流式细胞仪
流式细胞仪分选细胞的原理
流式细胞仪分选细胞的原理一、仪器原理流式细胞仪是一种利用流体动力学原理，结合光学和电子仪器技术，对细胞进行快速检测、分类和分选的仪器。
其主要原理是通过细胞在液体中的流动来实现对细胞的分选和分类。
二、流式细胞仪的组成流式细胞仪主要由液体系统、光学系统和电子系统三部分组成。
1.液体系统：液体系统包括进样系统、流动系统和废液系统。
进样系统负责将待检样品引入流动系统；流动系统则通过液体的流动将细胞送到光学系统进行检测；废液系统则负责将已经检测过的样品排出。
2.光学系统：光学系统由激光器、光学镜头、滤光片和光电倍增管等组成。
激光器产生的激光经过光学镜头聚焦后，照射到流动的细胞上，细胞反射、散射或荧光发射的光信号被光学镜头收集并通过滤光片进行过滤，最后由光电倍增管转化为电信号。
3.电子系统：电子系统主要由数据采集卡、计算机和控制软件组成。
数据采集卡负责将光电倍增管转换的电信号进行放大和数字化处理，然后传输给计算机；计算机通过控制软件对数据进行处理、分析和展示。
三、细胞的分选原理流式细胞仪的分选功能是通过细胞的特征参数来进行判断和分选的。
1.散射光信号分选：散射光信号是细胞受到激光照射后，由于细胞的大小、形状和内部结构的不同，产生的光信号。
通过检测散射光信号的强度和角度，可以判断细胞的大小和形态，从而实现对细胞的初步分选。
2.荧光信号分选：荧光信号是细胞在受到特定荧光染料激发后发射的光信号。
通过检测细胞的荧光强度和荧光颜色，可以判断细胞内特定荧光标记物的存在与否，从而实现对特定细胞类型的分选。
3.双参数联合分选：双参数联合分选是指根据细胞的两个或多个特征参数进行综合分析和判断。
比如可以根据细胞的大小和形状、荧光强度和颜色等参数进行综合判断，实现对多种细胞类型的准确分选。
四、应用领域流式细胞仪广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
1.生物医学研究：流式细胞仪可以对细胞的免疫表型、细胞周期、细胞凋亡等进行快速检测和分析，帮助科研人员深入了解细胞的生理和病理过程。
流式细胞仪
三）淋巴细胞分类
CD3(T细胞，CD4、CD8))、CD19 （B细胞）、CD16、CD56（NK细胞）， 原发性或继发性免疫缺陷病、自身免疫 性疾病、淋巴细胞增殖病、肿瘤疗效观 察与预后判断、移植免疫检测等。
R1 M1 M1
流式细胞术检测细胞表型
四）白血病的免疫分型
流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素 标记的单克隆抗体作分子探针，多参数 分析白血病细胞的免疫表型，了解被测 白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。
流式细胞仪数据分析
点图分析
流式细胞仪数据分析
直方图分析
图中100～101（M1）为阴性细胞，101以上的（M2）为阳性细胞
五、 流式细胞术的应用
细胞结构 细胞大小 细胞颗粒度 细胞表面积 核浆比例 DNA含量与细胞
周期 RNA含量 蛋白质含量
……
细胞功能
UL
254
2.40 37.47 461.36
UR 1067 10.08 816.86 468.89
LL 5291 49.98 19.57 4.41
LR 3975 37.55 418.80 9.87
图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死
Date acquired: 14-Jan-03 File: 7Gy 4hr.001 Source: dongbo DIPLOID: 100.00 % Dip G0-G1: 73.12 % at 48.16 Dip G2-M: 9.59 % at 96.33 Dip S: 17.29 % G2/G1: 2.00 Dip %CV: 6.04
FCM分析白血病免疫表型, 快速、特异、 准确，重复性好，能区分细胞起源、划 分其分化发育阶段等，对白血病的诊断 与分型、治疗方案选择与预后判断、发 病机理研究等有重要价值。
流式细胞仪常用的几种检测方法
流式细胞仪常用的几种检测方法1.细胞计数和生存率检测：流式细胞仪可以通过测定细胞的大小、形状和胞内染色物来实现细胞计数和生存率的检测。
通过自动聚焦和自动获取图像的功能，可以对大量的细胞进行计数和分析，并得出生存率数据。
2.表面标记检测：流式细胞仪可以利用荧光染料或荧光标记抗体对细胞表面的蛋白质、糖类或其他生物分子进行检测。
这种检测方法主要用于检测细胞表面标记的数量和分布情况，例如测定细胞表面特定抗原的表达水平。
3.细胞周期分析：流式细胞仪可以通过染色剂或荧光标记抗体对细胞进行染色，然后分析细胞在不同细胞周期阶段的比例。
这种检测方法可以用于研究细胞的增殖能力、细胞周期调控机制以及细胞周期与疾病发展的关系。
4.细胞凋亡检测：流式细胞仪可以利用染色剂或荧光标记抗体对细胞凋亡的标志物进行检测。
凋亡是细胞死亡的一种形式，通过测定凋亡细胞的数量和凋亡标志物的表达水平，可以研究细胞凋亡的调控机制以及细胞凋亡与疾病的关系。
5.细胞功能检测：流式细胞仪可以通过检测细胞内Ca2+浓度、ROS （活性氧物种）水平、蛋白质磷酸化等细胞功能指标来研究细胞的信号转导和功能活性。
例如，利用荧光染料可以测定细胞内钙离子的浓度变化，以研究细胞响应外界刺激的机制。
此外，流式细胞仪还可以进行细胞分选、多色细胞分析和细胞细胞间相互作用的研究。
细胞分选功能可以根据细胞标记物的表达水平将细胞分离出来，用于研究特定功能细胞的特性。
多色细胞分析可以用于同时检测多种标记物的表达水平，以揭示不同细胞类型的分子特征。
细胞间相互作用的研究可以通过检测细胞间的共聚或共表达标记物来研究细胞间的相互作用和相互影响。
总的来说，流式细胞仪是一种功能强大的实验室设备，常用于细胞生物学和疾病研究。
通过不同的检测方法，可以在细胞水平上研究细胞的数量、表面标记、周期、凋亡、功能以及细胞间相互作用等方面的特征。
流式细胞仪步骤
流式细胞仪步骤宝子们，今天来唠唠流式细胞仪的步骤呀。
那第一步呢，就是准备样本啦。
这个样本可不能马虎，得处理得妥妥当当的。
比如说细胞样本，要保证细胞是单个分散的状态，要是细胞都黏在一起，那流式细胞仪可就懵圈啦。
这就像咱们排队一样，得一个个排好，不能乱哄哄地挤成一团。
对于血液样本之类的，可能还需要进行一些特殊的处理，像裂解红细胞之类的操作，把那些会干扰检测的东西去掉。
接下来就是给样本标记啦。
这就像是给细胞穿上不同颜色的小衣服，让流式细胞仪能区分它们。
我们会用一些特异性的荧光抗体，这些抗体就像小侦探一样，能找到细胞上特定的蛋白或者标志物，然后紧紧地抱住它们。
不同的抗体带着不同颜色的荧光，这样细胞就被标记得花花绿绿的啦。
不过这一步可得小心哦，抗体的浓度要合适，就像做菜放盐一样，多了少了都不行。
浓度太高，可能会有非特异性结合，就像乱给人贴标签一样；浓度太低呢，又可能检测不到目标。
样本都准备好标记好之后呢，就可以把样本放到流式细胞仪里面啦。
这个时候就像是把精心打扮的小细胞们送上舞台一样。
流式细胞仪里面有个小管道，样本就沿着这个管道慢慢往前走。
在这个过程中呢，激光就会照射到这些细胞上。
激光就像舞台上的聚光灯一样，一照到细胞上，那些被标记的荧光就会发出亮光。
然后呢，仪器就开始检测这些荧光啦。
它会把每个细胞发出的荧光信号都收集起来，然后分析这些信号。
这个分析可厉害啦，它能知道每个细胞上有哪些标记，还能根据这些标记把细胞分成不同的群体。
就像把人群按照不同的特征分成不同的小组一样。
比如说按照细胞的大小、细胞表达的蛋白种类等等。
最后呢，我们就可以得到检测结果啦。
这个结果可以告诉我们好多信息呢，比如样本里不同类型细胞的比例是多少，细胞的状态是不是正常等等。
这就像是我们做了一次细胞世界的小普查，得到了很多有趣的情报。
宝子们，流式细胞仪的步骤大概就是这样啦，是不是还挺好玩的呢 。
流式细胞仪工作原理
流式细胞仪工作原理流式细胞仪是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的仪器，它能够对细胞进行高速、高效、高灵敏度的检测和分析。
流式细胞仪通过激光照射和细胞的光散射、荧光发射等特性，实现对细胞的分类、计数、分离和分析。
工作原理如下：1. 激光照射：流式细胞仪使用一束激光束照射样品中的细胞。
激光可以是单色激光，也可以是多色激光。
激光的波长和功率可以根据实验需要进行选择和调节。
2. 细胞光散射：当激光照射到细胞上时，光会与细胞中的物质发生相互作用，产生散射。
流式细胞仪通过检测细胞的光散射特性，可以获得细胞的大小、形状和复杂度等信息。
3. 荧光检测：在流式细胞仪中，可以通过给细胞标记荧光染料来检测细胞中的特定分子或标记物。
这些染料可以与细胞的蛋白质、核酸或其他分子结合，并发出特定的荧光信号。
流式细胞仪通过检测荧光信号的强度和波长，可以对细胞中的不同分子进行定量和定位分析。
4. 光学系统：流式细胞仪包含一个复杂的光学系统，用于收集和分析细胞发出的光信号。
该系统由多个透镜、滤光片和光电倍增管组成，能够收集和分离不同波长的光信号。
5. 数据分析：流式细胞仪通过计算机系统将收集到的光信号转化为数字信号，并进行数据分析和图形显示。
计算机软件可以对细胞进行分类、计数、分离和分析，生成直方图、散点图和柱状图等结果。
流式细胞仪的工作原理基于光学原理和细胞的光散射、荧光特性。
它能够快速、准确地获得细胞的多个参数，并对细胞进行定量和定位分析。
流式细胞仪在生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用，可以用于细胞免疫学、细胞生物学、肿瘤学等领域的研究和诊断。
血液科医生常说的“流式”,你知道是什么吗？
血液科医生常说的“流式”，你知道是什么吗？在血液科的诊断和治疗中，流式细胞仪是一种常见的检测工具。
在医生和患者的日常交流中，常会听到血液科医生提到“流式”，那么，究竟流式是什么，它在临床中有怎样的作用呢？接下来，让我们详细了解一下。
什么是流式细胞仪？流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种用于分析细胞数量、表面标记、细胞大小和形状等信息的仪器。
它利用细胞标记荧光染料与细胞中的不同成分结合，通过检测这些荧光标记或物理性质的差异来对不同类型的细胞进行鉴定和分类。
流式细胞仪的原理流式细胞仪的基本原理是使用激光器产生的激光束照射通过悬液中的细胞，激光光束照射到细胞上后，细胞中的荧光标记物会发出荧光信号，这些信号会被探测器捕获并转换为电信号。
根据细胞荧光信号的强度、颜色和形状，流式细胞仪可以对细胞进行定量和定性的分析。
流式细胞仪在临床中的应用流式细胞仪在临床诊断中有着广泛的应用，特别是在血液科领域。
以下是一些流式细胞仪在临床中的主要应用场景：1.白血病鉴定与分类：流式细胞仪可以通过检测白血病细胞表面的不同分子标记来帮助医生对白血病进行鉴定和分类，从而指导治疗方案的制定。
2.免疫功能评估：流式细胞仪可以帮助医生评估患者的免疫功能，检测免疫细胞的种类和数量，从而指导治疗和预后的评估。
3.感染性疾病诊断：流式细胞仪可以通过检测免疫细胞中的感染标记物来帮助诊断感染性疾病，如艾滋病、肝炎等。
4.骨髓移植前后监测：流式细胞仪可以在骨髓移植前后对患者的免疫系统进行监测，评估移植效果和患者的免疫排斥反应。
5.自身免疫性疾病诊断：流式细胞仪可以帮助诊断和监测自身免疫疾病，如风湿性关节炎、红斑狼疮等。
流式细胞仪的优势与传统的显微镜观察细胞相比，流式细胞仪具有以下一些明显的优势：•高通量性：流式细胞仪可以快速分析大批样本，提高检测效率。
•多参数性：流式细胞仪可以同时检测多个参数，如细胞大小、形状、表面标记等，提供更全面的信息。
流式细胞仪使用规范
流式细胞仪使用规范流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的细胞分析仪器，广泛应用于细胞学、免疫学、生物学、医学等领域。
流式细胞仪可以对细胞进行快速、准确的多参数分析，能够检测和分离不同细胞类型、测定细胞数量、评估细胞活性以及研究细胞表面标记物等。
为了保证流式细胞仪的正常使用，以下是一些流式细胞仪的使用规范和注意事项。
1.准备工作：a.检查仪器：确认仪器的状态，包括是否通电、通气、光源是否正常工作等。
b.清洁样品室：使用无菌纯水或适当的清洁剂擦拭样品室，确保没有杂物或污染物。
c.校准仪器：根据仪器规定进行标定和校准，确保仪器的准确性和稳定性。
2.样品准备：a.细胞处理：合理处理样品，保证单细胞悬浮状态。
可以通过胰酶消化、筛选等方法获取单细胞悬浮液。
b.细胞计数：使用合适的细胞计数仪进行细胞计数，计算出所需的细胞悬浮液浓度。
c.细胞染色：根据实验需求对样品进行适当的荧光染色或抗体标记，以便在流式细胞仪中检测和分析。
3.流式细胞仪操作：a.设置参数：根据实验设计和研究目的，设置合适的仪器参数，包括激光器选择、激发波长、检测波长、门控设置等。
b.样品加载：将样品注入流式细胞仪样品室，避免气泡的产生，并确保样品完整进入样品室。
c.数据采集：开始数据采集前，进行流式细胞仪的标定、峰位校正和峰间校正，以保证数据的准确性和可靠性。
d.数据分析：对采集到的数据进行分析和解读，根据实验要求选取合适的分析策略和软件进行数据处理。
4.清洁和保养：a.实验后清洁：实验结束后，及时清洁仪器，避免样品残留和交叉污染。
b.仪器维护：定期检查仪器的部件和附件，保证其正常工作。
如需要更换部件或常规维护，请按照厂家指南进行操作。
c.长时间停用：如果流式细胞仪长时间不使用，应按照厂家指南进行仪器的合理关闭和长期存储。
5.安全注意事项：a.避免直接接触激光线：在进行样品加载和设置参数时，避免接触激光线以避免损伤眼睛。
b.使用无菌操作：在样品加载和处理过程中，使用无菌操作和材料，避免细菌污染和交叉感染。
流式细胞仪的概念及其发展历史
流式细胞仪的概念及其发展历史1. 引言在现代生物科学领域中，流式细胞仪是一个关键的实验工具，用于分析和研究细胞的性质和功能。
本文将介绍流式细胞仪的基本概念以及其发展历史。
2. 流式细胞仪的概念流式细胞仪是一种能够快速、高效地分析和计数细胞、获得关于细胞表面分子、形态和功能信息的仪器。
它通过流式细胞术的原理，将细胞悬浮液以单个细胞为单位通过仪器，然后利用激光照射、细胞的自然发荧光或特定荧光染料来探测细胞的特定性质。
3. 流式细胞仪的发展历史20世纪60年代末，Wallace H. Coulter发明了第一台流式细胞仪。
这台仪器基于Coulter原理，使用电阻装置实现细胞计数，开创了流式细胞仪的先河。
随后，人们开始尝试利用光散射性质来分析细胞。
1970年代，Mack Fulwyler发明了一种使用激光照射和散射光收集的流式细胞仪。
这种新型流式细胞仪能够准确地测量细胞的大小和形状。
1980年代，流式细胞仪开始应用于免疫学研究领域。
人们开始利用荧光染料标记细胞表面的抗原，然后使用流式细胞仪进行检测和分析。
这一革新使得研究人员能够更深入地研究免疫细胞的功能和相互作用。
进入21世纪以后，流式细胞仪的性能不断提高。
新的激光技术、荧光染料和信号检测方法的应用使得流式细胞仪在多个领域都得到了广泛的应用，如免疫学、细胞生物学、血液学等。
4. 流式细胞仪的应用流式细胞仪的广泛应用使得它成为了生命科学领域中不可或缺的工具。
它可以用于细胞计数、活细胞和死细胞的区分、细胞周期分析、细胞凋亡检测、细胞表面标志物的鉴定等。
在免疫学研究领域，流式细胞仪被用来研究免疫细胞的活性、表面标志物、分泌物等。
同时，流式细胞仪还可以用于肿瘤学研究中的肿瘤细胞的检测和分类。
在血液学领域，流式细胞仪可以用于检测和鉴定不同类型的血细胞，包括白细胞、红细胞和血小板等。
5. 结论流式细胞仪凭借其高效、准确、可靠的特点，在现代生物科学研究中扮演着重要的角色。
流式细胞仪工作原理(一)
流式细胞仪工作原理(一)流式细胞仪工作原理什么是流式细胞仪？流式细胞仪（flow cytometer）是一种能够对细胞进行快速分析和分类的仪器，在医学、生物学等领域有着广泛应用。
流式细胞仪的组成流式细胞仪由主体仪器和计算机分析系统组成。
主要部分包括光源、检测器、激光、样品注射系统和流动细胞仓等部分。
流式细胞仪的原理流式细胞仪的工作原理基于细胞在流动状态下通过一束激光，同时检测细胞与光的交互作用，通过对细胞数量和物理特征的分析来实现细胞分类。
流式细胞仪的步骤流式细胞仪的操作步骤主要分为样本制备、仪器校准、样本注射、数据采集和数据分析。
样本制备将待检测的样本准备到合适的浓度和体积，通常需要使用细胞培养、荧光染色等方法。
仪器校准流式细胞仪需要进行仪器校准来保证数据质量，包括激光能量、电子学增益等方面的调整。
样本注射样本注射一般使用样本传送器或注射管来完成，注射后样品进入流动细胞仓进行分析。
数据采集流式细胞仪通过检测样品中的细胞和荧光信号来获得数据，数据将会被记录下来。
数据分析通过软件对数据进行分析和处理，比如进行细胞计数、细胞分类等。
流式细胞仪的应用流式细胞仪广泛应用于生物学、医学等领域，比如细胞学、免疫学、感染病学、药物研究等方面。
结语流式细胞仪是一种非常有用的仪器，在科学研究和医学诊断中都有着重要作用。
掌握流式细胞仪的工作原理和操作方法对于科研人员和医护人员来说是非常重要的。
流式细胞仪的优势流式细胞仪具有许多优势，例如高速度、快速获取结果、高精度、高通量、良好的灵敏度和特异性等。
流式细胞仪的缺点流式细胞仪也存在一些缺点，例如价格昂贵、需要较为复杂的校准和操作、需要专业的技术人员进行操作和分析等。
流式细胞仪技术的发展随着技术的进步，流式细胞仪也在不断发展和改进。
例如，现代化的流式细胞仪已经具备了多色激光、高通量、高精度、高速度、多参数检测等方面的特点。
流式细胞仪的未来未来，流式细胞仪具有广泛的应用前景。
流式细胞仪分类
流式细胞仪分类1. 简介流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的生物学实验仪器，用于对细胞进行分类和分析。
它通过将细胞悬浮液注入仪器中，利用激光束照射细胞，测量细胞在不同参数上的散射和荧光信号，从而对细胞进行分类和计数。
流式细胞仪广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
2. 流式细胞仪的分类方式根据不同的参数和功能，流式细胞仪可以分为以下几种类型：2.1. 基础型流式细胞仪基础型流式细胞仪是最常见的类型，它可以测量细胞在不同波长的激光照射下的散射和荧光信号。
基础型流式细胞仪通常具有多个激光器和多个探测器，可以同时测量多个参数。
常见的参数包括细胞大小、形态、颜色、荧光标记物等。
2.2. 高通量流式细胞仪高通量流式细胞仪是一种能够快速处理大量样本的流式细胞仪。
它通常具有多个样本载体和多个样本接口，可以同时处理多个样本，提高实验效率。
高通量流式细胞仪广泛应用于大规模细胞筛选、细胞库构建和高通量药物筛选等领域。
2.3. 分选型流式细胞仪分选型流式细胞仪是一种能够根据细胞的特定特征进行分选的流式细胞仪。
它通常具有一个或多个分选器，可以根据预设的分选条件将特定类型的细胞分选出来。
分选型流式细胞仪广泛应用于细胞克隆、单细胞测序和细胞治疗等领域。
2.4. 成像型流式细胞仪成像型流式细胞仪是一种能够对细胞进行高分辨率成像的流式细胞仪。
它通常具有高倍率物镜和高灵敏度的相机，可以对细胞进行三维成像和时间序列成像。
成像型流式细胞仪广泛应用于细胞动力学研究、细胞迁移和细胞内信号传导等领域。
3. 流式细胞仪的工作原理流式细胞仪的工作原理包括激光照射、散射信号检测和荧光信号检测三个步骤。
3.1. 激光照射流式细胞仪通过激光器产生高能量的激光束，将激光束聚焦到细胞悬浮液中的单个细胞上。
激光束的波长和功率可以根据需要进行选择，常用的波长包括488nm、532nm和633nm等。
3.2. 散射信号检测当激光束照射到细胞上时，细胞会发生散射现象。
流式细胞仪操作流程
流式细胞仪操作流程流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种广泛应用于生物医学研究领域的仪器，它能够对单个细胞进行快速、准确的细胞分析和分类。
本文将详细介绍使用流式细胞仪的操作流程。
一、实验准备在进行流式细胞仪实验之前，需要做好以下准备工作：1. 准备样品：收集和准备待分析的细胞样品，确保样品质量符合要求。
处理样品时要注意细胞的保存和处理条件，以避免样品的污染或破坏。
2. 准备反应体系：根据实验的需要，按照标准操作规程制备所需的反应液和缓冲溶液。
3. 检查和校准仪器：在使用流式细胞仪前，需要对仪器进行检查和校准，确保仪器状态良好，获得准确的实验结果。
二、仪器开机和设置1. 打开流式细胞仪电源，并等待仪器启动完成。
2. 进行仪器的初始化设置，包括选择所需的参数和实验模式等。
3. 设置流式细胞仪的激发和检测通道，根据实验需要选择适当的滤光片和荧光探针。
调整激光功率和检测灵敏度，确保后续实验过程中的信号质量。
三、样品加载和检测1. 将样品转移到适当的离心管中，并进行样品标记。
根据实验需要可以使用荧光标记物、抗体等对细胞进行特异标记。
2. 打开流式细胞仪的样品载架，将样品离心管安置在载架上，并将载架插入流式细胞仪的样品槽中。
3. 启动数据采集软件，设置样品参数和实验条件。
选择合适的采集速度和事件数目，确保获得足够的数据。
4. 开始数据采集，点击软件上的“实时运行”按钮，流式细胞仪将开始读取样品中的细胞信息，并将其转化为电子信号。
5. 采集完成后，保存数据并关闭数据采集软件。
四、数据分析1. 导出数据文件：根据实验需要，将采集到的数据文件导出到数据分析软件中进行进一步处理。
2. 进行数据筛选和清洗，去除噪音污染和非特异信号。
3. 根据实验的目的和问题，选择合适的数据分析方法，对细胞数据进行统计学和生物学分析。
4. 生成结果图表：根据数据分析结果，生成合适的图表或图像，用于展示实验结果和研究发现。
5. 结论和讨论：根据数据分析结果，撰写实验结论和讨论，解释实验结果并提出相应的科学推论。
流式细胞仪的工作原理
流式细胞仪的工作原理流式细胞仪是一种常用于细胞和微粒（如细菌、红细胞、蛋白质等）的快速高通量分析的仪器。
其工作原理主要包括样本的制备、细胞的悬浮、光学检测、数据分析等步骤。
以下是流式细胞仪的工作原理的详细描述：1. 样本制备：将目标细胞样本制备成单细胞悬浮液。
这可以通过细胞培养、组织分离、细胞裂解等方法来实现。
2. 细胞悬浮：将制备好的细胞样本经过稀释，使细胞以单个细胞的形式悬浮在流式细胞仪的缓冲液中，以避免细胞团块的干扰。
3. 光学检测：将悬浮的细胞注入到流式细胞仪的流动系统中，通过引导细胞通过薄流动通道（流式细胞仪中的流动注射器），在流动过程中，细胞单个地通过流动通道的中心。
4. 激光激发：流式细胞仪通过激光器在细胞上产生激光束，使细胞发出荧光、散射和吸收等信号。
不同的细胞成分会对光的不同特性作出反应，例如细胞大小、形状、染色体、细胞器、表面蛋白等。
5. 光学检测系统：流式细胞仪会使用多个光学透镜和滤光片，将细胞的各种信号分离并收集下来。
这些信号包括散射光（Forward Scatter，FSC）和侧向散射光（Side Scatter，SSC）来描述细胞的大小和复杂程度，以及多个不同波长的荧光信号，用于探测标记在细胞上的不同分子。
6. 数据采集和分析：流式细胞仪通过返回的信号，测量每个细胞的信号强度和散射属性，并将其转换为电子信号。
这些数据被记录下来，并通过数据分析软件进行分析和解读，以获取细胞数量、表型特征、信号强度等信息。
流式细胞仪通过上述原理，可以高效地分析数以千计甚至上万个单个细胞的信号和特征，用于细胞表型分析、免疫细胞学研究、细胞分选等。
流式细胞仪在医学、生命科学研究以及临床诊断中具有广泛的应用前景。
流式细胞仪使用方法说明书
流式细胞仪使用方法说明书1. 概述流式细胞仪是一种用于细胞分析和排序的先进仪器。
本方法说明书旨在向用户介绍如何正确操作流式细胞仪以及最佳的使用方法。
请用户在使用前仔细阅读本说明书并遵循相关的安全操作规程。
2. 仪器组成流式细胞仪主要由以下几个组成部分构成：- 流体传送系统：用于将样本引入仪器并排除废弃物。
- 激光系统：产生激光束以激发样本中的荧光染料。
- 光学系统：收集样本产生的荧光信号并进行检测。
- 数据分析系统：用于解析和分析收集到的数据。
3. 使用准备在进行流式细胞仪实验之前，请确保以下几个步骤已经完成：- 仪器校准：根据仪器的使用手册进行仪器校准，确保仪器工作在最佳状态。
- 样本准备：按照实验需求，对待测样本进行合适的处理，例如细胞培养、染色等。
- 试剂准备：准备好所需的荧光染料、缓冲液等试剂。
4. 仪器操作以下是流式细胞仪的一般操作步骤：- 打开仪器电源，并等待仪器启动完成。
- 将样本装入合适的样本管，并在样本管中加入适量的荧光染料或其他试剂。
- 将样本管放入仪器中的样本槽，并调整流速和其他参数。
- 启动激光系统，并调整激光强度和波长以适应实验需求。
- 开始数据采集，根据仪器界面指示收集所需数据。
- 数据分析：根据实验需要，使用相应的数据分析软件对采集到的数据进行解析和处理。
5. 安全注意事项在使用流式细胞仪时，务必注意以下安全事项：- 佩戴个人防护装备，包括实验手套和护目镜。
- 遵循实验室的生物安全规程，确保样本处理符合相关的安全要求。
- 避免直接暴露于激光束下，以免损伤眼睛和皮肤。
- 在清洁仪器时使用合适的溶剂，并按照仪器清洁的标准程序进行操作。
6. 故障排除在实际操作中，有时可能会遇到仪器故障或其他问题。
以下是一些常见问题及其排除方法：- 仪器无法启动: 检查电源连接是否正常，重启仪器。
- 数据质量差: 检查样本制备和染色的质量，调整参数和仪器校准。
- 清洗困难: 检查是否有阻塞，按照清洁程序进行清洗。
流式细胞仪操作步骤
流式细胞仪操作步骤一、样品准备1. 确认样品是否符合实验要求，如细胞浓度、荧光标记等。
2. 根据实验需求，选择合适的试管和细胞样品。
3. 确认样品中是否有杂质或污染物，必要时进行离心和洗涤。
4. 尽可能缩短样品处理时间，避免细胞活性受到影响。
二、样品上机1. 打开流式细胞仪，确认仪器正常工作。
2. 将样品加入到流式细胞仪的样品管中。
3. 根据实验需求，设置合适的流速和压力。
4. 开始采集数据，观察仪器工作状态，确保数据准确可靠。
三、参数设置1. 根据实验需求，选择合适的荧光标记和检测参数。
2. 根据细胞类型和特性，设置合适的门控和阈值。
3. 确认仪器校准和定标工作已完成。
4. 根据需要，设置多色分析，以便于进行细胞分群和定量分析。
四、数据采集1. 在采集数据时，观察仪器工作状态，确保数据准确可靠。
2. 根据实验需求，确定采集的数据量，确保数据具有代表性。
3. 记录采集数据的时间和条件，以便于后续数据分析。
4. 在采集数据时，注意观察细胞活性、浓度和分布情况，及时调整实验条件。
五、数据分析1. 使用专业软件对采集的数据进行处理和分析。
2. 根据实验需求，对数据进行去噪、归一化和定量分析。
3. 进行细胞分群、细胞周期和细胞凋亡等分析。
4. 对数据进行统计学分析和可视化展示。
六、结果输出1. 根据分析结果，输出相应的图表和数据表格。
2. 对结果进行解释和注释，以便于读者理解和应用。
3. 如果需要，可将结果整理成报告形式，提供给相关人员参考和使用。
七、质量控制八、实验室清理。
流式细胞仪的基本组成和工作原理
流式细胞仪是一种能够对细胞进行高效快速检测和分析的先进仪器，广泛应用于医学、生物学、药学等领域。
它通过对细胞进行单个分析，能够提供更加详细和精确的数据，对细胞的分类、计数、表面标记物分析等方面都有着重要的应用价值。
在进行流式细胞仪的选择和使用之前，了解其基本组成和工作原理是非常重要的。
一、流式细胞仪的基本组成流式细胞仪主要由激光器、光学系统、流动系统、检测系统和数据分析系统等组成。
1. 激光器激光器是流式细胞仪的激发光源，通常采用氩离子激光器、固体激光器或半导体激光器。
激光器能够提供高强度、单色、准直、相干的激发光源，用于激发待检测细胞中的荧光标记物。
2. 光学系统光学系统包括聚焦物镜、滤光镜、物镜和检测器等部分，用于将激发光源聚焦到待检测的细胞上，并收集样品发出的荧光信号。
光学系统的设计和性能对流式细胞仪的灵敏度和分辨率有着重要的影响。
3. 流动系统流动系统用于将样品中的细胞单个输送到激光束中进行检测。
它通常包括样品注射器、流动池和排液系统等部分，能够实现高速、稳定的细胞输送，保证检测过程的准确性和稳定性。
4. 检测系统检测系统用于对激发样品中的荧光信号进行检测和测量，通常包括多路光学检测器、光电倍增管、滤光片等部分，能够对不同波长的荧光信号进行高效、快速的检测。
5. 数据分析系统数据分析系统用于对检测到的荧光信号进行处理和分析，通常包括计算机、数据采集卡、数据处理软件等部分，能够提供多种数据处理和分析功能，帮助用户快速、准确地获取所需的数据信息。
二、流式细胞仪的工作原理流式细胞仪的工作原理主要包括样品注射、激发和检测、数据采集和分析等步骤。
1. 样品注射待检测的样品中的细胞被注入到流式细胞仪的流动系统中，形成单个细胞在流动状态下通过检测区域。
2. 激发和检测当细胞通过激发光源时，标记在细胞表面或内部的荧光染料被激发产生荧光。
光学系统将产生的荧光信号收集并分离成不同波长的光信号，并送入多路光学检测器进行检测和测量。
流式细胞仪工作原理
流式细胞仪工作原理流式细胞仪是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的仪器，它可以对细胞和微粒进行高速、连续的检测和分析。
它的工作原理基于光学原理和流体动力学原理，下面将详细介绍流式细胞仪的工作原理。
1. 光学系统流式细胞仪的光学系统由激光器、光学镜头、滤光片、光散射器和光电探测器等组成。
激光器产生一束高能量、单色、相干的光束，经过光学镜头聚焦后照射到待测样品上。
样品中的细胞或微粒与激光相互作用后，会发生光散射、荧光发射等现象。
2. 流体系统流式细胞仪的流体系统由进样系统、流速控制装置和废液排放系统组成。
待测样品通过进样系统进入流动细胞仓，并在流速控制装置的控制下以稳定的速度通过激光束。
废液排放系统用于收集经过检测的样品。
3. 光散射检测光散射是流式细胞仪最常用的检测方式之一。
当细胞或微粒经过激光束时，光线会被散射。
光散射信号分为前向散射和侧向散射。
前向散射与细胞或微粒的大小和形状相关，侧向散射与细胞或微粒的复杂度和粒子表面的结构相关。
流式细胞仪通过收集和测量光散射信号的强度和角度，可以获取细胞或微粒的大小、形状、复杂度等信息。
4. 荧光检测荧光检测是流式细胞仪另一种常用的检测方式。
通过给待测样品添加荧光染料或标记抗体，当激光照射到样品时，荧光染料或标记抗体会发出特定波长的荧光信号。
流式细胞仪通过滤光片选择性地收集特定波长的荧光信号，并通过光电探测器转换为电信号。
荧光检测可以用于检测细胞表面标记物、细胞内某种分子的含量等。
5. 数据分析流式细胞仪通过光电探测器将光信号转换为电信号，并将其转化为数字信号进行处理和分析。
流式细胞仪配备了专业的数据分析软件，可以对收集到的数据进行多参数分析、绘制直方图、散点图等，以获取更多关于细胞或微粒的信息。
总结：流式细胞仪的工作原理基于光学原理和流体动力学原理，通过光散射和荧光检测来获取细胞或微粒的相关信息。
它可以用于细胞表面标记物的检测、细胞内某种分子的含量分析、细胞周期和凋亡的研究等。
流式细胞仪行标
流式细胞仪行标
流式细胞仪（Flow Cytometry, FCM）是一种用于分析和分离活细胞的实验室技术。
它可以用来测定细胞的大小、复杂性（颗粒度）、内部荧光强度以及细胞表面或内部的特定分子标记。
流式细胞仪的工作流程大致包括以下步骤：
1. 样本制备：首先需要将细胞样本制备成单细胞悬液，并加入荧光染料或抗体以标记目标分子。
2. 染色：细胞悬液与荧光标记的抗体或染料混合后，孵育一段时间以使标记物结合到目标细胞上。
3. 样本加载：经过染色的细胞样本通过流式细胞仪的样本输入系统，通常是一个细管，称为流道。
4. 液流形成：细胞样本被雾化成单个细胞的液滴，这些液滴通过流道以一定速度流动。
5. 激光照射：流动中的细胞逐个经过激光束的照射。
激光激发细胞内或表面的荧光标记，使其发出光信号。
6. 信号检测：流式细胞仪配备有光电探测器，用来检测细胞发出的光信号。
每个细胞产生的信号被转换为电信号，并记录下来。
7. 数据分析：收集到的信号被计算机系统分析，根据细胞的荧光强度和散射光特性，可以得到细胞的各种参
数，如细胞大小、颗粒度、细胞膜和胞内分子的表达水平等。
8. 数据呈现：分析结果通常以二维图表（如前向散射与侧向散射图、荧光强度直方图）或三维/四维图表的形式展现，便于研究者进行进一步的数据解读和实验设计。
流式细胞仪广泛应用于免疫学、肿瘤学、细胞生物学等领域，对于疾病诊断、细胞分选、功能性研究等方面有着重要作用。
通过精确地测量和分析细胞的物理和化学特性，流式细胞仪能够提供关于细胞状态和功能的丰富信息。
流式细胞仪的基本组成
流式细胞仪的基本组成
1. 光源：用于激发细胞中的荧光染料。
常用的光源有氩离子激光器（Ar）和固态激光器等。
2. 光学系统：包括多个镜片、滤光片和光电倍增管。
光学系统能够将细胞产生的荧光信号转化为电信号。
3. 流体系统：用于将细胞悬浮液通过流式细胞仪进样口，使其在仪器中流动。
流体系统包括进样针、注射泵、流动池等。
4. 激发系统：通过透镜或反射镜将激活光束聚焦到细胞中，以激发细胞中所带的荧光。
5. 探测系统：用于检测经激发后的细胞产生的荧光信号。
主要包括一组光电倍增管（PMT）和滤光片。
每个光电倍增管检测特定波长的荧光信号。
6. 数据处理与分析系统：用于接收和整理由探测系统产生的数据，并进行计算、分析和可视化。
7. 控制系统：用于控制仪器的运行和调节各部分的参数，如激发光强度、荧光信号收集等。
以上是流式细胞仪的基本组成，不同型号和品牌的流式细胞仪可能会有些许差异。
流式细胞仪的组成可以根据实际需求进行扩展和改变，以适应不同实验的需要。
流式细胞仪工作原理
流式细胞仪工作原理流式细胞仪是一种广泛应用于生物学和医学研究领域的仪器，它能够对细胞进行高效、快速、准确的分析。
流式细胞仪的工作原理是基于细胞在流动液体中通过激光束的照射，测量细胞的不同特征参数。
本文将详细介绍流式细胞仪的工作原理。
一、激光照射及细胞流动1.1 激光源：流式细胞仪使用激光器作为光源，通常是氩氖激光器或者固态激光器。
1.2 激光照射：激光束照射到细胞悬液中的细胞，使细胞发生荧光或者散射。
1.3 细胞流动：细胞悬液通过流动系统，以单个细胞的形式通过激光束。
二、荧光检测系统2.1 光学系统：包括透镜、滤光片和光电倍增管等，用于检测细胞发出的荧光信号。
2.2 荧光探测：根据细胞内染料的荧光特性，检测细胞的荧光信号。
2.3 数据采集：将荧光信号转化为电信号，并通过计算机进行数据采集和分析。
三、细胞参数分析3.1 细胞大小：通过散射信号测量细胞的大小。
3.2 细胞形态：根据细胞的散射光信号，分析细胞的形态特征。
3.3 细胞表面标记：通过荧光信号检测细胞表面的标记物，如抗体或者荧光染料。
四、多参数分析4.1 多色荧光：流式细胞仪可以同时检测多种荧光信号，实现多参数分析。
4.2 细胞周期分析：通过不同荧光探针标记细胞周期不同阶段，进行细胞周期分析。
4.3 蛋白表达分析：通过检测细胞内特定蛋白的荧光信号，分析蛋白的表达水平。
五、应用领域5.1 免疫学研究：流式细胞仪广泛应用于免疫学研究中，用于检测免疫细胞的表面标记物。
5.2 肿瘤学研究：流式细胞仪可用于检测肿瘤细胞的表面标记物，分析肿瘤细胞的特性。
5.3 细胞生物学研究：流式细胞仪可用于细胞分析、细胞计数和细胞分选等细胞生物学研究领域。
总之，流式细胞仪通过激光照射、荧光检测系统、细胞参数分析、多参数分析和应用领域等多个方面的工作原理，实现了对细胞的高效、快速、准确的分析，为生物学和医学研究提供了重要的技术支持。
流式细胞仪原理及应用
流式细胞仪原理及应用流式细胞仪是一种用于细胞计数和表征的仪器，它基于细胞在流体中流动并通过光源的原理。
以下是流式细胞仪的原理和一些常见应用。
原理：1. 细胞准备：样品中的细胞首先需要进行适当的处理，包括细胞分离、去除细胞团块和杂质等，以确保流经流式细胞仪时的均匀性和准确性。
2. 细胞传递：样品中的细胞通过封闭的通道流动，形成单个细胞的串行排列，以便每个细胞能够单独接收光信号。
3. 激光照射：流式细胞仪使用激光器产生高强度的单色光束，照射到细胞上。
4. 光散射和吸收：细胞与经过的激光光束相互作用，发生光散射和吸收现象。
这些现象提供了关于细胞大小、形状、复杂度和细胞表面分子的信息。
5. 光信号收集：流式细胞仪使用多个光学组件和探测器来收集光信号。
不同的检测器可以收集不同的光散射角度和波长的光信号。
6. 数据分析：收集到的光信号通过计算机进行处理和分析，可以获得细胞的数量、计数、分类和细胞表面分子的信息。
应用：1. 细胞计数：流式细胞仪可以快速准确地计数细胞数量，并提供关于细胞浓度和细胞增殖的信息。
这在生物学研究和临床实验室中非常常见。
2. 细胞表征：通过测量细胞的大小、形状和表面标记物等特征，流式细胞仪可以对细胞进行表征，并帮助研究人员了解细胞类型和状态的变化。
3. 免疫细胞分析：流式细胞仪可以用于免疫学研究，如分析免疫系统中的不同细胞亚群、检测细胞表面抗原、测量细胞分泌物和研究细胞凋亡等。
4. DNA和蛋白质分析：通过使用荧光染料或抗体标记，流式细胞仪可以实现对DNA含量、染色体多样性以及特定蛋白质的定量和定位分析。
总之，流式细胞仪是一种功能强大的实验室工具，广泛应用于生物学、医学和药物研发等领域，为研究人员提供了大量有关细胞的信息。
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流式细胞仪的机型
1. 台式机 检测和分析 B.D. : FACSCalibur; LSRII; LSRI
2. 大型机 分选细胞 B.D. : FACSVantage ；FACSAria Beckman Coulter: MoFlo （DAKO）
荧光抗体的搭配
理论上，不同通道检测的参数可以同时进 行检测。但是如果进行3个荧光参数的检测， 尽可能的选择只需要调节一对参数之间的 补偿的荧光。 如，FL1+FL2+FL4; FL1+FL3+FL4; 注意：PE-Cy5和APC不能同时检测。
流式细胞仪的数据显示和分析
一维直方图、二维点阵图、等高线图和密度图。 1．单参数数据显示和分析— 一维直方图
90 Degree Light Scatter
Laser
FALS Sensor
SSC 与入射光成 90 ° 的光，与 细胞内部复杂度 相关，颗粒密度
90LS Sensor
根据FSC/SSC可以将全血中的淋巴细胞，单核 细胞和粒细胞分开
荧光参数 自发荧光：未经荧光染色，细胞内部的荧
光分子经激光照射后发出的荧光信号。 自发荧光的细胞成分： 核黄素，细胞色素等。 死亡细胞的自发荧光较高 需要设置阴性对照。
F/P FITC, PerCP: 2-9; APC, PE: 1; PE-Cy7, APC-Cy7: 1, N;
抗原密度 高丰度抗原：任何荧光素；低丰度抗原：PE，APC
染色指数 自发荧光
高：APC； 低：FITC 非特异形结合
FcR; 荧光自身
直接标记
特异性信号: 弱 非特异性结合:低 对照：相同荧光
➢ 上机（管道密闭）： 气阀关闭；”run”
PMT-voltage
未染色的细胞（空白对照）或者同型对照 ➢ Dot plot: FSC-SSC
线性坐标（细胞）；对数坐标（bead-CBA) 显示不同细胞群体，关注群体-设门 ➢ Dot plot: FL1/FL2; FL1/FL3; FL2/FL3 对数坐标
如,LP500允许500 nm以上的光通过，而500 nm以下的 光吸收或返回。
(2)短通滤片(SP)：使特定波长以下的光通过，特定波长以 上的光吸收或返回。
(3)带通滤片(BP)：允许相当窄的一波长范围内光通过，一 般滤片上有两个数，一个为允许通过波长的中心值，另一 为允许通过光波段的范围。如BP 500 / 50表示其允许通 过波长范围为475nm-525nm。
Mea n 99 .3 3
10 3.75
2.双参数数据显示和分析
表示：一维直方图、二维点阵图、等高线图和 密度图显示和分析。
二维图：横坐标-FSC/SSC/FL1/2/3/4；纵坐 标-FSC/SSC/FL1/2/3/4
根据阴性对照设置“四方格”标尺,分为四个区： LL-双阴性；LR和UL-单阳性；UR-双阳性；每个 区都可以用%和平均荧光强度表示。也可以设置 “门”。
流式细胞仪主要技术指标
1．流式细胞仪的分析速度： 一般检测1000～ 5000个细胞/秒,大型机可达每秒上万个 细胞。
2．荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分 子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。
3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC） 反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～ ０.5μm。
流动室及液流驱动系统
流动室(Flow Chamber或 Flow Cell) 仪器核心部件，被测样品在此与激光 相交。 充满了鞘液, 将样品流环包，使样品 流不会脱离液流的轴线方向，保证每 个细胞通过激光照射区的时间相等。
改变样本的进样速率开关,可提高采样分析的速度, 但是, 并不提高样本流的速度,而是改变了细胞间的 距离,样本流变宽,细胞间距离缩短,这样单位时间内 流经激光照射区的细胞数就增加。
500 nm
600 nm
700 nm
Protein
Propidium Iodide
Excitation
300 nm 400 nm
500 nm
Emisson
600 nm
700 nm
400 nm
500 nm
600 nm
700 nm
Relat iv e I nt ens it y
DNA
PI
Allophycocyanin (APC)
Fi l e: CD808 6.003
Qua d Locatio n: 1 4, 3 2
Qua d UL UR LL LR
Events % Gated % Total X Mean X Geo Me an Y Mean Y Geo Me an
88
1.52 1.27
9.33
8.68 86 .5 9
66 .4 4
横坐标：散射光(FSC or SSC-线性)或荧光信 号(FL1, 2,3,4-对数)的相对强度值；
纵坐标：表示细胞数。 根据阴性对照设定适当的“门”（直线门）， 仪器的计算机就会给出测定值（包括阳性细胞% 和平均荧光强度）。
Fi l e: CD8086 .0 06
Marke r % Gated Al l 10 0.00 M1 95 .4 9
“ready”：域值参数设置过高或过低 ；域值没有选择正 确的参数（通常为FSC）；进样器堵塞；密封圈破损；联机 失败 ；
“standby “：run按钮 ；液流系统漏气（鞘液箱未密封 ； 样品管破损 ；密封圈破损；）
2. 上样速度过高：
样品流中有气泡；域值过低 ；样品浓度过高 ；鞘液系统 中有空气
300 nm 400 nm
500 nm
632.5 nm (HeNe)
600 nm
700 nm
Excitation Emisson
Protein
如何选择荧光偶联的抗体
荧光偶联抗体的亮度 S/N(Positive/negative): 4-6 fold PE, PE-cy7,PE-cy5, APC>APC-cy7, alexa 647>FITC, alexa488
3. 上样速度过低：
域值设定过高 ；样品未充分混匀 ；样品稀释过大 ；进样 针堵塞
Fluorescence compensation: 单标记荧光调节补偿
FL2-%FL1
需要调节补偿的参数对 FL1/FL2；FL2/FL3；FL3/FL4
对照设置-以检测带有FITC/PE/APC的 样品为例 1.空白、阴性对照 2.单标记对照：FL1(FITC); FL2(PE); FL4(APC) 3. 混合对照：以上对照的两两组合；3 个混合
流式细胞仪技术 -应用和分析
基础部免疫教研室 刘书逊
Tel: 70316-21; lsx_2k2002@
流式细胞仪的概述
一、概述 流式细胞仪（Flow Cytometer 简称
FCM）是一项集激光技术、电子物理技术、 光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化 学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科 技仪器。
补偿与荧光强度成正比
FL2
未补偿
FL1
部分补偿 充分补偿
Uncompensated vs Compensated
FL1-%FL2
FL1-%FL2
FL2-%FL1
FL2
FL1
Forward Angle Light Scatter (FSC)
Laser
FALS Sensor
FSC 与入射光在同一方向的散射光，与细胞表面积相关
APC APC-Cy7 Alexa647
激发光波长(Ex)
488 488 488 488 488 488 488 488 488
633 633 633
发射光波长(Em)
519
FL1
519
578
FL2
630
670
668
FL3
667
695
785
660
785
FL4
668
300 nm
Fluorescein (FITC)
4．分辨率：通常用变异系数CV值来表示，,一般流式细胞仪 能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时 要求必须达到的。
5．流式细胞仪的分选速度：一般流式细胞仪分选速度＞ 1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上。
流式细胞仪构造
可分为五部分： (1)流动室及液流驱动系统; (2)激光光源及光束成形系统; (3)光学系统; (4)信号检测与存贮、显示、分析系统， (5)细胞分选系统。
素标记的同型对 照；或者预先用 抗体来源动物血 清封闭
间接标记
➢ 特异性信号: 强, 5-6 2nd Ab/ 1st Ab;
➢ 非特异性结合: 高 ➢ 对照：一抗来源
的同型对照或血 清＋二抗
Avidin-Biotin method
biotinylated primary Ab biotin avidin biotinylateon
400 nm
500 nm
Wavelength
600 nm
700 nm
400 nm
500 nm
600 nm
700 nm
Relat iv e I nt ens it y
Protein
Phycoerytherin (PE)
Excitation Emisson
300 nm 400 nm
55 97 96 .5 3 80 .9 4 18 9.73
15 2.97 68 3.82
59 9.15
10 6
阈值
减少杂颗粒：细胞碎片；坏死细胞；红细胞； 血小板等