阿莫西林聚合物测定原理和几点注意事项

阿莫西林聚合物测定原理和几点注意事项

浙江省食品药品检验所

抗生素中的高分子聚合物杂质是引发抗生素药物过敏反应的真正过敏原，因此严格控制抗生素药物中高分子聚合物的含量有着重要的意义。近日监督抽样中发现，阿莫西林胶囊聚合物含量超限问题较严重，因此我们以阿莫西林胶囊为例，对阿莫西林高分子聚合物测定的原理和测定过程中需要注意的问题进行了研究，现总结如下：

一、测定原理

和其他β-内酰胺类抗生素的聚合物测定方法一样，阿莫西林胶囊采用Sephadex G-10凝胶色谱系统测定。Sephadex G-10的排阻分子量为700d，因此除部分寡聚物外，阿莫西林胶囊聚合物在色谱过程中均不保留，即所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰，阿莫西林主成分表现为另一色谱峰。由于高分子聚合物的对照品难以制备，而此利用药品自身对照品在水溶剂及纯水流动相中主成分缔合物作对照，取代高分子杂质对照品对阿莫西林胶囊聚合物进行检测，较好的解决了这一难题；而在缓冲液作为溶剂及流动相的情况下，阿莫西林

相对不易聚合，因而在此条件下测定样品中聚合物的含量。

二、几个注意点

1、对照品。进口药品注册标准（JX20000355）和中国药典2005年版二部采用不同的对照品，结果按照进口药品注册标准检测得聚合物含量约为按药典方法的2倍。差别如此大的主要原因是进口药品注册标准以阿莫西林为对照品，中国药典2005年版二部选用青霉素作为对照品，两种对照品紫外响应不同，因而作为外标计算同一样品中聚合物含量所得结果也不同。

2、溶解方法。样品溶解可采用加2％Na2CO3溶液助溶和超声溶解两种方法，两种方法所得结果基本上没有差异。需要注意的是超声溶解时间不宜过长，超声用水不宜过热，否则容易使聚合物含量上升。b）样品溶解至进样放置时间不宜过长。C）阿莫西林对照溶液不稳定，在进样过程中峰面积越来越小，峰面积逐渐降低，峰宽逐渐增宽，造成连续进样的峰面积相对标准偏差较大，因此对照品溶解后要马上连续进样，有条件的要使用低温进样保温器。

3、Sephadex G-10色谱柱的活化。色谱柱对样品有一定吸附

作用，如有需要可对填料进行活化。在使用含0.2mol/L氢氧化钠和0.5mol/L氯化钠的溶液冲洗凝胶柱各半个小时候后，用水冲洗至中性，可改善保留时间不一致、峰形差等状况。这一过程需要注意的是，活化后要水洗至中性，否则会引起聚合物峰成倍增大。实际操作中发现用纯水冲洗很难完全洗去填料中的氢氧化钠，可行的方法是适当水洗后用缓冲盐流动相继续冲洗，可完全消除氢氧化钠残留的影响。