质含量高, +,-,./, 法脱
蛋白质含量 M
水相
醇沉
沉淀
真空干燥 L U$V M
多糖 L 称重、 测
离心分离
#( )
醇法 I , J 与 ./0/12/ 联用法
真空浓缩 离心分离
百合水提液 酶水解 浓缩液 醇沉 沉淀溶于水 加酸 多糖水 正丁醇 溶液 加氯仿、
离心分离
真空 水相 重复操作 水相 醇沉 沉淀
离心分离
干燥 L U$V M
操作 糖水溶液 沉淀
为江西产龙牙百合 广州
木瓜蛋白酶 L 酶活力 U$ 万单位 M 为食用级 酶制剂厂产品
硫酸、 蒽酮、 无水乙醇、 丙酮、 正丁醇、 氯仿、 三氯 三氟乙烷等均为国产分析纯。 # #( + 实验方法 ./0/12/ 法 I # J
百合水提液 真空浓缩 浓缩液 水相 醇沉 沉淀溶于水 水相 加酸 多
!"#$%&’$
3456 6789: 86/9 6/0/;1’ </74&96 7& ;/<&0/ =;&7/5> ?;&< @5’: A =&’:61BB41;59/6( 34/ ;/68’76 64&C/9 7417 74/
</74&9 &? D>E:</ A ./0/;5>2 C16 74/ F/67 &>/ 5> B&<=1;6&> C574 6/0/;1’ &74/; </74&96( 34/ </74&9 &? D>E:</ A 6/0G /;5>2 C16 /??/B750/ </74&9 7& ;/<&0/ =;&7/5> ?;&< =’1>7 A =&’:61BB41;59/6( ()* +,%-# @5’: A =&’:61BB41;59/ H/<&0/ =;&7/5>
B7C
糖结合紧密的蛋白质不易去除,故蛋白质含量较 高。 ’& 4 采用酶法与 +,-,./, 联用法 在通过木瓜蛋白酶处理 B 3 C 后,由于绝大部分游离 蛋白质及部分与多糖结合的蛋白质被水解,多糖沉 淀中蛋白质的含量大大降低,仅需 ! 次 +,-,./, 法, 即达去蛋白的要求,减少了多糖损失。且在酶解百 合水提液过程中,部分与多糖结合的蛋白质分解, 使蛋白质去除率提高,脱蛋白后的多糖蛋白质含量 较低。 ’& 7 蛋白质残留 由表看出,无论采用三种脱蛋白方法中的哪一 种,所得的水溶性百合多糖中蛋白质含量均在 )"1 以上,其原因可能是百合水溶性多糖中部分蛋白质 与多糖结合成紧密的糖蛋白复合物,故很难除去。 因本研究主要针对其中多糖的结构分析,采用酶法 和 +,-,./, 法去除游离蛋白质时,可能使部分多糖 E 蛋白质键断裂,因此酶解强度不宜过大、时间不宜 过长,否则易使太多多糖 E 蛋白质的复合物分解, 造成某些多糖 E 蛋白质复合物特有的生理活性降 低。 综上所述,百合多糖水提取液,分别用 +,-,./, 法 、 三 氯 三 氟 乙 烷 与 +,-,./, 联 用 法 、 酶 法 与 +,F -,./, 联用法三种方法脱蛋白后,结果显示采用酶法 与 +,-,./, 法联用效果最好,是一种很有效的植物多 糖中脱蛋白方法。
广泛存在于各种动植物和微生物组织中的多糖, 百合原料 是由各种单糖组成的天然高分子化合物。除典型的纤 维素和几丁质外, 各种类型的纤维素、 果胶、 粘液质都 具有结构多糖的功能。从二十世纪六十年代后,多糖 所具有的各种生理功能逐渐为人们所重视,尤其是增 强免疫力的功能被广泛认同,并被广泛应用于肿瘤化 疗。目前世界各国, 尤其是美国、 日本等发达国家正投 入大量人力、财力对各种动植物、微生物多糖进行深 入研究。但天然植物中多糖与蛋白质两种高分子成分 共存,且两种物质分子量相近,另外糖常常与蛋白形 成糖蛋白复合物,使蛋白质的脱除变得更加困难。但 也许正是由于结合了这部分蛋白质,多糖才具有众多 独特的生理功能,如各种蛋白质聚糖、糖蛋白具有生 理功能一样。另据报道百合中的多糖有降血糖 I + J 等多 种功能。可是在提取百合多糖时,提取物中蛋白质含 量很高,这对纯化带来了很大困难。本文针对百合多 糖水提物中蛋白质含量达 !$K 这一情况, 对几种百合 多糖脱蛋白方法进行了对比研究,以确定最佳脱蛋白 方法。
蛋白过程中,需反复处理 * D )" 次,每次除去的蛋 白质变性胶状物时,不可避免溶有少量多糖,另外 少量与蛋白质结合的蛋白聚糖和糖蛋白,在处理时 会沉淀下来,造成多糖损失。而与糖结合紧密的蛋 白质用 +,-,./, 法很难去除,故蛋白质含量较高。 ’& ’ 三氯三氟乙烷与 +,-,./, 法 在用三氯三氟乙烷处理脱除大部分蛋白质后, 仅需 ’ 次 +,-,./, 法处理,即无胶状物生成。减少了 处理次数,同时也减少了多糖的损失。但由于与多